基因擴增(PCR)實驗室

1、基因擴增（PCR）實驗室 遼陽鑫宇實驗室設(shè)備安裝工程有限公司技術(shù)部前 言基因擴增檢驗實驗室一文，是根據(jù)國家有關(guān)法律、法規(guī)和技術(shù)規(guī)范，進行選編、擇錄和收集有關(guān)資料、文章而編寫的。選編和擇錄有關(guān)技術(shù)規(guī)范等，如有錯誤是編著人理解有誤，編者表示歉意。本文的平面圖由黃海江、效果圖趙玉、錄入周悅同志完成。柏松楓、何興福、張璐、張偉卓、趙馨、趙儼、熊潔萌等編寫。陳洪柱參與校對。總經(jīng)理郎憲明（高級工程師）編導(dǎo)。本文為內(nèi)部參閱資料，僅供參考。 2015年2月基因擴增（PCR）實驗室 基因擴增檢驗方法（簡稱PCR）靈敏度高、特異性強、精確快捷、適用范圍廣等特點。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)科學(xué)研究、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品、臨床檢測、疾病與

2、動物疫病預(yù)防和控制、公安偵查等相關(guān)專業(yè)和學(xué)科廣為應(yīng)用。但是，PCR檢驗實驗室應(yīng)用時需保證實驗安全、設(shè)置合理的實驗室、規(guī)范的操作程序和嚴格的管理制度。 近幾年，對PCR實驗室建設(shè)越來越得到重視，因為對檢測結(jié)果的可靠性、準確性和安全性起到至關(guān)重要作用，PCR實驗室設(shè)計核心問題是如何避免污染。實驗室的平面布局、空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)運行、氣流控制等都是圍繞防止污染這個核心進行設(shè)計和建設(shè)。 1. PCR實驗室組合形式 PCR實驗室可以是分散形式，也可以是組合形式，現(xiàn)在主要是以組合形式為主。1.1 分散形式PCR實驗室各功能區(qū)間分散，又有一定的間距，不會造成區(qū)間干擾，因此沒有特定要求。由于工作流程的不便利，在新組

3、建的PCR實驗室時往往不被采用。1.2 組合形式PCR實驗室在較大空間實驗用房相鄰布置依次劃分各功能區(qū)域，形成一個組合形式完成基因擴增分析的PCR實驗室，各區(qū)間在物理空間上完全相互獨立，各區(qū)間無論是在空間還是在使用中，始終處于完全的分隔狀態(tài)。但是，各實驗區(qū)間集中布置，容易造成相互干擾，因此對總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定要求。對實驗室的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)、氣流流向、大氣壓力、人物流程等方面，在實驗室設(shè)計和裝修上需進行合理考慮。 2. PCR實驗室的區(qū)域設(shè)計 2.1 PCR實驗室分區(qū) PCR實驗室可分兩個工作區(qū)域：核酸擴增前區(qū)和核酸擴增后區(qū)。核酸擴增前區(qū)包括試劑準備區(qū)和樣品處理區(qū)，設(shè)在不同房間或區(qū)域；核

4、酸擴增后區(qū)包括擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)，設(shè)在不同房間或區(qū)域。2.1.1 PCR實驗室根據(jù)使用儀器的功能合理設(shè)置各個區(qū)域，如采用聚合酶聯(lián)反應(yīng)：則設(shè)置試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域。樣品需要粉碎處理的，還需增設(shè)樣品粉碎區(qū)；若使用實時熒光PCR法：基因擴增區(qū)、基因產(chǎn)物分析區(qū)可以合并；采用標本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的全自動化PCR分析儀，則標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并為一個區(qū)域，因此PCR實驗室原則上設(shè)置五個區(qū)或四個區(qū)或三個區(qū)或二個單獨的工作區(qū)。2.1.2 核酸擴增前區(qū)和核酸擴增后區(qū)可設(shè)在一個房間內(nèi)，但必須在滿足下列要求的前提下：2.1.2.1 核

