細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)大全

1、細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備一、無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室二、常用的儀器設(shè)備三、細(xì)胞培養(yǎng)需要的物品四、細(xì)胞培養(yǎng)用液和培養(yǎng)基一、無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室一、無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室 組成：組成： 更衣間：更衣間：放在外，供更換衣帽、鞋子等之用。放在外，供更換衣帽、鞋子等之用。 緩沖間：緩沖間：位于更衣間與操作間之間，也可同時(shí)與位于更衣間與操作間之間，也可同時(shí)與 幾個(gè)操作間相通。幾個(gè)操作間相通。 操作間：操作間：放在內(nèi)間，供無(wú)菌操作和細(xì)胞培養(yǎng)，房放在內(nèi)間，供無(wú)菌操作和細(xì)胞培養(yǎng)，房 間不受日光直射，大小適宜，高間不受日光直射，大小適宜，高2.5m2.5m。二、實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備使用二、實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備使用壓力蒸汽消毒器壓力蒸汽消毒器1.使用前的準(zhǔn)備：檢

2、查進(jìn)氣閥及排氣閥是否關(guān)閉，并使用前的準(zhǔn)備：檢查進(jìn)氣閥及排氣閥是否關(guān)閉，并加入適量水加入適量水。 2.裝放滅菌物：然后加蓋旋緊螺旋，密封。裝放滅菌物：然后加蓋旋緊螺旋，密封。 3.預(yù)熱及排氣：預(yù)熱及排氣：4.升壓保溫：一般為升壓保溫：一般為103.43kPa，溫度則相當(dāng)于，溫度則相當(dāng)于121.3時(shí)，持續(xù)時(shí)，持續(xù)1520min即可達(dá)到滅菌目的。即可達(dá)到滅菌目的。5.降壓開(kāi)蓋取物：關(guān)電源，待其壓力下降至零時(shí)，方可開(kāi)蓋取物。降壓開(kāi)蓋取物：關(guān)電源，待其壓力下降至零時(shí)，方可開(kāi)蓋取物。 【使用方法使用方法】干燥箱干燥箱 用于細(xì)胞培養(yǎng)的有些器械、器皿要烘干才能用于細(xì)胞培養(yǎng)的有些器械、器皿要烘干才能使用，玻璃器

3、皿需干熱消毒，因此，細(xì)胞培使用，玻璃器皿需干熱消毒，因此，細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室均配置有電熱干燥箱。干熱消毒時(shí)，養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室均配置有電熱干燥箱。干熱消毒時(shí)，升溫較高，一般需達(dá)到升溫較高，一般需達(dá)到160。 水純化裝置水純化裝置進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，配制各種培養(yǎng)液及試劑進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水；即使用于玻璃器等均需使用三次蒸餾水；即使用于玻璃器皿的沖洗，至少也應(yīng)是二次蒸餾水。皿的沖洗，至少也應(yīng)是二次蒸餾水。 蒸餾水器、壓力蒸氣消毒器和電熱干燥箱都蒸餾水器、壓力蒸氣消毒器和電熱干燥箱都是屬于大功率電器，使用時(shí)一定要注意是屬于大功率電器，使用時(shí)一定要注意用電用電安全安全，盡量做到分開(kāi)時(shí)

4、間使用。，盡量做到分開(kāi)時(shí)間使用。超凈工作臺(tái)CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱 培養(yǎng)箱：控溫及培養(yǎng)箱：控溫及的提供所需的的提供所需的CO2，使培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液的的pH保持穩(wěn)定。保持穩(wěn)定。 通常使用條件為通常使用條件為37 ，5 CO2CO2供氣凋節(jié)方法倒置顯微鏡倒置顯微鏡離心機(jī)離心機(jī)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，常需要制備細(xì)胞懸液、調(diào)整細(xì)胞密度、洗滌、收集細(xì)胞等，因此要使用離心機(jī)。平衡是關(guān)鍵電子分析天平電子分析天平冰箱細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器1、凍細(xì)胞和組織、凍細(xì)胞和組織2、注意液氮含量、注意液氮含量酸度計(jì)酸度計(jì) 酶標(biāo)儀特殊設(shè)備 如有條件，可添置一些特殊或先進(jìn)的設(shè)備儀器，使實(shí)驗(yàn)室工作做得更有效、更精確、更深入。有關(guān)的特殊

