抗核抗體基本概念及對(duì)應(yīng)臨床疾病概述

1、抗核抗體基本概念及臨床檢測(cè)抗核抗體基本概念及臨床檢測(cè)傳統(tǒng)定義傳統(tǒng)定義 針對(duì)細(xì)胞核成分的自身抗體的總稱。針對(duì)細(xì)胞核成分的自身抗體的總稱。廣義定義廣義定義 針對(duì)細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對(duì)針對(duì)細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對(duì)ana的理的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗體的總稱解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗體的總稱 靶抗原存在于包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂靶抗原存在于包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂結(jié)構(gòu)等部位結(jié)構(gòu)等部位抗核抗體的定義抗核抗體的定義 ana可見(jiàn)于多種疾病，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組可見(jiàn)于多種疾病，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組

2、織病的診斷、病情判斷和療效觀察的指標(biāo)織病的診斷、病情判斷和療效觀察的指標(biāo) 在非結(jié)締組織病中也可出現(xiàn)陽(yáng)性。在非結(jié)締組織病中也可出現(xiàn)陽(yáng)性。 正常人中（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽(yáng)性，但滴度低，并且正常人中（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽(yáng)性，但滴度低，并且常表現(xiàn)為常表現(xiàn)為igm型型 高滴度高滴度ana則高度提示自身免疫性疾病則高度提示自身免疫性疾病 目前，目前，ana檢測(cè)已成為臨床上的一個(gè)極重要的自身免疫病的檢測(cè)已成為臨床上的一個(gè)極重要的自身免疫病的篩查實(shí)驗(yàn)。篩查實(shí)驗(yàn)。ana檢測(cè)的臨床意義檢測(cè)的臨床意義系統(tǒng)性紅斑狼瘡系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動(dòng)期活動(dòng)期非活動(dòng)期非活動(dòng)期藥物誘導(dǎo)的紅斑狼瘡藥物誘導(dǎo)的紅斑狼瘡混合性結(jié)締組織病

3、（混合性結(jié)締組織?。╩ctd、sharp綜合征）綜合征）類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥多發(fā)性肌炎及皮肌炎多發(fā)性肌炎及皮肌炎干燥綜合征干燥綜合征慢性活動(dòng)性肝炎慢性活動(dòng)性肝炎潰瘍性結(jié)腸炎潰瘍性結(jié)腸炎其它風(fēng)濕病其它風(fēng)濕病正常人正常人 9510080100100100204020508595305070803040265-10ana檢測(cè)的臨床意義ana實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略推薦實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略推薦ana間接免疫熒光法篩查實(shí)驗(yàn)間接免疫熒光法篩查實(shí)驗(yàn)間接免疫熒光法檢測(cè)間接免疫熒光法檢測(cè)ana基本原理基本原理間接免疫熒光法間接免疫熒光法 包被包被hep-2細(xì)胞的基質(zhì)玻片細(xì)胞的基質(zhì)玻片

4、樣本中樣本中ana-iggfitc標(biāo)記的抗人標(biāo)記的抗人igg抗體抗體l 抗原譜完整抗原譜完整 (細(xì)胞核、細(xì)胞漿中近百種自身抗原細(xì)胞核、細(xì)胞漿中近百種自身抗原)l 人源細(xì)胞，無(wú)種屬非特異熒光干擾人源細(xì)胞，無(wú)種屬非特異熒光干擾l 腫瘤細(xì)胞，易于培養(yǎng)及商品化生產(chǎn)腫瘤細(xì)胞，易于培養(yǎng)及商品化生產(chǎn)l 核質(zhì)比大，可觀察到多種不同熒光核型核質(zhì)比大，可觀察到多種不同熒光核型ana篩查的經(jīng)典和標(biāo)準(zhǔn)基質(zhì)篩查的經(jīng)典和標(biāo)準(zhǔn)基質(zhì): hep-2均質(zhì)型核點(diǎn)型著絲點(diǎn)型核仁型scl-70粗顆粒型細(xì)顆粒型核膜型.核糖體p蛋白線粒體型高爾基體溶酶體肌動(dòng)蛋白波形蛋白基于基于hep-2細(xì)胞為基質(zhì)的細(xì)胞為基質(zhì)的ana初篩實(shí)驗(yàn)初篩實(shí)驗(yàn)ana

