發(fā)酵飼料中各組分的測定方法

1、發(fā)酵飼料中各組分的測定方法一、飼料中概略養(yǎng)分的測定方法（一）飼料中水分的測定方法1.原理: 試樣在105±2烘箱內(nèi)，在大氣壓下烘干，直至恒重，逸失的重量為水分2.儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽。分樣篩：孔徑0.45毫米（40目）分析天秤：感量0.0001克。電熱式恒溫烘箱：可控制溫度為105±2。稱樣皿：玻璃或鋁質(zhì)，直徑40毫米以上，高25毫米以下。干燥器：用氯化鈣（干燥試劑）或變色硅膠作干燥劑。3.試樣的選取和制備選取有代表性的試樣，其原始樣量應(yīng)在1000g以上用四分法將原始樣品縮減至500g，風(fēng)干后粉碎至40目，再用四分法縮至200g，裝入密封容器，放陰涼干燥處保存。

2、如試樣是多汁的鮮樣，或無法粉碎時(shí)應(yīng)預(yù)先干燥處理，稱取試樣200300g，在105烘箱中烘15分鐘，立即降至65，烘干56小時(shí)，取出后，在室內(nèi)空氣中冷卻4小時(shí)，稱重，即得風(fēng)干試樣。4.測定步驟（1）潔凈稱樣皿，在105±2烘箱中烘1小時(shí)，取出在干燥器中冷卻30分鐘（稱樣皿放入烤箱時(shí)應(yīng)開1/3蓋，冷卻和稱重時(shí)應(yīng)蓋嚴(yán)），稱準(zhǔn)至0。0002克，再烘干30分鐘，同樣冷卻，稱重，直至兩次重量之差小于0。0005克為恒重。（2）用已恒重稱樣皿稱取兩份平行樣，每份2.0克，樣品厚度4毫米以下，準(zhǔn)確至0。0002克，不蓋稱樣皿蓋（或半蓋），在105±2烘箱中烘烘4小時(shí)，以溫度到達(dá)105開始計(jì)

3、時(shí)，取出蓋好稱樣皿蓋，在干燥器中冷卻30分鐘，稱重。（3）再同樣烘干1小時(shí)，冷卻，稱重，直至兩次稱重之重量差小于0.002克。5.測定結(jié)果的計(jì)算計(jì)算公式：水分（%）=（W1W2）/（W1W0）×100%式中：W1105烘干前的試樣及稱樣皿的重量（g）；W2105烘干后試樣及稱樣皿的重量（g）；W0已恒重的稱樣皿的重量（g）。6.重復(fù)性每個(gè)試樣，應(yīng)取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果，兩個(gè)平行樣測定值相差不得超過0。2%，否則重做。、7.注意事項(xiàng)（1）如果試樣進(jìn)行過預(yù)先干燥處理，應(yīng)按下式計(jì)算原來試樣的所含水分總量：原試樣總水分（%）=預(yù)干燥減重（%）+100預(yù)干燥減重（%） &#

4、215;風(fēng)干試樣水分（%）（2）某些含脂肪高的樣品，烘干時(shí)間長反而增重，乃脂肪氧化所致，應(yīng)以增重前那次重量為準(zhǔn)。（3）含糖分高的易分解或易焦化試樣，應(yīng)使用減壓干燥法（70，600mm汞柱以下，烘干5小時(shí)）測定水份。（二）飼料中粗蛋白的測定方法 1.測定原理在催化劑（如硫酸銅、硫酸鉀、硫酸鈉或硒粉）作用下，試樣中有機(jī)物質(zhì)被濃硫酸消化分解，使含氮物質(zhì)（蛋白質(zhì)，氨態(tài)氮等）轉(zhuǎn)化為硫酸銨，而非含氮物質(zhì)則以二氧化碳、水蒸氣、二氧化硫等氣態(tài)逸出。消化液在強(qiáng)堿作用下蒸餾，釋放出氨氣，氨氣冷凝后被硼酸吸收，并與其結(jié)合成硼酸銨，然后以甲基紅-溴甲酚綠作混合指示劑，用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定，求出氮的含量，再乘以一定的

5、換算系數(shù)（通常用6.25計(jì)算），即得出試樣中粗蛋白質(zhì)的含量。2.試劑和材料未特殊標(biāo)注的試劑均為分析純。水至少應(yīng)為蒸餾水（1）濃硫酸：化學(xué)純。（2）400g/L氫氧化鈉溶液：40.0 g氫氧化鈉(化學(xué)純)，溶于100.0 mL水中。（3）混合催化劑：取質(zhì)量比為1:9的五水合硫酸銅(預(yù)處理：研磨至粉末狀)和無水硫酸鉀混合并研磨混勻，裝入試劑瓶中密封備用。（4）1 g/L甲基紅乙醇溶液：稱取0.10g甲基紅溶于100 mL乙醇中，棕色瓶中保存3個(gè)月。（5）1 g/L溴甲酚綠乙醇溶液：稱取0.10g溴甲酚綠溶于100 mL乙醇中，棕色瓶中保存3個(gè)月。（6） 硼酸吸收液：溶解2.0g分析純硼酸于100.

6、0ml容量瓶中，加蒸餾水至100.0ml，搖勻備用。（7） 0.05mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：4.2ml鹽酸注入1000 mL水中，用無水碳酸鈉法標(biāo)定。（8）蔗糖：分析純。（9）硫酸銨：基準(zhǔn)試劑。3.儀器設(shè)備（1）實(shí)驗(yàn)室用粉碎機(jī)。（2）分樣篩：40目（孔徑0.42 mm）。（3）分析天平：感量 0.0001 g。（4）消煮爐或六聯(lián)電爐：6×（8001000）（5）凱氏定氮儀：FOSS Kjeltec 8100?；虬胛⒘縿P氏定氮儀：如圖（6）酸式滴定管：25.0ml或50.0ml（7）凱氏燒瓶：100.0ml（8）燒杯：250.0ml（9）三角瓶：150.0ml（10）容量瓶：100

7、.0ml（11）移液管：10.0ml（12）量筒：10.0ml、25.0ml4.分析步驟 （1）消化 精確城區(qū)飼料樣本0.50001.0000g，將秤樣紙卷成桶狀，無損的移入100.0ml洗凈、烘干的已編號(hào)的凱氏燒瓶中，加入1.01.5g混合催化劑，沿著凱氏燒瓶壁加入10.015.0ml濃硫酸，將凱氏燒瓶放于毒氣櫥中電爐上消化，為防止消化時(shí)液體濺失，可再加兩粒玻璃珠，先低溫加熱防止泡沫浮起，待泡沫消失后，提高加熱溫度至沸騰。消化時(shí)要經(jīng)常轉(zhuǎn)動(dòng)凱氏燒瓶，如果有黑色碳粒消化不全，可將凱氏燒瓶內(nèi)壁上粘附少量黑色碳粒于硫酸中，繼續(xù)消化至完全澄清透明，無黑色碳粒呈藍(lán)綠色為止，移出電爐，放于沙盤中冷卻。（2

