國家自然科學(xué)基金2

1、項(xiàng)目類別投送學(xué)科代碼1科 學(xué) 部 編 號(hào)CC03031102國家自然科學(xué)基金申 請(qǐng) 書項(xiàng)目名稱：口腔癌肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的篩選及其核酸疫苗的研究申 請(qǐng) 者：所在單位：郵政編碼：通訊地址：電 話：傳 真：申請(qǐng)日期：國 家 自 然 科 學(xué) 基 金 委 員 會(huì) 19 填 報(bào) 說 明一、填寫申請(qǐng)書前，請(qǐng)先查閱國家自然科學(xué)基金有關(guān)項(xiàng)目申請(qǐng)辦法及規(guī)定。申請(qǐng)書各項(xiàng)內(nèi)容，要實(shí)事求是，逐條認(rèn)真填寫。表達(dá)要明確、嚴(yán)謹(jǐn)，字跡要清晰易辨。外來語要同時(shí)用原文和中文表達(dá)。第一次出現(xiàn)的縮寫詞，須注出全稱。二、申請(qǐng)書為十六開本，復(fù)印時(shí)用B5復(fù)印紙，于左側(cè)裝訂成冊(cè)。第三頁起各欄空格不夠時(shí)，請(qǐng)自行加頁。一式六份（至少一份為原件

2、），由所在單位審查簽署意見后，按申報(bào)學(xué)科投送國家自然科學(xué)基金委員會(huì)對(duì)口科學(xué)部。地區(qū)科學(xué)基金項(xiàng)目，申請(qǐng)書另報(bào)送省（自治區(qū)）科委一份原件。三、封面上右上角“科學(xué)部編號(hào)”由對(duì)口科學(xué)部填寫，項(xiàng)目類別和申報(bào)學(xué)科代碼1由申請(qǐng)者填寫。四、申請(qǐng)者和項(xiàng)目組中具有高級(jí)專業(yè)技術(shù)職務(wù)的主要成員申請(qǐng)（含參加）的項(xiàng)目數(shù)，連同在研的國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目數(shù)(不含重點(diǎn)項(xiàng)目、重大項(xiàng)目)，不得超過兩項(xiàng)。五、 同一申請(qǐng)者研究內(nèi)容相近的項(xiàng)目，只允許報(bào)送一個(gè)科學(xué)部。六、 申請(qǐng)者可因同類項(xiàng)目競爭等原因,提出不宜評(píng)議本項(xiàng)目的專家名單（姓名與單位，3人以內(nèi)）,附另頁于申請(qǐng)書原件中，供科學(xué)部選擇同行評(píng)議人時(shí)參考?？茖W(xué)部將對(duì)此信息保密。七、 國家

3、自然科學(xué)基金委員會(huì)通信地址:北京海淀區(qū)花園北路35號(hào)東門 郵政編碼：100083一、簡表名中文口腔癌肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的篩選及其核酸疫苗的研究研稱英文 Screen and nucleic acid immunization of lung highly metastatic related antigen gene in oral cancer ccancercancer究類別 A. 自由申請(qǐng) B. 高技術(shù)探索 C. 青年 D. 地區(qū) E 重大 F. 重點(diǎn) H. 專項(xiàng) AAAC 高技術(shù)探索 項(xiàng)目主題號(hào)項(xiàng)申報(bào)名稱1口 腔 頜 面 外 科 學(xué)名稱2A. 基礎(chǔ)研究目學(xué)科代碼1C03031102代

4、碼2B. 應(yīng)用基礎(chǔ)B申請(qǐng)金額所用實(shí)驗(yàn)室姓中文名拼音申請(qǐng)專業(yè)技術(shù)職務(wù)名稱代碼所名稱者在單性 質(zhì)位所在地總?cè)藬?shù)6主姓 名簽 字項(xiàng)要何榮根成陳萬濤鄧永強(qiáng)目員林李嵩周曉健組不含申研究內(nèi)容和意義摘要采用生物芯片技術(shù),對(duì)人腺樣囊性癌的肺低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系及其高轉(zhuǎn)移克隆株進(jìn)行大規(guī)模的基因表達(dá)定量對(duì)比分析,篩選鑒定肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因,設(shè)計(jì)構(gòu)建同源的核酸疫苗,建立動(dòng)物模型,運(yùn)用分子外科轉(zhuǎn)基因技術(shù)將核酸疫苗導(dǎo)入動(dòng)物模型中,分析其抗腫瘤免疫效果,進(jìn)一步闡明惡性腫瘤的肺轉(zhuǎn)移機(jī)理,尋找新的有效靶位點(diǎn),為防治癌轉(zhuǎn)移提供新方法。主題詞1.主題詞數(shù)量不多于3個(gè)；2.主題詞之間空一格（英文用/分隔）中文腫瘤轉(zhuǎn)移基因英文 tumor

