尿樣中氧氟沙星的含量測定ppt課件

1、尿樣中氧氟沙星的含量測定尿樣中氧氟沙星的含量測定 組員：胡帆、周凡漪實驗?zāi)康模簩嶒災(zāi)康模?.1.分析臨床上廣泛用于治療泌尿系統(tǒng)，呼吸分析臨床上廣泛用于治療泌尿系統(tǒng)，呼吸系統(tǒng)感染的藥物氧氟沙星。系統(tǒng)感染的藥物氧氟沙星。2.2.比較比較LC-UVLC-UV與與LC-LC-熒光分析氧氟沙星的區(qū)別。熒光分析氧氟沙星的區(qū)別。背景資料：背景資料： 氧氟沙星是第三代喹諾酮類新型廣譜抗菌氧氟沙星是第三代喹諾酮類新型廣譜抗菌藥藥,并具分布廣并具分布廣,吸收好吸收好,半衰期長等特點半衰期長等特點,臨臨床廣泛應(yīng)器具有廣譜抗菌作用。床廣泛應(yīng)器具有廣譜抗菌作用。尿樣采集：尿樣采集： 受試者空腹飲水受試者空腹飲水200m

2、l200ml排尿排尿, , 留取留取1h1h后后尿樣作空白尿樣作空白, ,一次口服一次口服OFLXOFLX片片600 mg, 600 mg, 搜搜集集1 1，2 2，3 3，4 4，5 5小時后的尿樣，做好標(biāo)小時后的尿樣，做好標(biāo)志。志。LC-UVLC-UV法分析尿樣中氧氟沙星的含量法分析尿樣中氧氟沙星的含量一、實驗條件：一、實驗條件：1.1 實驗儀器實驗儀器 Agilent高效液相色譜儀，高效液相色譜儀，G1314B-VWD紫紫外檢測器，色譜柱，量瓶外檢測器，色譜柱，量瓶1.2 實驗試劑實驗試劑 氧氟沙星片劑，甲醇氧氟沙星片劑，甲醇(色譜純色譜純)，尿樣，空白，尿樣，空白尿樣，尿樣，HAc溶液

3、溶液 1.3色譜條件 色譜柱:C18 5m (250 mm 416 mm) 流動相: 甲醇/0.05 %HAC=80：20 流速:1ml/min 進樣量：20l 柱溫：室溫 檢測波長：在250400nm處掃描，選取有最大吸收度處作為檢測波長。實踐過程中選用294nm作為檢測波長。二、實驗方法二、實驗方法2.1 尿液的預(yù)處置 取空白尿樣和尿樣，13000r/min離心10min，取上清液經(jīng)0.45m的水相濾膜過濾，保管濾液。 2.2 氧氟沙星規(guī)范液的配制 精細稱取氧氟沙星片劑200 mg ,置50ml容量瓶中,以流動相稀釋至刻度,配成4.0 mg/ml的貯藏液，用流動相稀釋400倍，汲取20l作

4、為進樣品。 2.3 規(guī)范曲線的制造 測定時，取規(guī)范液0.5，1，1.5，2，2.5ml,用流動相稀釋于10ml量瓶，汲取20l作為進樣品，記錄色譜圖，以氧氟沙星規(guī)范濃度對峰面積進展回歸，得到回歸方程。2.4 空白尿樣的配制 取空白尿液濾液1ml,用流動相稀釋20倍，汲取20l作為進樣品。2.5 尿樣的配制 取尿液濾液1ml,用流動相稀釋20倍，汲取20l作為進樣品。2.6 進樣 先進1針規(guī)范品察看流動相配置能否適宜,適宜后,進1針空白尿樣察看有無雜質(zhì)在測定波優(yōu)點影響左氧氟沙星的吸收,然后進樣規(guī)范品與待測樣品,規(guī)范品進樣5針來檢驗儀器精細度。2.7回收率實驗 取濃度為0.5，1，1.5 g/ml