8、）轉(zhuǎn)移 將冷卻的消化液加少許蒸餾水約20.0ml，搖勻后無損移入100.0ml容量瓶，用蒸餾歲反復(fù)沖洗燒瓶并移入容量瓶，冷卻到室溫后，再用蒸餾水定容至刻度。（3）空白實(shí)驗(yàn) 消化的同時(shí)另取一個(gè)凱氏燒瓶，加入除樣品外其他試劑，同樣消化至澄清透明，后續(xù)操作相同，為空白消化液。（4）蒸餾 安裝好半微量凱氏定氮儀，檢查冷凝水是否通暢。加熱蒸發(fā)器內(nèi)的水，待水沸騰后，調(diào)節(jié)好蒸汽的壓力，反復(fù)洗凈定氮儀反應(yīng)室，把裝有10.0ml 2.0%硼酸溶液的接受瓶至于冷凝管下方，將冷凝管下端的滴管插入硼酸溶液內(nèi)，用被測消化液沖洗10.0ml移液管3次，再用此移液管吸取10.0ml樣本消化液，由漏斗處諸如反應(yīng)室，并以少量蒸

9、餾水沖洗漏斗，塞好加液塞，從漏斗中加入40.0%NaOH溶液，輕輕地?fù)軇?dòng)加液塞，多余NaOH溶液用滴管吸出于盛NaOH溶液燒杯，加少量蒸餾水沖洗漏斗及反應(yīng)室內(nèi)壁，開始計(jì)時(shí)，蒸餾5min，接受瓶離開頁面繼續(xù)蒸餾1分鐘。用坩堝鉗切斷氣源，將反應(yīng)室的殘液吸出，反復(fù)沖洗反應(yīng)室數(shù)次，移走接受瓶前 用少量蒸餾水沖洗冷凝管尖端。放置下一個(gè)測定瓶，繼續(xù)下一個(gè)測定工作，（5）滴定 用0.05mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液滴定吸收液，溶液由藍(lán)綠色變成灰紅色為終點(diǎn)。5.計(jì)算試樣中粗蛋白含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，數(shù)值以%計(jì)，按下式進(jìn)行計(jì)算：式中：V1樣本消化液滴定時(shí)消耗0.05mol/L的HCl標(biāo)準(zhǔn)液的量，mL；V0空白消化液

10、滴定消耗0.05mol/L的HCl標(biāo)準(zhǔn)液的量，mL；V2樣品消耗后定容的體積，mL；V3定氮吸收樣品消化液的體積，mL；C鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；W試樣質(zhì)量，g；0.014每毫升1mol/L的HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于氮的克數(shù)；6.25氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)。6.重復(fù)性每個(gè)樣品取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測定，取其算術(shù)平均值，兩次滴定用標(biāo)準(zhǔn)液之差不超過0.1ml。粗蛋白%25%時(shí)，允許相對(duì)偏差為1%；10%粗蛋白%25時(shí)，允許相對(duì)偏差為2%；粗蛋白%10%時(shí)，允許相對(duì)偏差為3%。7.注意事項(xiàng)（1）平行測定試樣時(shí)稱樣量要盡量一致，以減少誤差；稱樣量要適當(dāng)，保證滴定時(shí)消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積數(shù)不少于15ml。

11、（2）樣品要用稱量紙包裹好后放入消化管中，催化劑要稱量在5.0g左右。緩緩加入硫酸，浸泡樣品15 min后將其放在消化爐上。（3）消化爐溫在200以下時(shí)才可以將盛有樣品的消化管放在消化爐上開始消化。（4）試樣消化初期應(yīng)保證冷凝水流量足已帶走實(shí)驗(yàn)所產(chǎn)生的有毒有害氣體，待（5）消化后的試樣溶液在放置冷卻后會(huì)結(jié)晶成固體，若結(jié)晶成固體后應(yīng)在電爐上加熱溶解后再進(jìn)行蒸餾操作，否則會(huì)在通入蒸汽時(shí)反應(yīng)劇烈，內(nèi)部壓力增高，有試樣溶液逸出或炸裂消化管的可能。（6）重新配制鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液后要進(jìn)行蒸餾器硫酸銨回收率的化學(xué)檢驗(yàn)。（7）定氮儀開機(jī)之后蒸餾試樣溶液之前需要進(jìn)行一次無樣測試（清洗），清洗儀器內(nèi)部管路，排除儀器內(nèi)

12、部管路的殘存的氣體；蒸餾結(jié)束后同樣需要進(jìn)行一次無樣測試（清洗），清洗儀器內(nèi)部管路。蒸餾過程中長時(shí)間使用高濃度的氫氧化鈉溶液，在管路內(nèi)部會(huì)形成氫氧化鈉固體結(jié)晶，輕者加氫氧化鈉量不足，嚴(yán)重的會(huì)造成管路堵塞無法加氫氧化鈉；應(yīng)對(duì)管路進(jìn)行定期清洗，將氫氧化鈉溶液更換為溫?zé)岬恼麴s水，對(duì)其管路清洗即可。（8）蒸餾前應(yīng)將蒸餾裝置的冷凝管末端浸入盛有硼酸吸收液的錐形瓶的液面以下，防止產(chǎn)生的氨氣損失；蒸餾完畢應(yīng)先將錐形瓶取下，然后關(guān)閉蒸汽，防止吸收液倒吸。蒸餾過程中應(yīng)確保體系的密封性，若有泄露實(shí)驗(yàn)應(yīng)重做。（三）飼料中粗脂肪的測定1.實(shí)驗(yàn)原理索氏脂肪提取器中用乙醚提取試樣，稱提取物的重量，除脂肪外還有有機(jī)酸，磷脂，