5、 / metastasis / gene簡 表 填 寫 要 求一、簡表內(nèi)容將輸入計(jì)算機(jī)，必須逐項(xiàng)認(rèn)真填寫，采用國家公布的標(biāo)準(zhǔn)簡化漢字。簡表中所有代碼以最新發(fā)布的國家自然科學(xué)基金申請(qǐng)項(xiàng)目分類目錄及代碼為準(zhǔn)填寫。高技術(shù)探索課題主題號(hào)按高技術(shù)新概念新構(gòu)思課題項(xiàng)目指南中主題號(hào)填寫，申請(qǐng)其重點(diǎn)項(xiàng)目時(shí)項(xiàng)目類別也填寫B(tài)，并在申請(qǐng)書封面右上角加注“高技術(shù)探索課題重點(diǎn)項(xiàng)目”。二、凡選擇性欄目,將相應(yīng)提示符A、B等之一填入該欄的右下角。三、部分欄目填寫要求：項(xiàng)目名稱應(yīng)確切反映研究內(nèi)容和范圍,最多不能超過25個(gè)漢字(包括標(biāo)點(diǎn)符號(hào))?；A(chǔ)研究指以認(rèn)識(shí)自然現(xiàn)象、探索自然規(guī)律為目的的,不直接考慮應(yīng)用目標(biāo)的研究活動(dòng)。應(yīng)用基

6、礎(chǔ)研究指有廣泛應(yīng)用前景，但以獲取新原理、新技術(shù)、新方法為主要目的的研究。報(bào)審學(xué)科申請(qǐng)項(xiàng)目所屬的最基礎(chǔ)學(xué)科。如涉及多學(xué)科可填寫兩個(gè),先填為主學(xué)科。申請(qǐng)金額以萬元為單位,用阿拉伯?dāng)?shù)字表示,注意小數(shù)點(diǎn)。起止年月起始時(shí)間從申請(qǐng)的次年的1月算起。完成時(shí)間為完成年度的12月。所用的實(shí)驗(yàn)室系指研究項(xiàng)目將利用的實(shí)驗(yàn)室,僅填寫國家計(jì)委批準(zhǔn)的國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室或部門批準(zhǔn)的開放實(shí)驗(yàn)室。所在單位名稱及代碼按單位公章填寫全稱。例如“中國科學(xué)院西安光學(xué)精密機(jī)械研究所”不得填寫“中科院西安光機(jī)所”或“西安光機(jī)所”。全稱中的數(shù)字,一律寫中文，例如：航空航天工業(yè)部七O一研究所。 首次申請(qǐng)國家自然科學(xué)基金的單位,尚未編入單位代碼,其

7、代碼暫不填。參加單位數(shù)指研究項(xiàng)目組成員所在單位數(shù),包括主持單位和合作單位,以阿拉伯?dāng)?shù)字表示。項(xiàng)目組主要成員指在項(xiàng)目組內(nèi)對(duì)學(xué)術(shù)思想、技術(shù)路線的制定與理論分析及對(duì)項(xiàng)目的完成起主要作用的人員。本欄雙線右側(cè)內(nèi)容不輸入計(jì)算機(jī)。研究內(nèi)容和意義摘要與主題詞均錄入軟盤。二、立論依據(jù)(包括項(xiàng)目的研究意義、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析,并附主要的參考文獻(xiàn)及出處)對(duì)基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合國際科學(xué)發(fā)展趨勢(shì)，論述項(xiàng)目的科學(xué)意義；對(duì)應(yīng)用基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合科學(xué)前沿，圍繞國民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展中的重要科技問題，論述其應(yīng)用前景。 項(xiàng)目的科學(xué)意義 惡性腫瘤肺轉(zhuǎn)移的防治是臨床上進(jìn)一步提高患者生存率和治愈率的關(guān)鍵所在，具備肺轉(zhuǎn)移潛能的癌細(xì)胞亞群是腫瘤