5、酸擴增前區(qū)實驗室內(nèi)設(shè)置兩個不同位置的實驗區(qū)，試劑配置在超凈工作臺中操作，樣品處理在生物安全柜內(nèi)操作。2.1.2.2 在核酸擴增后區(qū)使用全封閉的擴增和檢測系統(tǒng)時，如實時熒光PCR儀等。2.1.2.3 每個實驗人員使用各自的試劑、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。2.1.2.4 在實驗前后對操作區(qū)域和共享器具進行清潔及消毒。2.1.2.5 各區(qū)域的試劑、器具、儀器和設(shè)備為該區(qū)專用，不得交叉使用。2.2 PCR實驗室各區(qū)域功能：2.2.1 試劑儲存和準備區(qū)：擴增試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應(yīng)混合液的制備以及離心管、吸頭等消耗品的儲存和準備。2.2.2 標本制備區(qū)：樣品登記、處理和分裝；核酸（RNA/

6、DNA）提取、保存和使用；PCR擴增的第一輪加樣。對于涉及樣本的操作應(yīng)符合生物安全二級實驗室防護標準或更高。2.2.3 基因擴增區(qū)：cDNA合成和DNA擴增。如果在此區(qū)進行套式PCR的第二輪加樣，應(yīng)在PCR防護罩內(nèi)進行。 2.2.4 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增產(chǎn)物的電泳、雜交、成像、序列測定、變性高效液相分析、結(jié)果分析、登記及報告。 2.3 工作區(qū)域設(shè)備和儀器的配置。2.3.1 試劑儲存和準備區(qū)2-8和-20以下的冰箱、普通離心機、超凈工作臺、混勻器、微量加樣器（覆蓋0.2-1000L），消耗品（一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣吸頭）、專用工作服工作鞋（套）、專用辦公用品和廢棄物容器、可移動紫外

7、線燈。2.3.2 標本制備區(qū)2-8冰箱、-20（或-80）冰箱，生物安全柜、高速制冷離心機（臺式）、混勻器、恒溫水浴箱或加熱模塊、制冰器或制冷模塊、微量加樣器、消耗品（一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣吸頭）、專用工作服工作鞋（套）、上下水設(shè)備、專用辦公用品和廢棄物容器、紫外線殺菌燈。如需處理大分子的DNA 應(yīng)具有超聲波水浴儀。2.3.3 擴增區(qū) 核酸擴增儀、微量加樣器、消耗品（一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣吸頭）、專用工作服工作鞋（套）、專用辦公用品和廢棄物容器、紫外線殺菌燈。2.3.4 擴增產(chǎn)物分析區(qū)視檢驗方法不同而定，基本配置如下：電泳儀、電泳槽、攝影/像設(shè)備、變性高效液相分析儀

8、、測序儀、紫外透射儀、普通冰箱、離心機、恒溫水浴、微波爐、上下水設(shè)備、紫外線燈、微量加樣器、消耗品（一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣吸頭）、專用工作服工作鞋（套）、專用辦公用品和廢棄物容器。各區(qū)域設(shè)備和儀器的配備，應(yīng)根據(jù)使用的擴增檢測技術(shù)或試劑特點，對設(shè)備和儀器進行必要的增減。2.4 PCR實驗室單向流流向制度2.4.1 實驗室的空氣單向流流向應(yīng)該為：試劑儲存和準備區(qū)樣品制備區(qū)擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動。擴增前區(qū)保持微（弱）正壓狀態(tài)，擴增后區(qū)保持微（弱）負壓狀態(tài)。 2.4.2 實驗用品單向流工作流向應(yīng)該為：試劑儲存和準備區(qū)樣品制備區(qū)擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向進行。實驗用品包括實

