鼻咽癌易感抑瘤基因的功能基因組學研究{修}

1、 中 南 大 學 學 報 ( 醫(yī) 學 版 ) 2 0 0 8 , 3 3 ( 7 )J C e n t S o u t h U n i v ( M e d S c i )5 5 3? R E V I E WS ? ? 綜 述 ?鼻 咽 癌 易 感 / 抑 瘤 基 因 的 功 能 基 因 組 學 研 究李 小 玲 , 武 明 花 , 李 桂 源( 中 南 大 學 腫 瘤 研 究 所 , 長 沙 4 1 0 0 7 8 ) 摘 要 鼻 咽 癌 組 織 在 染 色 體 3 p , 9 p , 6 q , 1 1 q , 1 3q 和 1 4 q 等 區(qū) 域 存 在 較 高 的 等 位 基 因 不 平

2、 衡 , 表明 這 些 區(qū) 域 存 在 與 鼻 咽 癌 相 關(guān) 的 抑 瘤 基 因 。 采 用 c D N A 代 表 性 差 異 分 析 等 方 法 成 功 獲 得 了 候 選 的 鼻 咽癌 易 感 / 抑 瘤 基 因 , 并 進 行 了 基 因 功 能 研 究 。 發(fā) 現(xiàn) : ( 1 ) C x 基 因 的 表 達 增 強 是 由 于 腫 瘤 細 胞 為 突 破 細 胞通 訊 功 能 的 障 礙 , 試 圖 重 建 細 胞 間 隙 連 接 的 一 種 表 達 變 異 ; ( 2 ) B R D 7 基 因 是 一 個 與 細 胞 周 期 調(diào) 控 密 切相 關(guān) 的 核 轉(zhuǎn) 錄 調(diào) 控 因 子

3、 ; ( 3 ) N A G 7 基 因 具 有 雙 重 生 物 學 功 能 ? ? ? 在 抑 制 低 侵 襲 能 力 的 H N E 1 細 胞 增 殖的 同 時 , 能 夠 增 加 H N E 1 和 6 ? 1 0 B 細 胞 的 侵 襲 潛 能 ; ( 4 ) N G X 6 可 以 與 E z r i n 發(fā) 生 交 互 作 用 , 參 與 鼻 咽 癌轉(zhuǎn) 移 ; ( 5 ) S P L U N C 1 基 因 的 表 達 下 調(diào) 是 鼻 咽 癌 早 期 預(yù) 警 的 分 子 診 斷 標 志 物 。 這 些 易 感 / 抑 瘤 基 因 的 功 能基 因 組 學 研 究 為 闡 明 鼻

4、咽 癌 的 發(fā) 病 機 制 打 下 了 堅 實 的 理 論 基 礎(chǔ) 。 關(guān) 鍵 詞 鼻 咽 癌 ; 基 因 克 隆 ; 功 能 基 因 組 學 中 圖 分 類 號 Q 7 4 文 獻 標 識 碼 A 文 章 編 號 1 6 7 2 ? 7 3 4 7 ( 2 0 0 8 ) 0 7 ? 0 5 5 3 ? 0 6F u n c t i o n a l g e n o m i c s o f n a s o p h a r y n g e a l c a r c i n o m as u s c e p t i b i l i t y / s u p p r e s s o r g e n eL

5、 I X i a o ? l i n g , W U M i n g ? h u a , L I G u i ? y u a n( C a n c e r R e s e a r c h I n s t i t u t e , C e n t r a l S o u t h U n i v e r s i t y , C h a n g s h a 4 1 0 0 7 8 , C h i n a )A b s t r a c t : T h e r e i s o b v i o u s a l l e l e d i s e q u i l i b r i u m i n n a s o p

6、 h a r y n g e a l c a r c i n o m a a t c h r o m o s o m e3 p , 9 p , 6 q , 1 1 q , 1 3 q a n d 1 4 q . N a s o p h a r y n g e a l c a r c i n o m a ( N P C ) s u s c e p t i b i l i t y / s u p p r e s s o r g e n ec a n d i d a t e s w e r e o b a i n e d b y m o l e c u l a r b i o l o g y m e

7、 t h o d s , s u c h a s c D N A r e p r e s e n t a t i o n a l d i f f e r e n c e a n a ?l y s i s . T h e f u n c t i o n a l r e s e a r c h o f N P C s u s c e p t i b i l i t y / s u p p r e s s o r g e n e c a n d i d a t e s i n d i c a t e d : ( 1 ) T h ei n c r e a s e d e x p r e s s i o

8、 n o f C x c o n t r i b u t e d t o o b s t a c l e s o f g a p j u n c t i o n a l i n t e r c e l l u l a r c o m m u n i c a t i o n( G J I C ) , a n d r e s u l t e d a n a b e r r a t i o n o f G J I C ; ( 2 ) B R D 7 , a t r a n s c r i p t f a c t o r , w a s a s s o c i a t e dw i t hc e l

