第七章平面色譜

1、1第六章第六章 色層分離法色層分離法19世紀(jì)中葉已有人做過這世紀(jì)中葉已有人做過這樣或那樣的色層分離實(shí)驗(yàn)樣或那樣的色層分離實(shí)驗(yàn),但系但系統(tǒng)地研究和介紹色層分離法的統(tǒng)地研究和介紹色層分離法的,一般公認(rèn)最早的為俄國植物學(xué)一般公認(rèn)最早的為俄國植物學(xué)家家M茨維特。茨維特。2葉綠素的石油葉綠素的石油醚溶液醚溶液19061906年年俄國植物學(xué)家俄國植物學(xué)家Michael Tswett洗脫洗脫3氣 -液氣 液 色 層 分 離 法氣 -固氣 固 色 層 分 離 法氣 相 色 譜液 -液液 液 色 層 分 離 法液 -固液 固 色 層 分 離 法液 相 色 譜色 層 分 離 法按流動相分類按流動相分類4分 配 色

2、 譜 法吸 附 色 譜 法離 子 交 換 色 譜 法色 譜 法按原理分類按原理分類紙色層：紙色層：濾紙吸附的水作固定相，有機(jī)溶劑作流動相。濾紙吸附的水作固定相，有機(jī)溶劑作流動相。薄層色譜：薄層色譜：把吸附劑粉末舖成薄層作為固定相。把吸附劑粉末舖成薄層作為固定相。本章僅討論本章僅討論紙色層、薄層色譜法紙色層、薄層色譜法。5一、紙色層一、紙色層 微量操作技術(shù)，簡單、分離效率高、微量操作技術(shù)，簡單、分離效率高、但分離速度慢但分離速度慢、基本原理、基本原理紙色層紙色層紙上萃取色譜，它和萃取一樣，紙上萃取色譜，它和萃取一樣，它也是根據(jù)不同物質(zhì)在兩相間的分配比不同它也是根據(jù)不同物質(zhì)在兩相間的分配比不同而進(jìn)

3、行分離的（相當(dāng)于逆流萃?。?。而進(jìn)行分離的（相當(dāng)于逆流萃?。?1.層析缸 2.濾紙 3.原點(diǎn) 4.展開劑 5.前沿 6.7.斑點(diǎn)123456737xy2. 比移值比移值Rf組份分離后組份分離后,它們在濾紙上它們在濾紙上的位置用比移值的位置用比移值Rf表示表示.定義定義:yx8 Rf Rf的大小取決于溶質(zhì)在二相間的分配系數(shù)及濾紙的的大小取決于溶質(zhì)在二相間的分配系數(shù)及濾紙的性質(zhì)性質(zhì). . 不同的組分具有不同的分配系數(shù)不同的組分具有不同的分配系數(shù), , 因而也就有不因而也就有不同的同的RfRf. . 這就是定性的依據(jù)這就是定性的依據(jù). .3. 影響影響Rf的因素的因素(1). (1). 欲分離物的本

4、性欲分離物的本性: :物質(zhì)在兩相的分配系數(shù)物質(zhì)在兩相的分配系數(shù), ,決定了它決定了它 的的RfRf大小大小; ;(2). (2). 層析溶劑層析溶劑: :同一組分在不同溶劑中同一組分在不同溶劑中RfRf不同。通常應(yīng)選不同。通常應(yīng)選這樣的層析劑，使溶質(zhì)的這樣的層析劑，使溶質(zhì)的RfRf在在0.05 0.05 0.85 0.85之間之間, ,不同不同組分的組分的RfRf差值差值0.05.0.05.9(3). (3). pHpH: :影響它們的存在狀態(tài)影響它們的存在狀態(tài) (4). (4). 濾紙濾紙: :質(zhì)地均一、厚薄適當(dāng)、具有一定機(jī)械強(qiáng)度、質(zhì)地均一、厚薄適當(dāng)、具有一定機(jī)械強(qiáng)度、 不含雜質(zhì)不含雜質(zhì)(5

5、). 5). 溫度溫度: :在層析缸中用紅外燈照射。溫度會影響溶質(zhì)在層析缸中用紅外燈照射。溫度會影響溶質(zhì) 的分配系數(shù)及流動相的擴(kuò)散速度。層析操作應(yīng)在恒的分配系數(shù)及流動相的擴(kuò)散速度。層析操作應(yīng)在恒 溫下進(jìn)行，溫度不超過溫下進(jìn)行，溫度不超過 0.5 0.5o oC C(6). (6). 展開方式展開方式: :展開方式不同展開方式不同, ,RfRf也不同。下行法的也不同。下行法的RfRf最最 大，上行法的大，上行法的RfRf較小，環(huán)行法的較小，環(huán)行法的 RfRf也不大。也不大。104. 操作技術(shù)操作技術(shù)(1). 濾紙濾紙(擔(dān)體擔(dān)體)濾紙的選擇濾紙的選擇 a. 要求濾紙質(zhì)地均勻、平整無折痕邊緣整齊要求