8、組織與宿主組織之間長期相互作用、相互選擇的結(jié)果,在此過程中,這些癌細(xì)胞亞群產(chǎn)生了不同于其它亞群的特點(diǎn),包括轉(zhuǎn)移相關(guān)基因及由其所決定的細(xì)胞和群體水平的特點(diǎn),其中，肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因是一個(gè)相當(dāng)重要的方面1，因而，篩選和鑒定肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因，有助于深入理解和闡明肺轉(zhuǎn)移的機(jī)制。在此基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)和構(gòu)建有效的核酸疫苗，發(fā)展緊密結(jié)合臨床實(shí)際的轉(zhuǎn)染方法，激活機(jī)體的特異性主動(dòng)免疫，必將對(duì)殺傷肺高轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞亞群，進(jìn)而控制肺轉(zhuǎn)移有十分重要的意義。 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析 迄今為止,與口腔癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因只局限在P53 C-erB-2nm23等少數(shù)幾個(gè)基因上2,其根本原因在于以往的研究方法受到分子生物學(xué)技術(shù)的

9、極大限制,只能研究單個(gè)或少數(shù)幾個(gè)基因。1996年, 在人類基因組計(jì)劃的研究中，Steven Fodor等3充分結(jié)合并靈活運(yùn)用了計(jì)算機(jī)、DNA合成、探針雜交、照相平板印刷、激光共聚焦掃描等技術(shù),創(chuàng)造了完整的DNA生物芯片,可同時(shí)定量檢測(cè)成千上萬個(gè)基因的表達(dá)譜,結(jié)合生物信息學(xué)可從整體上分析疾病。1998年，Gress等4采用含20,736個(gè)基因片段的DNA芯片,檢查了胰腺癌細(xì)胞株、胰腺癌組織與對(duì)照胰腺組織的基因表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)胰腺癌存在129個(gè)新基因序列和97個(gè)EST,從而找出了形成胰腺癌惡性表型的相關(guān)基因。 現(xiàn)階段，國內(nèi)已建立DNA生物芯片技術(shù)和人腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC-2及其肺高轉(zhuǎn)移克隆株ACC-

10、M5，我們采用含14，000個(gè)基因片段的DNA生物芯片首次對(duì)遺傳背景相同而生物學(xué)行為不同的ACC-2和ACC-M進(jìn)行了大規(guī)模的基因表達(dá)定量對(duì)比分析，結(jié)果表明，低轉(zhuǎn)移性的ACC2細(xì)胞系和肺高轉(zhuǎn)移性的ACCM細(xì)胞株比較，有顯著差異的基因36個(gè)，有差異的基因213個(gè)。這些基因涉及跨膜蛋白、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞代謝過程等諸方面。其中的肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因可通過生物信息學(xué)分析、反義核酸、血小板凝集試驗(yàn)和裸小鼠移植瘤肺轉(zhuǎn)移模型來篩選和鑒定。 對(duì)腫瘤抗原加工遞呈過程和機(jī)體免疫反應(yīng)的深入研究表明,影響腫瘤免疫治療效果不理想的重要原因在于腫瘤相關(guān)抗原是正常細(xì)胞中有或曾經(jīng)有表達(dá)的蛋白質(zhì),只是在腫瘤細(xì)胞中有不適當(dāng)?shù)谋?/p>

11、達(dá),因而引起了機(jī)體的免疫耐受,為了克服免疫耐受,1998年Disis等6采用同源的人HER-2/neu蛋白免疫小鼠,誘導(dǎo)了比使用小鼠自身neu蛋白大得多的機(jī)體免疫。同時(shí)發(fā)現(xiàn)不使用完整的腫瘤抗原,而只使用腫瘤抗原多肽片段,能更有效地誘發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)。但以上研究均采用的是肽疫苗，近年來發(fā)展的核酸疫苗因安全、熱穩(wěn)定和能引發(fā)持久的細(xì)胞和體液免疫等特點(diǎn),從而比肽疫苗更具發(fā)展?jié)摿?。 核酸疫苗集中了減毒疫苗和亞單位疫苗的優(yōu)點(diǎn),既可以不斷表達(dá)抗原蛋白,又可以克隆所需基因片段,以激發(fā)理想的免疫反應(yīng),國內(nèi)外對(duì)以T細(xì)胞識(shí)別的腫瘤抗原為中心的抗腫瘤核酸疫苗免疫治療進(jìn)行了大量的研究8.9,表明能誘發(fā)機(jī)體的抗腫瘤免疫反