9、驗材料（試劑、樣品和擴增產(chǎn)物）、實驗器材（容器、板架、實驗服裝、帽子、口罩、手套、鞋套）、辦公用品（記錄紙、筆）、以及清潔工具等。物品的傳送是通過互鎖式傳遞窗傳遞。 2.4.3 實驗人員單向工作流流向應(yīng)該為：進入各工作區(qū)域嚴格按照試劑儲存和準備區(qū)樣品制備區(qū)擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)單一方向進行，不得逆向走動。原則上實驗人員應(yīng)在擴增后區(qū)工作后當(dāng)天不得再返回擴增前區(qū)工作。在標本制備區(qū)由于加樣的操作中可能會發(fā)生氣溶膠污染，所以應(yīng)避免或減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。2.4.4 實驗室的單向清潔流流向應(yīng)當(dāng)為：試劑儲存和準備區(qū)樣品制備區(qū)擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應(yīng)當(dāng)有各自的清潔用具，以防止交叉污

10、染。 2.5 PCR實驗室工作基本原則和實驗室各區(qū)域工作注意事項2.5.1 嚴格的實驗室分區(qū)制度；各區(qū)域必須有明確的標記，只用于特定的操作，不得從事其他工作；不同區(qū)域的設(shè)備物品（儀器、設(shè)備、材料、清潔工具），不得交叉使用。2.5.2 不同工作區(qū)域使用不同工作服（例如不同顏色），工作人員離開工作區(qū)域時，不得將工作服帶出。2.5.3 實驗前移入所需試劑、耗材、樣品以及盛放污染物的容器。 2.5.4 試劑儲存和準備區(qū)：儲存試劑和用于標本制備的消耗品等材料須直接運送至本區(qū)，不能經(jīng)過擴增檢測區(qū)。試劑盒中的陽性對照品及質(zhì)控品不能保存在本區(qū)，應(yīng)當(dāng)保存在標本制備區(qū)。2.5.5 標本制備區(qū)：由于在樣品混合、核酸

11、純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致污染，可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)正壓條件，避免從鄰近區(qū)域進入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免標本間的交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對具有潛在傳染危險性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)操做，并有明確的標本處理和滅活程序。 2.5.6 擴增區(qū)：為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)當(dāng)盡量避免或減少本區(qū)內(nèi)的人員不必要的走動。必須注意所有經(jīng)過檢測的反應(yīng)管不得在本區(qū)內(nèi)打開。2.5.7 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：核酸擴增后產(chǎn)物的分析方法較多，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法（放射性核素標記或非放射性核素標記）直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜

12、分析等。本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此，必須注意避免通過本區(qū)物品及工作服將擴增物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴增產(chǎn)物時，必須使用洗板機洗板，廢液必須收集在1moL /L HCL中，不能在實驗室內(nèi)傾倒，應(yīng)當(dāng)遠離PCR實驗室的地方棄掉。用過的吸頭也必須放在1moL/L HCL中侵泡后再放到廢棄物容器或垃圾袋中按程序處理。2.5.8 工作結(jié)束過后，須對工作區(qū)進行清潔處理：對工作區(qū)域的實驗臺面進行清潔消毒（如使用次氯酸鈉），實驗臺面采用紫外線照射更為方便、效果更佳。由于紫外線照射的距離和能量對于去污的效果非常關(guān)鍵，可使用移動紫外線燈（254nm波長），在工作完成后調(diào)至實驗臺面上60-9

13、0cm范圍內(nèi)照射。由于擴增產(chǎn)物僅幾百和幾十堿基對(bp),對紫外線損傷不敏感，因此紫外線照射擴增片段必須延長照射時間，最好是照射過夜。由于本區(qū)有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，故應(yīng)當(dāng)注意實驗人員的安全防護。3. PCR實驗室建設(shè)與裝修3.1根據(jù)使用采用儀器的不同確定五個或四個或三個或二個區(qū)域，各區(qū)域必須設(shè)置緩沖間，緩沖間宜設(shè)正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)，以減少室內(nèi)外空氣交換。也可設(shè)專用走廊，但緩沖間比專用走廊更為重要。 3.2 PCR實驗室空氣流向，可按照試劑儲備和準備區(qū)標本制備區(qū)擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)方向進行空氣壓力遞減方式控制

