NTproBNP生基礎(chǔ)和化驗(yàn)室指標(biāo)的應(yīng)用

1、1nt-probnp生物學(xué)基礎(chǔ)生物學(xué)基礎(chǔ)和化驗(yàn)室指標(biāo)的應(yīng)用和化驗(yàn)室指標(biāo)的應(yīng)用潘柏申教授潘柏申教授2內(nèi)容概要內(nèi)容概要 nt-nt-probnpprobnp生物學(xué)基礎(chǔ)生物學(xué)基礎(chǔ)v 利鈉肽家族利鈉肽家族v 腦鈉肽腦鈉肽bnp的生理功能的生理功能v 腦鈉肽腦鈉肽bnp的分泌和釋放的分泌和釋放v bnp和和nt-probnp的清除的清除 nt-probnp化驗(yàn)室指標(biāo)的應(yīng)用化驗(yàn)室指標(biāo)的應(yīng)用v 影響影響nt-nt-probnpprobnp的檢驗(yàn)前因素的檢驗(yàn)前因素v 影響影響nt-nt-probnpprobnp的檢驗(yàn)因素的檢驗(yàn)因素v 影響影響nt-nt-probnpprobnp的分析因素的分析因素3利鈉肽家族

2、（利鈉肽家族（6 6種心血管型肽種心血管型肽 ）anp（心房利鈉肽，28肽） anp存在于成人的心房，胚胎和新生兒的心室組織和肥大的心室。在慢性心力衰竭存在于成人的心房，胚胎和新生兒的心室組織和肥大的心室。在慢性心力衰竭等情況下，心房壓增加時(shí)，心房對(duì)其延展作出反應(yīng)而分泌等情況下，心房壓增加時(shí)，心房對(duì)其延展作出反應(yīng)而分泌anp。bnp （ b型利鈉肽，32肽） 主要存在于心臟中；心房、更主要的心室肌細(xì)胞是主要存在于心臟中；心房、更主要的心室肌細(xì)胞是bnp的主要來(lái)源。最近發(fā)現(xiàn)心臟的主要來(lái)源。最近發(fā)現(xiàn)心臟成纖維細(xì)胞等也可以產(chǎn)生成纖維細(xì)胞等也可以產(chǎn)生bnp。cnp （ c型利鈉肽，22或53肽） cn

3、p主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和血管組織合成。不同于主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和血管組織合成。不同于anp和和bnp，心臟組織中幾乎沒(méi)，心臟組織中幾乎沒(méi)有有cnp。 urodilatin（u型利鈉肽，32肽） 由腎臟以旁分泌的方式分泌，具有利鈉利尿作用。由腎臟以旁分泌的方式分泌，具有利鈉利尿作用。dnpvnp4利鈉肽家族（利鈉肽家族（3 3種種npnp受體受體 ） np受體a：作為鳥苷酰環(huán)化酶配對(duì)受體起生物學(xué)效應(yīng) np受體b ：作為鳥苷酰環(huán)化酶配對(duì)受體起生物學(xué)效應(yīng) np受體c ：作為短的細(xì)胞質(zhì)主受體起清除肽分子和可能的調(diào)節(jié)細(xì)胞增生作用 5利鈉肽家族在種群中的分布非常保守利鈉肽家族在種群中的分布非常保守 硬骨魚，

4、兩棲動(dòng)物，爬行動(dòng)物，鳥類 ：內(nèi)分泌和旁分泌都能在心和腦中被發(fā)現(xiàn) 哺乳動(dòng)物（人類，貓，牛，狗，家鼠，大鼠，羊和豬） ：內(nèi)分泌和旁分泌都能在心和腦中被發(fā)現(xiàn) 軟骨魚（軟骨魚綱） ：只發(fā)現(xiàn)了cnp 一些硬骨魚 ： anp，cnp，vnp 鯊魚和盲鰻：cnp 6npsnps功能的進(jìn)化功能的進(jìn)化調(diào)節(jié)滲透壓 容量調(diào)節(jié) 排鈉激素 水鈉排泄的減容激素 魚類哺乳動(dòng)物7人類人類bnpbnp的基因表達(dá)的基因表達(dá) bnp基因位于人類1號(hào)染色體，與anp基因（居于bnp上游約約8千個(gè)堿基）呈前后串聯(lián)關(guān)系 5端上游非翻譯區(qū)序列有3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子。 bnp基因的外顯子1編碼了5端非翻譯區(qū)和部分pre-probnp（26