13、脂溶性維生素，葉綠素等，因而測定結(jié)果稱為粗脂肪或乙醚提取物。2.實(shí)驗(yàn)試劑無水乙醚（分析純）3.儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽分樣篩：孔徑0。45毫米。分析天秤：感量0。0001克。電熱恒溫水浴鍋：室溫100。恒溫烘箱：50200。索氏脂肪提取儀：100.0ml或150.0ml濾紙或?yàn)V紙筒：中速，脫脂。干燥器：用氯化鈣（干燥級(jí)）或變色硅膠為干燥劑。稱樣皿：直徑80mm以上4.試樣的制備選取有代表性的試樣，用四分法將試樣縮減為500克，粉碎至40目，再用四分法縮減到200克，于密封容器中保存。5.分析步驟（1）索氏脂肪提取器的準(zhǔn)備索氏脂肪提取器，應(yīng)干燥無水，抽提瓶中有沸石數(shù)粒，在105±

14、;2烘箱中烘干60分鐘，干燥器中冷卻30分鐘，稱重，再烘干30分鐘，同樣冷卻稱重，兩次重量之差小于0.0008克為恒重，（2）稱取試樣12克準(zhǔn)確至0.0002克，用濾紙包好，放在稱量皿中。然后放入105烘箱中，烘干120分鐘，拿出來放在干燥器中冷卻30min后稱重，直至恒重。（3）將恒重的濾紙包由稱量皿中取出放入浸提管中，加入乙醚。（4）在6075的水浴上加熱，使乙醚回流，控制乙醚回流次數(shù)為每小時(shí)約10次，共回流約50次，檢查抽提管流出的乙醚揮發(fā)后不留下油跡為抽提終點(diǎn)。（5）取出試樣，在通風(fēng)處待乙醚揮發(fā)干凈后，置于稱量皿中放入105±2烘箱中烘干12小時(shí)，干燥器中冷卻30分鐘稱重，再

15、烘干30分鐘，同樣冷卻稱重，兩次重量之差小于0.001克為恒重。（6）乙醚的回收：提取完畢，待浸提管中乙醚流入盛醚瓶后，移去上部冷凝管取出樣品包，將冷凝管裝好再回流一次，以沖洗浸提管中殘留的脂肪，繼續(xù)蒸餾，當(dāng)乙醚聚集到虹吸管高度2/3處時(shí)，取下裝置，收回乙醚，繼續(xù)回流，直至脂肪瓶中的乙醚全部收完為止。也可以使用脂肪提取儀測定，依儀器操作說明書進(jìn)行操作。6.測定結(jié)果的計(jì)算：粗脂肪（%）=(m2m1)×100m式中：m:風(fēng)干試樣的重量，gm1：已恒重的抽提瓶重量,gm2：已恒重的盛有脂肪的抽提瓶的重量,g重復(fù)性每個(gè)試樣取兩平行樣進(jìn)行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。粗脂肪含量在10%以上（含1

16、0%）允許相對(duì)偏差為3%。粗脂肪含量在10%以下時(shí)，允許相對(duì)偏差為5%。（四）飼料中粗灰分的測定1.原理飼料中的灰分，即飼料中的礦物質(zhì)或無機(jī)鹽，主要是K、Na、Ca、Mg、S、Si、P、Fe以及其他微量元素等。飼料樣本經(jīng)過高溫(550)的灼燒以后，其中的有機(jī)元素，如N、H、O、C等，均被氧化而逸失，所剩殘?jiān)饕堑V物元素氧化物或無機(jī)鹽類，亦即礦物質(zhì)，但也會(huì)含少量雜質(zhì)，如砂、土等，所以稱為粗灰分。2.儀器設(shè)備（1）實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽。（2）高溫電爐:20-900。（3）分析天平: 感量0.0001g。（4）六聯(lián)可調(diào)電爐:6×1000W。（5）瓷坩堝: 帶蓋30ml。（6）干燥器:

17、 內(nèi)徑30cm (變色硅膠做干燥劑)。（7）坩堝鉗:長柄45cm短柄25cm。（8）毛筆。3.試劑（1）凡士林：醫(yī)用。（2）變色硅膠:化學(xué)純。（3）0.5%氯化鐵墨水溶液：稱取0.5克FeCl3溶于100ml藍(lán)墨水中。4.測定步驟（1）洗凈坩鍋，用0.5% 氯化鐵墨水溶液編號(hào)(號(hào)碼最好一律刻在坩鍋和坩鍋蓋的廠牌房，以便尋找)（2）在650左右高溫電爐中灼燒30分鐘，待爐溫降至200以下時(shí)，移入干燥器中冷卻30分鐘后稱重，如此重復(fù)操作至兩次重量之差不大于0.0005g為恒重。（3）在此坩堝中精稱樣本2g（準(zhǔn)確到0.0002g）（4）在電爐上小火炭化至無煙后，移入高溫電爐650左右灼燒2小時(shí)，取出

18、后于干燥器中冷卻30分鐘，稱重。再灼燒1小時(shí)，同樣冷卻稱重，直至前后兩次重量之差小于0.0002g為止。5.測定結(jié)算的計(jì)算 粗灰分%= （W3-W1）/（W2-W1）×100式中：W樣本重(g)W1坩鍋(帶蓋)重(g)W2坩鍋(帶蓋)加樣本重(g)W3坩鍋(帶蓋)加灰分重(g)6.注意事項(xiàng)（1）用電爐炭化時(shí)應(yīng)小心，炭化和灰化時(shí)應(yīng)打開坩鍋蓋少許，以防樣本顆粒被逸出的氣體帶走。（2）取用坩鍋鉗坩鍋時(shí)，坩鍋鉗必須燒熱后才能夾取高熱坩鍋，以防破裂。（3）灰化殘?jiān)伾c樣品中含量有關(guān)，一般樣品灰化完全時(shí)為白色，但含鐵高的樣品常呈紅棕色，含錳高的呈淡蘭色。如炭灰呈灰色，則表示沒灰化完全需繼續(xù)灼燒

19、。（五）飼料中NDF的測定方法1.原理植物性飼料如一般飼料、牧草的粗纖維經(jīng)中性洗滌劑（3%十二烷基硫酸鈉）分解，則大部分細(xì)胞內(nèi)容物溶解于洗滌劑中，其中包括脂肪、糖、淀粉和蛋白質(zhì)，統(tǒng)稱為中性洗滌劑溶解物（NDS），而不溶解的殘?jiān)鼮橹行韵礈炖w維（NDF），這部分主要是細(xì)胞壁部分，如半纖維素、纖維素、木質(zhì)素、硅酸鹽和極少量的蛋白質(zhì)。2. 儀器設(shè)備（1） 冷凝器或冷凝裝置兩套（2） 分析天平：感量0.0001g（3） 高腳燒杯：600.0ml，2個(gè)（4） 表面皿：直徑12.0cm，2個(gè)（5） 抽濾裝置一套（6） 玻璃坩堝3. 化學(xué)試劑（1） 中性洗滌劑（3.0%十二烷基硫酸鈉）：準(zhǔn)確秤取37.2g乙二