5、的氧氟沙星尿樣，稱取氧氟沙星規(guī)范品，配置為一樣濃度，經(jīng)過峰面積比值，測定回收率。2.8精細度實驗 取濃度為0.52.5g/ml的氧氟沙星規(guī)范品，1d內(nèi)反復(fù)測定5次,測得日內(nèi)RSD，隔日測定5 次, 測得日間RSD。紫外檢測測定尿液中左氧氟沙星的含量 紫外檢測測定尿液中左氧氟沙星的含量，實驗操作方法除檢測器設(shè)定與熒光檢測器不同外檢測波長：294nm，其他設(shè)置和操作均與熒光檢測時一樣。三、實驗結(jié)果三、實驗結(jié)果 熒光法測定尿樣中左氧氧氟沙星濃度規(guī)范曲線圖紫外法測定尿樣中左氧氟沙星濃度規(guī)范曲線圖精細度日內(nèi)、 日間RSD 丈量熒光法 日內(nèi)RSD=2.6% 日間RSD=3.3%紫外法 日內(nèi)RSD=0.8%

6、 日間RSD=2.9%回收率實驗 回收率 熒光 98.7%、101.4%、101.2%； 紫外 99.6%、98.4%、99.1%。熒光法測定尿樣中排出左氧氟沙星量g-時間曲線 紫外檢測測定尿樣中排出左氧氟沙星量g-時間曲線 熒光法測定尿樣中排出左氧氟沙星的累計量g-時間曲線 紫外檢測測定尿樣中排出左氧氟沙星的累計量g-時間曲線 討論 1、采用LC-UV法與LC-熒光法分別測定尿樣中氧氟沙星的含量，并且比較兩種方法丈量結(jié)果的不同，因此要求丈量過程具有對照性：待測樣品，規(guī)范品，空白樣品的濃度兩者均一樣，流動相也一樣，都采用外標(biāo)法，但由于分析方法的不同，檢測波長不同。 2、實驗中所采用的尿液由于新

7、穎尿液，假設(shè)無法做到這點，因在尿液中參與二甲苯等防腐劑，防止尿液因細菌繁衍呵斥混濁，影響實驗效果。而且尿樣中的藥物會分解，影響實驗結(jié)果，因此最好是現(xiàn)取，實驗過程中不運用時放入冰箱保管 3、由于沒有規(guī)范品對照，在測定時以左氧氟沙星片作為規(guī)范品運用。而事前沒有對其中左氧氟沙星的實踐含量進展過標(biāo)定，也不能排除片劑中的其他成分如輔料中的抗氧化劑等對實驗結(jié)果的影響。 4、實驗本來應(yīng)該統(tǒng)計每次的尿液量，計算出每次排尿中含有的左氧氟沙星的含量，然后制的排出藥物量-時間曲線，由于本次實驗中沒有精細的容器量尿液體積，只能大約估計尿液量，測算出尿液中藥物的量。 5、實驗中思索到出峰時間和分別度以及實踐操作的便利程

8、度，最終選擇的流動相甲醇：0.05%冰醋酸溶液=80：20，但是還是有脫尾景象，在熒光檢測中特別明顯。 6、從實驗數(shù)據(jù)，我們可以以為熒光檢測器作為檢測安裝，靈敏度、專屬性好沒有雜質(zhì)峰，較紫外檢測器優(yōu)。 規(guī)范品中左氧氟沙星出峰圖紫外檢測器檢測min00.511.522.5mAU 050100150200250300 VWD1 A, 波長=294 nm (20080524DOX000028.D) 1.045尿樣中左氧氟沙星出峰圖紫外檢測器檢測min00.511.522.533.544.5mAU 05101520253035 VWD1 A, 波長=294 nm (20080524DOX000033.D) 1.116 2.363規(guī)范品中左氧氟沙星出峰圖熒光檢測法min00.511.522.533.5LU 0510152025 FLD1 A, Ex=295, Em=505 (STU20080523DOX