藥物制劑分析二

1、1藥物制劑分析（二）藥物制劑分析（二）analysis of pharmaceutical preparations2p 【注射液的裝量注射液的裝量】 p 【注射用無菌粉末的裝量差異注射用無菌粉末的裝量差異】 p 【可見異物可見異物】 p 【無菌無菌】 p 【熱原熱原】或或【細菌內(nèi)毒素細菌內(nèi)毒素】 p 【不溶性微粒不溶性微?！?指藥物制成的供注入體內(nèi)的滅菌溶液、乳狀液指藥物制成的供注入體內(nèi)的滅菌溶液、乳狀液或混懸液，以及供臨用前配成溶或混懸液，以及供臨用前配成溶液或混懸液的液或混懸液的無菌粉末或濃溶液。無菌粉末或濃溶液。注射劑大都血管內(nèi)直接給藥，部分肌肉注射。注射劑大都血管內(nèi)直接給藥，部分肌肉

2、注射。安全性要求與檢查必須特別嚴格。安全性要求與檢查必須特別嚴格。 注射劑注射劑3不溶性微粒檢查不溶性微粒檢查p在在可見異物檢查可見異物檢查符合規(guī)定后，用以檢查靜符合規(guī)定后，用以檢查靜脈滴注用注射液（裝量為脈滴注用注射液（裝量為100ml以上者）以上者）中不溶性微粒。中不溶性微粒。p除另有規(guī)定外，每除另有規(guī)定外，每1ml中含有中含有10m以上的以上的微粒不得超過微粒不得超過20粒，含粒，含25m的微粒不得超的微粒不得超過過2粒。粒。p顯微計數(shù)法、光阻法顯微計數(shù)法、光阻法4熱原（熱原（pyrogen）檢查法檢查法o 熱原熱原o 活的微生物的代謝產(chǎn)物或是死亡的微生物尸體，是活的微生物的代謝產(chǎn)物或是

3、死亡的微生物尸體，是微生物的一種內(nèi)毒素，注射后會引起體溫異常升高，微生物的一種內(nèi)毒素，注射后會引起體溫異常升高，嚴重的還會出現(xiàn)昏迷、虛脫，甚至有生命危險。嚴重的還會出現(xiàn)昏迷、虛脫，甚至有生命危險。o 熱原檢查法熱原檢查法o 本法系將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，本法系將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定在規(guī)定時間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。5o 檢查法檢查法 o 取適用的家兔取適用的家兔3只，測定其正常體溫后只，測定其正常體溫后15分鐘以內(nèi)，分鐘以內(nèi)，自耳靜脈緩緩注

4、入規(guī)定劑量并溫?zé)嶂良s自耳靜脈緩緩注入規(guī)定劑量并溫?zé)嶂良s38的供試品的供試品溶液，然后每隔溶液，然后每隔30分鐘按前法測量其體溫分鐘按前法測量其體溫1次，共測次，共測6次，以次，以6次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高溫度兔體溫的升高溫度()。o 如如3只家兔中有只家兔中有1只體溫升高只體溫升高0.6或或0.6以上，或以上，或3只只家兔體溫升高均低于家兔體溫升高均低于0.6，但體溫升高的總和達，但體溫升高的總和達1.4或或1.4以上，應(yīng)另取以上，應(yīng)另取5只家兔復(fù)試。只家兔復(fù)試。o 結(jié)果判斷結(jié)果判斷61、注射劑中主藥含量大，附加成分不、注射劑中主