20、胺四乙酸二鈉（EDTA，化學(xué)純）和13.6g硼酸鈉（化學(xué)純），一同放入1000.0ml燒杯中，加入少量蒸餾水，加熱溶解后，再加入30.0g十二烷基硫酸鈉（化學(xué)純）和10.0ml乙二醇乙醚（化學(xué)純）；稱取23.0g無水磷酸鈉（化學(xué)純）置于另一燒杯中，加少量蒸餾水微微加熱溶解后，傾入第一燒杯，在容量瓶中稀釋至1000.0ml，此溶液pH值6.97.1左右。（2） 十氫化萘C10H18，化學(xué)純（3） 無水硫酸鈉4. 測定步驟（1） 準(zhǔn)確稱取風(fēng)干樣（通過40目篩）1.0g，置于高腳燒杯中。（2） 加入室溫的中性洗滌劑100.0ml和數(shù)滴十氫化萘（消泡劑）以及0.5g無水硫酸鈉，不要求準(zhǔn)確。（3） 套上

21、冷凝裝置，立即置于電爐上盡快煮沸（1.0min內(nèi)煮沸），溶液沸騰后調(diào)節(jié)電爐使其始終保持微沸狀態(tài)1h。（4） 煮沸完畢后離開熱源，冷卻熱源，冷卻10min，將已知重量的玻璃坩堝安裝在抽濾瓶上，將殘?jiān)恳迫?，抽濾，并用熱水沖洗、抽濾殘?jiān)翢o泡沫，將濾液全部濾干。（5） 用20.0ml丙酮沖洗2次，抽濾。（6） 取下玻璃坩堝，在105.0條件下烘干，稱至恒重。5. 結(jié)果計(jì)算NDF百分率的計(jì)算公式NDF（%）=（m1-m2）/m*100式中：m1玻璃坩堝和NDF的質(zhì)量 m2玻璃坩堝的質(zhì)量 m樣本質(zhì)量（6） 無氮浸出物的計(jì)算無氮浸出物（%）=100-水分（%）+粗蛋白質(zhì)（%）+粗脂肪（%）+粗纖維（%

22、）+粗灰分（%）二、揮發(fā)性脂肪酸的測定一般來說，碳原子數(shù)在10以下的脂肪酸大部分具有揮發(fā)性，并且易溶于水。在它們中間，隨著碳原子數(shù)的增加，揮發(fā)性逐漸下降。典型的揮發(fā)酸見附表5。附表5 低級(jí)脂肪酸的分子式及沸點(diǎn)名稱分子式沸點(diǎn)/名稱分子式沸點(diǎn)/甲酸乙酸丙酸HCOOHCH3COOHC2H5COOH100.8117.5140.0丁酸戊酸已酸C3H7COOHC4H9COOHC5H11COOH162.3185.5205.0揮發(fā)性脂肪酸易被微生物利用。在有機(jī)物的厭氧分解中，揮發(fā)性脂肪酸是作為生物代謝的中間或最終產(chǎn)物而存在。在厭氧發(fā)酵的液化產(chǎn)酸階段，這一類低級(jí)脂肪酸是這一階段的主要產(chǎn)物，其中以乙酸為主。在某種

23、條件下，乙酸可以達(dá)到該類酸總量的80%。在CH4形成過程中，甲酸和乙酸是形成甲烷的重要前體物。據(jù)研究，自然界有機(jī)物產(chǎn)生的CH4中大約有70%上由乙酸中的甲基原子團(tuán)形成的。丙酸、丁酸可以轉(zhuǎn)化成甲酸。有機(jī)酸過多往往反映出發(fā)酵池的病態(tài)。因此可以認(rèn)為，在微生物厭氧發(fā)酵過程中，揮發(fā)性脂肪酸不僅是一種不可缺少的營養(yǎng)成分，更重要的意義在于這類有機(jī)酸已是沼氣發(fā)酵研究有機(jī)物降解工藝條件優(yōu)劣的重要參數(shù)，在甲烷形成的研究和生產(chǎn)中，它們的含量也是重要的參數(shù)。在揮發(fā)性脂肪酸的總量測定中，是以乙酸作為基數(shù)進(jìn)行計(jì)算，除了要求測定總量外，對(duì)甲酸、乙酸等各種低級(jí)脂肪酸的分別定量分析也是十分重要的。（一）C2C5揮發(fā)性脂肪酸的氣

24、相色譜測定法1.測定原理使用色譜儀上的氫火焰檢測器測定揮發(fā)性脂肪酸含量，其基本原理是：色譜柱分離后餾出的物質(zhì)被載氣載入檢測器離子室的噴嘴口，與燃燒氣氫氣相混合，并以空氣助燃?xì)膺M(jìn)行燃燒，以此為能源，將組分電離成離子數(shù)目相等的正離子和負(fù)離子（電子）。在離子室內(nèi)裝有收集極和底電極，因此離子在電場內(nèi)作定向流動(dòng)，形成離子流。該離子流被收集極收集后，經(jīng)過微電流放大器放大輸送給記錄儀得到信號(hào)，此信號(hào)的大小代表單位時(shí)間內(nèi)進(jìn)入檢測器火焰的組分含量。2.測定條件試劑設(shè)備 乙酸、丙酸、丁酸、戊酸混合標(biāo)準(zhǔn)液的配制。分別吸取乙酸（A.R.，相對(duì)密度1.045，含量99%）、丙酸（A.R.，相對(duì)密度0.9987，含量99

25、.5%）、丁酸（A.R.，相對(duì)密度0.8097，含量99%）、戊酸（A.R.，相對(duì)密度0.934，含量100%）各25L于50mL容量瓶中，再加入2.5mL甲酸（A.R.，相對(duì)密度1.22，含量88%），最后用蒸餾水定容。其中乙酸、丁酸、戊酸的濃度分別為517L/L、497L/L、401L/L、467L/L。 6mol/ L硫酸的配制：將167mL濃硫酸（相對(duì)密度1.84）緩慢倒入833mL蒸餾水中。 甲酸：相對(duì)密度1.22，含量88%。 離心機(jī)400016000r/min。 氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器。 樣品預(yù)處理 用沼氣發(fā)酵液7mL加入2滴6mol/ L H2SO4使pH值降至3.5左右（用