5、個(gè)-氨基酸信號(hào)肽和最初的18個(gè)bnp前體氨基酸）。 外顯子2編碼了氨基酸45-129 外顯子3編碼了5末端氨基酸（130-134氨基酸）和3”側(cè)端富含attta非穩(wěn)定基序的非翻譯區(qū) 8利鈉肽的加工和分泌利鈉肽的加工和分泌（5a figure 1）j am coll cardiol 2007;49:119312029b b型利鈉肽（型利鈉肽（bnpbnp）基因的重要調(diào)節(jié)因子（）基因的重要調(diào)節(jié)因子（5a 5a table1table1） 刺激物刺激物潛在效應(yīng)器潛在效應(yīng)器cis元素元素腎上腺素能激動(dòng)劑腎上腺素能激動(dòng)劑camp, src, rac, gsk3, camk, pi3kgata (-85)

6、, mcat (-97 和和 -124)白介素白介素-1ras, rac, p38 mapk, pkcmcat (-97)內(nèi)皮素內(nèi)皮素-1rac, srcgata; -1818至至-408之間區(qū)之間區(qū)域域; tre 在在 -1000應(yīng)激應(yīng)激mkk6 and p38 mapk激動(dòng)激動(dòng)劑劑類類ap-1位點(diǎn)在位點(diǎn)在 -111缺血損傷缺血損傷未知未知-408至至+100之間區(qū)域之間區(qū)域苯腎上腺素苯腎上腺素神經(jīng)鈣蛋白神經(jīng)鈣蛋白nf-at 在在 -927甲狀腺素（甲狀腺素（t3）甲狀腺受體甲狀腺受體tre 在在 -1000機(jī)械拉伸機(jī)械拉伸p38 mapkssres (-652至至-633和和-162)ap

7、-1活化蛋白-1；camp環(huán)磷腺苷；camk鈣/鈣調(diào)節(jié)蛋白依賴蛋白激酶-；gsk3糖原合成酶激酶-3；mapk絲裂原激活蛋白激酶；mcat肌-cat結(jié)合點(diǎn)；mkk6絲裂原激活蛋白激酶激酶6；nf-at活化t細(xì)胞的核因子；pi3k磷脂酰肌醇3-激酶；pkc蛋白激酶c；ssres剪切壓力反應(yīng)元素；tretpa-反應(yīng)元素 hypertension 1996;27:715722.peptides 2005;26:944 956.10 血漿滲透壓血漿滲透壓 增加血容量增加血容量anp / bnpanp / bnp腎素腎素血管緊張素血管緊張素 iiii醛固酮醛固酮鈉的流失鈉的流失水的排泄水的排泄鈉的排泄鈉

8、的排泄腎小球腎小球?yàn)V過(guò)率濾過(guò)率 外周血管阻力外周血管阻力+ + + +- - - - - -+ + + +- -后葉加壓素后葉加壓素( (抗利尿激素抗利尿激素) ) 心肌擴(kuò)張心肌擴(kuò)張利鈉肽的生物功能（利鈉肽的生物功能（1）11利鈉肽的生物作用（利鈉肽的生物作用（2） 對(duì)對(duì)心血管的作用 促進(jìn)血管內(nèi)液體轉(zhuǎn)移至血管外，靜脈擴(kuò)張； 增加尿鈉排泄和降低心臟前負(fù)荷； 抑制腦和外周交感神經(jīng)系統(tǒng)，抑制自主神經(jīng)釋放兒茶酚胺，降低中樞神經(jīng)系統(tǒng)交感輸出信號(hào)，防止血壓升高； 降低迷走神經(jīng)輸入閾值，促進(jìn)副交感興奮性，抑制通常伴隨前負(fù)荷下降而出現(xiàn)的心動(dòng)過(guò)速反射和血管收縮 ；12 正常心臟正常心臟 心衰心衰bnpnt-pr

9、obnp腦鈉肽的合成與釋放腦鈉肽的合成與釋放anpnt-proanpanpnt-proanpbnpnt-probnp心室肥大13pre-pro-bnp1-134（前腦利鈉肽）前腦利鈉肽）26-氨基信號(hào)序列nt-probnp1-76bnp77-108pro-bnp1-108（腦利鈉肽原）腦利鈉肽原）t1/2 = 18 分鐘 室壁張力增加室壁張力增加t1/2 = 60-120 分鐘腦鈉肽的演變腦鈉肽的演變14b b型利鈉肽和型利鈉肽和nt-nt-probnpprobnp的清除的清除 bnp的清除 bnp通過(guò)受體介導(dǎo)與np受體c結(jié)合被清除 bnp能通過(guò)血流中中性肽鏈內(nèi)切酶的活性所清除 bnp能被包括