5、藥含量大，附加成分不干擾，可直接測定干擾，可直接測定葡萄糖酸鈣的原料藥和注射劑：絡(luò)合滴定法；葡萄糖酸鈣的原料藥和注射劑：絡(luò)合滴定法；2、主藥遇熱不穩(wěn)定而易分解，常采用、主藥遇熱不穩(wěn)定而易分解，常采用有機溶劑提取后測定有機溶劑提取后測定3、主藥含量較少，采用靈敏度高的方、主藥含量較少，采用靈敏度高的方法法排除附加劑干擾排除附加劑干擾注射劑含量測定注射劑含量測定7注射劑的溶劑注射劑的溶劑u包括包括: 水性溶劑、植物油及其他非水性溶劑等。水性溶劑、植物油及其他非水性溶劑等。u 最常用的水性溶劑為注射用水，亦可用最常用的水性溶劑為注射用水，亦可用0.9%氯化鈉溶液或其他適宜的水溶液。氯化鈉溶液或其他適

6、宜的水溶液。u 非水溶劑有乙醇、丙二醇、聚乙二醇的水溶液。非水溶劑有乙醇、丙二醇、聚乙二醇的水溶液。u 常用的油溶劑為注射用大豆油。其質(zhì)量應(yīng)符合常用的油溶劑為注射用大豆油。其質(zhì)量應(yīng)符合大豆油大豆油(供注射用供注射用)的標(biāo)準(zhǔn)。的標(biāo)準(zhǔn)。8p附加劑一般有滲透壓調(diào)節(jié)劑、附加劑一般有滲透壓調(diào)節(jié)劑、phph值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、抑菌劑等。抑菌劑等。p抗氧劑有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉等。抗氧劑有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉等。p常用的抑菌劑及其濃度常用的抑菌劑及其濃度(g/ml)(g/ml)為苯酚為苯酚0.5%0.5%、甲酚、甲酚0.3%0.3%、三氯叔、三氯叔丁醇

7、丁醇0.5%0.5%等。等。p抑菌劑用量應(yīng)能抑制注射液內(nèi)微生物的生長。加有抑菌劑的注抑菌劑用量應(yīng)能抑制注射液內(nèi)微生物的生長。加有抑菌劑的注射液，仍應(yīng)用適宜的方法滅菌。射液，仍應(yīng)用適宜的方法滅菌。附加劑附加劑9排除附加劑干擾排除附加劑干擾 o抗氧劑（亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、維生素c等）onacl（等滲溶液） o穩(wěn)定劑(乳酸鈣或其他鈣鹽) o溶劑水o溶劑油 10抗氧劑抗氧劑 具有還原性藥物的注射劑中常加抗氧劑。具有還原性藥物的注射劑中常加抗氧劑。 對氧化還原滴定有干擾。對氧化還原滴定有干擾。nahso3 + ch3coch3 (ch3)2c(oh)-so3na碘量法測定維生素碘量法測定維

8、生素c注射液注射液 na2s2o5 + h2o2nahso3nahso3 + hcho ho-ch2-so3na碘量法測定安乃近注射液。碘量法測定安乃近注射液。但是，甲醛也具有還原性。氧化電位高時不宜。但是，甲醛也具有還原性。氧化電位高時不宜。 亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉加入丙酮、或甲醛消除。亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉加入丙酮、或甲醛消除。1、加掩蔽劑、加掩蔽劑11【規(guī)格規(guī)格】 (1)1ml 0.25g (2)2ml 0.5g【含量測定含量測定】 精密量取本品精密量取本品10ml，置，置100ml量瓶中，加乙量瓶中，加乙醇醇80ml，再加水稀釋至刻度，搖勻，立即精密量取再加水稀釋至

9、刻度，搖勻，立即精密量取10ml，置錐形瓶中，加乙醇置錐形瓶中，加乙醇2ml、水、水6.5ml與與甲醛溶液甲醛溶液0.5ml，放置放置1分鐘，加鹽酸溶液分鐘，加鹽酸溶液(91000)1.0ml，搖勻，用碘滴定液搖勻，用碘滴定液(0.1mol/l)滴定（控制滴定速度為每分鐘滴定（控制滴定速度為每分鐘35ml），），至溶液至溶液所顯的淡黃色在所顯的淡黃色在30秒鐘內(nèi)不褪。每秒鐘內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/l)相當(dāng)于相當(dāng)于17.57mg的的c13h16n3nao4sh2o。安乃近注射液安乃近注射液 metamizole sodium injection122 2、加酸分解消除、加

