病理制片過(guò)程

1、病理制片過(guò)程在臨床病理科和組織學(xué)實(shí)驗(yàn)室，切片是最重要的技術(shù)之一。 切片的質(zhì)量不好，就無(wú)法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行觀察。 好的切片機(jī)只是整個(gè)樣品制備過(guò)程中的一個(gè)環(huán)節(jié)。要制備一張好的切片，必須要將技術(shù)、知識(shí)和技巧進(jìn)行完美的結(jié)合。待切片樣品的質(zhì)量是非常關(guān)鍵的因素，而樣品質(zhì)量有取決于前期處理工作的準(zhǔn)確無(wú)誤（例如：固定、巨檢、脫水和包埋）必須選擇正確的切片機(jī)型號(hào)以及合適的鋼刀或一次性刀片。切片必須根據(jù)實(shí)際應(yīng)用出發(fā)，需要根據(jù)樣品的類(lèi)型、大小、期望的厚度認(rèn)真考慮，還要兼顧操作者的便利性和舒適性。要且出高質(zhì)量的切片，經(jīng)驗(yàn)豐富的操作者也是必不可少的條件之一。操作者必須懂得切片機(jī)的工作原理，能夠?qū)C(jī)器進(jìn)行精細(xì)調(diào)節(jié)以達(dá)到最佳效果

2、；并且能應(yīng)對(duì)常見(jiàn)故障， 消除一些潛在的切片問(wèn)題； 還可以運(yùn)用恰當(dāng)?shù)那衅夹g(shù)，提高切片速度但不影響質(zhì)量。目前能做病理組織切片的地方很多，但要數(shù)上海舜田生物做出的病理切片相對(duì)質(zhì)量上比較好，該公司有 1 位專(zhuān)業(yè)從事病理實(shí)驗(yàn)的老師及相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員，積累了豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，所作出的切片及染色效果相當(dāng)不錯(cuò)。1 正確處理標(biāo)本的重要性1.1 固定正確的固定是病理制片技術(shù)中最重要的一步，這個(gè)步驟會(huì)影響到后續(xù)的每個(gè)環(huán)節(jié)。如果固定不充分，樣品的質(zhì)量就會(huì)有欠缺。組織必須在選定的固定劑中浸泡足夠長(zhǎng)的時(shí)間， 使大分子保持固有形態(tài)。 正確的固定可以防止樣品在脫水劑中發(fā)生變性以及后期處理步驟對(duì)于樣品造成的損害。固定不充分可能

3、增加切片的困難，表現(xiàn)出過(guò)度收縮，并且會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞核染色不足和/或胞核呈現(xiàn) “泡沫 ”狀。1.2 巨檢樣品需要修切成薄片，并盡可能做到均勻，否則很難在切片機(jī)上切出好的片子。如果樣品太厚以至于無(wú)法滲透充分，則必須經(jīng)過(guò)再次處理 才能進(jìn)行切片。這樣會(huì)影響樣品的質(zhì)量， 更浪費(fèi)時(shí)間。從最初的步驟開(kāi)始就正確處理會(huì)使后面的工作更簡(jiǎn)單，因此在大體取材的時(shí)候多花 些功夫會(huì)為以后的步驟節(jié)省大量時(shí)間和精力。備注：包埋盒塞滿(mǎn)組織且組織過(guò)厚就無(wú)法很好的固定， 后續(xù)的處理步驟也會(huì)效果欠佳。1.3 脫鈣為了后期進(jìn)行石蠟包埋切片，骨組織需要進(jìn)行脫鈣，鈣必須被完全去除才能確保切片的完整，并且可以防止刀具的損壞。在用酸溶液進(jìn)行 脫鈣

4、之前，骨組織必須經(jīng)過(guò)徹底的固定， 這樣其中的軟組織成分才能夠被保護(hù)， 且防止細(xì)胞核在酸的作用下被破壞，比如蛋白質(zhì)水解作用 。1.4 組織處理（脫水）組織經(jīng)過(guò)一系列經(jīng)典的處理過(guò)程，是使原本親水性的組織最終可以用疏水性的介質(zhì)進(jìn)行包埋，比如石蠟，火棉膠和絕大多數(shù)樹(shù)酯。備注：樣品無(wú)論是處理不充分還是處理過(guò)度，都可能導(dǎo)致切片效果不理想。脫水機(jī)旋轉(zhuǎn)升降式脫水機(jī)目前仍有一些病理工作者使用，但是全自動(dòng)全封閉負(fù)壓/壓力式脫水機(jī)逐漸占據(jù)主導(dǎo)地位。后者更有利于保護(hù)工作環(huán)境，更確保組織和試劑的充分作用， 可以更有效縮短脫水時(shí)間。 一些更先進(jìn)的全自動(dòng)全封閉脫水機(jī)還可以自動(dòng)記錄試劑的使用情況，并對(duì)試劑進(jìn)行智能監(jiān)控和更換。