6、濾紙質(zhì)地均勻、平整無折痕邊緣整齊 b. 要求濾紙的纖維松緊適宜要求濾紙的纖維松緊適宜 c. 濾紙的雜質(zhì)含量少濾紙的雜質(zhì)含量少11B.層析濾紙的性能與規(guī)格層析濾紙的性能與規(guī)格型號紙重g /m2厚度(mm)吸水性( 30min內(nèi)水上升mm)灰分g /m2性能1900.17150 1200.08快速2900.17120 900.08中速3900.1590 600.08慢速41800,34151 1210.08快速51800.32120 910.08中速61800.3090 600.08慢速12C.濾紙的處理濾紙的處理 以以0.1 0.4 mol/L HCl (或或 2 mol/L HAc)浸泡浸泡數(shù)

7、小時數(shù)小時, 除去無機(jī)雜質(zhì)后除去無機(jī)雜質(zhì)后, 取出用蒸餾水洗凈取出用蒸餾水洗凈, 再將濾紙放在丙酮再將濾紙放在丙酮-乙醇乙醇( 1 : 1 )中浸泡一周時間中浸泡一周時間, 除去有機(jī)雜質(zhì)除去有機(jī)雜質(zhì), 再取出風(fēng)干備用再取出風(fēng)干備用.13 固定相固定相 紙層析紙層析以吸著在纖維素上的水作固定相。以吸著在纖維素上的水作固定相。反相紙層析反相紙層析用甲酰胺、二甲基甲酰胺、用甲酰胺、二甲基甲酰胺、 丙二醇等作固定相。丙二醇等作固定相。 若分離芳香油等非極性物，以石蠟油、若分離芳香油等非極性物，以石蠟油、 硅油作固定相。硅油作固定相。(2). 試樣試樣 A.試樣的溶解試樣的溶解 ：盡量避免用水。一般用乙

8、醇、盡量避免用水。一般用乙醇、 丙酮、氯仿等，最好采用與展開劑極性相丙酮、氯仿等，最好采用與展開劑極性相 似的溶劑。液體樣，直接點(diǎn)樣。似的溶劑。液體樣，直接點(diǎn)樣。14點(diǎn)樣方法點(diǎn)樣方法a先用鉛筆在距紙條一端先用鉛筆在距紙條一端2 3 cm處劃一條直線（起始線）并處劃一條直線（起始線）并在線上隔一定距離劃一在線上隔一定距離劃一“x”號表示點(diǎn)樣位置；見下示意圖：號表示點(diǎn)樣位置；見下示意圖：15b.點(diǎn)樣工具：點(diǎn)樣工具：微量注射器、毛細(xì)滴管（微量注射器、毛細(xì)滴管（0.5 mm) ；c.點(diǎn)樣方法：點(diǎn)樣方法：用點(diǎn)樣工具吸取試液輕輕與用點(diǎn)樣工具吸取試液輕輕與“x”號接觸，號接觸，使點(diǎn)樣的斑點(diǎn)直徑為使點(diǎn)樣的斑點(diǎn)

9、直徑為0.2 0.5 cm, 每次點(diǎn)樣每次點(diǎn)樣2 20 l于濾紙于濾紙上，以冷風(fēng)吹干；上，以冷風(fēng)吹干；d. 干后干后，將紙的兩邊用線縫好，以圓筒形式置于層析缸將紙的兩邊用線縫好，以圓筒形式置于層析缸中展開。中展開。16C. 展開展開 a. 展開劑展開劑v 展開劑的選擇：展開劑的選擇： 欲分離物在兩相中的溶解度；欲分離物在兩相中的溶解度； 展開劑的極性展開劑的極性 展開劑與欲分離物間應(yīng)無化學(xué)反應(yīng)展開劑與欲分離物間應(yīng)無化學(xué)反應(yīng) 欲分離物在展開劑中的分配系數(shù)最好不受溫度欲分離物在展開劑中的分配系數(shù)最好不受溫度的影響的影響 欲分離物在兩相間的分配平衡瞬間達(dá)到欲分離物在兩相間的分配平衡瞬間達(dá)到17v 展

10、開劑展開劑 水飽和的正丁醇、正戊醇、水飽和的正丁醇、正戊醇、酚酚、四氯化碳、氯仿、苯、四氯化碳、氯仿、苯、丁酮、丁酮、丙酮、有機(jī)酸、有機(jī)堿，有時也加入一定比例的無丙酮、有機(jī)酸、有機(jī)堿，有時也加入一定比例的無機(jī)酸、無機(jī)堿、甲醇、乙醇等機(jī)酸、無機(jī)堿、甲醇、乙醇等b.展層方法展層方法：展層前，層析缸與已點(diǎn)樣濾紙必須予先經(jīng)水：展層前，層析缸與已點(diǎn)樣濾紙必須予先經(jīng)水蒸汽、溶劑蒸氣飽和。方法：將溶劑和水置于分液漏斗中充蒸汽、溶劑蒸氣飽和。方法：將溶劑和水置于分液漏斗中充分振蕩，分層后，將水層放入小燒杯內(nèi)，置于層析缸中平衡分振蕩，分層后，將水層放入小燒杯內(nèi)，置于層析缸中平衡一段時間，使濾紙吸飽蒸汽，然后移去