5、或先進(jìn)設(shè)備如下： 超低溫冰箱，70以下的冰箱便于儲(chǔ)存有些試劑及標(biāo)本； 熒光顯微鏡，進(jìn)行熒光染色樣本的觀察； 更精確及快速檢測(cè)細(xì)胞用的流式細(xì)胞儀等。三、細(xì)胞培養(yǎng)需要的物品：三、細(xì)胞培養(yǎng)需要的物品： 1、培養(yǎng)瓶（培養(yǎng)液、消化液以及PBS）。 2、藍(lán)口瓶、離心管、吸管、凍存管、燒杯、量筒、飯盒、培養(yǎng)皿、封口膜 3、槍頭（TIP頭） 4、培養(yǎng)板，培養(yǎng)皿，細(xì)胞計(jì)數(shù)板 5、手術(shù)器械。 1 1、清洗、清洗 2 2、浸酸：、浸酸： 玻璃器皿浸泡到清潔液中玻璃器皿浸泡到清潔液中 浸泡時(shí)間：一般為過(guò)夜，不應(yīng)少于浸泡時(shí)間：一般為過(guò)夜，不應(yīng)少于6 6 小時(shí)小時(shí) 清潔液清潔液 常用三種：重鉻酸鉀（常用三種：重鉻酸鉀（g

6、 g）濃硫酸（）濃硫酸（mlml）蒸餾水）蒸餾水（mlml） 強(qiáng)清潔液強(qiáng)清潔液 631000200 631000200 次強(qiáng)清洗液次強(qiáng)清洗液 120 2001000 120 2001000 弱清潔液弱清潔液 100 1001000100 1001000 需流水沖洗十次以上，每次水須灌滿(mǎn)及倒干凈需流水沖洗十次以上，每次水須灌滿(mǎn)及倒干凈3 3、消毒、消毒四、細(xì)胞培養(yǎng)用液及培養(yǎng)基四、細(xì)胞培養(yǎng)用液及培養(yǎng)基 培養(yǎng)用液培養(yǎng)用液水（三蒸水）水（三蒸水） 平衡鹽溶液（平衡鹽溶液（PBS） 消化液消化液 培養(yǎng)基培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基 濾器、磁力攪拌器、燒杯、 量筒、注射器。 貯液瓶（生

7、理鹽水瓶）、 NaHCO3、胎牛（小牛）血清、青霉素、鏈霉素、三蒸水、培養(yǎng)基粉劑平衡鹽液體平衡鹽液體（Balanced salt solution, BSS）PBS、 Hanks分散組織、細(xì)胞分散組織、細(xì)胞作用：作用：（1）在進(jìn)行原代培養(yǎng)過(guò)程中需分散組織、細(xì)胞。）在進(jìn)行原代培養(yǎng)過(guò)程中需分散組織、細(xì)胞。（2）在傳代中要使細(xì)胞脫離附著的底物時(shí)均需使用消化液。）在傳代中要使細(xì)胞脫離附著的底物時(shí)均需使用消化液。類(lèi)型：類(lèi)型：組織細(xì)胞培養(yǎng)中常用的消化液為組織細(xì)胞培養(yǎng)中常用的消化液為胰蛋白酶、二乙烯四乙酸二鈉胰蛋白酶、二乙烯四乙酸二鈉（EDTA）及膠原酶溶液，）及膠原酶溶液，可以分別單獨(dú)使用或混合使用。可以

8、分別單獨(dú)使用或混合使用。特點(diǎn)：特點(diǎn)：1、胰蛋白酶的活力用解離酪蛋白的能力來(lái)表示，常用的有、胰蛋白酶的活力用解離酪蛋白的能力來(lái)表示，常用的有1：125和和1：250兩種。兩種。2、許多學(xué)者認(rèn)為鈣、鎂離子和血清的存在都會(huì)降低胰蛋白酶的、許多學(xué)者認(rèn)為鈣、鎂離子和血清的存在都會(huì)降低胰蛋白酶的活力?；盍ΑＯ?xì)胞時(shí)，加入一些血清（消化細(xì)胞時(shí)，加入一些血清（10%）或含血清的培養(yǎng)液，）或含血清的培養(yǎng)液，能終止消化作用能終止消化作用。胰蛋白酶液胰蛋白酶液(Trypsin) 抗生素溶液w通常是青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用，俗稱(chēng)“雙抗溶液”。w青霉素主要是對(duì)革蘭陽(yáng)性菌有效，鏈霉素主要對(duì)革蘭陰性菌有效。加入這兩種抗生素可預(yù)防絕大多數(shù)細(xì)菌污染。 培養(yǎng)基內(nèi)青霉素、鏈霉素最終使用濃度為每毫升100單位。一般市售市售鏈霉素為100萬(wàn)U/瓶培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基維持體外細(xì)胞生存和生長(zhǎng)的溶液維持體外細(xì)胞生存和生長(zhǎng)的溶液1、天然培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基 2、合成培養(yǎng)基：、合成培養(yǎng)基： 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基 ：RPMI1640，DMEM等。等。 一般需加血清等一般需加血清等 需要補(bǔ)加NaHCO3，調(diào)PH。 根據(jù)包裝袋上的要求和實(shí)驗(yàn)需要補(bǔ)加NaHCO3和谷氨酰胺。 加抗生素： 上述溶液配制好后，用過(guò)濾法消毒除菌，采用0.22m。分裝于玻璃瓶中，使用時(shí)再加血清。四、