5、有一點(diǎn)非常重要，就是處理過(guò)度對(duì)組織造成破壞絕對(duì)不亞于處理不充分造成的后果。多種因素，比如試劑的種類(lèi)，處理步驟的多寡，處理時(shí)間的長(zhǎng)短，試劑的清潔度以及加熱、 真空和 /或壓力的使用都會(huì)影響具體某個(gè)樣品的處理程度。注：不同來(lái)源和不同大小的樣品最好不要共用同一個(gè)處理程序， 這樣可以避免其中部分樣品處理過(guò)度，而部分處理還不充分。處理步驟：（一）脫水：脫水的關(guān)鍵就是將樣品置于脫水試劑中足夠長(zhǎng)的時(shí)間，其中的游離水分子被除去，但是脫水時(shí)間也不宜過(guò)長(zhǎng)，否則結(jié)合水分子也會(huì)被除去 ，會(huì)導(dǎo)致結(jié)構(gòu)的變化。而脫水時(shí)間過(guò)短致使水分還殘留在樣品中， 就會(huì)導(dǎo)致包埋介質(zhì)無(wú)法很好滲透入樣品。但是，脫水過(guò)度會(huì)導(dǎo)致樣品的 皺縮變脆。

6、從過(guò)度脫水的組織塊上切到的切片，一旦放入水中，切片就會(huì)膨脹最后破碎。如果將整個(gè)組織塊浸入水中，則組織的表面會(huì)因 為水化而膨脹，這樣再進(jìn)行切片，雖然片子的性狀會(huì)有所改善，但是形態(tài)學(xué)會(huì)發(fā)生改變， 而且染色后會(huì)發(fā)生色彩偏淡， 對(duì)比度較弱。最常 用的脫水劑是乙醇和變性酒精。 甲基酒精有毒性， 會(huì)破壞肝臟中的甲醛， 因此不太單獨(dú)使用。異丙醇是乙醇最佳替代物，常規(guī)在微波處理 中使用。丁醇，劇毒，適用于較慢的組織處理過(guò)程，而且多用在植物和動(dòng)物組織。無(wú)水酒精往往會(huì)含有水分，因此最好能檢測(cè)一下試劑的純度?？梢杂靡后w比重計(jì)來(lái)測(cè)定，也可以將幾毫升酒精滴入幾毫升二甲苯或甲苯， 如果混合液出現(xiàn)混濁就表示酒精中至少含有

7、2的水分。（二）透明：用來(lái)進(jìn)行透明的試劑和脫水劑以及包埋介質(zhì)必須非常容易混合。如果組織在透明劑中時(shí)間不夠，那么組織就會(huì)發(fā)軟甚至呈糊狀。略微延長(zhǎng) 時(shí)間并 /或定期更換新鮮溶液可以避免透明不足的問(wèn)題。最常用的透明試劑如下：二甲苯：目前仍被廣泛使用的一種芳香烴類(lèi)化合物，能夠快速替換組織中的乙醇。在正確的脫水步驟后，芳香烴能夠改變樣品的折射率并使組織變 透明。當(dāng)有水分存在的時(shí)候，二甲苯會(huì)變混濁，這時(shí)必須更換。作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致組織變硬，尤其一些纖維、肌肉中樞神經(jīng)系統(tǒng)或軟骨 組織更容易變硬。如果發(fā)現(xiàn)組織在完成處理后變得太硬或發(fā)脆，請(qǐng)減少透明的時(shí)間或者尋找二甲苯替代物。請(qǐng)注意，微波處理過(guò)程不需要 使用透明

8、劑，可以降低組織處理過(guò)度的風(fēng)險(xiǎn)。二甲苯替代物：苯烯試劑或者短鏈脂肪酸碳?xì)浠衔铮ㄍ闊N）也得到了快速普及。苯烯試劑不會(huì)像二甲苯那樣使組織發(fā)生硬化，但是前者更容易污染石蠟 ，因此石蠟需要更頻繁的更換。 脂肪族化合物更容易滲透入組織， 相對(duì)二甲苯而言， 更容易去除組織中的脂肪。然而，這類(lèi)化合物不能接 觸到水分，因此在比較潮濕的地區(qū)很難使用。若放棄二甲苯而使用其替代物， 則重新調(diào)整處理的時(shí)間和溶液循環(huán)使用次數(shù)就顯得尤為重要 。其他透明試劑例如苯，甲苯，氯仿和香精油的應(yīng)用并不多見(jiàn)。（三）浸蠟（石蠟滲透）：石蠟是石油裂解物的提取物，屬于惰性的碳?xì)浠衔锏幕旌衔?。在脫水機(jī)中使用石蠟，溫度最好設(shè)定在熔點(diǎn)以上2

