重新定義16q22.1連鎖的常染色性遺傳性小腦共濟失調(diào)的致病基因座位

1、重新定義16q22.1連鎖的常染色體顯性遺傳性小腦共濟失調(diào)的致病基因座位（redefining the disease locus of 16q22.1-linked autosomal dominant cerebellar ataxia） 周琦o 2005年我們通過對52個臨床上表現(xiàn)為純小腦性癥狀的16q連鎖的常染色體顯性遺傳共濟失調(diào)的家系進行微衛(wèi)星多態(tài)位點單倍體分析（16q上還連鎖有sca4(16q22.1-adca)的致病基因，但臨床表現(xiàn)除了純小腦性的癥狀外還有感覺神經(jīng)病變和椎體束征）發(fā)現(xiàn)所有家系患者共有16q22.1基因組400kb基因組區(qū)域，即微衛(wèi)星多態(tài)位點gata01和171ms

2、m之間，在這個區(qū)域中的puratrophin-1基因上存在與所有家系患者共分離的-16ct雜合突變，這表明這個突變與疾病強連鎖。研究背景o 最近研究發(fā)現(xiàn)一家系中除了一個患者的puratrophin-1基因上沒有攜帶-16ct突變，家系其他患者都攜帶有該突變。通過微衛(wèi)星多態(tài)位點單倍體分析發(fā)現(xiàn)該患者共享puratrophin-1基因-16ct突變位點著絲粒側(cè)的單體型（致?。┍砻髡嬲闹虏』蛴锌赡懿皇莗uratrophin-1基因。立題依據(jù)o 單倍體分析確定16q22.1連鎖的常染色體顯性遺傳性小腦共濟失調(diào)的致病基因座位的著絲粒端o 單倍體分析確定16q22.1連鎖的常染色體顯性遺傳性小腦共濟失調(diào)

3、的致病基因位點端粒端研究內(nèi)容o本研究通過對依據(jù)臨床癥狀和攜帶-16ct突變位點診斷的16q-adca的64個家系所有患者的單體型分析，以發(fā)現(xiàn)所有家系患者共有的單倍體。查找并構(gòu)建ggaa05,d16s397 ggaa10和gata01四個多態(tài)標(biāo)記位點附近致病染色體特異的snps，通過對存在重復(fù)數(shù)變異微衛(wèi)星多態(tài)位點附近的snps的單體型分析以發(fā)現(xiàn)重組事件，從而確定致病基因座位的著絲粒端。o通過對臨床表現(xiàn)為純小腦共濟失調(diào)癥并排除攜帶sca1,2,3,6,7,8,12,14,17，和drpla突變基因且未攜帶-16ct突變位點22個家系23名患者的單體型分析，以發(fā)現(xiàn)是否存在患者共享-16ct突變位點著

4、絲粒側(cè)共有的致病單倍體，從而確定是否存在患者患有16-adca(根據(jù)純小腦共濟失調(diào)癥根據(jù)純小腦共濟失調(diào)癥已排除已排除sca4)研究方法實 驗 結(jié) 果（一）o 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)64個家系所有患者共有微衛(wèi)星多態(tài)位點ggaa05和171msm之間400kb基因組區(qū)域，并發(fā)現(xiàn)18個家系的患者ggaa05,d16s397，ggaa10和gata01四個微衛(wèi)星多態(tài)標(biāo)記位點存在重復(fù)數(shù)變異，尤其是ggaa05位點存在明顯的重復(fù)數(shù)變異(差異至少為差異至少為2）實 驗 結(jié) 果（二）o 在ggaa05,d16s397，ggaa10和gata01四個微衛(wèi)星多態(tài)位點存在重復(fù)數(shù)變異的14個家系(另另4個家系個家系未分析）未分

5、析）的患者的snps（上述微衛(wèi)星位點附近)單體型分析發(fā)現(xiàn)家系t46未攜帶snp01,02,03,04,而其他患者攜帶所有一樣的snps.實 驗 結(jié) 果（三）o 研究結(jié)果還顯示u09家系的一例患者共享多態(tài)位點d13s3043至gata01之間的致病單倍體，而此單倍體未包括puratrophin-1基因的-16ct突變位點。討論o 實 驗 結(jié) 果（一）發(fā)現(xiàn)的 14個家系的患者存在的ggaa05,d16s397，ggaa10和gata01四個微衛(wèi)星多態(tài)標(biāo)記位點重復(fù)數(shù)變異提示可能存在重組事件，但這14個家系被檢患者后3個重復(fù)單位變異數(shù)為1的微衛(wèi)星多態(tài)標(biāo)記位點附近的snp都一致，從而排除了后3微衛(wèi)星多態(tài)

6、標(biāo)記位點附近snp的重組事件，進而提示后3個重復(fù)單位變異數(shù)為1的微衛(wèi)星多態(tài)標(biāo)記位點緣于微衛(wèi)星的slippage mutation.o 同時從實 驗 結(jié) 果（一）可發(fā)現(xiàn)4個家系（p4，t3，t25，t46)微衛(wèi)星位點單倍體分析發(fā)現(xiàn)在多態(tài)位點ggaa05存在明顯的重復(fù)數(shù)變異，并且從實 驗 結(jié) 果（二）可發(fā)現(xiàn)t46家系的患者未攜帶ggaa05 附近的snp01,02,03,04多態(tài)位點，兩個實驗結(jié)果都強烈提示重組事件發(fā)生在snp04和snp05之間。o 從試驗（三)的結(jié)果并考慮到ggaa05多態(tài)位點等位基因的稀有性和特異且頻率低的snps,結(jié)合u09家系的患者的臨床癥狀與16q22.1-adca一致，強烈提示u09家系的患者共享puratrophin-1基因-16ct突變位點著絲粒側(cè)的單體型，進一步提示致病基因的端粒側(cè)邊界是-16ct突變位點（未包括-16ct突變位點）o 通過對一些16q-adca家系進行微衛(wèi)星多態(tài)位點和snps單倍體分析， 16q-adca基因座位可以從新定位在snp04和puratrophin-1基因-16ct突變位點之間900kb基因組區(qū)域，這個基因座位與先前ohata等定位的區(qū)域重疊但不一致。總結(jié)o盡管我們在u09家系發(fā)現(xiàn)有一個不攜帶puratro