26、pH試紙粗測），離心2030 min，取上層透明清液3mL，加入0.15 mL濃甲酸，最終pH值為2.0左右（控制在3.0以下）。 主要實(shí)驗(yàn)參數(shù) 條件一。固定相：GDX103+H3PO4，2%(6080目)；色譜柱：2m×6mm；柱溫：180200；氣化室溫度：240；檢測溫度：210；進(jìn)樣量：2L；載氣流量：N2，50mL/ min；氫氣流量：50 mL/ min；空氣流量：600700 mL/ min；衰減：×1/8。 條件二。色譜柱：2m×3mm，不銹鋼柱，內(nèi)填國產(chǎn)GDX-401擔(dān)體，6080目；柱溫：210；載氣：N2，流率為90mL/ min；空氣流率：

27、500 mL/ min；氫氣流率：50 mL/ min；氣化室溫度：240；檢測溫度：210。 條件三。色譜柱：2m×6mm，裝有以2%磷酸飽和的6080目GDX-103擔(dān)體；柱溫：180200；氣化室溫度：240；檢測溫度：210；進(jìn)樣量：2L；載氣流量：N2，50mL/ min；氫氣流量：50 mL/ min；空氣流量：600700 mL/ min； 條件四。色譜柱：2m×2mm，玻璃柱，內(nèi)裝有10%的商品固定液FluoradFC431涂布的Supelcoport擔(dān)體，100200目；柱溫：130；氣化室溫度：220；檢測溫度：210；載氣流量：N2，40mL/ min

28、。 定性與定量 定性。配制模擬標(biāo)準(zhǔn)樣品，用已知物質(zhì)的保留時(shí)間對(duì)照被測物質(zhì)的保留時(shí)間進(jìn)行定性。 定量。用已知樣校正法進(jìn)行定量，其方法是配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣（與樣品組分一致），進(jìn)行色譜試驗(yàn)，測量標(biāo)準(zhǔn)樣各組分的峰高（或峰面積），求出組分i的單位峰高（或峰面積）的組分含量或作出峰高和濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。當(dāng)樣品組分濃度變化不大時(shí)，可采用單位校正法。當(dāng)樣品組分濃度變化很大時(shí)，則需預(yù)先用校準(zhǔn)樣作出濃度和峰高或峰面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線，觀察其標(biāo)準(zhǔn)曲線是不是通過原點(diǎn)的直線，即是否呈線性。若呈線性，就可用單點(diǎn)校正法，按下面的公式計(jì)算：待測樣品濃度，L/L；待測樣品峰高，mm；標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，L/L；標(biāo)準(zhǔn)樣品峰高，mm；待測樣品

29、體積+甲酸體積，mL；待測樣品體積，mL。3.方法的精度和注意事項(xiàng) 以GDX103+H3PO42%為固定相，比用GDX101 、PEGS、Porapak.N等作為固定相其保留時(shí)間短，且峰形對(duì)稱。 本法最小檢測量為4L/L，相對(duì)誤差為1.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.7%（以乙酸計(jì)）。 有機(jī)酸是一種強(qiáng)極性物質(zhì)，沸點(diǎn)較高，由于擔(dān)體對(duì)酸的吸附，常常引起酸峰拖尾和鬼峰的出現(xiàn)。因此，取有機(jī)酸直接進(jìn)樣測定時(shí)，為了抑制酸的吸附，可采取以下措施。 在樣品中加入一定量的濃甲酸（相對(duì)密度1.22，含量88%），使其甲酸加入量（體積）與樣品的體積比為5：100。甲酸是一種一元羧酸，離解常數(shù)（2.11×10-4）大

30、于其他任何一元羧酸，當(dāng)含有甲酸的樣品進(jìn)入固定相時(shí)，擔(dān)體表面的吸附中心位置被甲酸暫時(shí)占據(jù)，這樣便抑制了C2C5酸被擔(dān)體的吸附。此外，甲酸在FID上響應(yīng)很低，故對(duì)其他組分的應(yīng)答影響不大。 酸的吸附還發(fā)生在接近進(jìn)樣口的地方，由于進(jìn)樣口常積累有碳質(zhì)沉積物，通常采用蒸餾水清洗進(jìn)樣口，并用1.5%磷酸-丙酮液來浸泡進(jìn)樣口，然后在約150的溫度下將進(jìn)樣口烘烤48h。 用1.5%磷酸-丙酮液來浸泡柱口玻璃毛。 在分析高濃度時(shí)，一定分析周期內(nèi)注射水或15%甲酸液來洗滌被柱子吸附的酸。 操作條件恒定以后，在進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)酸樣或樣品之前，用15%的甲酸液來沖洗柱子34次。 柱子使用壽命大約46個(gè)月，一旦發(fā)現(xiàn)色譜峰出現(xiàn)拖尾或

31、重復(fù)性差，則必須更換柱。 盡管采取了一系列防止吸附的措施，但柱子的吸附問題還是不可能完全解決，特別是對(duì)于4000L/L以上高濃度的酸樣，如何克服吸附問題還值得更進(jìn)一步研究。 當(dāng)檢測器的靈敏度顯著降低或更換新柱之后，重新做校正曲線。（二）揮發(fā)性脂肪酸總量的比色測定法1. 測定原理含揮發(fā)性脂肪酸的樣液，在加熱的條件下，與酸性乙二醇作用生成酯，此酯與羧胺反應(yīng)，形成氧肟酸。在高鐵試劑存在下，氧肟酸轉(zhuǎn)化為高鐵氧肟酸的棕紅色絡(luò)合物，其顏色的深淺在一個(gè)較大的范圍內(nèi)與反應(yīng)初始物揮發(fā)性脂肪酸的含量成正比，故可用比色法測定。2.測定方法 試劑 1：1硫酸：濃硫酸（相對(duì)密度1.84，C.P.）加到同體積蒸餾水中稀釋

32、配制。 酸性乙二醇試劑：取30.0mL乙二醇(C.P.)與4.0mL配制的稀硫酸混合。 4.5mol/L的氫氧化鈉：稱取180g氫氧化鈉(C.P.)溶于水中，冷后以蒸餾水稀釋至1L。 10%硫酸羥胺溶液：稱取硫酸羥胺(C.P.)10.0g，溶于100mL蒸餾水中。 羥胺試劑：量取20.0 mL4.5mol/L的氫氧化鈉，與5.0mL10%的硫酸羥胺相混合。 酸性氯化鐵試劑：將20.0g分析純FeCl3 ·6H2O溶于500mL水中，準(zhǔn)確加入20.0 mL濃硫酸，并以蒸餾水稀釋至1L。 測定程序 乙酸標(biāo)準(zhǔn)液的配制。精確稱取乙酸（分析純，相對(duì)密度1.045，含量99.0%）1.010g，

