皮膚刺激,皮內(nèi)試驗(yàn)ppt課件

1、刺激試驗(yàn)刺激試驗(yàn) 刺激是不涉及免疫學(xué)機(jī)制的一次、多次或持續(xù)與試驗(yàn)材料接觸所引起的局部炎癥反應(yīng)。1；.皮膚刺激試驗(yàn)皮膚刺激試驗(yàn) 評價材料在試驗(yàn)條件下產(chǎn)生皮膚刺激反應(yīng)的潛在性。 家兔為首選，預(yù)期無反應(yīng)，可直接使用3家兔。2；.試驗(yàn)材料與儀器試驗(yàn)材料與儀器 天平精度 0.01或0.1g 供試品稱量用精度 0.1或1mg 試劑稱量用精度 50g 試驗(yàn)用兔稱量用兔固定裝置、手術(shù)剪刀、推子、游標(biāo)卡尺、稱量瓶、吸管、移液管、包扎帶、醫(yī)用紗布、燒杯、壓力蒸汽滅菌器。3；.試劑與器具滅菌試劑試劑 75%(V/V)乙醇、0.9氯化鈉注射液或其它規(guī)定的浸提介質(zhì)。器具滅菌器具滅菌與供試品接觸的所有器具應(yīng)采用可靠的方法

2、滅菌，置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121恒溫20分鐘，或置電熱干燥箱內(nèi)160干烤2h。4；.試驗(yàn)動物試驗(yàn)動物 應(yīng)使用清潔級健康、初成年的、未使用過的試驗(yàn)用（新西蘭）兔，雌雄兼用, 同一品系,同一飼養(yǎng)條件，體重應(yīng)不低于2kg。5；.試驗(yàn)用兔的抓取固定方法試驗(yàn)用兔的抓取固定方法試驗(yàn)用兔比較馴服不會咬人，但腳爪較尖應(yīng)避免兔抓傷。進(jìn)行刺激試驗(yàn)時，只需將兔抓牢或按住即可，抓兔的方法是用右手把兩耳輕輕地拿在手心，抓住頸后部的皮厚處，提取兔，然后用左手托住臀部，使兔的體重大部分落在左手上，不能單提兩耳、捉拿四肢、提抓腰部和背部。6；.預(yù)試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)試驗(yàn)材料應(yīng)使用1只動物進(jìn)行初試。 如動物出現(xiàn)清晰紅斑或水腫時，不必再進(jìn)行

3、其他試驗(yàn)。如試驗(yàn)動物沒有出現(xiàn)清晰的紅斑或水腫反應(yīng)時,應(yīng)至少再選用2只動物進(jìn)行試驗(yàn)。 7；.試試 驗(yàn)驗(yàn) 步步 驟驟8；.動物準(zhǔn)備 試驗(yàn)前一天, 將試驗(yàn)用兔人工固定或固定到固定裝置上，然后把背部脊柱兩側(cè)的被毛用手術(shù)剪粗剪后再用推子小心的把被毛去除干凈(約10cm15cm區(qū)域),作為試驗(yàn)和觀察部位。去毛過程應(yīng)確保動物皮膚健康無損傷。9；.試驗(yàn)方法試驗(yàn)前用75的(V/V)乙醇擦拭背部去毛區(qū)域，等變干后根據(jù)供試品的不同性狀選用不同的方法進(jìn)行操作。10；.粉劑或液體樣品 取0.5g或0.5mL的試驗(yàn)材料，直接涂抹到剃毛皮膚部位。 粉劑使用前用少量的水制成糊狀，有利于涂抹。 用25mm25mm透氣性好的敷料

4、敷貼涂抹樣品的皮膚部位, 然后敷料外層用紗布包裹，再用半封閉性包扎帶固定敷料和紗布4h以上。接觸期結(jié)束后依次取下包扎帶、紗布及敷料, 對接觸部位進(jìn)行標(biāo)記,用溫水清洗并擦干。11；.固體樣品研成粉末，試驗(yàn)材料可用水充分濕化以保證與皮膚良好的接觸性。用25mm25mm的透氣性好的敷料塊覆蓋材料接觸部位, 然后敷料外層用紗布包裹，再用半封閉性包扎帶固定敷料和紗布4h以上，依次取下包扎帶、紗布及敷料, 對接觸部位進(jìn)行標(biāo)記,用溫水清洗并擦干。12；.藥包材：鋁質(zhì)軟膠管：取試樣5 支，向每支加入標(biāo)示容量的0.9氯化鈉注射液，振蕩5分鐘后，合并提取液備用。一般材料：取平整部位表面積600cm2剪碎，加入氯化