12、應(yīng),殺傷癌細(xì)胞。但目前關(guān)于肺轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原核酸疫苗的研究尚未見報(bào)道。 本研究在篩選鑒定肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)構(gòu)建同源的核酸疫苗，建立癌細(xì)胞動(dòng)物模型，采用已建立的緊密結(jié)合臨床實(shí)際的分子外科轉(zhuǎn)基因方法，研究其抗腫瘤效果，將對(duì)深入理解肺轉(zhuǎn)移的機(jī)制和臨床外科治療模式的發(fā)展產(chǎn)生積極影響10。 參考文獻(xiàn) 1. Resser-JR; Carbone-DP. Immunotherapy of head and neck cancer. Curr-Opin- Oncol. 1998 May; 10(3): 226-322 Clayman-GL; Frank-DK;et al Adenovirus-me

13、diated wild-type p53 gene transfer as a surgical adjuvant in advanced head and neck cancers. Clin-Cancer-Res. 1999 Jul; 5(7):268-2713. Strachan.T,Abitbol.M, et al.A new dimension for the human genome project : towards comprehensive maps. Nature Genetic.1997,16;126-1314. Gress T M, Muller-Pillasch F,

14、 et al. A pancreatic cancer-specific expression profile .Oncogene,1998,13:1819-18305.關(guān)曉峰,邱蔚六等.肺高轉(zhuǎn)移性腺樣囊性癌細(xì)胞株的篩選.中華口腔醫(yī)學(xué)雜志, 1996;2:74-77.6.M.L.Disis, F.M shiota etb al .Human HER-2/neu protein immunization circumvents tolerance to rat neu :a vaccine strategy for self tumor antigens .Immunology . 1998,9

15、3:192-199.7. Seder, Robert A.; Gurunathan, Sanjay. DNA Vaccines: Designer Vaccines for the 21st Century The New England Journal of Medicine.1999;341(4):277-2798.Ciernik IF,Berzofsky JA et al .Induction of cytotoxic T lymphocytes and antitumor immunity with DNA vaccines expressing single T cell epito

16、ps. J Immunol 1996,156:2369-23759.Gary L .Clayman, Adel K.EI-naggar et al In vivo molecular therapy with p53 adenovirus for microscopic residual head and neck squamous carcinoma.Cancer Research ,1995;55:1-6.10.Jack A.Roth .Molecular surgery for cancer. Arch Surg.1992;127:1298-1302.三、研究方案1.研究目標(biāo)、研究內(nèi)容和

17、擬解決的關(guān)鍵問題 研究目標(biāo): 已建立人腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC-2及其肺高轉(zhuǎn)移性克隆株ACC-M,采用DNA生物芯片技術(shù)對(duì)這兩個(gè)遺傳背景相同而生物學(xué)行為不同的癌細(xì)胞系的基因表達(dá)譜進(jìn)行定量對(duì)比掃描，運(yùn)用生物信息學(xué)、反義核酸技術(shù)、分子雜交來篩選鑒定肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因，同時(shí)建立癌細(xì)胞動(dòng)物模型，設(shè)計(jì)構(gòu)建與口腔癌肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因序列同源的核酸疫苗，采用已建立的緊密結(jié)合臨床實(shí)際的分子外科轉(zhuǎn)基因方法，深入研究其抗腫瘤免疫效果。 研究內(nèi)容 1.運(yùn)用DNA生物芯片技術(shù)（含14，000個(gè)基因）對(duì)腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC-2及其肺高轉(zhuǎn)移性克隆株ACC-M進(jìn)行大規(guī)模的基因表達(dá)譜定量對(duì)比分析。 2.結(jié)合生物信息學(xué)的聚

18、類分析和同源分析、反義核酸技術(shù)、血小板凝集試驗(yàn)、裸小鼠移植瘤肺轉(zhuǎn)移模型來篩選鑒定肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因,通過RT-PCR和分子雜交進(jìn)一步在臨床手術(shù)標(biāo)本和其它口腔癌細(xì)胞系中確證. 3.選用含巨細(xì)胞病毒（CMV）啟動(dòng)子和-Gal基因的真核表達(dá)載體,設(shè)計(jì)構(gòu)建與肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因同源的核酸疫苗。 4.建立癌細(xì)胞動(dòng)物模型，應(yīng)用分子外科轉(zhuǎn)基因方法，通過荷瘤動(dòng)物模型的COX生存分析、T細(xì)胞亞群功能測(cè)定、抗-Gal抗體測(cè)定來研究其體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)的強(qiáng)度。 擬解決的關(guān)鍵問題： 1 對(duì)DNA芯片所獲得的大量基因信息進(jìn)行有效的分析篩選和鑒定。 2.核酸疫苗的設(shè)計(jì)。 3.抗腫瘤效應(yīng)的分析。 2.擬采用的研究方法、技術(shù)路

