臨床醫(yī)學(xué)生化理論課教案(分子生物學(xué)常用技術(shù))

1、學(xué)習(xí)必備歡迎下載江西醫(yī)學(xué)院上饒分院理論課教案課程名稱：生物化學(xué)任課教師：專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)班級(jí)授課時(shí)間：章十二內(nèi)容分子生物學(xué)常用技術(shù)節(jié)1、熟悉分子雜交的概念；目2、熟悉 PCR 技術(shù)原理；的要3、熟悉 PCR 技術(shù)應(yīng)用范圍求4、了解分子雜交與印漬技術(shù)的種類5、了解人類基因組計(jì)劃相關(guān)內(nèi)容重重點(diǎn)：分子雜交的概念； PCR 技術(shù)原理； PCR 技術(shù)應(yīng)用范點(diǎn)圍。與難難點(diǎn)：分子雜交與印漬技術(shù)的種類；人類基因組計(jì)劃相關(guān)內(nèi)點(diǎn)容。教具學(xué)習(xí)必備歡迎下載第一節(jié)分子雜交與印漬技術(shù)一分子雜交分子雜交法這是最早用于性病診斷的重組DNA 技術(shù)。 基本原理是具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強(qiáng)度等）可按堿

2、基互補(bǔ)原則形成雙鏈，此雜交過(guò)程是高度特異的。雜交的雙方是待測(cè)核酸及探針。待測(cè)核酸序列為性病病原體基因組或質(zhì)粒DNA 。探針以放射核素或非放射性核素標(biāo)記，以利于雜交信號(hào)的檢測(cè)。所謂雜交 （hydridization）指兩個(gè)以上的分子因具有相近的化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)而在適宜的條件下形成雜交體（hybrid ），雜交體中的分子不是來(lái)自一個(gè)二聚體分子。同一個(gè)二聚體中的兩個(gè)分子在變性解離后重組合稱為復(fù)性 。利用兩條不同來(lái)源的多核苷酸鏈之間的互補(bǔ)性而使它們形成雜交體雙鏈叫核酸雜交。（一）斑點(diǎn)雜交（二） Southern blot（三） Northern blot（四）原位雜交（insitu hybridizat

3、ion）二印漬技術(shù)（一） DNA印漬技術(shù)即（二） RNA印漬技術(shù)即Southern blot 雜交技術(shù)即 DNA-DNA 雜交技術(shù) Northern blot 雜交技術(shù)即 RNA-DNA 雜交技術(shù)教（三）蛋白質(zhì)的印漬技術(shù)即免疫印漬技術(shù)即利用抗原抗體反應(yīng)，檢測(cè)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素薄膜上的特異性的蛋白質(zhì)。學(xué)第二節(jié) PCR技術(shù)過(guò)一、 PCR 的工作原理PCR 技術(shù)原理是在了解DNA 一級(jí)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)引物（ primer 或 sense ，人工程合成）， DNA 多聚酶可識(shí)別并結(jié)合引物，以單鏈DNA為模板， dNTP 為底物，設(shè)合成其互補(bǔ)鏈。 通過(guò)反復(fù)變性， 反復(fù)合成互補(bǔ)鏈的過(guò)程，達(dá)到 DNA 擴(kuò)增的目

4、的。計(jì)二、 PCR的主要用途歸納起來(lái)，主要應(yīng)用于兩方面；HIV 、HPV 、 HBV 、（一）檢測(cè)外源懷基因片段，集中在病毒感染的檢查上，如CMV 等；（二）內(nèi)源性基因片段， 如人體的單基因病、 重組基因、 易位的染色體、 Ig 的 mRNA 片段、癌基因片段等。如 PCR-SSCP 檢測(cè)點(diǎn)突變已見(jiàn)報(bào)道于人類大部分的腫瘤組織或細(xì)胞，如乳腺癌、食管癌、肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌等。檢測(cè)的基因包括多種癌基因及抑癌基因，也是檢測(cè)抑癌基因 p53 突變最常用的方法， 僅檢測(cè)第 5-8 外顯子即可發(fā)現(xiàn) 85以上的 p53 基因突變。 由于該法簡(jiǎn)便快速， 特別適合大樣本基因突變研究的篩選工作。 PCR 和分子克隆 。第三節(jié)核酸序列分析核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)分析是基因分析最直接的第一手資料。目前DNA 、RNA 以及蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)分析中，DNA 的堿基序列分析方法多樣、簡(jiǎn)單、快速。下面就M13 噬菌體 -雙脫氧核苷酸（ddNTP ）的 DNA 測(cè)序法介紹如下。（多媒體演示）第四節(jié)人類基因組計(jì)劃的研究現(xiàn)狀與展望一、研究現(xiàn)狀（一）人類基因組測(cè)序（二）疾病基因的定位克隆學(xué)習(xí)必備歡迎下載（三）多基因病的研究（四）中國(guó)的人類基因組研究二、展望（一） 生命科學(xué)工業(yè)的形成5、myb 家族：編碼核蛋白， 能與