9、°4°， 在最后一步石蠟滲透完成后，脫水缸必須用透明劑徹底清洗， 不能有任何石蠟的殘留。 負(fù)壓可以增強(qiáng)滲透的效果，但是在處理活檢樣本的時(shí)候，負(fù)壓和加熱都必須慎用。另外還需要注意，即便有些脫水機(jī)增加到了4 個(gè)蠟缸，總的滲透時(shí)間不能延長(zhǎng)。 在確保滲透效果的基礎(chǔ)上 ，組織在石蠟中停留的時(shí)間越短越好。1.5 石蠟包埋包埋是將正確定位的組織包裹在一種介質(zhì)中（此處以石蠟為例）然后固化。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都會(huì)創(chuàng)建一套特有的處理方法，這就決定了樣品在 處理后的硬度。用來(lái)包埋的石蠟必須能夠和樣品的硬度相匹配， 這樣才能確保進(jìn)行切片的蠟塊質(zhì)地盡可能均勻。另外有兩點(diǎn)對(duì)于切片也至關(guān)重要：溫度和樣品的定位。

10、組織包埋機(jī)已被廣泛使用，機(jī)器最大的優(yōu)點(diǎn)就是能夠在每個(gè)步驟上都達(dá)到確的溫控 。石蠟熔化并保持熔化狀態(tài)的這個(gè)溫度非常重要，必須確保一些添加劑完全溶解入石蠟。模具，樣品和石蠟之間的溫差必須控制在幾度以 內(nèi)，這樣才能確保石蠟充分包圍并支撐樣品。已經(jīng)包埋的模具最好放置在包埋機(jī)的冷臺(tái)上而不是冰塊上， 這樣可以使石蠟固化且不產(chǎn)生裂 縫。樣品必須進(jìn)行正確定位，從而保證正確的面被切到，但是對(duì)于樣品和刀刃接觸的方式必須要經(jīng)過(guò)考慮。對(duì)于不同類(lèi)型的樣品，有很多種方 法可供參考，用來(lái)正確定位樣品。提高包埋效果的技巧有些石蠟特別適合用于滲透，有些更適合用于包埋，而有些都適合?？梢韵蚬?yīng)商查詢(xún)。石蠟應(yīng)當(dāng)在高于其熔點(diǎn)2

11、76;C 至 4°C 的溫度下進(jìn)行熔化和儲(chǔ)存，這樣其中的添加劑才能溶解入液體。 如果溫度太低， 其中一些較重的添加劑， 比如聚合物就會(huì)沉在底部，然后最先流出。熔化的石蠟在流出以前最好先進(jìn)行攪拌。設(shè)定包埋機(jī)的參數(shù)，確保石蠟流出口過(guò)夜的時(shí)候處于保溫狀態(tài)。經(jīng)常清空并清洗流出口。始終確保流出蠟缸的石蠟是過(guò)濾后的。和以往的觀點(diǎn)相反，將石蠟設(shè)定在高溫（大約85°C）持續(xù)數(shù)星期，反而是無(wú)害的。盡管石蠟中添加了穩(wěn)定劑，在氧化作用下，石蠟仍然會(huì)變質(zhì)。最初的征兆就是顏色轉(zhuǎn)變?yōu)椴蔹S色直到黃色。隨后可能有異味產(chǎn)生。選擇尺寸恰當(dāng)?shù)哪＞?，確保樣品的四周都被石蠟包圍，樣品置于中心。用壓平裝置或者彎頭鑷子

12、的背部輕柔地將樣品展平（易碎樣品可能會(huì)被壓碎）。不要讓樣品在模具中撐太滿(mǎn)。大或硬的樣品必須按照一定角度放置在模具中。如果同一個(gè)樣品包含多種不同密度的成分，則包埋的時(shí)候要確保樣品最硬的部分必須最后接觸到鋒利的刀刃。皮膚往往帶有毛發(fā)，則包埋的時(shí)候必須保證毛發(fā)最后才被切到。動(dòng)物樣本中，如果組織的來(lái)源不同但是切片的性狀相似則可以包埋在同一個(gè)蠟塊中，比如肝臟和脾臟，腦組織和脊髓。脫鈣的骨組織必須包埋在“硬 ”石蠟中，樣品最窄的一端必須位于蠟塊的底邊，從而在切片的時(shí)候，最先接觸到刀刃。（見(jiàn)下圖）為了切片的穩(wěn)定性，模具中必須添加足夠的石蠟，確保包埋盒至少充盈一半。如果石蠟漏出，那么在蠟塊完全固化之前，必須添

