常用分子生物學(xué)試劑配置方法

1、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用試劑的配制方法？ 懸賞分：0 - 提問(wèn)時(shí)間2007-4-23 17:02提問(wèn)者： jianglijun928 - 試用期 一級(jí) 其他回答 共 1 條一.常用貯液與溶液 1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(B

2、SA）：加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無(wú)DNA酶）于9.5ml水中（為減少變性， 須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。 1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存于-20?；蜣D(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇 至微量離心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。 8mol/L乙酸鉀（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化鉀（KCl）：

3、溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸鈉（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中，用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽。或稱(chēng)取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/L HEPES：將23.8gHEPES溶于約90ml的水中，用NaOH調(diào)pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl：加8.6ml的濃

4、鹽酸至91.4ml的水中。 25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（異丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份貯存于-20。 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。 100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹 或貯存于-20。 20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。 10m

5、g/mlRnase（無(wú)DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白R(shí)NA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl調(diào)pH至7.5，于-20貯存。（配制過(guò)程中要戴手套） 5mol/L氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。 10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。 10SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱(chēng)取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器

6、攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。 100三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制） 2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20。 100×Denhardt試劑（Denhardt's regent） 成分及終濃度 配制100ml溶液各成分的用量 2%聚蔗糖（Ficoll，400型） 2%聚乙烯吡

7、咯烷酮（PVP-40） 2%BSA（組分V） 水 2g 2g 2g 加水至總體積為100ml 依照上表稱(chēng)取各組分，溶于水中定容。過(guò)濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20貯存。 10×標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接） 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl 100mmol/L MgCl2 100mmol/L DTT 2mmol/L ATP 5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選） 0.5mg/ml BSA（組分V）（可選） 水 5ml 1mol/L 貯液 1ml 1mol/L 貯液 1ml 1m

8、ol/L 貯液 200ul 100 mmol/L 貯液 50ul 1 mmol/L 貯液 0.5ml 10 mg/mL 貯液 2.25ml 將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20 。 100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions） 可以購(gòu)買(mǎi)到100mmol/L純dNTPs貯液，-80可貯存至少6個(gè)月。 10mmol/L dNTP混合液 成分及終濃度 配制20ul溶液各成分的用量 10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水 2ul 100 mmol/L dATP 貯液 2ul 100 mmol/L d

9、CTP 貯液 2ul 100 mmol/L dGTP 貯液 2ul 100 mmol/L dTTP 貯液 12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分的用量 質(zhì)量濃度為20聚乙二醇 2.5mol/L 氯化鈉 水 20g 50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉 補(bǔ)足100ml 加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。 20×SSC 成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量 300mmol/L 檸檬酸三鈉（二水） 3mol/L 氯化鈉 水 88.2g 175.3g 補(bǔ)足1L 溶解檸檬酸三

10、鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10N NaOH溶液調(diào)pH為7.0，用水補(bǔ)足體積至1L。 DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1。在37溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用DEPC處理Tris緩沖液。 甲酰胺（deionized formamide） 直接購(gòu)買(mǎi)或加Dowex XG8 混合樹(shù)脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾除去樹(shù)脂后分成小份，充氮?dú)庥?80貯存（防止氧化

11、）。 磷酸緩沖液（phosphate buffer） 按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。 1mol/L 磷酸二氫鈉（ml） 1mol/L 磷酸氫二鈉（ml） 最終pH值 877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225

12、265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2 TE（用于懸浮和貯存DNA） 成分及終濃度 配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/L TrisHCl 1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml Tris緩沖液（Tris-HCl buffer） 將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH（25下）加一定量的濃鹽酸（11

13、.6N），用水調(diào)整終體積至1L。 濃鹽酸的體積（ml） pH 8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液 電泳緩沖液 50×Tris-乙酸（TAE）緩沖液 成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris堿 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 242g 57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 補(bǔ)足1L 5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液

14、成分及終濃度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris堿 445 mmol/L 硼酸鹽 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 補(bǔ)足1L 染料 1溴酚藍(lán)（bromophenol blue） 加1g水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。 1二甲苯青FF（xylene cyanole FF） 溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙錠（ethidium bromide） 小心稱(chēng)取1g溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全

15、溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4貯存。 凝膠上樣液（gel loading solutions） 6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.3 N 氫氧化鈉 6 mmol/L EDTA 18聚蔗糖（400型） 0.15溴甲酚綠 0.25二甲苯青FF 水 300ul 10N 氫氧化鈉 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg 補(bǔ)足到10ml 6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚藍(lán) 0.15二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15聚蔗糖（400型）

16、 水 1.5ml 1溴酚藍(lán) 1.5ml 1二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.5g 補(bǔ)足到10ml 6×溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.25溴酚藍(lán) 0.25二甲苯青FF 15聚蔗糖（400型） 水 2.5ml 1溴酚藍(lán) 2.5ml 1二甲苯青FF 1.5g 補(bǔ)足到10ml 6×甘油凝膠上樣液（4貯存） 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚藍(lán) 0.15二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50甘油 水 1.5ml 1溴酚藍(lán) 1.5ml 1二甲苯青FF 100

17、ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml 6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚藍(lán) 0.15二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40聚蔗糖 水 1.5ml 1溴酚藍(lán) 1.5ml 1二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g 補(bǔ)足到10ml 10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存） 成分及終濃度 配制10ml溶液各成分用量 0.2溴酚藍(lán) 0.2二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1SDS 50甘油 水 20mg 20mg 4ml 0.5mol/L

18、 EDTA(pH8.0) 100ul 10 SDS 5ml 補(bǔ)足到10ml 三.常用培養(yǎng)基 LB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化鈉 10g 如果需要用1N NaOH（1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。 SOB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 5g 氯化鈉 0.5g 1 mol/L 氯化鉀 2.5ml 用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過(guò)菌的1mol/L氯化鎂。 SOC培

19、養(yǎng)基 成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過(guò)菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到100ml，用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌）。 TB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml 各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60，再加100ml滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌）

20、。 2×YT培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 16g 酵母提取物 10g 氯化鈉 4ml 如果需要用1N NaOH（1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。 YPD培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g 用水補(bǔ)足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對(duì)色氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加1.6g色氨酸，因?yàn)閅PD培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。 四.常用抗生素 氨芐青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 羧芐青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后