1中藥化學(xué)實驗

1、中藥化學(xué)實驗實驗一實驗一 薄層板的制備、活度薄層板的制備、活度測定及薄層層析、紙層析的應(yīng)測定及薄層層析、紙層析的應(yīng)用用o1.1.掌握薄層層析（掌握薄層層析（tlctlc）、紙層析（）、紙層析（pcpc）的原理的原理o2.2.掌握薄層層析板的制備及薄層層析、紙掌握薄層層析板的制備及薄層層析、紙層析操作的基本方法；層析操作的基本方法；一、實驗?zāi)康囊笠?、實驗?zāi)康囊蟊由V（薄層色譜（tlc）o薄層色譜薄層色譜(thin layer chromatography) 又稱又稱薄層層析，屬于薄層層析，屬于固液吸附色譜固液吸附色譜。薄層色譜（薄層色譜（tlc）基本原理）基本原理o吸附劑對不同物質(zhì)吸附能力

2、不同；展開劑對不同物質(zhì)溶解度不吸附劑對不同物質(zhì)吸附能力不同；展開劑對不同物質(zhì)溶解度不同，通過展開達到分離的目的。即混合液點在薄層板上時，吸同，通過展開達到分離的目的。即混合液點在薄層板上時，吸附劑對不同物質(zhì)有不同程度的吸附，在用溶劑展開時，因薄層附劑對不同物質(zhì)有不同程度的吸附，在用溶劑展開時，因薄層上的毛細(xì)管效應(yīng)，溶劑上升，當(dāng)升到原點時，混合物溶解，溶上的毛細(xì)管效應(yīng)，溶劑上升，當(dāng)升到原點時，混合物溶解，溶解后隨著不斷上升的溶劑上移于原點之上，遇到新的吸附劑又解后隨著不斷上升的溶劑上移于原點之上，遇到新的吸附劑又被吸附，接著又溶解、解吸，使斑點不斷上移。而在上升過程被吸附，接著又溶解、解吸，使斑

3、點不斷上移。而在上升過程中，由于有的成分吸附得牢些，即上移速度慢些，反之則快些，中，由于有的成分吸附得牢些，即上移速度慢些，反之則快些，從而達到從而達到“差速遷移差速遷移”，當(dāng)展開至一定距離后，就可達到分離，當(dāng)展開至一定距離后，就可達到分離混合物的目的?；旌衔锏哪康?。斑點上升的高度用斑點上升的高度用rf表示：表示：rf= 原點至斑點中心的距離原點至斑點中心的距離 / 原點至原點至溶劑前沿的距離溶劑前沿的距離, rf1 展開劑極性越大，溶質(zhì)展開劑極性越大，溶質(zhì)rf值越大（即爬的越高），但很可能降值越大（即爬的越高），但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物、根據(jù)相低分離能力；另外

4、單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物、根據(jù)相似相容，要使用多元溶劑體系。似相容，要使用多元溶劑體系。薄層色譜（薄層色譜（tlc）的優(yōu)點）的優(yōu)點o是近年來發(fā)展起來的一種是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單微量、快速而簡單的色譜法，的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點。它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點。o分離：分離：一方面適用于少量樣品（幾到幾十微克，甚至一方面適用于少量樣品（幾到幾十微克，甚至0.01g）的分離；）的分離；o精制：精制：另一方面若在制作薄層板時，另一方面若在制作薄層板時，把吸附層加厚，把吸附層加厚，將樣品點成一條線，則可分離多達將樣品點成一條線，則可分離多達500mg的樣品的樣品。因。

5、因此又可用來精制樣品。此又可用來精制樣品。o跟蹤化學(xué)反應(yīng)：跟蹤化學(xué)反應(yīng)：在進行化學(xué)反應(yīng)時，常利用薄層色譜在進行化學(xué)反應(yīng)時，常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。 o此法此法 特別適用于特別適用于 揮發(fā)性較小揮發(fā)性較小 或在或在 較高溫度較高溫度 易發(fā)易發(fā)生變化生變化 而不能用而不能用 氣相色譜分析的物質(zhì)。氣相色譜分析的物質(zhì)。o薄層色譜是在被洗滌干凈的薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板玻板（103cm左右）左右）上均勻的涂一層上均勻的涂一層吸附劑吸附劑或支持劑，待干燥、活或支持劑，待干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管或微量注化后將樣品溶

6、液用管口平整的毛細(xì)管或微量注射器滴加于離薄層板一端約射器滴加于離薄層板一端約1cm處的起始線上，處的起始線上，涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽展開槽內(nèi)，浸入深度為內(nèi)，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑附近時，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑或在紫外燈下顯色?；蛟谧贤鉄粝嘛@色。層析條件三要素層析條件三要素o被分離物質(zhì)的極性被分離物質(zhì)的極性o展開劑的極性（固定相和流動相）展開劑的極性（固定相和流動相）o吸附劑的活度吸附劑的活度 （載體或擔(dān)體如：氧化鋁，硅藻（載體或擔(dān)體如：氧化鋁，硅藻土