13、加石蠟。石蠟添加劑：絕大多數(shù)市售的用于組織學(xué)的石蠟是含有添加劑的，目的在于改善切片的質(zhì)量，改變硬度或者有利于連片。常見(jiàn)的添加劑如下：蜂蠟降低結(jié)晶的大小，增加粘度和附著力。橡膠降低脆性，增加粘度，有助于連片其他石蠟降低結(jié)晶大小，使質(zhì)地更平滑，可以在不改變?nèi)埸c(diǎn)的前提下提高硬度。塑料增加硬度，對(duì)硬組織起到很好的支撐作用，得到更薄的切片DMSO （二甲基亞砜）增強(qiáng)滲透（警告！腐蝕性）熔點(diǎn)和凝固點(diǎn)：絕大多數(shù)用于組織學(xué)的石蠟是多種石蠟的混合物，這樣可以確保的硬度和指定的凝固點(diǎn)。 “凝固點(diǎn) ”是制造商使用的術(shù)語(yǔ)，其實(shí)相當(dāng)于“熔點(diǎn) ”。這個(gè)溫度是指在石蠟中插入小木棒后， 石蠟開(kāi)始在木棒上凝固的那個(gè)溫度。凝固點(diǎn)

14、和熔點(diǎn)溫度往往是同一個(gè)溫度或者在兩個(gè)溫度之間。市售石蠟的特性往往根據(jù)其添加物和熔點(diǎn)的不同而有一定差異。56°C 到58°C 這個(gè)范圍被常規(guī)實(shí)驗(yàn)室中普遍應(yīng)用。較低熔點(diǎn)的石蠟(50 °C 到 53°C)往往有其特殊的應(yīng)用。一般情況，低熔點(diǎn)的石蠟往往比較柔軟，因此更適合包埋較軟的組織。進(jìn)行較薄的切片比較困難，但是很容易連片。（可以選購(gòu)質(zhì)地較硬但是熔點(diǎn)較低的石蠟。）相反的，高熔點(diǎn)的石蠟一般比較硬。對(duì)于質(zhì)地較硬的樣品，這樣的石蠟有更好的支撐效果，而且很容易得到薄切片，但是連片就比較困難了。樣品夾具在切片以前，完成包埋的蠟塊必須固定到切片機(jī)的樣品夾具上。夾持力必須確

15、保樣品能被完全固定，因此蠟塊往往會(huì)附著在一個(gè)支持物上，比如塑料包埋框或者環(huán)行樣品夾。 在不使石蠟變形且避免造成切片形狀不規(guī)則的前提下，用最大的力量夾持支撐物。請(qǐng)注意，石蠟塊必須牢固附著于支撐物（例如，在包埋盒中必須有足夠的石蠟充填），并且支撐物的背后必須接觸實(shí)心物體的表面。塑料最常用的支撐物就是簡(jiǎn)單并獨(dú)立使用的一次性包埋盒。與市售的模具配套使用，蠟塊的平面會(huì)很平整，且邊緣能在X 和 Y 軸向上保持平行。用相同方法包埋的一批組織塊不需要對(duì)表面進(jìn)行調(diào)節(jié)或僅需要很小的調(diào)節(jié)。環(huán)行模具也偶爾會(huì)用到，其中必須充填足夠的包埋劑，而且不能夾持太緊。圓形的支撐物經(jīng)常在塑料包埋時(shí)使用。木塊：這是廉價(jià)的包埋盒替代物

16、。盡可能使用硬質(zhì)木材（避免使用松軟的松木）并進(jìn)行切割以適合夾具的形狀。木塊的表面可以開(kāi)槽，從而增加黏附力。注意：木制的支撐物在水中浸泡后會(huì)膨脹，導(dǎo)致在樣品夾上固定效果欠佳。金屬：金屬支撐物在塑料包埋時(shí)使用較多。金屬支撐物可以重復(fù)使用，但是相對(duì)比較貴，在使用時(shí)需要進(jìn)行X/Y 向的定位調(diào)節(jié)。而且調(diào)節(jié)這個(gè)平面有一定的難度。如果組織塊附著恰當(dāng)，這種夾具的穩(wěn)定性非常好。使用切片機(jī)必須遵從最佳的工作秩序，無(wú)論使用鋼刀還是一次性刀片，切緣必須鋒利，并且不能有任何缺口或雜質(zhì)附著。2.切片機(jī)及相關(guān)附件耗材簡(jiǎn)介2.1 切片機(jī)的類(lèi)型輪轉(zhuǎn)式：輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)有一個(gè)控制精確進(jìn)樣的手輪，手輪進(jìn)行360°的旋轉(zhuǎn)，控制