11、小燒杯，將溶劑倒入一段時間，使濾紙吸飽蒸汽，然后移去小燒杯，將溶劑倒入溶劑槽中，立即將點(diǎn)好樣的濾紙的一端浸入溶劑槽內(nèi)展層。溶劑槽中，立即將點(diǎn)好樣的濾紙的一端浸入溶劑槽內(nèi)展層。18上行法上行法將點(diǎn)有試樣的濾紙條的將點(diǎn)有試樣的濾紙條的下端浸入溶劑（但不能浸沒下端浸入溶劑（但不能浸沒點(diǎn)樣處）上端固定在層析缸點(diǎn)樣處）上端固定在層析缸的上部，保持垂直，將缸密的上部，保持垂直，將缸密閉，使溶劑沿下端上升而展閉，使溶劑沿下端上升而展層。待溶液上升到距離紙上層。待溶液上升到距離紙上端端3 4 cm 3 4 cm 時，將濾紙取出，時，將濾紙取出，用鉛筆在溶劑前沿處畫線作用鉛筆在溶劑前沿處畫線作記號（見右圖）記號

12、（見右圖）19玻片玻片玻璃棒玻璃棒原點(diǎn)原點(diǎn)玻皿玻皿剪成鋸齒狀，便于溶劑滴下剪成鋸齒狀，便于溶劑滴下下行法下行法 溶劑自紙的溶劑自紙的上端向下降（借上端向下降（借助于重力的作助于重力的作用），具有分離用），具有分離速度快及連續(xù)揮速度快及連續(xù)揮發(fā)色譜的優(yōu)點(diǎn)。發(fā)色譜的優(yōu)點(diǎn)。20 環(huán)行法環(huán)行法 又叫徑向色譜法。這是一種既快又方便的方法。取一張圓形又叫徑向色譜法。這是一種既快又方便的方法。取一張圓形濾紙在直徑的兩邊各畫兩根平行線，用剪刀沿這兩根線剪至圓濾紙在直徑的兩邊各畫兩根平行線，用剪刀沿這兩根線剪至圓心處，在紙的中央滴上試液，干后，將濾紙夾在兩個大小相同心處，在紙的中央滴上試液，干后，將濾紙夾在兩個

13、大小相同培養(yǎng)皿之間，使剪開的紙條的尾端浸入流動相。培養(yǎng)皿之間，使剪開的紙條的尾端浸入流動相。21 雙向展開法雙向展開法有時用一種溶劑不能將樣品中組份分開時，可以試用雙向展有時用一種溶劑不能將樣品中組份分開時，可以試用雙向展開法。該法是用正方形或長方形濾紙，在紙的一角上點(diǎn)樣，先用開法。該法是用正方形或長方形濾紙，在紙的一角上點(diǎn)樣，先用一種展開劑朝一個方向展開，展開完畢，待溶劑揮發(fā)后，再用另一種展開劑朝一個方向展開，展開完畢，待溶劑揮發(fā)后，再用另一種展開劑朝與原來垂直的方向進(jìn)行第二次展層。一種展開劑朝與原來垂直的方向進(jìn)行第二次展層。若前后二次展若前后二次展開劑選擇適當(dāng)，開劑選擇適當(dāng)，可使各種組份完

14、可使各種組份完全分離。例如，全分離。例如，氨基酸的分離可氨基酸的分離可用此法。雙向展用此法。雙向展開法也可以二次開法也可以二次使用同一種展開使用同一種展開劑展層。劑展層。22D. 顯色顯色展層后，將濾紙從層析缸中取出，用鉛筆在溶劑展層后，將濾紙從層析缸中取出，用鉛筆在溶劑前沿作記號前沿作記號a. 有色物有色物：直接觀察各個色斑：直接觀察各個色斑b. 無色物無色物： 物理法顯色：物理法顯色：用紫外燈照，觀察有無吸收或發(fā)用紫外燈照，觀察有無吸收或發(fā)出各種不同顏色的熒光斑點(diǎn)，并用鉛筆畫下斑出各種不同顏色的熒光斑點(diǎn)，并用鉛筆畫下斑點(diǎn)的位置及大小。點(diǎn)的位置及大小。23. 分析分析a. 定性定性：實(shí)驗(yàn)條件

15、，各物質(zhì)有各物質(zhì)的：實(shí)驗(yàn)條件，各物質(zhì)有各物質(zhì)的Rf。為。為了查明未知物的組成，最好是在同樣條件下與已了查明未知物的組成，最好是在同樣條件下與已知的純物質(zhì)做對照實(shí)驗(yàn)知的純物質(zhì)做對照實(shí)驗(yàn)化學(xué)法顯色化學(xué)法顯色：利用各種物質(zhì)的特性反應(yīng)，噴灑適：利用各種物質(zhì)的特性反應(yīng)，噴灑適當(dāng)?shù)娘@色劑，若被分離的物質(zhì)含有羧酸，可噴酸當(dāng)?shù)娘@色劑，若被分離的物質(zhì)含有羧酸，可噴酸堿指示劑溴甲酚綠，當(dāng)斑點(diǎn)呈黃色，說明羧酸確堿指示劑溴甲酚綠，當(dāng)斑點(diǎn)呈黃色，說明羧酸確實(shí)存在；若被分離的物質(zhì)含有氨基酸，則可噴茚實(shí)存在；若被分離的物質(zhì)含有氨基酸，則可噴茚三酮，多數(shù)氨基酸呈紫色，個別氨基酸呈黃色。三酮，多數(shù)氨基酸呈紫色，個別氨基酸呈黃色

