動(dòng)物組織各種固定液及優(yōu)缺點(diǎn)

1、螃動(dòng)物組織各種固定液及優(yōu)缺點(diǎn)罿編號(hào)肅類別薃名字袂配方蒈優(yōu)缺點(diǎn)或備注螅甲醛：從組織學(xué)的觀點(diǎn)來說，甲醛是一種良好的固定劑，它有很多的優(yōu)點(diǎn):1.組織收縮較少，損傷少，保存固有物質(zhì)好.2.固定均勻，穿透力強(qiáng)3 能使組織硬化增進(jìn)組織彈性，有利于切片.4.能保存脂肪及脂類物質(zhì).5.成本較低.蚄缺點(diǎn):1.雜質(zhì)含量較多，如甲醇，可鈍化酶類，影響反應(yīng).2.含有微量甲酸，導(dǎo)致固定液酸變，影響染色.3.可產(chǎn)生福爾馬林色素，影響觀祭.4.不能固定尿酸和糖類物質(zhì).5.容易揮發(fā)，污染環(huán)境，可導(dǎo)致標(biāo)本干涸.6.可長(zhǎng)期存在于固定過的組織上有人做過實(shí)驗(yàn)，組織用甲醛固定后在流水中沖洗5小時(shí)后，仍留有相當(dāng)多的甲醛與蛋白質(zhì)相結(jié)合，臨

2、床活檢不用因此要特別指出的是，在其后的各種技術(shù)操作中，要特別注意到甲醛的存在，必須要想辦法除去它，否則將會(huì)給各種染色造成影響，甚至導(dǎo)致失敗。羀1袈薆10% 緩沖福爾馬林蚆甲醛100ml蒸餾水莂該固定液是當(dāng)今流行的固定液，因它對(duì)組織固固定液900ml NaH 2PO4定較好,損傷較少，因?qū)ζ浜蟮母鞣矫嫜芯慷驾^4g Na 2HPO 4好,尤其是對(duì)免疫組化的染色.6.5g芇2芆蒃10%福爾馬林固定蒁甲醛100 ml肆這是一種最簡(jiǎn)單的固定液，適合于邊遠(yuǎn)地區(qū)液攜帶的固定液，但由于它的單一性，因此，只羀自來水900ml要有條件的單位都不要求使用這種固定液。薅3袃莀10%福爾馬林鹽固螇甲醛100ml自來水莂

3、先將Nacl溶于水，再加入甲醛。這也是一種定液900ml Nacl 9 克較為簡(jiǎn)單的固定液，但由于加入Nacl，它是j一種重金屬鹽物質(zhì)，加入了它可促進(jìn)和改善染色，增加染色的強(qiáng)度羈4衿蕆Bouin氏固定液莃苦味酸飽和水溶液肀該固定液中的冰醋酸，對(duì)膠原纖維等組織有 "175ml甲醛 2 ml冰膨脹作用。而甲醛對(duì)組織有收縮作用。兩種試醋酸5 ml劑的混合使用，用以抵消彼此間的副作用。使 21組織固定達(dá)到優(yōu)良的固定水平艿5羋蒅醛糖鈣固定液蒂甲醛100ml羈先將蔗糖和乙酸鈣溶于蒸鎦水，后加入甲醛。蔗糖300ml該固定液對(duì)于做酶的組織化學(xué)的研究效果較乙酸鈣20g好，組織固定后，做冰凍切片，再給予

4、顯示。蒸鎦水90ml蚈節(jié)薁酒精：優(yōu)點(diǎn)：1、可保存尿酸結(jié)晶和糖原等物質(zhì)。2、能在任何比例的情況下與水混合，如組織的脫水，切片染色前后都離不開酒精，通常都用95%的工業(yè)酒精來配成60%、70%、80%、90%等不同的濃度來使用。3、4、肇可溶解苯類物質(zhì)為染色步驟中的橋梁試劑。常規(guī)活檢等切片上的石蠟必須除去，才能進(jìn)行染色，能除去石蠟的物質(zhì)有苯及汽油等，因此稱它為橋梁試劑。4、能除去切片上的水份，使切片無水化。切片經(jīng)染色后，到無水酒精中已完全無水，這樣處理對(duì)于切片的保存是有好處的，否則，切片將會(huì)褪色。5，可與其它試劑配成多種的混合固定液，加快固定，它的缺點(diǎn)是：1、可溶解脂類物質(zhì)，凡要證明組織是否含有脂

5、類和類脂物時(shí)，切不能用含有酒精的固定液去固定組織，也不能用石蠟切片。2、對(duì)組織收縮較大，不宜作單純固定液。3、滲透力不強(qiáng)。當(dāng)用酒精固定組織時(shí)，組織表面很快就被固定，并形成了一層蛋白膜，這層膜可阻擋固定液向里滲透，造成了中間組織固 定不佳的現(xiàn)象。4、可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡經(jīng)酒精固定的組織，核的染色都不好。5、可脫去切片上已著染的各種顏色，切片經(jīng)染色后，一是必須洗去多余的染液，二是必須脫去切片上的水。在用酒精洗切片時(shí)，必 須仔細(xì)地掌握顯微鏡下觀察，還要掌握酒精的濃度，低濃底的酒精脫色力強(qiáng)，稍不注意，便可脫去切片上大部分的 顏色。切片脫水時(shí)，要較快地通過低濃度的酒精，以免使已著染的顏色被脫