17、樣品頭豎直向下經(jīng)過(guò)刀刃然后豎直向上回到處于最高點(diǎn)的起始 位置。在到達(dá)切片行程最高點(diǎn)的時(shí)候， 樣品頭會(huì)按照設(shè)定的切片厚度水平向朝前運(yùn)動(dòng)， 然后再開(kāi)始向下的行程。這類(lèi)切片機(jī)常規(guī)進(jìn)行石蠟 或塑料包埋樣品的切片。平推滑動(dòng)式：平推滑動(dòng)式切片機(jī)是一種水平向運(yùn)動(dòng)的切片機(jī)，其刀架固定不動(dòng)。樣品位于刀的下方，進(jìn)行切片。這種切片機(jī)通常用來(lái)切特別大或者特別硬的樣品。平推雪橇式：平推滑雪橇式切片機(jī)是一種水平向運(yùn)動(dòng)的切片機(jī)，其樣品頭固定不動(dòng)。 刀架在樣品的上方運(yùn)動(dòng)，進(jìn)行切片。一些輕型的切片機(jī)可以進(jìn)行常 規(guī)切片，而重型切片機(jī)可以用來(lái)切特別硬或者特別大的樣品。2.2 切片機(jī)常見(jiàn)的功能回縮功能：無(wú)回縮功能：沒(méi)有回縮功能的切片

18、機(jī)， 當(dāng)樣品頭下降的時(shí)候， 組織塊就經(jīng)過(guò)刀鋒，隨后沿同一平面上返回到起始位置，然后樣品頭按照指 定的厚度前進(jìn)重復(fù)下進(jìn)行下一個(gè)動(dòng)作。有回縮功能：帶回縮功能的切片機(jī)， 當(dāng)樣品頭向下移動(dòng)時(shí)和無(wú)回縮切片機(jī)的動(dòng)作完全一樣，但是在樣品頭上升時(shí)，樣品頭會(huì)離開(kāi)原來(lái)的平 面，朝刀刃的反向移動(dòng)，從而防止樣品表面和刀鋒接觸。 這個(gè)功能有很大的好處， 因?yàn)槭紫瓤梢匝娱L(zhǎng)刀的使用壽命，還可以減少樣品表面 可能的摩擦（從而降低熱膨脹），并且防止碎屑積聚在的刀刃背面并確保切片的一致性。安全功能：手輪鎖：切片機(jī)一般都配備手輪鎖，可以將手輪鎖定于任意位置，防止機(jī)器閑置期間意外觸及手輪，導(dǎo)致人員意外傷害樣或品頭撞擊刀具 。更人性化

19、的切片機(jī)往往還配備第二手輪鎖， 手輪把手只能被鎖定于最高點(diǎn)， 便于在切片過(guò)程中隨時(shí)更換樣品或刀具。刀架護(hù)刀器： 無(wú)論鋼刀刀架還是一次性刀片架， 都應(yīng)當(dāng)配有牢固的護(hù)刀器， 在更換樣品或機(jī)器閑置的時(shí)候用戶(hù)一定要養(yǎng)成良好習(xí)慣， 將護(hù) 刀器覆蓋在刀刃上方，對(duì)人員和刀具都是一種保護(hù)。好的的護(hù)刀器必須能安全地覆蓋刀刃的全長(zhǎng)。自動(dòng)切片機(jī)安全性： 自動(dòng)切片機(jī)必須有緊急制動(dòng)裝置，防止在自動(dòng)操作過(guò)程中有意外發(fā)生。人性化的切片機(jī)往往無(wú)法一鍵啟動(dòng)，必須依靠 組合鍵才能使馬達(dá)運(yùn)轉(zhuǎn)，這樣可以最大限度避免意外啟動(dòng)造成的人員傷害或機(jī)器損壞。2.3 操作特點(diǎn)：手動(dòng)：手動(dòng)切片機(jī)不具備電動(dòng)切片功能。粗修和切片都必須由操作者手動(dòng)完成