16、。其它化合物所用顯色劑可從手冊里查閱。其它化合物所用顯色劑可從手冊里查閱。24b. 定量定量 剪洗法：剪洗法：將斑點(diǎn)剪下，用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵?，然后將斑點(diǎn)剪下，用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵?，然后用各種儀器方法（如紅外、紫外、原子吸收、發(fā)用各種儀器方法（如紅外、紫外、原子吸收、發(fā)射光譜），也可將斑點(diǎn)剪下灰化，再用適當(dāng)?shù)娜苌涔庾V），也可將斑點(diǎn)剪下灰化，再用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙?，測之。劑溶解，測之。 比較法比較法：經(jīng)紙色譜將各種組份分開后，可在相同：經(jīng)紙色譜將各種組份分開后，可在相同條件下，制得標(biāo)準(zhǔn)系列圖譜，與待測斑點(diǎn)顏色、條件下，制得標(biāo)準(zhǔn)系列圖譜，與待測斑點(diǎn)顏色、面積進(jìn)行比較，確定其可能的含量。面積進(jìn)行比較，確定其可能

17、的含量。 反射散射光譜法反射散射光譜法： 25F. 應(yīng)用應(yīng)用例氨基酸的分離（固定相為水）例氨基酸的分離（固定相為水）流動相流動相分離情況分離情況正丁醇：正丁醇：2 mol/L HAc = 1 : 1酪氨酸、二碘酪氨酸酪氨酸、二碘酪氨酸用水飽和的芐醇用水飽和的芐醇亮氨酸、異亮氨酸亮氨酸、異亮氨酸叔丁醇：甲乙酮：甲酸：叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水水16 : 16 : 0.1 : 3.9亮氨酸、異亮氨酸亮氨酸、異亮氨酸26流動相流動相分離情況分離情況丁醇：醋酸：水丁醇：醋酸：水32 : 2 :22甲狀腺素、二碘酪氨酸甲狀腺素、二碘酪氨酸流動相：丁醇：流動相：丁醇：HAc :H2O = 4 : 1 :5流

18、動相：流動相：M甲酚甲酚酚：酚：pH = 9.33硼酸硼酸緩沖液緩沖液 = 1 : 1亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、酪色氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、丙氨酸、脯氨酸、谷氨酸、氨酸、丙氨酸、脯氨酸、谷氨酸、蘇氨酸、門冬氨酸、谷氨酰酸、蘇氨酸、門冬氨酸、谷氨酰酸、門冬酰氨、精氨酸、組氨酸、賴門冬酰氨、精氨酸、組氨酸、賴氨酸、胱氨酸等氨酸、胱氨酸等27例例2. 糖的分離糖的分離(固定相為水固定相為水)流動相流動相分離情況分離情況醋酸乙脂醋酸乙脂:吡啶吡啶:水水= 2 : 1 : 1 木糖、阿拉伯糖、甘露木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖糖、葡萄糖丁醇

19、丁醇:吡啶吡啶:水水= 45 : 25 : 40乳糖、半乳糖、葡萄糖乳糖、半乳糖、葡萄糖丁醇丁醇:乙醇乙醇:水水: NH3 = 40 : 10 : 49 : 1尿中葡萄糖尿中葡萄糖丁醇丁醇:乙醇乙醇:水水= 10 : 1 : 2蜜二糖、果糖、葡萄糖蜜二糖、果糖、葡萄糖28流動相流動相分離情況分離情況流動相：酚流動相：酚流動相：丁醇流動相：丁醇:醋酸醋酸:水水= 1 : 1 : 1鼠李糖、核糖、阿拉伯鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、乳糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖醛酸半乳糖醛酸丁醇丁醇:乙醇乙醇:水水= 4 : 1 : 5低聚糖低聚糖75% 2丙醇：醋酸

20、丙醇：醋酸9 : 1 直鏈淀粉直鏈淀粉丁醇丁醇:吡啶吡啶:水：苯水：苯= 50 : 30 : 3 : 45棉子糖棉子糖29例脂肪酸的分離（固定相為水）例脂肪酸的分離（固定相為水）流動相流動相分離情況分離情況95%乙醇：濃氨水乙醇：濃氨水100 : 1同系的直鏈脂肪酸同系的直鏈脂肪酸正己醇：正己醇： 1.5 mol/L 氨水氨水1 : 1烷氧基酸烷氧基酸流動相流動相1:乙醇：濃氨水乙醇：濃氨水 : H2O = 80 : 5 : 15流動相流動相2：乙二醇乙醚：桉樹：乙二醇乙醚：桉樹腦：腦：88%甲酸甲酸 = 5 : 5 : 2草酸、酒石酸、檸檬酸、蘋草酸、酒石酸、檸檬酸、蘋果酸、羥基醋酸、順丁烯

21、二果酸、羥基醋酸、順丁烯二酸、丙二酸、乳酸、琥珀酸、酸、丙二酸、乳酸、琥珀酸、烏頭酸、己二酸、延胡索酸、烏頭酸、己二酸、延胡索酸、葵二酸葵二酸30例例4無機(jī)應(yīng)用（固定相為水）無機(jī)應(yīng)用（固定相為水）流動相流動相分離情況分離情況12 mol/LHCl：甲醇：甲醇：丁醇：甲基異丁酮丁醇：甲基異丁酮55 : 35 : 5 : 5K+、Rb + 、Cs +乙醇：水乙醇：水80 : 20Li + 、Na + 、K +10% HCl的水飽和丁醇的水飽和丁醇Zn 2+Ga 3+In 3+ Al 3+苯酚：甲醇：苯酚：甲醇：HCl 5 : 3 : 2Al 3+ Ga 3+ In 3+ Tl 3+31流動相流動相