7、，纖維素等）土，纖維素等）二、薄層層析、紙層析概述二、薄層層析、紙層析概述1. 1. 薄層層析薄層層析（thin layer chromatography,thin layer chromatography, tlctlc）使用材料：使用材料：薄層板與吸附劑（氧化鋁、硅膠、聚酰胺薄層板與吸附劑（氧化鋁、硅膠、聚酰胺等）等） 涂布器、點樣器材、展開箱、顯色與檢測儀器涂布器、點樣器材、展開箱、顯色與檢測儀器分離原理：分離原理：吸附色譜、分配色譜吸附色譜、分配色譜 2. 2. 紙層析紙層析（paper chromatography,paper chromatography, pc pc）載體：載體：

8、濾紙纖維；濾紙纖維；固定相：固定相：水；水；流動相：流動相：有機溶劑有機溶劑 1. 1. 混合單糖紙層析鑒別混合單糖紙層析鑒別1 1）濾紙載體的制備：）濾紙載體的制備：取圓形濾紙一張，用剪刀在其圓心取圓形濾紙一張，用剪刀在其圓心處挖一小洞，另取一濾紙捻插入其中。處挖一小洞，另取一濾紙捻插入其中。2 2）樣品：）樣品：5%5%葡萄糖水溶液、葡萄糖水溶液、5%5%鼠李糖水溶液、二者混合鼠李糖水溶液、二者混合水溶液水溶液3 3）展開劑：）展開劑：正丁醇正丁醇- -冰醋酸冰醋酸- -水（水（4:1:14:1:1）4 4）顯色劑：）顯色劑：鄰苯二甲酸鄰苯二甲酸- -苯胺試劑，噴霧后于苯胺試劑，噴霧后于1

9、05 105 加熱加熱1010分鐘分鐘三、實驗操作步驟及注意事項三、實驗操作步驟及注意事項2.2.氧化鋁薄層涂布氧化鋁薄層涂布( (軟板）軟板）取表面光滑，直徑均勻的玻璃棒一支，依據(jù)所制取表面光滑，直徑均勻的玻璃棒一支，依據(jù)所制備薄層的寬度、厚度要求，在備薄層的寬度、厚度要求，在玻璃棒玻璃棒兩端套上厚兩端套上厚度為度為0.3-1mm的塑料圈或金屬環(huán)，將氧化鋁粉末的塑料圈或金屬環(huán)，將氧化鋁粉末向前推向前推，使其均勻鋪在選定的載板上。，使其均勻鋪在選定的載板上。24133. 3. 硅膠硅膠g g薄層涂布（硬板）薄層涂布（硬板）硅膠：水（硅膠：水（1 1：3 3）于研缽中研磨均勻，放置片刻，隨即）于

10、研缽中研磨均勻，放置片刻，隨即用藥匙取一定量，分別倒在一定大小的玻璃片上，均勻用藥匙取一定量，分別倒在一定大小的玻璃片上，均勻涂布成涂布成0.25-0.50.25-0.5mmmm厚度，輕輕振動玻璃板，使薄層面平厚度，輕輕振動玻璃板，使薄層面平整均勻，水平放置，室溫晾干，于烘箱中整均勻，水平放置，室溫晾干，于烘箱中110110烘干活烘干活化化1-21-2小時，冷后小時，冷后貯于干燥器內(nèi)貯于干燥器內(nèi)備用。備用。4. 4. 氧化鋁活度測定氧化鋁活度測定1 1）染料樣品：）染料樣品： 偶氮苯、對甲氧基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅偶氮苯、對甲氧基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅 薄薄 層層 板：板：已鋪制好的已鋪制好的氧化鋁軟板氧化鋁軟板 展展 開開 劑：劑：四氯化碳四氯化碳( (用量浸沒起始線用量浸沒起始線0.5cm 0.5cm ) ) 點點 樣樣 量：量：0.02ml(0.02ml(直徑不大于直徑不大于2-3mm)2-3mm)（點樣毛細(xì)管）（點樣毛細(xì)管）2 2）測）測 定：定：四種染料的四種染料的rfrf值，與氧化鋁活度表值，與氧化鋁活度表比較，確定此氧化鋁活度級別比較，確定此氧化鋁活度級別樣點直徑樣點直徑不大于不大于3mmo斑點隨著溶劑上行展開是要斑點隨著溶劑上行展開是要擴散擴散的。初始斑點的。初始斑點過大過大,展開后會與其他斑點展開后會與其他斑點重合重合,影響實驗準(zhǔn)確性。影響實