肺炎病原學(xué)診斷

1、 軍團(tuán)菌屬、結(jié)核桿菌等n病毒感染為25 % 35%，細(xì)菌感染為2154 % ,非典型病原如支原體、衣原體感染為7 % ,兩種以上病原混合11%。不同年齡組兒童的常見(jiàn)微生物病原年齡組病原體主要臨床表現(xiàn)出生至20 日b 族鏈球菌 早發(fā)型敗血癥的肺部表現(xiàn)。g- 腸道細(xì)菌 常為院內(nèi)感染,經(jīng)常在生后1 周才發(fā)現(xiàn)。巨細(xì)胞病毒 全身巨細(xì)胞病毒感染的肺部表現(xiàn),伴先天性感染的其他體征存在。3 周至3 月 沙眼衣原體 由母體生殖道感染,出現(xiàn)發(fā)熱及進(jìn)展性、亞急性間質(zhì)性肺炎。rsv 發(fā)病的高峰在27 月齡,常以喘息為特點(diǎn),在各季或早春多見(jiàn)。副流感病毒3 同rsv 感染非常相似,在嬰兒晚期影響很小,在冬季不流行。肺炎鏈

2、球菌 最常見(jiàn)的細(xì)菌性肺炎病原。嬰幼兒年齡組 百日咳桿菌 主要引起支氣管炎,但在嚴(yán)重病例也引起肺炎。不同年齡組兒童的常見(jiàn)微生物病原年齡組病原體主要臨床表現(xiàn)4 月至4歲rsv、腺病毒、副流感流感病毒、鼻病毒是引起年幼兒肺炎的最常見(jiàn)病因。 肺炎鏈球菌 最常引起大葉性肺炎,但也可引起其他形式的肺炎。流感嗜血桿菌其他血清型和不定型株在發(fā)展中國(guó)家可引起肺炎肺炎支原體 在這一年齡組中的年長(zhǎng)兒中主要引起肺炎結(jié)核分枝桿菌 在此病原感染高度流行地區(qū)是肺炎的重要病因。不同年齡組兒童的常見(jiàn)微生物病原年齡組病原體主要臨床表現(xiàn)5 至15 歲 肺炎支原體 這一年齡組兒童肺炎的主要病因肺炎衣原體 可能是這一年齡組年長(zhǎng)兒童肺炎

3、的一個(gè)重要病因肺炎鏈球菌 大葉性肺炎的最主要病原,但可能也引起其他形式肺炎。結(jié)核分枝桿菌 在此病原感染的高發(fā)地區(qū)是肺炎的常見(jiàn)病因,并可能在青春期和妊娠期病情惡化 兒童cap 病原學(xué)診斷方法n病原菌分離培養(yǎng)n免疫學(xué)方法檢測(cè)病原的特異性抗原抗體n分子生物學(xué)診斷方法病原培養(yǎng)分離n標(biāo)本種類(lèi)血液胸水支氣管肺泡灌洗痰液，咽、鼻分泌物血液培養(yǎng)血液培養(yǎng)n肺炎伴發(fā)菌血癥機(jī)會(huì)510，重癥和免疫抑制患者則較高。n血標(biāo)本采集方便、安全，且污染機(jī)會(huì)少、特異性高，它們?cè)诓≡瓕W(xué)診斷上具有特殊意義。n重癥特別是免疫抑制宿主肺炎，應(yīng)盡早、多次采血作細(xì)菌和真菌培養(yǎng)。 血液培養(yǎng)n血培養(yǎng)標(biāo)本要求采集必須在使用抗菌藥物之前采用全自動(dòng)血

4、培養(yǎng)儀配備的兒童專(zhuān)用血培養(yǎng)瓶每次2瓶，在不同部位采血采血量，兒童3-5ml，嬰幼兒1-2ml。采集后的血培養(yǎng)瓶應(yīng)立即送往實(shí)驗(yàn)室blood culture positivity rates91.699.399.6868890929496981001st2nd3rdculture setsblood cultures positive (% )weinstein et al., 1983采血量與陽(yáng)性率的關(guān)系采血量與陽(yáng)性率的關(guān)系胸水胸水 n對(duì)大多數(shù)伴有胸腔積液的肺炎，無(wú)論確診與否，應(yīng)該行胸腔穿刺術(shù)采集標(biāo)本。胸腔積液或膿胸均應(yīng)做厭氧培養(yǎng)。n胸水是無(wú)污染標(biāo)本，不論被檢測(cè)出的微生物數(shù)量多少，都被認(rèn)為是病原

5、體。n細(xì)胞計(jì)數(shù)和ph測(cè)定，腺苷脫氨酶（ada）測(cè)定對(duì)鑒別結(jié)核胸膜炎具有較好價(jià)值。n胸水的抗原檢測(cè)用于疾病診斷，如流感嗜血桿菌b型、肺炎鏈球菌、軍團(tuán)菌或新型隱球菌。 痰標(biāo)本n痰培養(yǎng)結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)、直接鏡檢、細(xì)胞學(xué)篩選、定量或半定量培養(yǎng)以及所發(fā)現(xiàn)的微生物的致病力等加以解釋。n可用于普通細(xì)菌、分枝桿菌、真菌的檢測(cè)，但不適于檢測(cè)厭氧菌。n在無(wú)菌條件下，用負(fù)壓吸引法吸取患兒會(huì)咽部以下的下呼吸道的分泌物，置滅菌三通管內(nèi)。痰標(biāo)本n痰涂片鏡檢每低倍鏡視野25個(gè)中性粒細(xì)胞。n痰標(biāo)本也可以用直接免疫熒光法快速檢測(cè)出下呼吸道的病毒感染。支氣管肺泡灌洗液n對(duì)于不能咳出或誘導(dǎo)出足夠的痰液患者，支氣管肺泡灌洗液可作為