22、分離情況分離情況丁醇：丁醇：HAc：乙酸乙脂：乙酸乙脂：水水10 : 2 : 1 : 7從從Fe、Al、Ti中分離中分離出出Ga乙酸乙脂：水：乙酸乙脂：水：HNO385 : 10 : 5從稀土、從稀土、Zr、Ti、Th中分離出中分離出Sc乙醚：濃乙醚：濃HNO3 87.5 : 12.5HfZr4 mol/L HCl 飽和丁醇飽和丁醇UO2Th32例例5生物學(xué)應(yīng)用生物學(xué)應(yīng)用FeCuCoNiNiNiNiTiMo黑毛黑毛紅毛紅毛黃毛黃毛白白毛毛 兔毛的色譜圖毛發(fā)是這樣毛發(fā)是這樣, ,皮膚是否是皮膚是否是這樣這樣 ? ? ?取不同顏色兔毛(300 500 mg), 干法灰化, 溶于稀HCl 中,用丙酮

23、 : 丁醇 : HCl = 10 : 4 : 2, 展開后,顯色33用紙色譜法分離用紙色譜法分離A A、B B兩種物質(zhì)，在某條件下兩物兩種物質(zhì)，在某條件下兩物質(zhì)的比移值質(zhì)的比移值R Rf f分別為分別為0.360.36、0.400.40。設(shè)。設(shè)A A、B B兩物質(zhì)兩物質(zhì)斑點(diǎn)的直徑分別為斑點(diǎn)的直徑分別為0.2 cm,0.4 cm,0.2 cm,0.4 cm,當(dāng)展開劑的前當(dāng)展開劑的前沿達(dá)到沿達(dá)到10 cm10 cm時，時，A A、B B能否完全分離能否完全分離? ?設(shè)設(shè)A A、B B兩物質(zhì)色譜斑點(diǎn)的中心距原點(diǎn)分別為兩物質(zhì)色譜斑點(diǎn)的中心距原點(diǎn)分別為x x1 1, ,x x 2 2 cm,cm,則則

24、x x1 1/10 = 0.36 /10 = 0.36 x x2 2/10 = 0.40/10 = 0.40 x x2 2- -x x1 1 = (0.40-0.36)= (0.40-0.36) 10 = 0.4(cm)10 = 0.4(cm) 欲分離兩物質(zhì)，兩斑點(diǎn)中心距離至少為欲分離兩物質(zhì)，兩斑點(diǎn)中心距離至少為 (0.20+0.40)/2 = 0.30cm,(0.20+0.40)/2 = 0.30cm, 而實(shí)際兩斑點(diǎn)中心距離為而實(shí)際兩斑點(diǎn)中心距離為0.4 cm ,0.4 cm , 故在此條件下故在此條件下A BA B兩物質(zhì)可得到完全分離。兩物質(zhì)可得到完全分離。34用紙色譜法分離用紙色譜法分離

25、A A、B B兩種物質(zhì)，在一定條件下兩種物質(zhì)，在一定條件下A A、B B兩物質(zhì)的比移值分別為兩物質(zhì)的比移值分別為0.35,0.450.35,0.45，設(shè)，設(shè)A A、B B兩物質(zhì)色兩物質(zhì)色譜斑點(diǎn)的直徑分別為譜斑點(diǎn)的直徑分別為0.50cm0.50cm和和0.80cm,0.80cm,要求展開劑前要求展開劑前沿至少達(dá)到多少厘米時，沿至少達(dá)到多少厘米時，A A和和B B才能完全分離才能完全分離? ?設(shè)設(shè)x1, x2分別為分別為AB兩物質(zhì)斑點(diǎn)距原點(diǎn)的距離：兩物質(zhì)斑點(diǎn)距原點(diǎn)的距離：則則 x1/y=0.35 x2/y =0.45 x2-x1=0.40+0.25=0.65又又 x2-x1=(0.45-0.35)

26、y =0.65 y =6.5(cm)35紙色譜法分離混合離子紙色譜法分離混合離子,若混合離子極性大小若混合離子極性大小順序?yàn)轫樞驗(yàn)锳BC,用弱極性有機(jī)溶劑展開后其用弱極性有機(jī)溶劑展開后其Rf值大小順序?yàn)橹荡笮№樞驗(yàn)開。 C, B, A 36二、薄層色譜法二、薄層色譜法1. 原理和特點(diǎn)原理和特點(diǎn)原理原理: 當(dāng)展開劑從薄板上固定相的空隙中通過時當(dāng)展開劑從薄板上固定相的空隙中通過時, 由于各由于各組分的組分的K的不同和足夠多次的分配的不同和足夠多次的分配. 特點(diǎn)特點(diǎn):裝置簡、操作方便裝置簡、操作方便; 展開時間短展開時間短;樣品負(fù)荷量大、樣品負(fù)荷量大、斑點(diǎn)擴(kuò)散少斑點(diǎn)擴(kuò)散少;同一張色譜圖可用不同的試劑