9、l c y c l e r e g u l a t i o n ; ( 3 ) N A G 7 , a ne s t r o g e n r e c e p t o r r e p r e s s o r , i n h i b i t e dt h e i n v a s i v e p o t e n t i a l o fh u m a n N P C c e l l s b y r e g u l a t i n g E R e x p r e s s i o n a n d t h e H ? r a s / p ? c ? R a f a n d J N K / A P ? 1 /

10、 M M P 1 s i g ?n a l i n g p a t h w a y s ; ( 4 ) N G X 6 , a m e t a s t a s i s ? a s s o c i a t e d p r o t e i n , c a n n e g a t i v e ? r e g u l a t e E G F / R a s /M A P K s i g n a l i n g t r a n s d u c t i o n p a t h w a y , a n d i n t e r a c t w i t h e z r i n p r o t e i n t o

11、 i n h i b i t i n v a s i o n a n d m e t a s t a ?s i s o f N P C c e l l s ; ( 5 ) S P L U N C 1 , a s e c r e t e d p r o t e i n , c a n i n h i b i t t h e b a c t e r i u m c l o n e f o r m a t i o n , a n di s a n i n n a t e i m m u n e m o l e c u l e . T h e s e d a t a w i l l l a y a n

12、 i m p o r t a n t f o u n d a t i o n f o r t h e N P C m e c h a n i s m .K e y w o r d s : n a s o p h a r y n g e a l c a r c i n o m a ; g e n e c l o n e ; f u n c t i o n a l g e n o m i c s J C e n t S o u t h U n i v ( M e d S c i ) , 2 0 0 8 , 3 3 ( 7 ) : 0 5 5 3 ? 0 6 收 稿 日 期 ( D a t e o

13、f r e c e p t i o n ) 2 0 0 8 ? 0 6 ? 1 8作 者 簡 介 ( B i o g r a p h y ) 李 小 玲 ( 1 9 6 1 ? ) , 女 , 湖 南 長 沙 人 , 博 士 , 教 授 , 主 要 從 事 腫 瘤 發(fā) 病 病 因 學 研 究 。通 訊 作 者 ( C o r r e s p o n d i n g a u t h o r ) 李 桂 源 , E ? m a i l : l i g y x y s m . n e t基 金 項 目 ( F o u n d a t i o n i t e m s ) 國 家 重 大 科 學 研 究

14、 計 劃 ( 2 0 0 6 C B 9 1 0 5 0 2 , 2 0 0 6 C B 9 1 0 5 0 4 ) ; 國 家 自 然 科 學 基 金 ( 3 0 7 7 0 8 2 5 ) ; 湖 南 省 自 然 科學 基 金 ( 0 6 J J 2 0 0 4 2 , 0 6 J J 2 0 0 8 0 ) 。 T h i s w o r k w a s s u p p o r t e d b y S t a t e K e y R e s e a r c h P r o g r a m o f C h i n a( 2 0 0 6 C B 9 1 0 5 0 2 , 2 0 0 6 C

15、 B 9 1 0 5 0 4 ) ; N a t i o n a l N a t u r a l S c i e n c e F o u n d a t i o n o f C h i n a ( 3 0 7 7 0 8 2 5 ) ; a n d N a t u r a lS c i e n c e F o u n d a t i o n o f H u n a n P r o v i n c e , P . R . C h i n a ( 0 6 J J 2 0 0 4 2 , 0 6 J J 2 0 0 8 0 ) .書 書 書5 5 4中 南 大 學 學 報 ( 醫(yī) 學 版 ) , 2

16、 0 0 8 , 3 3 ( 7 ) 鼻 咽 癌 ( n a s o p h a r y n g e a l c a r c i n o m a , N P C ) 是 一種 嚴 重 威 脅 我 國 南 方 及 東 南 亞 地 區(qū) 人 民 身 心 健2 鼻 咽 癌 易 感 / 抑 瘤 基 因 的 克 隆康 的 惡 性 腫 瘤 , 素 有 “ 中 國 瘤 ” 之 稱 。 它 是 多 因 素( E B 病 毒 感 染 、 環(huán) 境 因 素 和 遺 傳 易 感 性 等 ) 參 與 2 . 1 利 用 表 型 克 隆 策 略 克 隆 鼻 咽 癌 易 感 / 抑 瘤基 因 候 選 者的 多 基 因 遺 傳

17、 性 疾 病 , 遺 傳 易 感 性 可 能 在 鼻 咽 癌2 . 1 . 1 L Z 1 6 和 L Z 2 0 基 因 的 克 隆 采 用 c D N A的 發(fā) 生 發(fā) 展 中 起 重 要 作 用 。 因 此 , 充 分 利 用 人 類代 表 性 差 異 分 析 法 ( c D N A R D A ) , R A C E 及 c D N A基 因 組 計 劃 這 一 生 命 科 學 領(lǐng) 域 宏 偉 工 程 的 最 新文 庫 并 結(jié) 合 生 物 信 息 資 源 進 行 綜 合 分 析 , 得 到 了成 果 , 克 隆 鼻 咽 癌 相 關(guān) 的 新 基 因 并 研 究 其 生 物 學新 基 因