19、線、實(shí)驗(yàn)方案及可行性分析 實(shí)驗(yàn)方案和研究方法1. 分別培養(yǎng)人腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC-2及其肺高轉(zhuǎn)移克隆株ACC-M，抽提總RNA，分離mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA并用P33標(biāo)記.2. 制備cDNA陣列膜片,包含約14,000個(gè)基因,每個(gè)基因的序列已測(cè)出,分別與標(biāo)記的cDNA片段雜交,采用專用軟件和生物信息學(xué)分析基因表達(dá)量的差異。3. 運(yùn)用生物信息學(xué)的聚類分析、同源分析和各種基因庫信息對(duì)有差異的基因進(jìn)行初步篩選,采用反義核酸技術(shù),結(jié)合細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)、血小板凝集試驗(yàn)和腺樣囊性癌裸小鼠移植瘤肺轉(zhuǎn)移模型,鑒定初步篩選的靶基因在細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移中的作用，通過RT-PCR和分子雜交進(jìn)一步在臨床手術(shù)標(biāo)本和其它口腔癌

20、細(xì)胞系中確證。4. 通過國際互聯(lián)網(wǎng)查詢美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)的生物信息科技中心(NCBI),可獲 得與靶基因不同同源度的序列,據(jù)此選用含巨細(xì)胞病毒（CMV）啟動(dòng)子和-Gal基因的真核表達(dá)載體,設(shè)計(jì)構(gòu)建與肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因同源的核酸疫苗。同時(shí),查找含相同序列的鼠癌細(xì)胞系,并從中科院上海細(xì)胞所細(xì)胞庫中獲取相應(yīng)的鼠癌細(xì)胞系,在小鼠（非裸鼠）上種植癌細(xì)胞建立癌細(xì)胞鼠模型。5. 利用已建立的分子外科縫線和注射轉(zhuǎn)基因的方法,將核酸疫苗轉(zhuǎn)入癌細(xì)胞鼠模型 中, 通過荷瘤鼠模型的COX生存分析、T淋巴細(xì)胞亞群分析、抗-Gal抗體測(cè)定來研究其體內(nèi)抗腫瘤的效應(yīng),從中找出最有效的抗腫瘤作用因子. 可行性分析

21、1.本實(shí)驗(yàn)室長期從事腺樣囊性癌肺轉(zhuǎn)移機(jī)理及其防治的研究,積累了豐富的理論知識(shí)和實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn),并取得了公認(rèn)的成就. 2.已進(jìn)行的預(yù)初試驗(yàn)表明, 肺低轉(zhuǎn)移性的ACC2細(xì)胞系和肺高轉(zhuǎn)移性的ACCM細(xì)胞 株比較，已發(fā)現(xiàn)有顯著差異的基因36個(gè)，有差異的基因213個(gè)。3.申請(qǐng)者本人在攻讀研究生期間致力于腫瘤的分子外科和核酸疫苗的研究，該研究首次將含報(bào)告基因的質(zhì)粒導(dǎo)入兔舌肌和胸鎖乳突肌，建立了分子外科轉(zhuǎn)基因技術(shù)。并已熟練掌握分子克隆和基因重組技術(shù). 4.實(shí)驗(yàn)所需的基因分析軟件、真核表達(dá)載體質(zhì)粒、免疫分析試劑等已具備3. 本項(xiàng)目的創(chuàng)新之處1.首次采用DNA芯片對(duì)遺傳背景相同而生物學(xué)行為不同的口腔癌細(xì)胞進(jìn)行大規(guī)模的