14、氣流流向，防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流逆向進入擴增前的區(qū)域。也可通過負壓排風(fēng)裝置、排風(fēng)扇或其它可行的方式進行。3.3壓差與凈化級別3.3.1 試劑貯存和準備區(qū)、樣品處理區(qū)應(yīng)設(shè)微正壓，以防止外界核酸氣溶膠的進入，造成污染，可以通過空氣進風(fēng)風(fēng)量的大于排風(fēng)量達到正壓效果。3.3.2 核酸擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)設(shè)微負壓，防止含核酸的氣溶膠擴散出去而污染試劑與樣品，造成假陽性結(jié)果，可以通過控制排風(fēng)風(fēng)量大于進風(fēng)風(fēng)量達到負壓效果。3.3.3 PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求，若需要一般采用凈化級別8或9級（即萬級或十萬級）。3.4 PCR實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制為避免各個實驗區(qū)域間交叉感染的可能性，宜采用全送全

15、排的氣流組織形式。同時要嚴格控制送排風(fēng)的比例，以保證各實驗區(qū)的壓力要求。3.4.1 試劑儲存和準備區(qū)：因為該區(qū)主要進行的操作為儲存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備，對于氣流壓力的控制，本區(qū)沒有嚴格要求，但宜采用微正壓。3.4.2 標本制備區(qū)：該區(qū)域主要進行的操作為標本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、儲存即加入至擴增反應(yīng)管和測定RNA和DNA的合成體。本區(qū)的壓力梯度要求與相對相鄰近區(qū)域為正壓，是為避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)氣溶膠污染。3.4.3 擴增區(qū)：擴增反應(yīng)混合物配制和擴增反應(yīng)，該區(qū)域主要進行的操作為DNA和CDNA擴增。此外，已制備的DNA模板和合成的CDNA（來自標本制備區(qū)）的加

16、入和主反應(yīng)混合液（來自試劑儲存和制備區(qū)）制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。在巢式PCR測試中，通常在第一輪擴增后必須打開反應(yīng)管，因為巢式擴增有較高的危險性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進行。因此，本區(qū)壓力梯度要求為相對鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)瀉出。3.4.4 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定（根據(jù)所使用的分析儀器的不同此區(qū)域與擴增區(qū)可以合并為一個區(qū)），本區(qū)是主要擴增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)域的壓力梯度要求相對于鄰近區(qū)域應(yīng)為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)域擴散至其他區(qū)域。4. PCR實驗室污染的預(yù)防與控制PCR實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免實驗室污染。常見的污染有以下幾種：

17、天然基因組DNA的污染、試劑的污染以及標本間（樣品）的污染。由于一旦發(fā)生污染，實驗就必須停止，直至查到污染源為止，而且實驗結(jié)果必須作廢，需重新進行實驗，不僅浪費人力、物力，而且也延長了實驗結(jié)果的報告時間。實驗室一旦發(fā)生污染，尋查污染源是一件很繁瑣的事情，因此要避免污染，首先是預(yù)防污染的發(fā)生，而不是發(fā)生了再研究如何排除。避免污染的發(fā)生，應(yīng)注意：4.1工作區(qū)域的嚴格劃分4.1.1 各個區(qū)域的合理設(shè)置4.1.2 各個試驗區(qū)域須有明顯的標記（如醒目的門牌或不同的地面顏色），以避免各個不同的實驗區(qū)域設(shè)備、物品、試劑等發(fā)生混淆。4.2 合理的系統(tǒng)設(shè)置4.2.1 合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，應(yīng)盡量采用全送全排的