10、酸分解消除 亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉 均可均可被酸分解，加熱逸出被酸分解，加熱逸出soso2 2na2s2o3 + 2hcl 2nacl + h2s2o3(加熱)nahso3+hcl nacl + h2so3 (加熱)so2 + h2oso2 + h2o13鹽酸普魯卡因胺注射液鹽酸普魯卡因胺注射液 procainamide hydrochloride injection 本品為鹽酸普魯卡因胺的滅菌水溶液。本品為鹽酸普魯卡因胺的滅菌水溶液。 【規(guī)格規(guī)格】(1)1ml0.1g (2)2ml0.2g (3)5ml0.5g (1)1ml0.1g (2)2ml0.

11、2g (3)5ml0.5g (4)10ml1g (4)10ml1g 【含量測定含量測定】精密量取本品精密量取本品5ml5ml，加水加水40ml40ml與鹽酸溶液與鹽酸溶液(12)10ml(12)10ml，迅速煮沸，迅速煮沸，立即冷卻至室溫，照永停滴定法立即冷卻至室溫，照永停滴定法( (附附錄錄 a) a)，用亞硝酸鈉滴定液用亞硝酸鈉滴定液(0.1mol/l)(0.1mol/l)滴定。每滴定。每1ml1ml亞硝酸亞硝酸鈉滴定液鈉滴定液(0.1mol/l)(0.1mol/l)相當(dāng)于相當(dāng)于27.18mg27.18mg的的c13h21n3ohclc13h21n3ohcl。 143 3、加弱氧化劑氧化消

12、除、加弱氧化劑氧化消除過氧化氫和硝酸，將抗氧劑過氧化氫和硝酸，將抗氧劑(亞硫酸鹽等亞硫酸鹽等)氧化，而不氧化被測藥物，不消耗滴定液。氧化，而不氧化被測藥物，不消耗滴定液。na2so3 + h2o2 na2so4 + h2ona2so3 + 2hno3 na2so4 + 2no2 + h2o15鹽酸氯丙嗪注射液鹽酸氯丙嗪注射液本品為鹽酸氯丙嗪的滅菌水溶液。本品可本品為鹽酸氯丙嗪的滅菌水溶液。本品可加適量的維生素加適量的維生素c c ( 0.01mol/l ( 0.01mol/l hclhcl中中uvuv最大吸收最大吸收243nm243nm) )?！竞繙y定含量測定】避光操作。精密量取本品適量避光

13、操作。精密量取本品適量(約相當(dāng)于鹽酸氯約相當(dāng)于鹽酸氯丙嗪丙嗪50mg)，置，置250ml量瓶中，加鹽酸溶液量瓶中，加鹽酸溶液(91000)至刻度，至刻度，搖勻；精密量取搖勻；精密量取10ml，置，置50ml量瓶中，加鹽酸溶液量瓶中，加鹽酸溶液(91000)至刻度，搖勻，照分光光度法至刻度，搖勻，照分光光度法(附錄附錄 a)，在，在306nm的波長的波長處測定吸收度，按處測定吸收度，按c17h19cln2shcl的吸收系數(shù)的吸收系數(shù)( e )為為115計計算，即得。算，即得。 【規(guī)格規(guī)格】(1)1ml 10mg(2)1ml 25mg(3)2ml 50mg 4 4、uvuv吸收譜差消除干擾吸收譜差