22、基因定量對(duì)比分析。2.篩選和鑒定新的肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因.3.本研究設(shè)計(jì)構(gòu)建了與肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因同源的核酸疫苗,深入研究了其抗腫瘤免疫作用.技術(shù)路線： 低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系A(chǔ)CC-2和肺高轉(zhuǎn)移性克隆株ACC-M 抽提總RNA，分離mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,P33標(biāo)記. DNA芯片技術(shù)（含14，000個(gè)基因）的基因表達(dá)譜定量對(duì)比掃描分析 生物信息學(xué) 反義核酸技術(shù)、血小板凝集試驗(yàn) RT-PCR和分子雜交聚類和同源分析 腺樣囊性癌裸小鼠移植瘤肺轉(zhuǎn)移模型鑒定 進(jìn)一步確證 肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因 設(shè)計(jì)構(gòu)建同源核酸疫苗 建立癌細(xì)胞鼠模型 將核酸疫苗轉(zhuǎn)入癌細(xì)胞鼠模型中 COX生存分析、T淋巴細(xì)胞亞群分析、抗-G

23、al抗體測(cè)定來研究其體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng) 4.年度研究計(jì)劃及預(yù)期進(jìn)展1. DNA芯片技術(shù)對(duì)低轉(zhuǎn)移性的ACC2細(xì)胞系和肺高轉(zhuǎn)移性克隆株ACCM細(xì)胞株的基因的大規(guī)模掃描分析. 2. 肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因篩選。 肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的分析和鑒定。1. 構(gòu)建核酸疫苗。 1. 建立癌細(xì)胞動(dòng)物模型。 2. 測(cè)定分析抗腫瘤效應(yīng)。 5.預(yù)期研究成果 1. 獲得人腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC-2及其肺高轉(zhuǎn)移性克隆株ACC-M二者完整的基因表達(dá)差異譜。 2. 口腔癌肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的篩選和鑒定。 2. 核酸疫苗抗腫瘤方法的應(yīng)用。 4. 在國內(nèi)、外專業(yè)刊物上發(fā)表論文5-6篇,參加國際、國內(nèi)會(huì)議交流2-3次。 5. 預(yù)期研究

24、成果1.獲得人腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC-2及其肺高轉(zhuǎn)移性克隆株ACC-M二者完整的基因表達(dá)差異譜。 2.口腔癌肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的篩選和鑒定。 3.核酸疫苗抗腫瘤方法的應(yīng)用。 4.在國內(nèi)、外專業(yè)刊物上發(fā)表論文5-6篇,參加國際、國內(nèi)會(huì)議交流2-3次。四、研究基礎(chǔ)1. 與本項(xiàng)目有關(guān)的研究工作積累和已取得的研究工作成績 1 2.預(yù)初實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，肺低轉(zhuǎn)移性的ACC2細(xì)胞系和肺高轉(zhuǎn)移性的ACCM細(xì)胞株比較，有顯著差異的基因36個(gè)，有差異的基因213個(gè)。這些基因涉及細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞代謝過程、跨膜蛋白等諸方面，為進(jìn)一步進(jìn)行肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的篩選和鑒定及核酸疫苗的設(shè)計(jì)提供了寶貴的數(shù)據(jù)。 3.申請(qǐng)者本

25、人在攻讀研究生期間致力于腫瘤的分子外科和核酸疫苗的研究，該研究首次將含報(bào)告基因的質(zhì)粒導(dǎo)入兔舌肌和胸鎖乳突肌中，建立了分子外科轉(zhuǎn)基因技術(shù)。并已熟練了掌握分子克隆和基因重組技術(shù).2.已具備的實(shí)驗(yàn)條件，尚缺少的實(shí)驗(yàn)條件和擬解決的途徑（包括利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和部門開放實(shí)驗(yàn)室的計(jì)劃和落實(shí)情況） 1.口腔腫瘤生物實(shí)驗(yàn)室具備細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的各項(xiàng)有關(guān)設(shè)備,包括達(dá)到GFP標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)室、進(jìn)口培養(yǎng)箱、無菌標(biāo)準(zhǔn)操作臺(tái)、低溫超高速離心機(jī)、-80低溫冰箱、PCR擴(kuò)增儀、核酸蛋白分析儀等。 2.擁有DNA 芯片分析的全套設(shè)備,包括96孔板和384孔板、PCR儀自動(dòng)點(diǎn)膜儀、信號(hào)掃描儀、雜交爐等。 3.建有達(dá)SPF