18、空調(diào)系統(tǒng)（擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)更為重要）。4.2.2 嚴格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區(qū)域內(nèi)不同的壓力梯度。 4.2.3 嚴格保證合理的氣流流程工藝，保證核酸擴增后區(qū)的氣流不逆向流入核酸擴增前區(qū)。4.3 嚴格的實驗室配套設(shè)施完備的實驗室配套實施是保證實驗工作的必備條件，應(yīng)根據(jù)各個區(qū)域功能配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器，如生物安全柜、超凈工作臺、離心機等。避免PCR實驗室的污染除了實驗室在設(shè)計上應(yīng)注意工作區(qū)域的嚴格劃分、合理的系統(tǒng)設(shè)置、完備的配套設(shè)施外，規(guī)范的操作和嚴格的管理也同樣重要。5. 裝飾材料5.1 吊頂與隔墻：采用彩鋼夾心板等材料要符合國家關(guān)于實驗室的消防規(guī)范。應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好；所有陰角應(yīng)采

19、用弧形線條過渡，墻體內(nèi)壁光潔不吸附、易清潔消毒、耐腐蝕。功能相近的實驗室隔墻設(shè)置比例適宜的透視窗，透視窗以雙面玻璃為好，這樣能保持與墻體齊平，隔墻距走廊隔墻不低于1.5米為宜，吊頂棚高以2.42.6m為宜。5.2 地面：實驗室建議采用PVC卷材或環(huán)氧樹脂整體地面，地面與墻交界處應(yīng)圓弧過渡上墻120mm-150mm（需用水沖刷房間），使用進口橡膠卷材（片）更佳。地面材料與其他圍護結(jié)構(gòu)交界處應(yīng)安全平齊過渡，無縫隙和裂紋，地面鋪設(shè)前采用自流平處理，地面平整性好、易清潔、耐腐蝕。5.3 門：彩鋼板門框為冷軋槽鋼，外加鋁型材，配專用密封條，優(yōu)質(zhì)閉門器，設(shè)可視窗，門單向鎖定。緩沖間的門與主實驗室的門有互鎖

20、功能。5.4傳遞窗：各實驗室區(qū)間設(shè)不銹鋼互鎖功能傳遞窗并具有消毒功能，試劑和標本通過傳遞窗傳遞，保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。5.5 給排水系統(tǒng)：給排水管宜設(shè)在緩沖區(qū)。給水管路最好采用薄壁不銹鋼鋼管，管上安裝逆止閥。緩沖區(qū)設(shè)洗手盆，手動水龍頭；標本制備區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)設(shè)洗手盆，水龍頭（感應(yīng)、腳踏、手動）和洗眼器。如果設(shè)置地漏，地漏采用不銹鋼密閉地漏。5.6照明：燈具要選用凈化燈具，便于清洗不積塵。 6 安全與自動系統(tǒng) 6.1 疏散出口（專用走廊）設(shè)置專用疏散指示燈（標識）及應(yīng)急照明。 6.2 送排風(fēng)系統(tǒng)采用變頻控制，并聯(lián)動互鎖，即工作時先啟動排風(fēng)機后啟動送風(fēng)機。停機時相反，

21、并設(shè)事故自動報警裝置。6.3自動系統(tǒng)發(fā)生故障時由手動控制裝置控制，自動控制系統(tǒng)設(shè)備及主件采用進口產(chǎn)品為宜。6.4 網(wǎng)絡(luò)與通信：各區(qū)域?qū)嶒炇?、緩沖室設(shè)網(wǎng)絡(luò)終端，在專用走廊設(shè)電話分機。6.5 強電系統(tǒng)：實驗室用電負荷為一級負荷，采用雙路電源供電，設(shè)自動切換裝置，配電箱單獨設(shè)置。根據(jù)實驗室各區(qū)域功能合理配置三相和單相電源，穿管暗線埋設(shè)，大型儀器接地線布局到位。實驗室照度滿足規(guī)范要求（最低照度為200lx），裝有紫外線燈，照射無死角。7. PCR實驗室建設(shè)與裝修注意事項7.1在設(shè)計的過程中應(yīng)注意事項：規(guī)范的安裝流程和全面的服務(wù)流程；嚴格按照規(guī)范科學(xué)設(shè)計的安裝流程。安裝前需要確定以下安裝條件，如：電源電