5、間接免疫熒光法篩查試驗(yàn)的實(shí)際價(jià)值間接免疫熒光法篩查試驗(yàn)的實(shí)際價(jià)值l 初步甄別自身免疫性疾病患者（陰陽(yáng)性結(jié)果）初步甄別自身免疫性疾病患者（陰陽(yáng)性結(jié)果）l 盡可能判斷熒光核型（縮小靶抗原確認(rèn)實(shí)驗(yàn)范圍）盡可能判斷熒光核型（縮小靶抗原確認(rèn)實(shí)驗(yàn)范圍）l 獲取抗體滴度信息（判斷病情進(jìn)展、預(yù)后等）獲取抗體滴度信息（判斷病情進(jìn)展、預(yù)后等）考慮到熒光法篩查試驗(yàn)存在主觀性強(qiáng)的特點(diǎn)，因此應(yīng)考慮到熒光法篩查試驗(yàn)存在主觀性強(qiáng)的特點(diǎn)，因此應(yīng)以一種客觀和現(xiàn)實(shí)的態(tài)度去面對(duì)篩查試驗(yàn)結(jié)果以一種客觀和現(xiàn)實(shí)的態(tài)度去面對(duì)篩查試驗(yàn)結(jié)果幾個(gè)相對(duì)常見(jiàn)且重要的熒光核型幾個(gè)相對(duì)常見(jiàn)且重要的熒光核型均質(zhì)型核點(diǎn)型著絲點(diǎn)型核仁型粗顆粒型核膜型.核糖體

6、p蛋白線粒體型肌動(dòng)蛋白常見(jiàn)且重要核型的標(biāo)準(zhǔn)l核型表現(xiàn)相對(duì)典型l陽(yáng)性率相對(duì)較高l靶抗原相對(duì)明確應(yīng)重視應(yīng)重視ana滴度的檢測(cè)滴度的檢測(cè)抗體滴度的臨床意義1、明確界定自身免疫性疾病患者；2、作為疾病進(jìn)程、臨床療效和病情預(yù)后及轉(zhuǎn)歸等的判斷指標(biāo)當(dāng)前國(guó)際主流ana間接免疫熒光法檢測(cè)系統(tǒng)廣泛采用的起始稀釋度為1:40。即該檢測(cè)系統(tǒng)的正常參考范圍為1:40。梯度稀釋時(shí)的稀釋因子為1:2。hob公司產(chǎn)品推薦按照1:80開(kāi)展稀釋。 熒光強(qiáng)弱及血清稀釋度熒光強(qiáng)弱及血清稀釋度熒光強(qiáng)弱判讀熒光強(qiáng)弱判讀 觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度一般用“+”號(hào)表示。“”為無(wú)或僅見(jiàn)極微弱熒光；“+”為熒光較弱但清楚可見(jiàn)；“+”為熒光明亮；“

7、+”為耀眼的強(qiáng)熒光。臨床上根據(jù)特異性熒光強(qiáng)度達(dá)臨床上根據(jù)特異性熒光強(qiáng)度達(dá)“+”+”以上判定為陽(yáng)性以上判定為陽(yáng)性抗體梯度稀釋抗體梯度稀釋起始稀釋：起始稀釋：1:801:80梯度稀釋（稀釋因子梯度稀釋（稀釋因子2 2）1:1601:1601:3201:3201:6401:6401:12801:12801:25601:2560直至抗體轉(zhuǎn)陰直至抗體轉(zhuǎn)陰各稀釋度的反應(yīng)性各稀釋度的反應(yīng)性抗體滴度抗體滴度臨床意義臨床意義1:801:640陽(yáng)性陽(yáng)性+1:80陽(yáng)性，需結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合判斷陽(yáng)性，需結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合判斷陽(yáng)性陽(yáng)性+1:160陽(yáng)性，提示可能存在相關(guān)疾病陽(yáng)性，提示可能存在相關(guān)疾病陽(yáng)性陽(yáng)性+弱弱+1:320