5、鈉注射液100mL，70放置24小時后取出冷卻備用。 13；.0.9氯化鈉注射液及其浸提液 將浸提液滴到25mm25mm的4層紗布塊上(每塊約0.5mL), 按下圖所示部位敷貼于動物背部兩側(cè)。將滴有0.9氯化鈉注射液的紗布塊敷貼在對照接觸部位。 然后敷料外層用紗布包裹，再用半封閉性包扎帶固定敷料和紗布4h以上，依次取下包扎帶、紗布及敷料, 對接觸部位進(jìn)行標(biāo)記,用溫水清洗并擦干。14；.去毛的背部區(qū)域?qū)φ詹课还┰嚻凡课还┰嚻凡课粚φ詹课活^部尾部15；.結(jié)果觀察 在除去敷貼物后1h、24h、48h和72h記錄各接觸部位情況。如存在持久性損傷有必要延長觀察時間, 以評價這種損傷的可逆性或不可逆性,但

6、延長期不必超過14d。 按下表規(guī)定的分類系統(tǒng), 描述每一接觸部位在每一規(guī)定時間內(nèi)皮膚紅斑和水腫反應(yīng)情況并評分, 記錄結(jié)果以出具試驗(yàn)報告。16；.反應(yīng) 記 分 紅斑和焦痂形成 無紅斑 極輕微紅斑(勉強(qiáng)可見) 紅斑清晰 中度紅斑 重度紅斑(紫紅色) 至焦痂形成水腫形成 無水腫 極輕微水腫(勉強(qiáng)可見) 水腫清晰(腫起, 不超出區(qū)域邊緣) 中度水腫 (腫起約1mm)重度水腫(腫起超過1mm, 并超出接觸區(qū)) 0123401234 刺激最高記分 8 注: 記錄并報告皮膚部位的其他異常情況。 表14 觀察損傷情況及評分標(biāo)準(zhǔn)17；.反應(yīng)類型 平 均 記 分 極輕微輕度中度重度 0.0 0.4 0.5 1.9

7、2.0 4.95.0 8.0 表15皮膚刺激試驗(yàn)結(jié)果評價18；.結(jié)果評價按下列規(guī)定確定原發(fā)性刺激指數(shù)(PII)。 將每只動物在每一規(guī)定時間試驗(yàn)材料引起的紅斑與水腫的原發(fā)性刺激記分相加后再除以觀察總數(shù)(總數(shù)為6:2個計(jì)分類型和3個觀察期)。當(dāng)用0.9氯化鈉注射液對照時，計(jì)算出對照原發(fā)性刺激記分，將試驗(yàn)材料原發(fā)性刺激記分減去該記分，即得出每只動物原發(fā)性刺激記分。 使用24h、48h和72h的觀察數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算。試驗(yàn)之前或72h后的恢復(fù)觀察數(shù)據(jù)不用于計(jì)算。 每只動物的記分相加后除以動物總數(shù)即為原發(fā)性刺激指數(shù)。19；.皮內(nèi)刺激試驗(yàn)皮內(nèi)刺激試驗(yàn) 簡述簡述評價材料通過皮內(nèi)注射浸提液產(chǎn)生刺激反應(yīng)的潛在性。 應(yīng)

8、排除的試驗(yàn)材料應(yīng)排除的試驗(yàn)材料任何對皮膚、眼、粘膜組織有刺激的材料或產(chǎn)品, 如具有腐蝕性的強(qiáng)酸或強(qiáng)堿材料(pH2或11.5)不應(yīng)再進(jìn)行本試驗(yàn)。20；.試驗(yàn)材料與儀器試驗(yàn)材料與儀器天平 精度 0.01或0.1g 供試品稱量用精度 0.1或1mg 試劑稱量用精度 50g 試驗(yàn)用兔稱量用兔固定裝置、手術(shù)剪刀、推子、稱量瓶、吸管、移液管、注射器（2mL）、注射針（5、8）、燒杯、壓力蒸汽滅菌器。21；.試劑試劑75%(V/V)乙醇、0.9氯化鈉注射液、植物油或其它規(guī)定的溶劑。器具滅菌器具滅菌與供試品接觸的所有器具應(yīng)采用可靠的方法滅菌，置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121恒溫20分鐘，或置電熱干燥箱內(nèi)160干烤2h