20、。半自動(dòng)：半自動(dòng)切片機(jī)往往只有一個(gè)驅(qū)動(dòng)馬達(dá)控制進(jìn)樣，沒(méi)有切片馬達(dá)。全自動(dòng)：全自動(dòng)切片機(jī)有兩個(gè)驅(qū)動(dòng)馬達(dá)，既能控制粗進(jìn)樣也能進(jìn)行切片。2.4 刀具分類(lèi)：重復(fù)使用型刀要長(zhǎng)時(shí)間保持刀刃的鋒利，刀必須在不同的階段進(jìn)行很好的鍛造以達(dá)到恰當(dāng)?shù)钠胶狻Ｙ|(zhì)地較軟的刀往往刀刃不鋒利，而質(zhì)地很硬的刀比較 脆，容易在切片過(guò)程中刀刃崩裂。 經(jīng)過(guò)鍛造的刀通常用來(lái)切石蠟包埋、 火棉膠包埋、 冰凍和較軟的工業(yè)樣品。鋒利而無(wú)暇的刀刃是獲得一張好切片的基礎(chǔ)。磨得比較好的刀，斜面很小，從側(cè)面觀察，斜邊筆直，不會(huì)出現(xiàn)錐形。斜邊上出現(xiàn)錐形會(huì)使 刀刃發(fā)生彎曲，導(dǎo)致刀刃只在某個(gè)點(diǎn)上貼近蠟塊，而其余部分相對(duì)遠(yuǎn)離。所以減小斜面很重要，否則刀刃更

21、多的區(qū)域就需要進(jìn)行打磨以避 免刀對(duì)樣品的刮擦。刀刃上的擦痕顯然會(huì)影響切片的質(zhì)量。放大 100 倍對(duì)刀刃進(jìn)行觀察，應(yīng)該看到一道很細(xì)的反光，呈筆直、不間斷的 明亮的細(xì)線(xiàn)。不理想的刀刃看上去是不規(guī)則并有中斷的線(xiàn)條。刀的角度：刀刃上用來(lái)進(jìn)行切片的區(qū)域是由兩個(gè)相交的平面組成， 叫做切面。在這兩個(gè)平面之間形成的夾角叫做斜角，（通常 27°-3 2 °），這個(gè)角度通常大于楔角（通常 15°-18 °）在切片機(jī)上進(jìn)行角度的調(diào)節(jié)：當(dāng)?shù)栋惭b到切片機(jī)的刀架上時(shí)，必須呈一定角度，這樣才能在刀刃接觸組織平面的那個(gè)小平面和組織塊平面 之間形成一個(gè)間隙。這個(gè)角度就是間隙角。 在切片機(jī)

22、上都一個(gè)數(shù)字刻度表示間隙角的大小， 這個(gè)讀數(shù)在不同的切片機(jī)上可能會(huì)有差別。更 換了不同的切片刀后，這個(gè)數(shù)值可能需要調(diào)節(jié)。尋找合適角度的方法，最好采取試錯(cuò)法。刀片的寬度同樣會(huì)影響到間隙角。經(jīng)過(guò)多次磨刀后，刀的寬度會(huì)變窄，為了和樣品有一個(gè)正確的切入點(diǎn)，刀必須被抬高。刀架必須經(jīng)過(guò)調(diào) 節(jié)，這樣被磨過(guò)（變窄）的刀的刀鋒必須處在和新（寬的）的刀鋒一樣高低的位置。不同的剖面：“ B型”刀的剖面略向下凹，刀刃處很薄?，F(xiàn)在除了在柔軟的石蠟包埋或者火棉膠包埋切片中使用外，很少再用到?！?C型”刀是一種剖面為楔形的標(biāo)準(zhǔn)刀具， 兩側(cè)面是一個(gè)平整的面 (剖面為等腰三角形 )。在常規(guī)石蠟切片、冰凍切片、硬質(zhì)火棉膠和較軟的

23、工業(yè)樣品切片中使用?！?D型”刀剖面呈楔形，兩條側(cè)邊不對(duì)稱(chēng)，刀刃非常鋒利。這類(lèi)刀在較硬組織的切片時(shí)使用，例如塑料包埋樣品或者較硬的工業(yè)樣品。不同的長(zhǎng)度：重復(fù)使用型切片刀有很多不同的長(zhǎng)度。 長(zhǎng)度在 120mm 的短刀推薦在冰凍切片時(shí)使用， 160mm 和 185mm 的刀常規(guī) 應(yīng)用于輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)，而更長(zhǎng)的刀通常在平推式滑行切片機(jī)或平推雪橇式切片機(jī)。注：所有的刀都應(yīng)當(dāng)表面涂抹油脂后存放，以免生銹。一次性刀片一次性刀片，采用優(yōu)質(zhì)的不銹鋼，由于其便利性和經(jīng)濟(jì)性，在絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室里作為重復(fù)使用型刀的替代品。大多數(shù)的切片機(jī)都帶有集成 的刀片刀架，但是一次性刀片也可以插入安裝在標(biāo)準(zhǔn)鋼刀刀架上的刀片夾內(nèi)使用。