27、顯斑，也可用同一張色譜圖可用不同的試劑顯斑，也可用濃硫酸等強(qiáng)氧化劑或在濃硫酸等強(qiáng)氧化劑或在400 500 加熱碳化檢出加熱碳化檢出.缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：Rf值的重復(fù)性差值的重復(fù)性差克服辦法克服辦法：標(biāo)樣和試樣在同一塊板上展開：標(biāo)樣和試樣在同一塊板上展開372. 吸附劑（固定相）吸附劑（固定相）決定吸附性能的因素：吸附劑的化學(xué)組成、活性、表面積決定吸附性能的因素：吸附劑的化學(xué)組成、活性、表面積要求：要求：合適的吸附力合適的吸附力;與展開劑、被吸附物質(zhì)均不起化與展開劑、被吸附物質(zhì)均不起化學(xué)反應(yīng)學(xué)反應(yīng);粒度細(xì)小而且均勻（范氏方程，減少渦流擴(kuò)散項(xiàng)）粒度細(xì)小而且均勻（范氏方程，減少渦流擴(kuò)散項(xiàng)）(1). 氧化鋁氧

28、化鋁氧化鋁呈微弱堿性，酸性較強(qiáng)的化合物在氧化鋁上氧化鋁呈微弱堿性，酸性較強(qiáng)的化合物在氧化鋁上吸附的很牢（所以，酸性物質(zhì)分離不好），故通常用于分吸附的很牢（所以，酸性物質(zhì)分離不好），故通常用于分離碳?xì)浠衔铩⑸飰A類和對堿性物質(zhì)比較穩(wěn)定的中性物離碳?xì)浠衔?、生物堿類和對堿性物質(zhì)比較穩(wěn)定的中性物質(zhì)、堿性物質(zhì)。質(zhì)、堿性物質(zhì)。38一般要求薄板用的活性為一般要求薄板用的活性為 級級氧化鋁的活性與含水量密切相關(guān)（含一定量的水份時，吸氧化鋁的活性與含水量密切相關(guān)（含一定量的水份時，吸附劑表面的吸附中心回被水分子占據(jù)）附劑表面的吸附中心回被水分子占據(jù)）活性活性 含水量（）含水量（） 市售的供薄層色譜用的市售的

29、供薄層色譜用的Al2O3有有:Al2O3 H：氧化鋁中無粘合劑：氧化鋁中無粘合劑Al2O3 G：氧化鋁中含煅石膏（一般：氧化鋁中含煅石膏（一般5煅石膏）煅石膏） 煅石膏煅石膏CaSO4，作為粘合劑，作為粘合劑Al2O3 HF254：氧化鋁中不含煅石膏，僅含熒光指示劑：氧化鋁中不含煅石膏，僅含熒光指示劑 （在（在254 nm下呈黃綠色熒光）下呈黃綠色熒光）Al2O3 GF254：氧化鋁中既含煅石膏又含熒光指示劑：氧化鋁中既含煅石膏又含熒光指示劑 （在（在254 nm下呈黃綠色熒光）下呈黃綠色熒光）上述商品可以直接調(diào)料涂敷（上述商品可以直接調(diào)料涂敷（1份料，份料，2份水調(diào)合）份水調(diào)合）39（）硅膠

30、（吸附性較（）硅膠（吸附性較Al2O3弱）弱）硅膠是微酸性吸附劑，且適用于酸性、中性物質(zhì)的分離硅膠是微酸性吸附劑，且適用于酸性、中性物質(zhì)的分離（如有機(jī)酸、氨基酸、萜類、甾體）堿性物質(zhì)則能與硅膠作用（如有機(jī)酸、氨基酸、萜類、甾體）堿性物質(zhì)則能與硅膠作用（當(dāng)用中性溶劑展層，堿性物質(zhì)有時停留在原點(diǎn)不動，或者得（當(dāng)用中性溶劑展層，堿性物質(zhì)有時停留在原點(diǎn)不動，或者得到拖尾的斑點(diǎn)，而不能很好的分離）到拖尾的斑點(diǎn)，而不能很好的分離）薄層用商品硅膠有：硅膠薄層用商品硅膠有：硅膠H H（不含粘結(jié)劑）、硅膠（不含粘結(jié)劑）、硅膠G G（含粘（含粘結(jié)劑煅石膏）、硅膠結(jié)劑煅石膏）、硅膠HFHF254254（含熒光物質(zhì)的

31、硅膠）硅膠（含熒光物質(zhì)的硅膠）硅膠GFGF254254（含（含有煅石膏和熒光劑）有煅石膏和熒光劑） 此外，硅藻土、硅酸鹽、雜多酸鹽、聚酰胺、纖維素也此外，硅藻土、硅酸鹽、雜多酸鹽、聚酰胺、纖維素也可用作吸附劑?？捎米魑絼??；钚曰钚?含水量（）含水量（） 0 5 15 25 3540(3). 選擇吸附劑的規(guī)律：選擇吸附劑的規(guī)律：v極性物質(zhì)被極性表面的吸附劑吸附；極性物質(zhì)被極性表面的吸附劑吸附；v親水性的吸附劑適用于在非水溶液中吸附物質(zhì)親水性的吸附劑適用于在非水溶液中吸附物質(zhì)v疏水性的吸附劑適用于在水溶液中吸附物質(zhì)疏水性的吸附劑適用于在水溶液中吸附物質(zhì)展開劑（流動相）展開劑（流動相） 展開劑的洗