33、以蒸餾水稀釋至100mL，此溶液含乙酸10mg/mL。準(zhǔn)確吸取10 mg/mL乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0mL、5.0mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL、25.0mL、30.0mL，分別置于100.0mL容量瓶內(nèi)，以蒸餾水定容至刻度，搖勻，即得100L/L、500L/L、1000L/L、1500L/L、2000L/L、2500L/L、3000L/L的乙酸標(biāo)準(zhǔn)系列液。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。取相對(duì)密度1.045的乙酸（分析純）試劑，制成50mL/L、100 mL/L、500 mL/L、1000 mL/L、1500 mL/L、2500 mL/L、3000 mL/L的系列標(biāo)準(zhǔn)液，分別吸取0.5 mL分置

34、于試管中（12.5cm×1.5cm），每瓶中準(zhǔn)確加入，于沸水浴中加熱3min，然后立即以冷水冷卻；再加入2.5mL羥胺試劑，充分搖勻，然后，充分振蕩混勻，以蒸餾水定容，用721型分光光度計(jì)以500nm波長測定其光密度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以橫坐標(biāo)表示濃度值，縱坐標(biāo)表示光密度值。 樣品的測定。以400010000r/min的離心條件，制取沼氣發(fā)酵樣品澄清液，吸取0.5mL樣液置于試管中（12.5cm×1.5cm），準(zhǔn)確加入1.7 mL酸性乙二醇試劑，充分混合，于沸水浴中加熱3min，應(yīng)避免試管與加熱器壁直接接觸。然后立即將試管置于冷水中冷卻。加入2.5mL羥胺試劑，并混勻，放置1m

35、in，然后全部倒進(jìn)盛有10mL酸性氯化鐵試劑的25mL容量瓶中，用蒸餾水定容，并充分搖勻，靜置5min，用分光光度計(jì)以500nm波長測定光密度。同樣操作做空白試驗(yàn)1份。 計(jì)算式中 C樣液光密度值相應(yīng)于標(biāo)準(zhǔn)曲線上揮發(fā)酸的含量，mg； V測定樣液體積，mL； 測定時(shí)液樣的稀釋倍數(shù)。2.5.2.3 注意事項(xiàng) 此方法是揮發(fā)性脂肪酸總量的經(jīng)驗(yàn)測定法，比蒸餾法測定更為簡便、快速。除150mg/L以下的低濃度范圍外，其測定值相對(duì)誤差與氣相色譜法測定總值的相對(duì)誤差相近。 此法中的反應(yīng)是在嚴(yán)格的pH值條件下進(jìn)行的，最適pH值為1.6±0.1。pH值高于2.0時(shí)，色度加劇，pH值低于1.0時(shí)，顏色難以穩(wěn)

36、定，易消失。 酸性己二醇試劑和羥胺試劑宜使用時(shí)配，也可在測定中配入。例如，以加入1.5mL己二醇和0.2mL稀硫酸來代替1.7mL酸性己二醇試劑，以0.5mL硫酸羥胺和2.0mL4.5mol/L的氫氧化鈉來代替2.5mL羥胺試劑。 如果所做的空白測定含量酸量超過200mg/L時(shí)必須用氫氧化鈉蒸餾提純己二醇 。 酸性氯化鐵配制好后，應(yīng)靜置過夜，棄去沉淀。 必須嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，顯色反應(yīng)必須充分搖動(dòng)。 比色法沒揮發(fā)性脂肪酸總量，方便快速，對(duì)于特定樣品（特別是污水污泥體系）的準(zhǔn)確度較高，適合于沼氣發(fā)酵的常規(guī)分析。 （三）揮發(fā)性脂肪酸（VFA）的測定-碳酸氫鹽堿度和VFA分析的聯(lián)合滴定法 &

37、#160; 揮發(fā)性脂肪酸（VFA）是厭氧消化過程的重要中間產(chǎn)物，甲烷菌主要利用VFA形成甲烷，只有少部分甲烷由CO2和H2生成。但CO2和H2的生成也經(jīng)過高分子有機(jī)物形成VFA的中間過程。由此看來，形成甲烷的過程離不開VFA的形成，但是VFA在厭氧反應(yīng)器中的積累能反映出甲烷菌的不活躍狀態(tài)或反應(yīng)器操作條件的惡化，較高的VFA（例如乙酸）濃度對(duì)甲烷菌有抑制作用。因此在反應(yīng)器運(yùn)行中，出水VFA用作重要的控制指標(biāo)。在VFA測定中，常進(jìn)行VFA總量測定，其單位以mmol/L或換算為按乙酸計(jì)，以單位mg/L表示。對(duì)VFA中各種低級(jí)脂肪酸（乙酸、丙酸）的分別定量分析也是重要的，有時(shí)常需要知道以COD表示的V

38、FA的量（即VFA以單位mgCOD/L）表示，此時(shí)也需要知道VFA中各種有機(jī)酸的含量，因此它們換算為COD的換算系數(shù)是不同的。VFA包括甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸以及它們的異構(gòu)體。在運(yùn)轉(zhuǎn)良好的高速厭氧反應(yīng)器中，VFA中乙酸可占有很高的比例，但當(dāng)反應(yīng)器運(yùn)行狀態(tài)不好時(shí)，丙、丁酸濃度會(huì)上升。 （1）分析原理厭氧處理中會(huì)產(chǎn)生大量的CO2，在反應(yīng)器條件下（pH68之間），這些CO2主要以HCO3-形成存在。這是厭氧處理中最重要的pH緩沖物，由HCO3-或主要由HCO3-引起的堿度稱為碳酸氫鹽堿度。HCO3-產(chǎn)生最大緩沖能力的范圍約在pH67。如前所述，HCO3-可以通過滴定測定，但測定

39、過程受到其它一些陰離子的干擾，其中發(fā)酵液中常含有的VFA的陰離子是影響碳酸氫鹽堿度的主要因素。為此，在荷蘭發(fā)展了碳酸氫鹽堿度和VFA同時(shí)進(jìn)行測量的方法。其原理如下：水樣先以0.1000mol/L的HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至PH=3，在這一pH值下，所有HCO3-被完全轉(zhuǎn)化為H2CO3，VFA也幾乎完全地轉(zhuǎn)化為其非離子形式。此后，已被滴定至pH3的水樣在如圖所示的帶回流冷凝器的燒瓶中煮沸，所有轉(zhuǎn)化為H2CO3的HCO3-將分解為CO2和H2O，其中CO2完全由其中溢出，而VFA則因?yàn)橛谢亓骼淠鞫Ａ粼谒畼又?。然后水樣?.1000 mol/L的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH6.5，在此pH下，所有的VF