24、寬型和窄型刀片：一次性刀片通常區(qū)分為寬型和窄型， 這就表明了刀的寬度。 大多數(shù)窄型刀寬度為 1/4 英寸（約 6mm），厚度為 0.010 英寸（約 0 .23mm ）；也有制造商采用厚度為 0.012 英寸（約 0.27mm）的規(guī)格。寬型刀大約寬度為 1/2 英寸（約 11.4mm），常規(guī)的刀片厚度通常在 0.012 英寸（約 0.27mm），重力刀片（硬組織切片專(zhuān)用）厚度可達(dá) 0.033 英寸（約 0.75mm） 。實(shí)際的尺寸可能因?yàn)椴煌闹圃焐虝?huì)有很大的差別，其中可能有些刀片在寬度和厚度上無(wú)法適應(yīng)刀架。 請(qǐng)確保刀片和刀架之間兼容性。無(wú)涂層 vs.帶涂層：一次性刀片的表面可以帶有很薄的鍍層

25、或涂層。不同制造商可能采用不同的涂層，但是幾乎所有的涂層中都會(huì)含有聚四氟乙烯（PTFE ）類(lèi)聚合物中的一種，這是一種類(lèi)似Teflon 的環(huán)保型涂層。涂層的好處在于可以防止刀刃氧化，延長(zhǎng)刀片的使用壽命并且可以降低摩擦力從而減少切片壓力。但是如果涂層過(guò)厚也會(huì)有壞處，最初的幾張切片可能卷曲或者打卷， 給人造成刀片 “過(guò)于鋒利 ”的感覺(jué)。當(dāng)?shù)?片切過(guò)數(shù)張片子后，涂層被磨去部分，則卷曲的現(xiàn)象會(huì)有所改善。在一些物體的表面摩擦刀片這種方法不是很值得推薦。有時(shí)候，降低涂 層所造成的摩擦反而會(huì)導(dǎo)致連片的困難，切片很容易互相分開(kāi)。無(wú)涂層的寬型或窄型刀片和有涂層刀片除了表面缺少保護(hù)性涂層，通常是一樣的，前者往往涂抹

26、優(yōu)質(zhì)的油。這種無(wú)涂層刀片有時(shí)也被稱(chēng)作 “經(jīng)濟(jì)型 ”刀片，因?yàn)樗鼈儽扔型繉拥镀瑑r(jià)格便宜。刀刃夾角：絕大多數(shù)窄型刀片會(huì)有一個(gè)大約 35°的夾角(每個(gè)側(cè)面各自?shī)A角則為 17½ )°，而寬型刀片的夾角為 32°到 35°。在 制造過(guò)程中，夾角可能會(huì)有細(xì)微的變化。刀片一側(cè)的夾角甚至可能和另一側(cè)的角度略有不同。 這就可以解釋為什么有時(shí)候刀片某一面切片 的效果比另一面好，或者不及另一面。切片機(jī)上的角度調(diào)節(jié)：不論是嵌入鋼刀架內(nèi)的一次性刀片夾還是一體化的刀片夾都會(huì)有一個(gè)用來(lái)調(diào)節(jié)間隙角的讀數(shù)指示，這個(gè)讀數(shù)在不同的切片機(jī)，不同的刀架 可以有所不同。當(dāng)使用

27、不同制造商提供的刀片或者使用不同高度的刀片時(shí)， 間隙角可能會(huì)需要進(jìn)行相應(yīng)調(diào)節(jié)。確定一個(gè)適當(dāng)?shù)慕嵌茸詈玫?方法可能就是 “試錯(cuò)法 ”。（試錯(cuò)法即不斷嘗試并排除錯(cuò)誤可能的方法）。刀片壓板的狀態(tài)：壓板的作用是將一次性刀片固定在恰當(dāng)?shù)奈恢?，因此壓力板必須保持清潔，也不能有任何損壞。如果在壓板表面有明顯可見(jiàn)的弧度，而這 部分又會(huì)和刀片接觸，并導(dǎo)致刀片發(fā)生彎曲。因此刀刃會(huì)以一種不正常的方式接觸阻止塊的表面。同樣，刀片上的碎屑也會(huì)導(dǎo)致同樣的效 果。刀夾的夾力：作用在刀片上的壓力必須均勻分布在刀片被覆蓋的全部長(zhǎng)度。力度必須足夠大以確保刀片的穩(wěn)定，防止任何可能的振動(dòng)。但是也不能夾持 過(guò)緊，否則會(huì)導(dǎo)致刀片彎曲而切