22、壓、電源進線位置、電話網(wǎng)絡(luò)線位置、進水水壓、最小安裝空間、地面平整度、通風(fēng)孔、給水管和下水管的位置等，理想狀態(tài)的尺寸。 7.2 PCR實驗室可以按二級生物安全實驗室建設(shè)標準執(zhí)行，國家標準是底線不能違背，行業(yè)標準高于國家標準，應(yīng)按行業(yè)標準執(zhí)行。7.3 實驗室各區(qū)域功能不同，為滿足設(shè)備、儀器、用品等的擺放需求，各區(qū)域須有充分的空間。建筑面積（m2）分配，以聚合酶聯(lián)反應(yīng)法為例：試劑儲存和準備區(qū)2535、樣品處理區(qū)2030、核酸擴增區(qū)2030、擴增產(chǎn)物分析區(qū)2030為宜。各區(qū)域的緩沖間也須留有足夠的使用面積，以便于洗手盆、更衣柜、衛(wèi)生用具等的擺放、存儲和出入門的設(shè)置與開啟。如果平面布局允許宜設(shè)專用走廊

23、，專用走廊寬度不得低于1.2m，設(shè)置進出口。7.4 實驗室樣品處理區(qū)的面積應(yīng)大于其他區(qū)域，以便于生物安全柜的擺放，如采用實時熒光法，擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)合并一個區(qū)域，房間尺寸可適當(dāng)縮小，因全封閉熒光分析儀尺寸不大。7.5 緩沖間、試劑儲存和準備區(qū)、樣品處理區(qū)設(shè)置正壓間；擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)設(shè)置負壓間。7.6 PCR實驗室各區(qū)域間沒有潔凈度的要求，但是為了保護和延長生物安全柜的使用壽命和實驗環(huán)境，經(jīng)濟條件允許情況下，各區(qū)域均可采用空調(diào)通風(fēng)凈化系統(tǒng)，潔凈度宜為89級。7.7 PCR實驗室擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)的氣流不能逆流向擴增前的區(qū)域，以免污染造成假陽性結(jié)果。擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)排風(fēng)不得排

24、向技術(shù)夾層，應(yīng)排向室外。7.8 凡是有壓差要求的房間，在顯著位置須設(shè)有壓差顯示裝置，并預(yù)留測試孔，測試孔要密封。7.9 洗手盆不宜過大，試驗臺面兩端棱角須圓弧處理，實驗臺底層離地面距離在150mm以上或考慮加裝移動輪便于移動。7.10 基因擴增實驗室應(yīng)選用B2級生物安全柜，不宜選用A1/2級生物安全柜，因A1/2級生物安全柜循環(huán)風(fēng)易造成標本交叉污染。7.11 實驗室微正壓是指相對于大氣壓的最小壓差不得低于10Pa，因在多風(fēng)季節(jié)大氣的最小正壓差往往能達到5Pa或5Pa以上。7.12 技術(shù)夾層寬度應(yīng)不低于600mm，800mm為宜。7.13 各房間進出的門，依據(jù)室內(nèi)壓差，設(shè)置門的開啟方向。8. 基

25、因擴增實驗室（PCR）參考文件即文件擇錄9. 平面布局見圖1/210. 工程案例8. 基因擴增實驗室（PCR實驗室）設(shè)計參考文件 文件1、關(guān)于批準發(fā)布疾病預(yù)防控制中心建設(shè)標準建標1272009 號。 文件擇錄第13頁：附表一 疾病預(yù)防控制中心特殊用途實驗室用房建筑面積指標。項目名稱建筑面積（）備注項目功能室內(nèi)環(huán)境要求其他PCR實驗室試劑配備室2535聚合酶鏈反應(yīng)實驗宜為正壓1、 適用于有一定生物安全隱患的實驗；2、 實驗流向、氣流、人流、物流均為單向流。樣品處理室2030宜為BSL-2或以上等級實驗室核酸擴增室2030壓強不高于樣品處理室，局部5級凈化產(chǎn)物分析室2030壓強低于核酸擴增室文件擇