8、明確陽(yáng)性，提示可能存在相關(guān)疾病明確陽(yáng)性，提示可能存在相關(guān)疾病陽(yáng)性陽(yáng)性+陽(yáng)性陽(yáng)性+1:640中等陽(yáng)性，提示可能存在相關(guān)疾病中等陽(yáng)性，提示可能存在相關(guān)疾病陽(yáng)性陽(yáng)性+陽(yáng)性陽(yáng)性+1:1280強(qiáng)陽(yáng)性，高度提示存在相關(guān)疾病強(qiáng)陽(yáng)性，高度提示存在相關(guān)疾病陽(yáng)性陽(yáng)性+陽(yáng)性陽(yáng)性+1:2560極強(qiáng)的陽(yáng)性，高度提示存在相關(guān)疾病。極強(qiáng)的陽(yáng)性，高度提示存在相關(guān)疾病。ana熒光滴度判讀舉例熒光滴度判讀舉例hob公司間接免疫熒光法產(chǎn)品系列公司間接免疫熒光法產(chǎn)品系列產(chǎn)品系列產(chǎn)品系列ana篩查篩查dsdnaakaanca組織器官組織器官基質(zhì)基質(zhì)hep-2細(xì)胞細(xì)胞綠蠅短膜蟲(chóng)綠蠅短膜蟲(chóng)大鼠食管大鼠食管中性粒細(xì)胞中性粒細(xì)胞乙醇和甲醛固定

9、乙醇和甲醛固定大鼠肝大鼠肝/腎腎/胃胃檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)項(xiàng)目ana各種不同核型各種不同核型抗抗dsdna抗體抗體抗角蛋白抗體抗角蛋白抗體抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體asmapcaamalkm-1lc-1hep-2細(xì)胞產(chǎn)品系列細(xì)胞產(chǎn)品系列 （舉例）（舉例）166孔孔1010孔孔812孔孔ana靶抗原確認(rèn)實(shí)驗(yàn)靶抗原確認(rèn)實(shí)驗(yàn)條帶酶免分析法檢測(cè)條帶酶免分析法檢測(cè)ana基本原理基本原理lia檢測(cè)方法原理檢測(cè)方法原理底物底物顏色反應(yīng)顏色反應(yīng)硝酸纖維膜硝酸纖維膜igg抗體抗體堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人igg抗體抗體anaana譜系列譜系列u1-nrnp u1-nrnp 和和 smsm抗原

10、抗原sle: 5-30%sle: 5-30%sle: 15-40%sle: 15-40%mctd: 95-100%mctd: 95-100%功能功能: :參與參與mrnamrna前體的剪切前體的剪切ss-a (ro-60), ro-52 和和ss-banti-ss-a (60 kda)干燥綜合征.:40-95%sle: 20-60%新生兒狼瘡: 96%anti-ss-b干燥綜合征.:40-95%sle: 10-20%新生兒狼瘡: 78%anti-ro-52 (52 kda)非特異功能: 調(diào)控rna翻譯功能:rna聚合酶iii輔助蛋白xscl-70 (dna-拓?fù)洚悩?gòu)酶拓?fù)洚悩?gòu)酶i)功能: 在d