14、消除干擾243 254 306氯丙嗪氯丙嗪維生素維生素c鹽酸氯丙嗪注射液的含量測定鹽酸氯丙嗪注射液的含量測定17甲萘氫醌二磷酸酯鈉注射液甲萘氫醌二磷酸酯鈉注射液(usp)(usp)本品為滅菌水溶液。含苯甲酸、或苯酚抑菌劑，及焦亞硫酸鈉。本品為滅菌水溶液。含苯甲酸、或苯酚抑菌劑，及焦亞硫酸鈉。5. 萃取分離后萃取分離后 uv測定測定【含量測定含量測定】精密移取本品適量，用精密移取本品適量，用0.1mol/l0.1mol/l鹽酸稀釋鹽酸稀釋配制為每配制為每1ml1ml含甲萘氫醌二磷酸酯鈉含甲萘氫醌二磷酸酯鈉5050 g g的溶液，取上述溶的溶液，取上述溶液液10ml10ml置于置于60ml60ml

15、分液漏斗中，用分液漏斗中，用15ml15ml三氯甲烷提取三氯甲烷提取三次，棄三次，棄去有機層，取水層離心分離后作為供試液，去有機層，取水層離心分離后作為供試液，于于290nm290nm處處測定測定其吸收值其吸收值a a。另取甲萘氫醌二磷酸酯鈉對照品同法測定，按。另取甲萘氫醌二磷酸酯鈉對照品同法測定，按計算含量，即得。計算含量，即得。18溶劑油溶劑油脂溶性藥物脂溶性藥物( (甾體激素等甾體激素等) )常配制成油溶液。常配制成油溶液。溶劑油對以水為溶劑的分析方法可產(chǎn)生影響：溶液溶劑油對以水為溶劑的分析方法可產(chǎn)生影響：溶液渾濁，影響渾濁，影響uvuv測定、容量滴定、測定、容量滴定、hplchplc測

16、定。測定。1 1、有機溶劑稀釋法、有機溶劑稀釋法藥物標(biāo)示量高，稀釋倍數(shù)大或測定溶劑對油溶藥物標(biāo)示量高，稀釋倍數(shù)大或測定溶劑對油溶解性好，溶劑油對測定無干擾。解性好，溶劑油對測定無干擾。19維生素維生素e注射液注射液 vitamin e injection 本品為維生素本品為維生素e的滅菌油溶液。的滅菌油溶液。【含量測定含量測定】 精密量取本品精密量取本品2ml，置棕色具塞錐形瓶中，照維置棕色具塞錐形瓶中，照維生素生素e項下的方法，精密加入項下的方法，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液內(nèi)標(biāo)溶液50ml，密塞，密塞，搖勻，取搖勻，取13l注入氣相色譜儀，并依法測定校正注入氣相色譜儀，并依法測定校正因子，計算，即得。

17、因子，計算，即得。【規(guī)格規(guī)格】1ml 50mg202 2、溶劑提取、溶劑提取-hplc-hplc法法 例：丙酸睪酮注射液丙酸睪酮注射液 testosterone propionate injection本品為丙酸睪酮的滅菌油溶液。本品為丙酸睪酮的滅菌油溶液。 【含量測定含量測定】hplc法法測定法測定法 用用內(nèi)容量移液管內(nèi)容量移液管精密量取本品適量精密量取本品適量(約相當(dāng)于丙酸睪約相當(dāng)于丙酸睪酮酮50mg)，置，置50ml 量瓶中，用量瓶中，用乙醚乙醚分數(shù)次洗滌移液管內(nèi)壁，分數(shù)次洗滌移液管內(nèi)壁，洗液并入量瓶中，加洗液并入量瓶中，加乙醚稀釋乙醚稀釋至刻度，搖勻；精密量取至刻度，搖勻；精密量取5m