18、L Z 1 6 的 全 長 1 6 0 3 b p c D N A 序 列 , 該 基 因功 能 , 對 探 討 鼻 咽 癌 發(fā) 病 機 制 、 診 斷 及 防 治 有 著定 位 于 1 6 號 染 色 體 , 編 碼 3 6 6 個 氨 基 酸 ; 并 通 過十 分 重 要 的 意 義 。計 算 機 在 基 因 庫 中 模 擬 分 析 , 得 出 了 L Z 2 0 基 因的 全 長 2 . 1 k b c D N A 序 列 , 該 基 因 編 碼 5 3 1 個 氨1 鼻 咽 癌 全 基 因 組 掃 描 及 比 較 基 4 基 酸 , 定 位 于 6 q 2 2 . 1 2 2 . 3

19、3 。因 組 雜 交 分 析2 . 1 . 2 B R D 7 和 鼻 咽 癌 相 關(guān) 基 因 N A G 1 1 和N A G 1 2 的 克 隆 通 過 文 庫 篩 選 , 結(jié) 合 N o r t h e r n , 中 南 大 學 腫 瘤 研 究 所 分 子 遺 傳 室 應(yīng) 用 比 較P C R 和 生 物 信 息 學 等 方 法 綜 合 分 析 , 克 隆 了 轉(zhuǎn) 錄基 因 組 雜 交 檢 測 了 2 0 例 鼻 咽 癌 基 因 組 D N A 的 丟本 為 2 . 2 , 1 . 1 , 和 1 . 4 k b 的 3 個 鼻 咽 癌 差 異 表 達失 和 擴 增 , 發(fā) 現(xiàn) 鼻 咽

20、 癌 常 見 的 擴 增 染 色 體 是 1 q基 因 , 分 別 命 名 為 B R D 7 , n a s o p h a r y n g e a l c a r c i n o m a( 7 / 2 0 ) , 2 q ( 7 / 2 0 ) , 3 q ( 7 / 2 0 ) , 7 q ( 7 / 2 0 ) , 8 qa s s o c i a t e d g e n e ( N A G 1 1 和 N A G 1 2 ) 。 B R D 7 基 因 定( 8 / 2 0 ) 及 1 2 q ( 7 / 2 0 ) , 高 水 平 擴 增 的 染 色 體 是位 在 1 6 q 1

21、1 . 1 1 6 q 1 2 . 2 , 有 1 1 個 外 顯 子 , 編 碼1 2 p ( 2 / 2 0 ) 和 X 染 色 體 ( 3 / 2 0 ) ; 常 見 的 缺 失 染6 5 1 個 氨 基 酸 組 成 的 核 蛋 白 , 有 多 個 磷 酸 化 位 點色 體 為 3 p ( 1 0 / 2 0 ) , 9 p ( 6 / 2 0 ) , 1 1 q ( 8 / 2 0 ) 及 5 和 溴 區(qū) 結(jié) 構(gòu) 域 ( b r o m o d o m a i n ) 的 核 內(nèi) 轉(zhuǎn) 錄 因 子 。1 6 q ( 7 / 2 0 ) 。 結(jié) 果 表 明 鼻 咽 癌 細 胞 中 存 在

22、多 條N A G 1 1 和 N A G 1 2 基 因 定 位 于 9 q 2 2 , N A G 1 1 基 因染 色 體 拷 貝 數(shù) 的 改 變 , 由 此 推 測 相 應(yīng) 區(qū) 域 內(nèi) 的 瘤有 4 個 外 顯 子 , 編 碼 8 7個 氨 基 酸 組 成 的 跨 膜 蛋基 因 的 擴 增 和 抑 瘤 基 因 的 丟 失 可 能 參 與 了 鼻 咽白 , 蛋 白 含 有 3 個 A T P 結(jié) 合 區(qū) 、 兩 個 蛋 白 激 酶 C 1 癌 的 發(fā) 生 發(fā) 展 。 6 磷 酸 化 位 點 和 兩 個 N ? 肉 豆 蔻 酸 化 位 點 。同 時 , 我 們 利 用 平 均 分 布 于 常

23、 染 色 體 上 的2 . 1 . 3 鼻 咽 組 織 特 異 性 基 因 N A S G 和3 3 6 個 微 衛(wèi) 星 標 記 , 采 用 半 自 動 熒 光 標 記 多 重M G C 1 4 5 9 7 的 分 離 與 鑒 定 尋 找 不 同 組 織 或 同P C R 對 4 8 例 原 發(fā) 性 散 發(fā) 性 鼻 咽 癌 進 行 微 衛(wèi) 星 等一 組 織 不 同 發(fā) 育 階 段 以 及 在 病 變 組 織 或 正 常 組位 基 因 不 平 衡 ( A I ) 分 析 , 發(fā) 現(xiàn) 染 色 體 3 p 和 9 p織 中 特 異 性 表 達 基 因 是 研 究 組 織 發(fā) 育 、 分 化 和 病