26、標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。 主要預(yù)初實(shí)驗(yàn)結(jié)果1. DNA芯片對(duì)肺低轉(zhuǎn)移性的ACC2細(xì)胞系和肺高轉(zhuǎn)移性克隆株ACCM細(xì)胞的14,000個(gè)基因的定量對(duì)比掃描分析結(jié)果表明,有顯著差異的基因36個(gè)，有差異的基因213個(gè)。下面列出的是部分顯著差異基因的基因序列號(hào)及其相關(guān)信息。2. 這些基因涉及細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞代謝過程、跨膜蛋白等諸方面，為肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的篩選和核酸疫苗的設(shè)計(jì)提供了可靠的數(shù)據(jù)和堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。Hs.201967 cds=(26,997) /gb=U05861 /gi=487134 /ug=Hs.201967 /len=1222Hs.79748 cds=(111,1700) /gb=AB018

27、010 /gi=5926733 /ug=Hs.79748 /len=1879Hs.183698 cds=(29,508) /gb=Z49148 /gi=793842 /ug=Hs.183698 /len=630Hs.111515 gb=AA484881 /gi=2213948 /ug=Hs.111515 /len=436Hs.78183 cds=(51,1022) /gb=D17793 /gi=457407 /ug=Hs.78183 /len=1204Hs.255772 clone_end=5' /gb=AA186737 /gi=1774854 /ug=Hs.255772 /len=5

28、11Hs.58593 cds=(119,868) /gb=X16901 /gi=35864 /ug=Hs.58593 /len=1408Hs.75069 cds=(0,1451) /gb=U23143 /gi=746435 /ug=Hs.75069 /len=1452Hs.150741 clone_end=3' /gb=AW072071 /gi=6027069 /ug=Hs.150741 /len=467Hs.109798 cds=(41,421) /gb=AJ249732 /gi=5921472 /ug=Hs.109798 /len=711Hs.14779 clone_end=3&#

29、39; /gb=N64822 /gi=1212651 /ug=Hs.14779 /len=636Hs.132390 cds=(0,977) /gb=U09848 /gi=495567 /ug=Hs.132390 /len=3505Hs.43800 clone_end=5' /gb=W20128 /gi=1295998 /ug=Hs.43800 /len=526Hs.241829 clone_end=3' /gb=AI254779 /gi=3862304 /ug=Hs.241829 /len=359Hs.71819 clone_end=3' /gb=AI005336 /g

30、i=3214846 /ug=Hs.71819 /len=685Hs.189083 clone_end=3' /gb=AA582554 /gi=2359914 /ug=Hs.189083 /len=461Hs.123057 cds=(11,385) /gb=X84003 /gi=791052 /ug=Hs.123057 /len=413Hs.177687 cds=(7,978) /gb=S68287 /gi=544761 /ug=Hs.177687 /len=1167Hs.50966 cds=(118,4620) /gb=D90282 /gi=219552 /ug=Hs.50966 /l

31、en=5215 Hs.76686 cds=(320,925) /gb=Y00483 /gi=31918 /ug=Hs.76686 /len=1136Hs.18136 cds=(143,3403) /gb=U40490 /gi=1110519 /ug=Hs.18136 /len=4232Hs.119689 cds=(100,450) /gb=S70585 /gi=1683259 /ug=Hs.119689 /len=703Hs.82837 cds=UNKNOWN /gb=L13435 /gi=291845 /ug=Hs.82837 /len=1056 Hs.181101 cds=(32,802)

32、 /gb=X60221 /gi=509290 /ug=Hs.181101 /len=11343.申請(qǐng)者和項(xiàng)目組主要成員的學(xué)歷和研究工作簡歷，近期已發(fā)表與本項(xiàng)目有關(guān)的主要論著目錄*和獲得學(xué)術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)情況及在本項(xiàng)目中承擔(dān)的任務(wù);青年科學(xué)基金申請(qǐng)者還應(yīng)注明學(xué)位論文名稱及導(dǎo)師姓名與工作單位 *論文：作者·題目·刊名·年份·卷（期）·頁碼 專著：作者·書名·出版者·年份 五、經(jīng)費(fèi)預(yù)算 支出科目金額（萬元）計(jì) 算 根 據(jù) 及 理 由1 . 合計(jì)0.50辦公用品0.50學(xué)術(shù)交流及會(huì)議費(fèi)用0.40科研成果鑒定0.40資料檢索、復(fù)印和論