40、A和其他弱酸將被轉(zhuǎn)化為其離子形式。由使用的HCl和NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的量，即可計(jì)算出碳酸鹽堿度和VFA的濃度。由此得到的結(jié)果更易于判斷水樣在厭氧條件下的緩沖能力。（2）儀器1250ml帶磨口燒瓶，250ml燒杯；210ml半微量酸式滴定管；310ml半微量堿式滴定管；4回流冷凝器；5自動(dòng)電位滴定計(jì)；（3）試劑1無二氧化碳水   用于制備標(biāo)準(zhǔn)溶液及稀釋用的蒸餾水或去離子水，臨用前煮沸15min，冷卻至室溫。PH值應(yīng)大于6.0，電導(dǎo)率小于2s/cm。   2酚酞指示液   稱取1g酚酞溶于100ml 95%乙醇中，用0.1mol氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)

41、溶液滴定至出現(xiàn)淡紅色為止。   3甲基橙指示劑   稱取0.1g甲基橙溶于100ml蒸餾水中。   4碳酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（1/2 Na2CO3=0.0250 mol/L）   稱取1.392g(于250烘干4h)的無水碳酸鈉(Na2CO3)，溶于少量無二氧化碳水中，移入1000ml容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻。貯于聚乙烯瓶中，保存時(shí)間不要超過一周。   5鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.0250 mol/L）   用分度吸管吸取2.1 ml濃鹽酸(=1.19g/ml)，并用蒸餾水稀釋至100

42、0ml,此溶液濃度0.0250 mol/L。其準(zhǔn)確濃度按下法標(biāo)定：   用無分度吸管吸取25.00 ml碳酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于250 ml錐形瓶中，加無二氧化碳水稀釋至約100ml，加入3滴甲基橙指示液，用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至由桔黃色剛變成桔紅色，記錄鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液用量。按下式計(jì)算其準(zhǔn)確度： C=0.0250×25.00/V   式中，   c-鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（mol/L）；   V-鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液用量（ml）。6氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.0250 mol/L）稱取60g氫氧化鈉，溶于50ml水中，冷卻后移入聚

43、乙烯細(xì)口瓶中，蓋緊瓶蓋靜置4d以上。然后吸取上層澄清溶液1.4ml，用水稀釋至1000ml，此溶液約為001mol/L。其精確濃度可用鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)定，標(biāo)定方法如下：   取基準(zhǔn)試劑級(jí)鄰苯二甲酸氫鉀在105-110烘干至恒重。精確稱取三份，每份約0.1g（稱準(zhǔn)至0.0001g），分別置于250ml錐形瓶中，加入100ml水，稍加熱使之溶解。然后加入4滴酚酞指示劑，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡紅色不褪為止。記錄下氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量（ml），并按下式計(jì)算其濃度：C= =G×103/(204.22×V)  式中，   C-氫氧

44、化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶濃度（mol/L）；   V-氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶用量（ml）；   G-鄰苯二甲酸氫鉀重量（g）；   204.22-苯二甲酸氫鉀(KH4C8H4O4)摩爾質(zhì)量(g/mol)。（4）操作步驟   按自動(dòng)電位計(jì)說明書安裝、校正好電位計(jì)，以蒸餾水清洗電極。   用移液管吸取過濾后的水樣Vml（其中含有VFA的量不超過3mmol），加入250ml燒杯中。   將樣品水溫調(diào)制（25±2），將盛有此樣品的250ml燒杯置于滴定臺(tái)上，投入長約1.5cm的磁力攪拌棒，打開攪

45、拌開關(guān)并調(diào)置一定攪拌強(qiáng)度，小心將電極放入燒杯的液面下。   如果此樣品水樣的pH高于6.5，則準(zhǔn)確調(diào)節(jié)至6.5。   然后在自動(dòng)電位滴定計(jì)上滴定此水樣至pH3.0，消耗的0.1000mol/LHCl記作Zml。   將此水樣轉(zhuǎn)移至磨口錐形瓶中，加入沸石或玻璃珠少許，安裝好回流冷 凝器。打開冷卻水，加熱至沸騰并維持3min以上，撤離酒精燈并等待2min，將溶液移回250ml燒杯。   以NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH=6.5，消耗的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液記作Bml。（5）結(jié)果計(jì)算揮發(fā)酸（VFA）（mol/l）=(Z×

46、Ca-B×Cb)×103/V式中，   Ca-標(biāo)準(zhǔn)HCl溶液的濃度（mol/L）；   Cb-標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液的濃度（mol/L）。（四）揮發(fā)性脂肪酸（VFA）的測定-Q/YZJ10-03-02-20001、范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于工業(yè)廢水厭氧消化過程中消化液中的揮發(fā)酸含量的測定。2、引用標(biāo)準(zhǔn)下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文，通過在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。本標(biāo)準(zhǔn)出版時(shí)，所示版本均有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會(huì)被修訂，使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)最新版本的可能性。GB/T 6682-1992分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（ISO3696-1978）GB1

47、2999-1992水質(zhì)采樣樣品保存規(guī)定。3、方法提要樣品中的乙酸、丙酸、丁酸等揮發(fā)性有機(jī)物在酸性條件下被蒸餾出來，餾出液經(jīng)回流以除去CO2、H2S、SO2等氣體，趁熱以酚酞為指示劑用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液滴定，結(jié)果以乙酸計(jì)算。4、試劑和材料除另有說明，本標(biāo)準(zhǔn)使用的試劑和水，均指分析純?cè)噭┖虶B/T6682規(guī)定的三級(jí)水。4.1 25%硫酸溶液取250毫升分析純濃硫酸加入約700毫升蒸餾水中，然后加水至1升。4.2 酚酞指示劑稱取0.5克酚酞，溶于50ml 95%乙醇中，用水稀釋至100ml。4.3 0.1N氫氧化鈉溶液配制及標(biāo)定稱取60克氫氧化鈉溶于50ml水中，轉(zhuǎn)入150ml的聚乙烯瓶

48、中，冷卻后，用裝有堿石灰管的橡皮塞塞緊，靜置24小時(shí)以上。吸取上層清液約7.5ml置于1000ml容量瓶中，用無二氧化碳水稀釋至標(biāo)線，搖勻。稱取在105-110度干燥過的基準(zhǔn)試劑級(jí)苯二甲酸氫鉀約0.5克（稱至0.0001g），置于250ml錐形瓶中，加無二氧化碳水100ml使之溶解，加入4滴酚酞指示劑，用待標(biāo)定的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淺紅色為終點(diǎn)。同時(shí)用無二氧化碳水做空白滴定，按下式計(jì)算。氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（mol/L）=M×1000/(V1-V0) ×204.23式中：m稱取苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量（g）；V0滴定空白時(shí)所耗氧氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（ml）；V1滴定苯二甲酸氫鉀時(shí)