24、7 的 A I 是 N P C 常 見 的 遺 傳 學 異 常 。 通 過 微 衛(wèi) 星 和變 的 關(guān) 鍵 。 張 比 成 等 采 用 抑 制 性 消 減 雜 交 技 術(shù)C G H 分 析 的 結(jié) 果 比 較 , 發(fā) 現(xiàn) 3 p 等 位 基 因 不 平 衡( s u p p r e s s i o n s u b t r a c t i v e h y b r i d i z a t i o n , S S H ) 分 離 鑒 定由 整 個 3 p 和 部 分 3 p 區(qū) 域 的 丟 失 導(dǎo) 致 , 鄧 龍 文了 人 鼻 咽 組 織 特 異 性 基 因 N A S G 和 M G C 1 4 5

25、 9 7 , 這 2 等 通 過 微 衛(wèi) 星 分 析 確 定 了 3 p 染 色 體 缺 失 的 最兩 個 基 因 在 人 鼻 咽 和 氣 管 相 對 特 異 性 表 達 , 在小 區(qū) 位 于 D 3 S 1 2 9 7 ( 3 p 2 6 . 3 2 6 . 2 ) 和 D 3 S 1 5 6 0 肺 、 心 臟 和 唾 液 腺 弱 表 達 , 而 在 其 他 組 織 未 檢 測( 3 p 2 5 . 3 ) ; 而 9 p 等 位 基 因 不 平 衡 則 是 由 整 個 9 到 明 顯 表 達 。 由 于 N A S G 和 M G C 1 4 5 9 7 這 兩 個 基因 均 屬 于 P

26、 L U N C 家 族 成 員 , 目 前 已 被 人 類 基 因 組號 染 色 體 的 丟 失 , 整 個 或 部 分 9 p 的 丟 失 , 以 及 整 2 3 命 名 委 員 會 分 別 更 名 為 S P L U N C 1 和 L P L U N C 1 。個 或 部 分 9 p 的 擴 增 所 引 起 。 陽 劍 波 等 用 1 12 . 2 利 用 定 位 克 隆 策 略 克 隆 鼻 咽 癌 易 感 / 抑 瘤個 定 位 于 9 p 2 1 2 2 區(qū) 域 的 高 度 微 衛(wèi) 星 多 態(tài) 性 標基 因 候 選 者 定 位 克 隆 目 前 主 要 有 兩 種 策 略 :記 分 析

27、 , 發(fā) 現(xiàn) D 9 S 1 6 1 D 9 S 1 8 5 3 位 點 之 間 是 部 分一 是 進 行 染 色 體 雜 合 缺 失 的 研 究 , 找 出 某 種 腫 瘤鼻 咽 癌 患 者 9 p 2 1 2 2 區(qū) 域 的 一 個 較 小 共 同 缺 失共 同 缺 失 的 片 段 , 再 克 隆 包 含 在 該 片 段 中 的 抑 癌區(qū) , 該 區(qū) 域 內(nèi) 存 在 與 鼻 咽 癌 密 切 相 關(guān) 的 抑 瘤 基因 ?；?因 ; 二 是 對 遺 傳 性 腫 瘤 家 系 進 行 連 鎖 分 析 , 將癌 基 因 定 位 于 染 色 體 某 一 位 置 再 進 行 克 隆 。 兩者 的 共 同

28、 之 處 在 于 首 先 捕 捉 腫 瘤 相 關(guān) 基 因 的 染5 5 5鼻 咽 癌 易 感 / 抑 瘤 基 因 的 功 能 基 因 組 學 研 究 李 小 玲 , 等色 體 位 置 信 息 , 再 利 用 物 理 克 隆 的 手 段 獲 得 癌 基 E S T s 拼 接 、 I M A G E c D N A 克 隆 直 接 測 序 等 方 法 , 得因 或 抑 癌 基 因 。 到 包 含 該 E S T 的 大 小 為 3 9 4 1 b p 的 c D N A 序 列 。2 . 2 . 1 定 位 在 3 p 的 鼻 咽 癌 候 選 易 感 / 抑 瘤 基 因 該 基 因 被 命 名

29、為 N A G 2 2 基 因 , 其 蛋 白 產(chǎn) 物 中 含 有的 克 隆 酪 氨 酸 激 酶 和 蛋 白 激 酶 C 的 磷 酸 化 位 點 、 c A M P ?2 . 2 . 1 . 1 從 染 色 體 3 p 2 5 L O H 高 頻 區(qū) 克 隆 鼻 咽 和 c G M P ? 依 賴 性 蛋 白 激 酶 的 磷 酸 化 位 點 、 多 個 C a ? 8 癌 候 選 抑 瘤 基 因 N A G 7 C h e n 等 從 U n i g e n e 庫s e i n k i n a s e 磷 酸 激 酶 位 點 及 3 個 c o i l e d c o i l 結(jié)中 選 取