28、出不規(guī)則的切片。 為了達(dá)到這種微妙的平衡， 需要在反復(fù)實(shí)踐中提高技巧。3.正確的切片技術(shù)：3.1 人體工程學(xué)和因工造成的肌肉骨骼損傷：工作習(xí)慣合并日常生活方式很可能導(dǎo)致職業(yè)相關(guān)的肌肉骨骼損傷，比如腕管綜合癥，肌腱炎和腱鞘炎。不恰當(dāng)使用切片機(jī)完全可以造成潛在的傷害。在這里，我們會(huì)介紹一些實(shí)用的小訣竅：a.添置一把符合人體工程學(xué)的座椅。調(diào)節(jié)座椅高度，保證手可以輕松夠到手輪，且不占用擱置腿腳的空間。如果腳不能踏到地板，請(qǐng)使用腳凳。b.將水浴缸放置在切片機(jī)區(qū)域旁L(fǎng) 型的延伸段， 這樣只需要稍微轉(zhuǎn)動(dòng)身體和椅子就可以夠到水浴缸，不必頻繁傾斜身體。c.轉(zhuǎn)動(dòng)手輪最好完成一周的旋轉(zhuǎn)。最好不要以擺動(dòng)方式搖手輪（即

29、半刀法）。d.將精確進(jìn)樣手輪的把手的直徑增加到 1.5 英寸（約 35mm）。包裹把手的材料可以是有彈性并光滑的物質(zhì)。e.使手臂盡量貼近身體，不要將手靠在工作臺(tái)的邊緣或者任何尖銳的表面。不要將肘部外展側(cè)伸出。f. 在進(jìn)行切片時(shí)，保持肩膀處于放松的位置。不要扛著肩膀工作。盡量使頸部的肌肉放松。頸部肌肉處于緊張狀態(tài)會(huì)阻斷該區(qū)域的血液循環(huán)，導(dǎo)致神經(jīng)被壓迫。g.經(jīng)常稍事休息。做體操或者自我按摩以便恢復(fù)血液循環(huán)并消除緊張。h.如果可能，盡量采用自動(dòng)化。3.2 切片機(jī)的設(shè)置：在切片機(jī)上設(shè)定的切片厚度即表示了手輪旋轉(zhuǎn)一圈后樣品頭精確進(jìn)樣的距離。但這并不意味每張切片一定是這個(gè)厚度。有很多因素都會(huì)影響到切片的厚

30、度，比如溫度、 切片速度、切片壓力、刀的角度、儀器的潤(rùn)滑程度等。判斷切片厚度的最好辦法就是在顯微鏡下觀察。當(dāng)然，有經(jīng)驗(yàn)的病理技師在切片時(shí)，將切片漂浮在水浴缸中，此時(shí)就可以隨時(shí)識(shí)別切片厚度的變化。3.3 樣品塊的放置（水平vs.垂直定位）：樣品的定位往往由操作者的判斷來(lái)決定，但是實(shí)際情況往往是樣品塊的底部先接觸到刀刃，因此定位應(yīng)當(dāng)根據(jù)這個(gè)實(shí)際情況出發(fā)。如果樣品是包埋在塑料包埋盒上的話(huà)，應(yīng)當(dāng)確保夾具均勻夾住兩個(gè)對(duì)等的表面，即包埋的兩個(gè)側(cè)面。如果樣品夾豎直夾住包埋盒印有標(biāo)記的那個(gè)側(cè)面，這會(huì)導(dǎo)致一些樣品變得不穩(wěn)定，因?yàn)樽鳂?biāo)記的側(cè)面往往帶有角度并且面積相對(duì)較小。如果切片時(shí)發(fā)現(xiàn)效果很差，可以嘗試將樣品旋轉(zhuǎn) 90°。3.4 刀的角度：當(dāng)?shù)痘蛘叩镀惭b在切片機(jī)合適的刀架上以后，刀架必須有一定的傾斜度，這樣刀的夾角才能和樣品表面之間形成一個(gè)間隙，這就是間隙角。如果傾斜度不恰當(dāng)，刀刃夾角會(huì)因?yàn)樾ㄈ胄?yīng)而對(duì)組織塊的表面造成擠壓，就會(huì)導(dǎo)致跳片或者厚薄不均切片的產(chǎn)生。間隙角的讀數(shù)在不同的切片機(jī)會(huì)有各種差別。使用不同的刀或者不同的刀片或者更換不同制造商，都需要對(duì)間隙角進(jìn)行略微的調(diào)節(jié)。要找倒合適的角度，最好的辦法就是試錯(cuò)法。3.5 修片厚度：在修塊的時(shí)候一定要非常小心，避免把蠟塊中的組織不小心剝離