33、文打印、幻燈等0.20論文發(fā)表、版面、審稿費(fèi)3.實(shí)驗(yàn)材料費(fèi)6.002.00分子生物學(xué)試劑2.00生化分析試劑0.50免疫分析試劑· 0.50普通試劑0.50基因庫查詢及軟件分析費(fèi)0.50實(shí)驗(yàn)動(dòng)物4.儀器設(shè)備費(fèi)1.00 0.50儀器設(shè)備添置費(fèi)0.50伐器設(shè)備維修費(fèi)、折舊費(fèi)5.協(xié)作費(fèi)0.50科研極作6.管理費(fèi)0.50科研管理、水電費(fèi)16.002.科研業(yè)務(wù)費(fèi)0.50辦公用品0.50學(xué)術(shù)交流及會(huì)議費(fèi)用0.40科研成果鑒定0.40資料檢索、復(fù)印和論文打印、幻燈等0.20論文發(fā)表、版面、審稿費(fèi)3.實(shí)驗(yàn)材料費(fèi)6.002.00分子生物學(xué)試劑2.00生化分析試劑0.50免疫分析試劑· 0.5

34、0普通試劑0.50基因庫查詢及軟件分析費(fèi)0.50實(shí)驗(yàn)動(dòng)物4.儀器設(shè)備費(fèi)1.00 0.50儀器設(shè)備添置費(fèi)0.50伐器設(shè)備維修費(fèi)、折舊費(fèi)5.協(xié)作費(fèi)0.50科研極作6.管理費(fèi)0.50科研管理、水電費(fèi)2.000.50辦公用品0.50學(xué)術(shù)交流及會(huì)議費(fèi)用0.40科研成果鑒定0.40資料檢索、復(fù)印和論文打印、幻燈等0.20論文發(fā)表、版面、審稿費(fèi)3.實(shí)驗(yàn)材料費(fèi)12.004.00分子生物學(xué)試劑4.00生化分析試劑1.00免疫分析試劑1.00普通試劑1.00基因庫查詢及軟件分析費(fèi)1.00 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物4.儀器設(shè)備費(fèi)1.001.00 儀器設(shè)備添置費(fèi)5.協(xié)作費(fèi)0.50 科研協(xié)作6.管理費(fèi)0.50 科研管理、水電費(fèi)注：預(yù)算

35、支出科目按下列順序填寫： 1.科研業(yè)務(wù)費(fèi) 2.實(shí)驗(yàn)材料費(fèi) 3.儀器設(shè)備費(fèi) 4.實(shí)驗(yàn)室改裝費(fèi) 六、申請(qǐng)者正在承擔(dān)的其它研究項(xiàng)目(包括攀登計(jì)劃、863計(jì)劃、攻關(guān)任務(wù)和各部委、省市任務(wù)等項(xiàng)目的名稱及編號(hào)、任務(wù)來源、起止年月、負(fù)責(zé)或參加等情況)七、申請(qǐng)者承擔(dān)（負(fù)責(zé)或參加）國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目的情況批準(zhǔn)號(hào)項(xiàng)目名稱起止年月負(fù)責(zé)或參加進(jìn)展或完成情況對(duì)申請(qǐng)者負(fù)責(zé)的前一個(gè)已結(jié)題科學(xué)基金資助項(xiàng)目（項(xiàng)目名稱及批準(zhǔn)號(hào)）完成情況、后續(xù)研究進(jìn)展及與本申請(qǐng)項(xiàng)目的關(guān)系加以詳細(xì)說明。另附該已結(jié)題項(xiàng)目 研究工作總結(jié)摘要（300字）及已發(fā)表主要相關(guān)論文首頁復(fù)印件（限三篇）。八、申請(qǐng)者承諾我保證上述填報(bào)內(nèi)容的真實(shí)性。如果獲得資助，我與本項(xiàng)目組成員將嚴(yán)格遵守國家自然科學(xué)基金委員會(huì)的有關(guān)規(guī)定，切實(shí)保證研究工作時(shí)間，按計(jì)劃認(rèn)真開展研究工作，按時(shí)報(bào)送有關(guān)材料。申請(qǐng)者（簽章） 九、推薦意見(不具有高級(jí)專業(yè)技術(shù)職務(wù)的申請(qǐng)者,須有兩名具有高級(jí)專業(yè)技術(shù)職務(wù)的同行專家推薦。 推薦時(shí),請(qǐng)認(rèn)真負(fù)責(zé)地介紹申請(qǐng)者及其項(xiàng)目組成員的業(yè)務(wù)基礎(chǔ)、