30、2 0 個 上 皮 組 織 來 源 的 E S T 克 隆 3 p 2 5 L O H 構(gòu) 域 。高 頻 區(qū) 中 與 鼻 咽 癌 相 關(guān) 的 新 基 因 。 從 人 的 骨 骼 2 . 2 . 4 定 位 在 9 p 上 的 鼻 咽 癌 候 選 抑 瘤 基 因 肌 c D N A 文 庫 中 克 隆 了 一 個 1 . 6 k b 的 c D N A 序 在 染 色 體 9 p 2 1 ? 2 2 區(qū) 域 , 采 用 E S T s 拼 接 、 I M ?列 , 將 其 命 名 為 N A G 7 基 因 。 N A G 7 基 因 含 有 1 個 A G E c D N A 克 隆 直 接

31、測 序 等 方 法 , 獲 得 了 一 個 全蛋 白 激 酶 C ( P K C ) 磷 酸 化 位 點 和 1 個 肉 豆 蔻 基 長 為 2 . 0 k b 與 鼻 咽 癌 相 關(guān) 的 新 候 選 抑 瘤 基 因 , 命( M y r i s t y l ) 化 位 點 , 編 碼 一 個 含 9 4 個 氨 基 酸 的 堿 名 為 N A G 2 0 基 因 。 其 蛋 白 羧 基 端 含 有 2 個 連 續(xù)性 跨 膜 蛋 白 。 通 過 在 鼻 咽 癌 活 檢 組 織 中 檢 測 未 的 重 要 U B A 功 能 域 ( u b i q u i t i n a s s o c i a

32、 t e d d o m a i n ) ,發(fā) 現(xiàn) 點 突 變 、 缺 失 與 重 排 。 生 物 信 息 學 預(yù) 測 表 屬 于 泛 肽 相 關(guān) 蛋 白 家 族 的 一 個 新 成 員 , 經(jīng) 國 際 人明 , N A G 7 基 因 的 雜 合 性 丟 失 、 5 端 調(diào) 控 區(qū) 、 3 端 類 基 因 命 名 委 員 會 同 意 , 將 其 正 式 命 名 為 u b i q u i t ? 1 1 非 翻 譯 區(qū) 以 及 內(nèi) 外 顯 子 結(jié) 合 區(qū) 點 突 變 可 能 影 響 i n a s s o c i a t e d p r o t e i n 1 ( U B A P 1 ) 。

33、 此 外 , 我 室 從N A G 7 基 因 在 鼻 咽 癌 中 的 表 達 。9 p 2 1 2 2 區(qū) 域 克 隆 了 另 外 一 個 鼻 咽 癌 相 關(guān) 基 因2 . 2 . 1 . 2 從 鼻 咽 癌 易 感 基 因 3 p 2 1 區(qū) 域 克 隆 鼻 N G X 6 。 根 據(jù) S M A R T 軟 件 分 析 , N G X 6 基 因 編 碼 的咽 癌 候 選 易 感 基 因 L T F 本 研 究 室 通 過 1 8 個 蛋 白 產(chǎn) 物 有 一 個 E G F ? l i k e d o m a i n 和 兩 個 跨 膜 區(qū) ,鼻 咽 癌 高 發(fā) 家 系 的 連 鎖 分

34、析 , 首 次 將 鼻 咽 癌 遺 傳 結(jié) 構(gòu) 與 E G F 家 族 的 成 員 有 一 定 的 相 似 性 , 提 示易 感 基 因 區(qū) 精 細 定 位 于 3 p 2 1 上 1 3 . 6 厘 摩 ( c e n t i ?N G X 6 發(fā) 揮 抑 瘤 功 能 可 能 與 E G F R 的 表 達 調(diào) 控 有 9 1 2 m o r g a n , c M ) 的 區(qū) 域 。 通 過 對 1 8 個 家 系 的 關(guān) 聯(lián) 關(guān) 。分 析 , 發(fā) 現(xiàn) 染 色 體 3 p 2 1區(qū) 域 存 在 多 個 位 點 及 單倍 型 與 鼻 咽 癌 存 在 傳 遞 不 平 衡 , 進 一 步 將 鼻

35、 咽 癌3 鼻 咽 癌 易 感 / 抑 瘤 基 因 的 功 能 研 究遺 傳 易 感 區(qū) 域 定 位 從 染 色 體 3 p 2 1 上 的 1 3 . 6 c M 1 0 縮 小 至 1 2 . 4 c M 區(qū) 域 。 通 過 自 制 的 包 含 染 色 3 . 1 C o n n e x i n 基 因 間 隙 連 接 蛋 白 ( c o n n e x i n ,體 3 p 2 1 區(qū) 域 2 8 8 個 基 因 的 c D N A 芯 片 篩 選 并 證 C x ) 在 胚 胎 發(fā) 育 、 細 胞 的 生 長 、 分 化 以 及 細 胞 自 身實 , L T F 基 因 是 定 位 于