32、脫作用實(shí)質(zhì)是展開劑分子與欲分離組分竟?fàn)幷归_劑的洗脫作用實(shí)質(zhì)是展開劑分子與欲分離組分竟?fàn)幷紦?jù)表面吸附中心的過程。占據(jù)表面吸附中心的過程。 強(qiáng)極性展開劑分子占據(jù)吸附中心的能力強(qiáng)，所以，有強(qiáng)強(qiáng)極性展開劑分子占據(jù)吸附中心的能力強(qiáng)，所以，有強(qiáng)的洗脫作用，非極性展開劑分子占據(jù)吸附中心的能力弱，所的洗脫作用，非極性展開劑分子占據(jù)吸附中心的能力弱，所以，有弱的洗脫作用。以，有弱的洗脫作用。（1）常用展開劑的極性：）常用展開劑的極性： 石油醚石油醚環(huán)己烷環(huán)己烷二硫化碳二硫化碳四氯化碳四氯化碳三氯乙烯三氯乙烯苯苯甲苯甲苯二氯甲烷二氯甲烷氯仿氯仿乙醚乙醚乙酸乙酯乙酸乙酯丙酮丙酮乙醇乙醇甲醇甲醇吡啶吡啶酸酸41（2）

33、欲分離組分的極性：）欲分離組分的極性：v飽和碳?xì)浠衔锵捣菢O性化合物，不被吸附或吸附不牢。飽和碳?xì)浠衔锵捣菢O性化合物，不被吸附或吸附不牢。在其結(jié)構(gòu)中引進(jìn)某些功能團(tuán)則極性增加。取代基團(tuán)極性越在其結(jié)構(gòu)中引進(jìn)某些功能團(tuán)則極性增加。取代基團(tuán)極性越強(qiáng)，整個分子極性越強(qiáng)。常見功能團(tuán)按其極性增加的順序強(qiáng)，整個分子極性越強(qiáng)。常見功能團(tuán)按其極性增加的順序是：是： 烷烴烷烴烯烴烯烴醚類醚類硝基化合物硝基化合物二甲胺二甲胺酯類酯類酮類酮類醛類醛類硫醇硫醇胺胺類類酰胺酰胺醇類醇類酚類酚類羧酸類羧酸類 v當(dāng)有機(jī)分子的基本母核相同時，極性基團(tuán)越多，整個分當(dāng)有機(jī)分子的基本母核相同時，極性基團(tuán)越多，整個分子的極性越大子的極

34、性越大v分子的雙鍵越多，吸附能力越強(qiáng)；共軛雙鍵越多，吸附分子的雙鍵越多，吸附能力越強(qiáng)；共軛雙鍵越多，吸附能力越強(qiáng)能力越強(qiáng)v分子中取代基團(tuán)的空間排列對吸附性也有影響，如同一分子中取代基團(tuán)的空間排列對吸附性也有影響，如同一母核中羥基處于能形成內(nèi)氫鍵位置時，其吸附能力弱于不母核中羥基處于能形成內(nèi)氫鍵位置時，其吸附能力弱于不能形成內(nèi)氫鍵的化合物能形成內(nèi)氫鍵的化合物42（3）展開劑的選擇）展開劑的選擇434. 操作技術(shù)操作技術(shù)（1）制板）制板玻璃板玻璃板: a .平整、去油、去污（可用濃平整、去油、去污（可用濃H2SO4-K2CrO7洗液浸洗液浸洗，或丙酮擦洗，自來水洗凈后，烘干）洗，或丙酮擦洗，自來水

35、洗凈后，烘干）b. 玻璃板的尺寸根玻璃板的尺寸根據(jù)自己的需要自由選擇，小的可用據(jù)自己的需要自由選擇，小的可用2.5 7.5cm的載玻片的載玻片, 大大的可用的可用20 20cm的玻片。的玻片。涂布液涂布液:取一定量的吸附劑放入研缽中，加入需要的水或適取一定量的吸附劑放入研缽中，加入需要的水或適當(dāng)?shù)娜軇?，研磨時間以調(diào)成稀糊狀為度，當(dāng)濃度均一后，即當(dāng)?shù)娜軇?，研磨時間以調(diào)成稀糊狀為度，當(dāng)濃度均一后，即成膠狀物，色澤潔白為最佳，立即傾入玻璃板上，用下述方成膠狀物，色澤潔白為最佳，立即傾入玻璃板上，用下述方法涂布。法涂布。涂布方法涂布方法:玻棒涂布玻棒涂布;玻片刮涂玻片刮涂;傾斜涂布傾斜涂布;涂布器涂布

36、器.活化活化:44(2)(2)點(diǎn)樣點(diǎn)樣適當(dāng)?shù)狞c(diǎn)樣量，集中的斑點(diǎn)是得到一個好的色譜的必要適當(dāng)?shù)狞c(diǎn)樣量，集中的斑點(diǎn)是得到一個好的色譜的必要條件。如何才適當(dāng)？不同的分離要求、不同的薄板（有厚有條件。如何才適當(dāng)？不同的分離要求、不同的薄板（有厚有?。?、不同的吸附劑（性能不一），需要不同的點(diǎn)樣量。從?。?、不同的吸附劑（性能不一），需要不同的點(diǎn)樣量。從下圖可見：點(diǎn)樣量少了，不易檢出；點(diǎn)樣量多了，易拖尾或下圖可見：點(diǎn)樣量少了，不易檢出；點(diǎn)樣量多了，易拖尾或擴(kuò)散，影響分離效果。擴(kuò)散，影響分離效果。45純物質(zhì)的鑒定，若又有高靈敏度的顯色劑，點(diǎn)樣量只純物質(zhì)的鑒定，若又有高靈敏度的顯色劑，點(diǎn)樣量只需需 g或或ng；