6、去。螈芃6羃螁Carnoy 氏固定液芅氯仿300ml肁該固定液固定組織快速，在固定的冋時(shí)兼有冰醋酸100 ml95% 酒精 600 ml脫水的作用。溶液中的氯仿和酒精，對(duì)組織的 收縮較厲害，但應(yīng)用了冰醋酸，這種現(xiàn)象便被蒞中和去芀7膂AF固定液膀甲醛 100 ml冰醋蠆這種固定液的作用與上液有相似之處，但要 酸50 ml 95%酒精注意的是，凡使用含有醋酸的固定液，其脫水 |850 ml用具不能使用銅制的脫水盒，因冰醋酸跟銅離 子起反應(yīng)，生成醋酸銅，這種物質(zhì)可沉淀于組 織間，可破壞組織中的抗原，造成免疫組化檢測(cè)的失敗。應(yīng)用時(shí)應(yīng)多加注意蚅冰醋酸：優(yōu)點(diǎn)有：1、能迅速固定染色質(zhì)，助于染色，用醋酸配成的

7、固定液，其作用快，固定效果均勻，對(duì)于染色 質(zhì)的固定快，因此，用其作固定的切片染色好， 在配其它染色液如明磯蘇木素和伊紅時(shí)，常常需加入一定量的醋酸，以促進(jìn)染色。2、能使組織尤其是富含纖維的組織膨脹。各種固定液對(duì)組織都有收縮的作用，尤其是對(duì)富含纖維的 組織。而它不但不會(huì)使組織收縮，而且還會(huì)令許多組織發(fā)生膨脹的作用。不足之處：1、不能作為單一的固定劑。膄2、不能凝固蛋白質(zhì)，不能保存白細(xì)胞顆粒，紅細(xì)胞及含血鐵黃素等。薂聿8蒆Ze nker 氏固定液：重鉻酸鉀25G升汞50G 蒸餾水1000ml 冰醋酸50ml先將重鉻酸鉀和升汞溶于水中，尢其是重鉻酸 鉀，應(yīng)用熱水或加溫的方法將其溶解，然后過 濾貯存于帶

8、蓋的玻璃瓶中以防失效。臨用時(shí)， 取貯存液950ml ,加入50ml的冰醋酸，即可 使用。應(yīng)用該固定液固定的組織，一般不要超 過24h，取出組織，流水沖冼12小時(shí)以上，然 后保存于75%-80%的酒精中，在切片染色前，必須用碘除去汞鹽的沉著。應(yīng)用該固定液的組織，細(xì)胞核及細(xì)胞漿染色十分清晰，特別 是要顯示骨骼肌的橫紋時(shí)，應(yīng)用本液可獲得滿 意的結(jié)果，但由于其含有醋酸，故不能用于保 存細(xì)胞顆粒，紅細(xì)胞及含鐵血黃素。9Flemmi ng氏液2%酸水溶液200ml1% 鉻酸水溶液700ml冰醋酸100ml該液中的奧酸對(duì)脂肪組織既有固定作用，又有 染色作用，對(duì)有髓神經(jīng)纖維也有固定兼染髓鞘 的作用。如果做 H

9、E的染色，該液不適合。應(yīng) 用該液固定的組織，切片不能太大過厚，一般 1-2毫米厚固定時(shí)間1-3天，后經(jīng)水洗，保存 于80%酒精中，除上述兩液體外，還有Bouin 氏液和Carnoy氏液等重鉻酸鉀： 它的優(yōu)點(diǎn)是：1、能固定脂肪及類脂物。 2、為髓鞘及嗜鉻細(xì)胞優(yōu)良的媒染劑。3、可配成多種的混合固定液足之處有：1、不能沉淀蛋白質(zhì)，它必須和醋酸配成混合固定液，方能發(fā)揮作用，產(chǎn)生鉻酸，沉淀蛋白 質(zhì)。2、具有毒性及產(chǎn)生高溫。在配制液體時(shí)，如清洗劑，當(dāng)加入硫酸時(shí)，可產(chǎn)生很高的溫度，并揮發(fā)出刺鼻的氣 體，應(yīng)特別注意。3、它不能長(zhǎng)期固定組織，經(jīng)它固定的組織應(yīng)充分水洗后保存于80%酒精中。10Helly氏液重鉻酸

10、鉀25g升汞50g 蒸餾水1000ml臨用時(shí)加入甲醛，因其加入后于24小時(shí)后可|發(fā)生沉淀而失效，因用時(shí)應(yīng)特別注意。該液是白細(xì)胞顆粒的優(yōu)良固定劑，因此凡為白細(xì)胞或 J甲醛50ml造血器官如骨髓，脾臟及患先天性梅毒之肝臟等，可用此液固定。此液原配方要求加入硫酸鈉，但據(jù)我們經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為，硫酸鈉在液中對(duì)組織無任何作用，故省去11Orth氏液重鉻酸鉀20g 蒸餾水1000ml甲醛100ml該液固定組織較緩慢，不適合于作臨床的活檢 固定液，4毫米厚的組織固定時(shí)間需 36-72小 時(shí)，該液對(duì)于染色質(zhì)的固定好，顯示清晰，但 可溶解部分紅細(xì)胞和含鐵血黃素。重鉻酸鉀的不足之處有：1、不能沉淀蛋白質(zhì)，它必須和醋酸配成混合 固定液，方能發(fā)揮作用，產(chǎn)生鉻酸，沉淀蛋白 質(zhì)。2