36、 3 p 2 1 區(qū) 域 內(nèi) 的 鼻 咽 癌 候 選 穩(wěn) 定 的 維 持 等 方 面 起 重 要 作 用 。 C x 是 一 個 多 基 1 0 易 感 基 因 。 因 家 族 , 至 少 有 1 3 個 成 員 。 C x 2 6 , 3 0 , 3 1 , 3 1 . 1 ,2 . 2 . 2 定 位 于 6 q 上 的 鼻 咽 癌 候 選 抑 瘤 基 因 3 2 , 3 7 , 4 0 , 4 3 , 4 5 在 正 常 鼻 咽 組 織 中 表 達 ; 在 染 色 體 6 q 區(qū) 域 , 從 U n i g e n e 庫 中 選 取 C x 3 6 , 4 6 , 4 6 . 6 ,

37、5 0 在 正 常 鼻 咽 組 織 低 表 達 或 不D 6 S 1 5 8 1 附 近 1 1 個 上 皮 組 織 來 源 的 E S T , 克 隆 表 達 。 本 研 究 組 首 次 明 確 了 C x 基 因 在 鼻 咽 癌 細了 一 個 與 鼻 咽 癌 相 關(guān) 的 新 候 選 瘤 基 因 ? ? ? 胞 株 ( H N E 1 ) 基 因 組 中 的 表 達 譜 , 發(fā) 現(xiàn) C x 3 7 和N A G 2 3 。 N A G 2 3 基 因 編 碼 一 個 3 9 0 個 氨 基 酸 的 酸 C x 4 6 在 鼻 咽 癌 細 胞 株 中 特 異 表 達 , 促 分 化 劑 ( 維

38、性 胞 漿 蛋 白 。 該 蛋 白 含 一 保 守 的 F ? b o x 功 能 區(qū) , 甲 酸 ) 能 抑 制 H N E 1 的 生 長 及 C x 3 7 和 C x 4 6 在 1 3 ? 1 4 為 F ? b o x 蛋 白 家 族 的 新 成 員 , 人 類 基 因 組 命 名 委 H N E 1 中 的 表 達 。 C x 基 因 被 認 為 是 一 種 抑 瘤員 會 將 其 更 名 為 F B O X 3 0 。 在 鼻 咽 癌 活 檢 組 織 未 基 因 候 選 者 , 但 本 研 究 組 通 過 對 C x 基 因 在 鼻 咽檢 測 到 N A G 2 3 基 因 的

39、點 突 變 、 缺 失 與 重 排 。 癌 細 胞 株 、 胃 癌 中 表 達 譜 的 研 究 , 發(fā) 現(xiàn) 這 些 腫 瘤中 有 些 C x 基 因 的 表 達 減 弱 , 而 另 一 些 C x 基 因 表2 . 2 . 3 定 位 在 7 q 上 的 鼻 咽 癌 候 選 抑 瘤 基 因 7 q 3 2 ? t e r 的 微 衛(wèi) 星 位 點 D 7 S 6 3 1 D 7 S 6 8 4 附 達 增 強 , 因 此 提 出 一 種 新 的 假 說 : 在 癌 變 環(huán) 境 中 ,近 存 在 約 3 0 % 4 6 % 的 高 頻 率 等 位 基 因 L O H , 最 某 些 C x 基 因

40、 的 表 達 增 強 是 由 于 腫 瘤 細 胞 為 突 破小 共 同 缺 失 區(qū) 在 D 7 S 5 0 9 附 近 , 距 其 鄰 近 的 微 衛(wèi) 細 胞 通 訊 功 能 的 障 礙 , 試 圖 重 建 細 胞 間 隙 連 接 的星 位 點 D 7 S 5 0 0 和 D 7 S 4 9 5 分 別 為 2 . 9 c M 和 一 種 表 達 變 異 , 但 重 建 的 間 隙 連 接 通 道 難 以 發(fā) 揮1 . 2 c M , 提 示 該 區(qū) 域 定 位 有 與 鼻 咽 癌 密 切 相 關(guān) 的 正 常 功 能 , 甚 至 干 擾 細 胞 正 常 的 間 隙 連 接 通 訊 。抑 瘤 基

41、 因 。 查 詢 人 類 U n i G e n e E S T 數(shù) 據(jù) 庫 , 采 用 C x 基 因 在 某 些 惡 性 腫 瘤 中 的 表 達 錯 位 現(xiàn) 象 的 假5 5 6中 南 大 學 學 報 ( 醫(yī) 學 版 ) , 2 0 0 8 , 3 3 ( 7 ) 說 , 為 闡 明 C x 基 因 在 惡 性 腫 瘤 基 因 組 中 的 表 達 大 于 H N E 1 細 胞 , N A G 7 基 因 能 明 顯 促 進 H N E 1 細規(guī) 律 和 分 子 機 制 提 供 了 創(chuàng) 造 性 的 概 念 和 思 路 。胞 向 腎 內(nèi) 的 侵 襲 。 說 明 N A G 7 基 因 并 不