18、l 置具塞離心管中，在溫水浴內(nèi)置具塞離心管中，在溫水浴內(nèi)使乙醚揮散使乙醚揮散；用；用甲醇甲醇振搖振搖提取提取4次次(5，5，5，3ml)，每次振搖每次振搖10分鐘后分鐘后離心離心15分鐘，并用分鐘，并用滴管將甲醇液移置滴管將甲醇液移置25ml 量瓶中，量瓶中，合并合并提取液，精密加入內(nèi)提取液，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液標(biāo)溶液5ml,用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取510l 注入液相注入液相色譜儀，色譜儀，測定測定，即得。，即得。21容量分析法：容量分析法：標(biāo)示量標(biāo)示量%=v t fv樣樣 標(biāo)示量（標(biāo)示量（g/ml) 100%紫外分光光度法：紫外分光光度法：標(biāo)示量標(biāo)示量%=a/ e 稀

19、釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)100 標(biāo)示量（標(biāo)示量（g/ml) 100%注射劑含量測定結(jié)果計算注射劑含量測定結(jié)果計算22例：馬來酸氯苯那敏注射液的含量測定例：馬來酸氯苯那敏注射液的含量測定 精密量取本品精密量取本品2.5ml（標(biāo)示量標(biāo)示量1ml:10mg），），置置500ml量瓶中，加鹽酸溶液稀釋至刻度；精量瓶中，加鹽酸溶液稀釋至刻度；精密吸取密吸取25ml，置，置50ml量瓶中，加鹽酸溶液稀量瓶中，加鹽酸溶液稀釋至刻度。取稀釋液在釋至刻度。取稀釋液在264nm處測得吸收度為處測得吸收度為0.536，按吸收系數(shù)，按吸收系數(shù)e1%1cm為為217，計算其百分計算其百分標(biāo)示量。標(biāo)示量。23復(fù)方制劑分析復(fù)方制劑分

20、析 assay of compound preparationso復(fù)方制劑的意義增強某些藥物的作用某幾種藥物有協(xié)同作用降低某些成分的毒副作用o復(fù)方制劑分析的特點成分更復(fù)雜含量差異懸殊 24復(fù)方制劑的分類復(fù)方制劑的分類o各國藥典收載的復(fù)方制劑復(fù)方解熱鎮(zhèn)痛類復(fù)方甾體激素類復(fù)方維生素類復(fù)方磺胺類25方法選擇原則方法選擇原則 o是否有特殊的、不受干擾的性質(zhì)o由簡到繁（不分離分離測定、同時分別測定）o先準(zhǔn)確后快速o新藥：hplc優(yōu)先原則o醫(yī)院制劑：uv優(yōu)先原則26u復(fù)方磺胺甲噁唑片是由復(fù)方磺胺甲噁唑片是由磺胺甲噁唑（磺胺甲噁唑（smz）、）、甲氧芐啶（甲氧芐啶（tmp）兩種有效成分組成。兩種有效成分組成

21、。u處方：處方： 磺胺甲噁唑磺胺甲噁唑 400g 甲氧芐啶甲氧芐啶 80g 制成制成 1000片片uchp（2000版）版）: 雙波長分光光度法雙波長分光光度法uchp（2005、2010版）版）: 高效液相色譜法高效液相色譜法復(fù)方制劑分析示例復(fù)方制劑分析示例27 chpchp（20002000版）版）: : 雙波長分光光度法雙波長分光光度法原理：原理：u選擇二個測定波長選擇二個測定波長1 1 與與2 2 u干擾組分干擾組分a a在這兩個波長處有等吸收在這兩個波長處有等吸收u待測組分待測組分b b在這兩個波長處有顯著的在這兩個波長處有顯著的a aua a與與b b濃度成正比，與濃度成正比，與a

22、 a濃度無關(guān)濃度無關(guān)復(fù)方磺胺甲復(fù)方磺胺甲噁噁唑片的含量測定唑片的含量測定28測定測定smzsmz時，把時，把tmptmp作為干擾成分作為干擾成分smz smz max = 257 nmmax = 257 nmtmp atmp a257nm257nm = a = a304nm 304nm 測定測定tmp tmp 時，把時，把smzsmz作為干擾成分作為干擾成分tmp tmp = 239 nm = 239 nm （有較大紫外吸收）（有較大紫外吸收）smz asmz a239nm239nm = a = a295nm295nm29復(fù)方左炔諾孕酮片 o 本品每片中含左炔諾孕酮本品每片中含左炔諾孕酮(c2