26、錄第37頁：如組合形式PCR實驗室（基因擴增實驗室），根據(jù)特定專業(yè)要求，應(yīng)設(shè)五個（或四個/三個）相互隔離的工作區(qū)域，即試劑貯存和準備區(qū)、樣品粉碎區(qū)（根據(jù)需要設(shè)置）、樣品制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)以及產(chǎn)物分析區(qū)；當(dāng)采用熒光PCR時，擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)可合并為一個區(qū)域。為了減少不同工作區(qū)之間的空氣交換量，各個工作區(qū)的出入口應(yīng)設(shè)置緩沖間，并且建筑條件許可時，可設(shè)置專用走廊，形成定向的人流、物流與實驗流程。同時對室內(nèi)環(huán)境也有特定要求，需設(shè)置通風(fēng)系統(tǒng)，形成定向的氣流保護區(qū)，避免各個實驗區(qū)之間的相互干擾。文件2、醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)【2010】194號：附件醫(yī)療機構(gòu)臨床

27、基因擴增檢驗實驗室工作導(dǎo)則。文件擇錄：一、臨床基因擴增實驗室的設(shè)計臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設(shè)計原則。原則上臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。這4個區(qū)域在物理空間上還是在使用中，應(yīng)當(dāng)始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣直接相通。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。例如使用實時熒光PCR儀，擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并；采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向。臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向可按照試劑儲存和準備區(qū)標本制備區(qū)擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)進行，

28、防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域?？砂凑赵噭﹥Υ婧蜏蕚鋮^(qū)標本制備區(qū)擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進行?？赏ㄟ^安裝排風(fēng)扇、負壓排風(fēng)裝置或其他可行方式實現(xiàn)。 二、臨床基因擴增檢驗實驗室工作基本原則。（一）進入各個工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴格按照單一方向進行，即試劑儲存和準備區(qū)標本制備區(qū)擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)。（四）實驗室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑儲存和準備區(qū)標本制備區(qū)擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)方向進行。不同的實驗區(qū)應(yīng)當(dāng)有各自的清潔用具以防止交叉污染。三、臨床基因擴增檢驗實驗室各區(qū)域工作注意事項 （二）標本制備區(qū)。由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件，避免從鄰近區(qū)

29、進入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對具有潛在傳染危險性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。 文件3、全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版） 第22頁 4.HIV核酸檢測實驗室要求 4.1實驗室分區(qū)和功能 實驗室應(yīng)設(shè)置兩個獨立的工作區(qū)域：核酸擴增前區(qū)和核酸擴增后區(qū)。核酸擴增前區(qū)包括試劑準備區(qū)和樣品處理區(qū)，設(shè)在不同房間或區(qū)域；核酸擴增后區(qū)包括擴增區(qū)和擴增產(chǎn)區(qū)分析區(qū)，設(shè)在不同房間或區(qū)域。4.1.4在滿足下列要求的前提下，核酸擴增前區(qū)或核酸擴增后區(qū)可設(shè)在一個房間內(nèi)。 4.1.4.1核酸擴增前區(qū)實驗室內(nèi)設(shè)置兩個不同的位置的實驗區(qū)，試劑配制在超凈工作臺中操作，樣品處理在生物安全柜內(nèi)進行。4.1.4.2在核酸擴增后區(qū)使用全封閉的擴增和檢測系統(tǒng)時，如實時熒光PCR儀等。 4.5.4單向工作流制度4.5.4.1實驗室的氣流應(yīng)從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū)，不得逆向流動。建議擴增前區(qū)弱正壓狀態(tài)，擴增后區(qū)保持弱負壓狀態(tài)。4.5.4.2實驗室