42、 具 備 啟 動3 . 2 B R D 7 ? ? ? 一 個 核 轉(zhuǎn) 錄 調(diào) 控 因 子 的 功 能 研 究 細 胞 運 動 侵 襲 的 作 用 , 而 是 能 促 進 腫 瘤 細 胞 的 運 B R D 7 基 因 是 鼻 咽 癌 組 織 表 達 下 調(diào) / 缺 失 的 動 侵 襲 潛 能 。 N A G 7 基 因 通 過 抑 制 E R 表 達 , 激候 選 抑 瘤 基 因 。 B R D 7 基 因 轉(zhuǎn) 染 至 鼻 咽 癌 細 胞 系 活 H ? r a s / p ? c ? R a f , J N K / A P ? 1 和 A K T / p 7 0 s 6 K 等H N E

43、1 中 , 可 部 分 逆 轉(zhuǎn) H N E 1 細 胞 的 惡 性 表 型 , 明 信 號 傳 導(dǎo) 通 路 , 上 調(diào) C A V 1 , M M P 1 和 E z r i n 表 達 , 2 1 顯 抑 制 細 胞 的 生 長 和 軟 瓊 脂 集 落 形 成 , 將 細 胞 阻 促 進 鼻 咽 癌 H N E 1 細 胞 的 運 動 侵 襲 潛 能 。滯 在 G / G 期 , 并 且 可 以 延 遲 裸 鼠 皮 下 移 植 瘤 的 利 用 人 腫 瘤 相 關(guān) 寡 核 苷 酸 芯 片 篩 選 N A G 7 基0 1 1 5 形 成 。 利 用 酵 母 雙 雜 交 系 統(tǒng) ( T w o

44、? h y b r i d s y s ? 因 調(diào) 控 鼻 咽 癌 H N E 1 細 胞 的 基 因 差 異 表 達 譜 和 蛋白 質(zhì) 譜 分 析 , 構(gòu) 建 了 鼻 咽 癌 差 異 表 達 的 基 因 組 和t e m ) 篩 選 與 B R D 7 蛋 白 相 互 作 用 的 蛋 白 , 發(fā) 現(xiàn)蛋 白 質(zhì) 組 數(shù) 據(jù) 庫 , 成 功 實 現(xiàn) 了 鼻 咽 癌 差 異 基 因 組B R D 7 能 與 B R D 3 和 / 或 B R D 2 蛋 白 形 成 異 源 二 聚 1 6 體 或 三 聚 體 發(fā) 揮 核 內(nèi) 轉(zhuǎn) 錄 調(diào) 節(jié) 功 能 。 并 發(fā) 現(xiàn) 和 蛋 白 質(zhì) 組 的 對 接

45、。 N A G 7 基 因 的 作 用 機 制 可 能B R D 7 與 B R D 2 蛋 白 間 的 交 互 作 用 不 依 賴 于 兩 蛋 是 通 過 誘 發(fā) 基 因 表 達 譜 的 改 變 而 引 起 蛋 白 質(zhì) 表達 譜 發(fā) 生 相 應(yīng) 的 改 變 , 在 一 致 性 改 變 的 功 能 分 子白 的 b r o m o d o m a i n 結(jié) 構(gòu) 域 , B R D 2 的 C ? 末 端 ( 2 2 a a的 作 用 下 , 抑 制 細 胞 增 殖 , 從 而 發(fā) 揮 抑 制 鼻 咽 癌4 2 8 7 9 8 ) 某 一 區(qū) 域 是 B R D 2 和 B R D 7 蛋 白

46、 間 交 2 1 互 作 用 的 結(jié) 構(gòu) 基 礎(chǔ) , 可 以 增 強 B R D 7 的 促 凋 亡 活 細 胞 生 長 的 作 用 。3 . 4 N G X 6 ? ? ? 與 E z r i n 發(fā) 生 交 互 作 用 的 轉(zhuǎn) 移 相性 。 通 過 對 B R D 7 上 游 分 子 事 件 的 研 究 , 采 用 缺關(guān) 抑 瘤 基 因 N G X 6 基 因 是 一 個 重 要 的 鼻 咽 癌失 突 變 、 熒 光 素 酶 活 性 和 可 視 化 啟 動 子 活 性 檢 測技 術(shù) , 證 實 了 B R D 7 的 核 心 啟 動 子 活 性 區(qū) 域 , 并 發(fā) 抑 瘤 基 因 侯 選

47、者 , 與 鼻 咽 癌 的 淋 巴 結(jié) 轉(zhuǎn) 移 呈 負 相 1 7 現(xiàn) 其 受 到 c ? M y c 基 因 的 直 接 負 性 調(diào) 控 。 B R D 7 關(guān) , 在 鼻 咽 癌 細 胞 中 的 高 表 達 , 可 導(dǎo) 致 鼻 咽 癌 細胞 H N E 1 蛋 白 質(zhì) 表 達 譜 發(fā) 生 改 變 , 負 性 調(diào) 控 E G F R能 夠 抑 制 b e t a ? c a t e n i n 的 核 聚 集 , 下 調(diào) T C F 4 啟 動介 導(dǎo) 的 M A P K 信 號 通 路 , 下 調(diào) 細 胞 周 期 素 D 1 的子 活 性 , 從 而 參 與 調(diào) 節(jié) W n t 通 路 。