6、獲取標(biāo)本進(jìn)行病原菌培養(yǎng)的一種方法。n支氣管肺泡灌洗液在檢測(cè)需氧菌、真菌、軍團(tuán)菌和分枝桿菌等感染時(shí)可提高陽(yáng)性檢出率。有研究表明特異性高達(dá)89100%。 n支氣管肺泡灌洗液經(jīng)低速在玻片上制成細(xì)胞標(biāo)本涂片，可以用直接免疫熒光法快速檢測(cè)出下呼吸道的病毒感染的8種病毒。n鱗狀上皮細(xì)胞1中性粒細(xì)胞80為合格標(biāo)本。標(biāo)本采集和送檢n痰和支氣管肺泡灌洗液必須在使用抗菌藥物之前或停藥停藥1天后留取標(biāo)本。天后留取標(biāo)本。標(biāo)本采集后1h內(nèi)必須立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室處理。室溫下延擱2h會(huì)降低肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌的分離率，銅綠假單胞菌等革蘭陰性桿菌則過(guò)度生長(zhǎng)。我院呼吸道分離的主要細(xì)菌（2008-2009）n肺炎鏈球菌8

7、69株（14 % ）n金黃色葡萄球菌692株（11%）n流感嗜血桿菌662株（10%）n肺炎支原體878株（16.3%）細(xì)菌培養(yǎng)菌落形態(tài)n肺炎鏈球菌 、金黃色葡萄球菌 細(xì)菌培養(yǎng)菌落形態(tài)mp培養(yǎng)mp培養(yǎng)mfa檢測(cè)呼吸道病毒mfa法檢測(cè)呼吸道病毒病原微生物的抗體檢測(cè) n血清學(xué)檢查通常用于檢測(cè)非典型病原體如肺炎支原體（mp）、肺炎衣原體（cp）、軍團(tuán)菌。n常用方法有間接免疫熒光試驗(yàn)（ifa）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（elisa）、放射免疫法（ria）、顆粒凝集試驗(yàn)（pa）等。 mp血清學(xué)檢查nelisa法檢測(cè)mp-igm、 mp-igg定性或定量n pa法檢測(cè)mp-igm確診mp急性感染則應(yīng)強(qiáng)調(diào)雙份血清(

8、間隔2周)恢復(fù)期抗體滴度上升4倍或下降至原來(lái)的1/4或抗體滴度持續(xù)1:160。 cp血清學(xué)檢查n微量免疫熒光法(mif)、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(elisa)n抗體檢測(cè)3種：igm,igg和igan初次感染(原發(fā)感染)時(shí)，igm于發(fā)病后3周出現(xiàn)，igg于發(fā)病后6一8周出現(xiàn)，而iga反應(yīng)較弱或不出現(xiàn)。n再次感染(重復(fù)感染)時(shí)，igg常在1一2周內(nèi)出現(xiàn)，且效價(jià)可以很高，但往往沒(méi)有igm出現(xiàn)或其效價(jià)很低。軍團(tuán)菌血清抗體檢測(cè)n尿軍團(tuán)菌抗原檢測(cè)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)病人尿軍團(tuán)菌抗原檢測(cè)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)病人痰或尿液的嗜肺軍團(tuán)菌抗原。痰或尿液的嗜肺軍團(tuán)菌抗原。n血清學(xué)檢查血清學(xué)檢查: 間接免疫熒光法或酶聯(lián)免

9、疫吸附試驗(yàn)間接免疫熒光法或酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)特異性檢測(cè)特異性igm抗體，如效價(jià)抗體，如效價(jià)1：128或雙份血清或雙份血清效價(jià)呈效價(jià)呈4倍以上升高可做出確定診斷。倍以上升高可做出確定診斷。軍團(tuán)菌檢測(cè)軍團(tuán)菌檢測(cè)分類(lèi)分類(lèi)檢材檢材方法方法注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)細(xì)菌學(xué)基因?qū)W (pcr)血清學(xué)尿抗原檢測(cè)尿抗原檢測(cè)痰培養(yǎng)分泌物支氣管肺泡灌洗液陽(yáng)性率低下陽(yáng)性率低下同上leg基因mip 基因軍團(tuán)菌特異性嗜肺軍團(tuán)菌特異性血清微量凝集ifa, dfa雙份血清效價(jià)呈4倍增長(zhǎng)單份血清效價(jià) 256尿液immunochlomatographyelisaria嗜肺軍團(tuán)菌嗜肺軍團(tuán)菌1型特異性型特異性發(fā)病60天內(nèi)，但免疫缺陷病人可延長(zhǎng)ifa檢測(cè)呼吸道病原抗體分子生物學(xué)技術(shù)n優(yōu)點(diǎn)直接從臨床標(biāo)本中快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出包括苛養(yǎng)菌在內(nèi)的細(xì)菌.檢測(cè)耐藥基因?qū)δ退幘M(jìn)行流行病學(xué)研究pcr方法n方法隨機(jī)擴(kuò)增dna多態(tài)性分析限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析pcr多重pcr pfgemp分子生物學(xué)檢測(cè)npcr檢測(cè)mpp1粘附蛋白：根據(jù)肺炎支原體p1粘附蛋白設(shè)計(jì)pcr引物：p1: 5-gccaccctcgggggcagtcag-3p2: 5-gagtcgggattccccgcggagg-3n擴(kuò)增產(chǎn)物209bp雙重pcr簡(jiǎn)便、快速檢測(cè)軍團(tuán)菌n根據(jù)軍團(tuán)菌16srrna基因和