9、。供試品制備供試品制備根據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定制備供試品。22；.試驗(yàn)動物試驗(yàn)動物應(yīng)使用清潔級健康、初成年的、未使用過的試驗(yàn)用（新西蘭）兔，雌雄兼用, 同一品系,同一飼養(yǎng)條件 體重不低于2kg。預(yù)試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)試驗(yàn)材料初試至少采用2只動物。初試反應(yīng)如可疑或不明確, 應(yīng)考慮進(jìn)行復(fù)試。23；.試驗(yàn)步驟試驗(yàn)步驟試驗(yàn)前一天，將試驗(yàn)用兔人工固定或固定到固定裝置上，然后把背部脊柱兩側(cè)的被毛用手術(shù)剪粗剪后再用推子小心的把被毛去除干凈(約10cm20cm區(qū)域),作為試驗(yàn)和觀察部位。去毛過程應(yīng)確保動物皮膚健康無損傷。試驗(yàn)前用75的(V/V)乙醇擦拭背部去毛區(qū)域，等變干后再進(jìn)行注射。在每只兔脊柱左側(cè)上面5個點(diǎn)(見下圖)用注

10、射器皮內(nèi)注射0.2mL0.9氯化鈉注射液制備的浸提供試液。在每只兔脊柱左側(cè)的下面五個點(diǎn)(見下圖) 用注射器皮內(nèi)注射0.2mL 0.9氯化鈉注射液對照液。在每只兔的脊柱右側(cè)上面五個點(diǎn)(見下圖2)用注射器注射0.2mL植物油制備的浸提供試液，右側(cè)下面五個點(diǎn)用注射器注射0.2mL植物油對照液。24；.1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 7 7 8 8 9 9 10101 1 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 7 7 8 8 9 9 1010注射0.2mL 0.9氯化鈉注射液制備的浸提供試液注射0.2mL 0.9氯化鈉注射液對照液注射0.2mL植物油制備的浸提供試液注射0.2mL注射

11、植物油對照液頭尾25；.注：有時我們應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)材料的粘性選用不同規(guī)格的注射針頭做皮內(nèi)注射。在不妨礙注射的前提下，應(yīng)盡量選用小號針頭。26；.27；.28；.29；.30；.31；. 24小時觀察32；.結(jié)果觀察結(jié)果觀察 注射后即刻和24h、48h和72h后觀察記錄各注射部位狀況。 按下表給出的分類系統(tǒng)對每一觀察期各注射部位的紅斑（ER）和水腫(ED)的組織反應(yīng)評分, 并記錄試驗(yàn)結(jié)果。油類液體皮內(nèi)注射常會引起炎癥反應(yīng)。在72h觀察時, 可靜脈注射適宜的活體染料, 如臺盼藍(lán)或伊文思藍(lán), 以顯示出刺激區(qū)域有助于反應(yīng)評價。33；.結(jié)果評價結(jié)果評價 按下列方法確定刺激指數(shù)。將每只動物在每一規(guī)定時間內(nèi)每種浸提液出現(xiàn)的紅斑與水腫的刺激記分相加,再除以觀察總數(shù)為試驗(yàn)材料刺激記分。對試劑對照注射部位也同樣評價。將試驗(yàn)材料刺激記分減去試劑對照的記分得出每只動物刺激記分, 用于計(jì)算刺激指數(shù)。注: 記錄并報告注射部位的其他異常情況34；.反 應(yīng)記 分 紅斑和焦痂形成 無紅斑 極輕微紅斑(勉強(qiáng)可見) 清晰紅斑 中度紅斑 重度紅斑(紫紅色) 至焦痂形成水腫形成 無水腫 極輕微水腫(勉強(qiáng)可見) 清晰水腫 (腫起, 不超出區(qū)域邊緣) 中度水腫(腫起約1mm) 重度水腫(腫起超過1mm, 并超出接觸區(qū)) 0123401234刺激最高記分 8注: 記錄并報告注射部位的其他異常情況。 表17 刺激記分