48、B R D 7 能 夠 下 調(diào)c ? j u n , J N K , p ? c ? j u n , p ? E R K 表 達 , 負 性 調(diào) 控 M A P K 表 達 , 使 細 胞 增 殖 速 度 降 低 , 從 而 發(fā) 揮 抑 制 鼻 咽 1 8 通 路 , 結(jié) 合 乙 酰 化 組 蛋 白 , 通 過 r a s / M E K / E R K 癌 細 胞 生 長 的 作 用 。 同 時 , N G X 6 能 與 細 胞 骨 架連 接 蛋 白 E z r i n 發(fā) 生 交 互 作 用 , 并 下 調(diào) E z r i n 表 達 ,和 R b / E 2 F 兩 條 通 路 抑 制

49、 鼻 咽 癌 細 胞 周 期 進 程 ,是 在 鼻 咽 癌 發(fā) 病 過 程 中 與 細 胞 周 期 密 切 相 關(guān) 的 部 分 抑 制 E G F 誘 導(dǎo) 的 鼻 咽 癌 細 胞 的 運 動 遷 移 , 減 1 9 核 轉(zhuǎn) 錄 調(diào) 節(jié) 因 子 。 B R D 7 核 定 位 信 號 缺 失 突 變 弱 細 胞 侵 襲 能 力 , 增 強 細 胞 間 通 訊 能 力 。 缺 失 突體 B R D 7 N L S 存 在 胞 漿 到 胞 核 的 移 位 障 礙 、 該 突 變 研 究 表 明 , 它 的 E G F 和 C Y T O 結(jié) 構(gòu) 域 是 調(diào) 節(jié) 細 2 2 胞 黏 附 、 運 動 遷

50、 移 和 生 長 增 殖 的 關(guān) 鍵 功 能 域 。變 體 對 細 胞 周 期 進 程 延 緩 程 度 明 顯 減 小 , 提 示B R D 7 的 N L S 結(jié) 構(gòu) 域 是 其 重 要 功 能 結(jié) 構(gòu) 域 。 以 上 N G X 6 在 結(jié) 直 腸 癌 的 發(fā) 生 發(fā) 展 中 同 樣 發(fā) 揮 著結(jié) 果 提 示 鼻 咽 癌 相 關(guān) 基 因 B R D 7 基 因 編 碼 核 轉(zhuǎn) 錄 非 常 重 要 的 作 用 。 它 在 結(jié) 直 腸 癌 組 織 中 表 達 明顯 下 降 ; 并 抑 制 b e t a ? c a t e n i n / W n t 通 路 中 的 b e t a ?蛋 白

51、在 細 胞 惡 變 過 程 中 可 能 有 細 胞 漿 到 細 胞 核的 移 位 障 礙 。 總 之 , B R D 7 基 因 作 為 鼻 咽 癌 候 選 c a t e n i n 和 M A P K 信 號 通 路 中 關(guān) 鍵 分 子 J N K 1 / 2 的的 抑 瘤 / 易 感 基 因 之 一 , 其 表 達 異 常 參 與 了 鼻 咽 蛋 白 質(zhì) 表 達 和 核 移 位 , 使 b e t a ? c a t e n i n 和 p J N K 1 向 2 0 癌 的 發(fā) 生 和 進 展 。 細 胞 膜 的 聚 集 , 抑 制 b e t a ? c a t e n i n 和

52、p J N K 1 的 核 移位 , 來 負 調(diào) 控 W n t 和 S P A K / J N K 通 路 , 延 緩 細 胞 周3 . 3 N A G 7 ? ? ? 具 有 雙 重 生 物 學 功 能 的 鼻 咽 癌 相關(guān) 基 因 N A G 7 基 因 能 明 顯 抑 制 鼻 咽 癌 H N E 1 期 的 進 程 , 抑 制 腫 瘤 增 殖 和 裸 鼠 皮 下 移 植 瘤 的 生細 胞 體 內(nèi) 、 外 增 殖 , 并 且 在 不 同 侵 襲 轉(zhuǎn) 移 潛 能 的 長 , 并 能 抑 制 腫 瘤 血 管 的 生 成 , 下 調(diào) V E G F 的 表 2 3 腫 瘤 細 胞 系 中 存 在 表 達 差 異 和 序 列 突 變 。 它 能 達 , 使 結(jié) 腸 癌 細 胞 體 外 侵 襲 能 力 下 降 。夠 增 加 低 侵 襲 轉(zhuǎn) 移 潛 能 的 H N E 1 和 6 ? 1 0 B 細 胞 與 3 .