23、1h28o2)應(yīng)為應(yīng)為0.1350.1725mg，含炔雌醇，含炔雌醇(c20h24o2)應(yīng)為應(yīng)為27.034.5g。o 【處方處方】左炔諾孕酮左炔諾孕酮150mg炔雌醇炔雌醇 30mg 制成制成1000片片o chp 2005年版年版分光光度法分光光度法o chp 2010年版年版-hplc法法30chp2005年版年版-分光光度法分光光度法o【含量測定含量測定】對照品溶液的制備對照品溶液的制備精密稱取左炔諾孕酮對照品精密稱取左炔諾孕酮對照品15mg，搖勻搖勻(每每1ml中含左炔諾孕酮中含左炔諾孕酮75g、炔雌醇、炔雌醇15g)。o 供試品溶液的制備供試品溶液的制備取本品取本品5片，置分液漏斗

24、中，加水片，置分液漏斗中，加水6ml，振搖使崩，振搖使崩解，用解，用氯仿振搖提取氯仿振搖提取56次，每次約次，每次約78ml，提取液經(jīng)同一棉花濾入，提取液經(jīng)同一棉花濾入50ml量瓶中量瓶中,加氯仿稀釋至刻度加氯仿稀釋至刻度,搖勻即得。搖勻即得。o左炔諾孕酮左炔諾孕酮精密量取供試品溶液精密量取供試品溶液10ml，置，置50ml具塞錐形瓶中，在水具塞錐形瓶中，在水浴上蒸干，精密加乙醇浴上蒸干，精密加乙醇5ml使溶解；另精密量取對照品溶液使溶解；另精密量取對照品溶液2ml，置另，置另一具塞錐形瓶中，加乙醇一具塞錐形瓶中，加乙醇3ml。在上述各錐形瓶中分別精密加。在上述各錐形瓶中分別精密加堿性三堿性三

25、硝基苯酚溶液硝基苯酚溶液4ml，密塞，在暗處放置，密塞，在暗處放置40分鐘分鐘,照分光光度法照分光光度法(附錄附錄 )，在，在490nm的波長處分別測定吸收度，計算，即得。的波長處分別測定吸收度，計算，即得。o炔雌醇炔雌醇 .同上，上述各錐形瓶置冰浴上冷卻同上，上述各錐形瓶置冰浴上冷卻30秒后，各精密加秒后，各精密加硫酸硫酸6ml，隨加隨振搖，加完繼續(xù)冷卻，隨加隨振搖，加完繼續(xù)冷卻30秒鐘，取出秒鐘，取出,在室溫放置在室溫放置20分鐘，分鐘，照分光光度法照分光光度法(附錄附錄),在在530nm波長處分別測定吸收度，計算，波長處分別測定吸收度，計算，即得。即得。 31chp2010年版hplc法o【含量測定含量測定】 照高效液相色譜法（附錄照高效液相色譜法（附錄 d）測定。）測定。o色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈劑；乙腈-水（水（60:40）為流動相；檢測波長為）為流動相；檢測波長為220nm。理論板。理論板數(shù)按左炔諾孕酮峰計算應(yīng)不低于數(shù)按左炔諾孕酮峰計算應(yīng)不低于5000，左炔諾孕酮峰與炔雌醇，左炔諾孕酮峰與炔雌醇峰的分離度應(yīng)不小于峰的分離度應(yīng)不小于2.5。o測定法測定法 取本品取本品10片，分別置片，分別置10ml量瓶中，量瓶中，加流動相適量，超加流動相適量，超聲處