37、若進(jìn)行天然物或中間產(chǎn)物的分離時，點(diǎn)樣量；若進(jìn)行天然物或中間產(chǎn)物的分離時，點(diǎn)樣量需需50 g幾百微克；若進(jìn)行制備色譜，進(jìn)樣量可達(dá)幾百微克；若進(jìn)行制備色譜，進(jìn)樣量可達(dá)1mg。點(diǎn)樣時可用內(nèi)徑約點(diǎn)樣時可用內(nèi)徑約1mm，管口平整的毛細(xì)管或微量吸管，管口平整的毛細(xì)管或微量吸管吸取試液后，輕輕接觸板面，分?jǐn)?shù)次滴加樣品。吸取試液后，輕輕接觸板面，分?jǐn)?shù)次滴加樣品。注意點(diǎn)：注意點(diǎn)：a.溶解試樣的溶劑最好是揮發(fā)性的溶解試樣的溶劑最好是揮發(fā)性的b.點(diǎn)樣宜分幾次點(diǎn)加點(diǎn)樣宜分幾次點(diǎn)加,即點(diǎn)一次后即點(diǎn)一次后, 用吹風(fēng)機(jī)的冷風(fēng)吹干用吹風(fēng)機(jī)的冷風(fēng)吹干, 再點(diǎn)再點(diǎn), 再吹干再吹干, ., 反復(fù)反復(fù),直到點(diǎn)完所要求的量直到點(diǎn)完所要

38、求的量c. 點(diǎn)樣量的體積盡可能小些點(diǎn)樣量的體積盡可能小些(2 10 L左右左右)d. 點(diǎn)樣最好是在密閉的室中或比較干燥的環(huán)境下完成點(diǎn)樣最好是在密閉的室中或比較干燥的環(huán)境下完成, 避避免薄板吸水降低活性免薄板吸水降低活性.4615cm2.5cm1.5cm溶劑前沿溶劑前沿47（）展層（）展層薄層的展開需在密閉的器皿中進(jìn)行，密閉容器應(yīng)用展開薄層的展開需在密閉的器皿中進(jìn)行，密閉容器應(yīng)用展開溶劑予先飽和。展開方式和紙層析相同。但不加粘合劑的薄板溶劑予先飽和。展開方式和紙層析相同。但不加粘合劑的薄板只能作近水平式（與平面成只能作近水平式（與平面成20 10oC角）的上行或下行的展層角）的上行或下行的展層而

39、不能垂直展層。而不能垂直展層。48 把點(diǎn)好樣品的薄板浸入把點(diǎn)好樣品的薄板浸入0.5cm深的適宜展開劑中，當(dāng)展開劑深的適宜展開劑中，當(dāng)展開劑移動至離起點(diǎn)約移動至離起點(diǎn)約10 20cm處處(約約30min)，將薄板取出放平，將薄板取出放平，用鉛筆或小針記下溶劑前沿的用鉛筆或小針記下溶劑前沿的位置后，在室溫干燥或烘箱內(nèi)位置后，在室溫干燥或烘箱內(nèi)干燥，測其干燥，測其Rf值。值。49注意：每次的展層距離要固定，以便注意：每次的展層距離要固定，以便Rf值的重復(fù)值的重復(fù)50（）檢出（）檢出 a.本身是有色物，可以直接觀測斑點(diǎn)的位置和顏色本身是有色物，可以直接觀測斑點(diǎn)的位置和顏色 b.本身無色但在紫外線的照射

40、下會發(fā)出不同顏色的熒光本身無色但在紫外線的照射下會發(fā)出不同顏色的熒光 c.薄板本身有熒光（硅膠薄板本身有熒光（硅膠HF254+366, 硅膠硅膠GF254, .), 欲測欲測物吸收紫外線物吸收紫外線, 在熒光背景下呈暗色在熒光背景下呈暗色 d.多數(shù)有機(jī)物多數(shù)有機(jī)物, 噴噴10 50% H2SO4(或鉻硫酸或鉻硫酸)并在并在100 120oC加熱加熱, 使有機(jī)物碳化使有機(jī)物碳化, 觀察加熱中有機(jī)物顏色變觀察加熱中有機(jī)物顏色變化及碳化斑點(diǎn)位置化及碳化斑點(diǎn)位置, 可以推斷物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)可以推斷物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì) e. 噴顯色劑或熒光試劑（不含粘合劑的薄板不能噴，只噴顯色劑或熒光試劑（不含粘合劑的薄板不能噴，只能浸，以免把吸附劑吹散）能浸，以免把吸附劑吹散）51主要顯色試劑主要顯色試劑試劑試劑配制及使用方法配制及使用方法檢出范圍檢出范圍濃濃H2SO4噴霧噴霧, 100 120oC , 觀察顏色變化觀察顏色變化高級醇、醛、酮、甾體高級醇、醛、酮、甾體H2SO4-K2Cr2O75g K2Cr2O7+100mL H2SO4, 噴霧噴霧,280oC觀察顏色