11、na復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過(guò)程中完成雙鏈解螺旋疾病疾病:硬化癥硬化癥: 50% - 75%anti-scl-70 anti-scl-70 特點(diǎn)特點(diǎn) 局限型和彌散型硬化癥病中的陽(yáng)性率分別為局限型和彌散型硬化癥病中的陽(yáng)性率分別為10% 和和48%。 抗抗scl-70抗體陽(yáng)性的患者通常病情發(fā)展快、預(yù)抗體陽(yáng)性的患者通常病情發(fā)展快、預(yù)后差、多器官累及。后差、多器官累及。pm-scl 抗原抗原: 幾種多肽復(fù)合物幾種多肽復(fù)合物(分子量間于分子量間于20-100kda)，主要的靶抗原為，主要的靶抗原為100 kda 相關(guān)疾病相關(guān)疾病: 硬化癥硬化癥:2% - 5% 肌炎肌炎:8%重疊綜合征重疊綜合征:24%jo-1 抗原

12、:組氨酰trna合成酶(50 kda),細(xì)胞漿中的磷蛋白 相關(guān)疾病: 多肌炎/皮肌炎的血清學(xué)標(biāo)志，陽(yáng)性率為25- 35%，當(dāng)伴有肺間質(zhì)纖維化的多肌炎，陽(yáng)性率可高達(dá)70%。 著絲點(diǎn)著絲點(diǎn) 抗原：動(dòng)粒中的4種蛋白：a (17 kda), b (80 kda), c(140 kda), d蛋白 (50 kda)。著絲點(diǎn)蛋白 b為主要的靶抗原 (與iif：100%) 功能: 分裂期紡垂體的附著點(diǎn) 相關(guān)疾病: 硬化癥:18%局限型: 80% - 95%(crest綜合征) pcna:細(xì)胞增殖相關(guān)核抗原細(xì)胞增殖相關(guān)核抗原i型型 抗原抗原:dna聚合酶聚合酶的輔助蛋白的輔助蛋白 發(fā)揮控制細(xì)胞周期的作用發(fā)揮控

13、制細(xì)胞周期的作用 相關(guān)疾病相關(guān)疾病: 系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體，但其發(fā)生率僅為系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體，但其發(fā)生率僅為3%。 染色體結(jié)構(gòu)示意圖染色體結(jié)構(gòu)示意圖dna核小體染色體染色質(zhì)組蛋白dsdna 抗原：雙鏈dna，天然dna(脫氧核糖核酸骨架) 相關(guān)疾?。篸sdna: 為sle的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一，陽(yáng)性率為60-90%，不同的檢測(cè)方法診斷特異性差別較大。抗體滴度與疾病的活動(dòng)性、狼瘡腎炎的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)具有相關(guān)性。組蛋白組蛋白 抗原:h1, h2a, h2b, h3, h4，h2a-h2b，h3-h4(主要的靶抗原為h1和h2b) 相關(guān)疾病: 藥物誘導(dǎo)性 le: 100%(抗組蛋白抗體是該病唯一的標(biāo)

14、志性抗體)各種結(jié)締組織?。簊le: 30-80% ssc: 30% ss: 10%核小體核小體 抗原:組蛋白和dna形成的復(fù)合物 相關(guān)疾病: sle：高特異性指標(biāo)，陽(yáng)性率為50-95%，特異性幾乎100%，抗核小體抗體可獨(dú)立于抗dsdna抗體單獨(dú)出現(xiàn)，因而抗核小體抗體與抗dsdna抗體聯(lián)合檢測(cè)，可提高sle的血清學(xué)檢出率。40 s亞基60 s亞基亞基p0p1 p1p2 p2抗原抗原:核糖體核糖體60s 亞基中的亞基中的3種蛋白質(zhì)種蛋白質(zhì):p0, p1, p2. 具備相同的碳端抗原位點(diǎn)具備相同的碳端抗原位點(diǎn)核糖體核糖體 p蛋白蛋白相關(guān)疾病相關(guān)疾病: sle:為為sle的高特異性指標(biāo)，陽(yáng)性率為的高