49、所耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（ml）；204.23苯二甲酸氫鉀的摩爾質(zhì)量（g/mol）。5、儀器和設(shè)備5.1 500毫升蒸餾裝置；5.2 500亳升磨口三角瓶；5.3 球形冷凝管；5.4 25毫升堿式滴定管。6、取樣按國家環(huán)保局頒布的環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范（地表水和“廢水”）部分規(guī)定采取有代表性的樣品采集后應(yīng)盡快測定或加少量氫氧化鈉固定，置于4下保存。7、分析步驟7.1 蒸餾。取300毫升/V5（或適量水樣加蒸餾水稀釋至300毫升）水樣于500毫升的平底蒸餾瓶中，然后加入25毫升25%的硫酸溶液，再加入數(shù)粒玻璃珠，進(jìn)行蒸餾，接取200毫升蒸餾液。7.2 滴定。在另一電爐上加熱煮沸回流30分鐘，取下三角

50、燒瓶，加3滴酚酞指示劑，趁熱用0.1N的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至微紅色30秒不褪色為終點(diǎn)。7.3同時(shí)按上述步驟用蒸餾水代替水樣作空白。8、分析結(jié)果計(jì)算揮發(fā)酸（VFA）（mg/l）= (V3-V4)×N×60×103/V5式中：V3滴定樣品時(shí)所消耗的NaOH毫升數(shù)；V4滴定空白時(shí)所耗的NaOH毫升數(shù)；V5取樣量（ml）；NNaOH溶液的濃度（mol/L）；60乙酸的分子量。9、注意事項(xiàng)9.1 在蒸餾過程中不能使水樣直接沖入蒸出液中，若蒸出則需重新取樣蒸餾。9.2 當(dāng)丁、戊酸含量高時(shí)，代表性不強(qiáng)，最好用氣相色譜法。VAF不能代表乙、丙、丁、戊的各種含量。10、報(bào)告10.

51、1 當(dāng)兩次重復(fù)測定結(jié)果之差不大于算術(shù)平均值的10%時(shí)，取算術(shù)平均值報(bào)告、分析結(jié)果報(bào)告至0.1mg/L。10.2 報(bào)告應(yīng)包括以下內(nèi)容：a)有關(guān)樣品的全部資料，例如樣品的名稱、采樣地點(diǎn)、采樣日期、采樣時(shí)間等；b)本標(biāo)準(zhǔn)的代號(hào)；c)分析結(jié)果；d)測定中觀察到的任何異?，F(xiàn)象的細(xì)節(jié)及說明；e)分析人員的姓名及分析日期等。（五）VFA的滴定法分析（1）原理   本法原理是將廢水以磷酸酸化后，從中蒸發(fā)出揮發(fā)性脂肪酸，再以酚酞為指示劑用NaOH溶液滴定餾出液。廢水中的氨態(tài)氮可能對(duì)測定形成干擾，因此應(yīng)當(dāng)首先在堿性條件下蒸發(fā)出氨態(tài)氮，如果要同時(shí)測定氨態(tài)氮，以硼酸溶液吸收后滴定之。因此此法可用于

52、氨態(tài)氮和VFA的聯(lián)合測定。（2）藥品10%NaOH溶液NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液，0.1000mol/l10%磷酸溶液，取70ml密度1.7mg/cm3的磷酸用水稀釋至1L。酚酞指示劑，1%的乙酸溶液。（3）測定步驟于蒸餾瓶中放入50200ml待測廢水，其VFA含量不超過30mmol。如水樣體積不足100ml，可以蒸餾水稀釋至100ml。放入幾滴酚酞指示劑。加入10%NaOH溶液，使溶解呈堿性，并使NaOH略過量。開始蒸餾 ，至蒸餾瓶中剩余的液體為5060ml為止。用蒸餾水將蒸餾瓶剩余液體稀釋至原來的體積，用10ml10%的磷酸酸化，在接受瓶中放入10ml蒸餾水并使接受瓶與蒸餾瓶上的冷凝管連接，導(dǎo)入管應(yīng)

53、浸入接受瓶的液面以下。蒸餾至瓶中液體為1520ml為止。待蒸餾瓶冷卻后，加入50ml蒸餾水再次蒸餾，至剩余1020ml液體為止。為了除去二氧化碳、硫化氫、二氧化硫等干擾物，可向餾出液中通入高純氮?dú)?015min，然后加入10滴酚酞，用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡粉色不消失為止。（4） 計(jì)算揮發(fā)性脂肪酸含量計(jì)算如下：VFA=V (NaOH)*C*1000/Vs (mmol/L)式中：V(NaOH)-滴定消耗的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml; c - 滴定消耗的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的準(zhǔn)確濃度，mol/L;揮發(fā)性脂肪酸(VFA)的測定揮發(fā)性脂肪酸是厭氧硝化過程的中間產(chǎn)物，甲烷菌主要利用VFA形成甲烷，只有少部

54、分甲烷由CO2和H2生成。VFA在厭氧反應(yīng)器中的積累能反映出甲烷菌的不活躍狀態(tài)或反應(yīng)器操作條件的惡化，較高的VFA濃度對(duì)甲烷菌有抑制作用。VFA包括甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸及它們的異構(gòu)體，在運(yùn)轉(zhuǎn)良好的反應(yīng)器中，乙酸比例較高，反應(yīng)器不好時(shí)，甲酸、丙酸濃度升高。在VFA測定中，其單位常換算為按乙酸計(jì)，以mg/L表示。常用的測定方法有：滴定法和氣相色譜分析法一、滴定法測VFA：1、原理將廢水酸化后，從中蒸餾出揮發(fā)性脂肪酸，再以酚酞為指示劑用氫氧化鈉滴定餾出液。廢水中的氨態(tài)氮先在堿性條件下蒸餾出。2、儀器：50ml堿式滴定管、錐形瓶、帶磨口的具支蒸餾燒瓶（500ml）、與燒瓶配套的蛇形冷凝管、橡膠導(dǎo)管、電爐試劑：(1)10%氫氧化鈉：10g氫氧化鈉溶于水,稀至100ml。(2)10%磷酸溶液：取70ml濃磷酸稀釋至1L。(3)酚酞指示劑：稱取0.5g酚酞溶于50ml 95%的乙醇中,用水稀釋至100ml。(4)氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1000mol/L)：稱取60g氫氧化鈉溶于50ml水中，轉(zhuǎn)