10、腎臟在內(nèi)的高血流量器官通過(guò)被動(dòng)排泄（或局部區(qū)域內(nèi)由中性內(nèi)切酶降解）所清除 nt-probnp的清除 缺乏主動(dòng)清除機(jī)制 在高血流量的器官床內(nèi)被清除（肌肉，肝臟，腎臟等） 機(jī)制研究顯示腎臟對(duì)nt-probnp和bnp的清除能力相等15npsnps生物學(xué)的小結(jié)生物學(xué)的小結(jié) np系統(tǒng)在物種間高度保守并有著復(fù)雜的基因調(diào)節(jié)機(jī)制。probnp1-108和nt-probnp1-76沒(méi)有或幾乎沒(méi)有生物學(xué)活性，bnp3-32的生物學(xué)活性較bnp1-32弱。bnp通過(guò)多種機(jī)制被清除，包括受體清除，中性內(nèi)切酶降解和由多種器官被動(dòng)清除。有多種器官可能以被動(dòng)方式清除nt-probnp。機(jī)制研究顯示腎臟對(duì)nt-probnp

11、和bnp的清除能力相等 16nt-probnp化驗(yàn)室指標(biāo)的應(yīng)用影響影響nt-nt-probnpprobnp的檢驗(yàn)前因素的檢驗(yàn)前因素 影響影響nt-nt-probnpprobnp的檢驗(yàn)因素的檢驗(yàn)因素 影響影響nt-nt-probnpprobnp的分析因素的分析因素17影響影響nt-nt-probnpprobnp的檢驗(yàn)前因素的檢驗(yàn)前因素18影響影響bnpbnp和和nt-nt-probnpprobnp的檢驗(yàn)前因素的檢驗(yàn)前因素 nt-probnp的檢測(cè)可以在各種不同的標(biāo)本中進(jìn)行 ，包括edta化血漿、血清和肝素化血漿 。但edta化血漿中測(cè)得的nt-probnp較在血清或肝素化血漿中低（根據(jù)方法的不同

12、可能低10%-13% ） bnp檢測(cè)只能用硅化玻璃管采樣，nt-probnp分析的血樣可以抽進(jìn)玻璃或塑料管中而不會(huì)改變其穩(wěn)定性 檢測(cè)前的非規(guī)律運(yùn)動(dòng)對(duì)bnp和nt-probnp的影響尚未有報(bào)導(dǎo) 姿勢(shì)對(duì)于nt-probnp值并沒(méi)有太大的影響 沒(méi)有發(fā)現(xiàn)nt-probnp有持續(xù)的晝夜節(jié)律變化。但在心衰患者中有報(bào)道發(fā)現(xiàn)bnp的一個(gè)較小但重要的晝夜節(jié)律變化。 在不同的儲(chǔ)存條件下血清或血漿nt-probnp的濃度都較穩(wěn)定，如室溫下保存7天，4 保存10天 ，-20 或更低溫度下保存若干個(gè)月。bnp在室溫條件下甚至在冷凍情況下都不穩(wěn)定 19室溫下在室溫下在edtaedta化血漿中化血漿中nt-nt-probn

13、pprobnp的短期和長(zhǎng)期穩(wěn)的短期和長(zhǎng)期穩(wěn)定性優(yōu)于定性優(yōu)于bnpbnp（11a 11a figure1figure1) )clin chim acta 2003;338:107115.202-82-80 0c c在在edtaedta化血漿中化血漿中nt-nt-probnpprobnp的短期和長(zhǎng)期穩(wěn)定的短期和長(zhǎng)期穩(wěn)定性優(yōu)于性優(yōu)于bnpbnp （11a 11a figure1figure1) )clin chim acta 2003;338:107115.21-20-200 0c c在在edtaedta化血漿中化血漿中nt-nt-probnpprobnp的短期和長(zhǎng)期穩(wěn)定的短期和長(zhǎng)期穩(wěn)定性優(yōu)于性優(yōu)于

14、bnpbnp （11a 11a figure1figure1) )clin chim acta 2003;338:107115.22影響影響nt-nt-probnpprobnp的檢驗(yàn)因素的檢驗(yàn)因素23現(xiàn)有現(xiàn)有nt-nt-probnpprobnp檢測(cè)的方法間的最大偏倚只有檢測(cè)的方法間的最大偏倚只有2020，偏倚主要是由于不同檢驗(yàn)者采用的不同方法，偏倚主要是由于不同檢驗(yàn)者采用的不同方法 ，較容易校正（較容易校正（13a 13a figure2afigure2a）clin chem lab med 2005;43:12631273.24bnpbnp檢測(cè)方法均基于不同的認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)，使用針對(duì)原始檢測(cè)方法均

15、基于不同的認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)，使用針對(duì)原始bnpbnp分子分子不同部分的抗體，且定標(biāo)器也不同，同一樣本通過(guò)不同的方不同部分的抗體，且定標(biāo)器也不同，同一樣本通過(guò)不同的方法檢測(cè)法檢測(cè)bnpbnp結(jié)果的差異可能結(jié)果的差異可能4040。 （13a 13a figure2bfigure2b）am j clin pathol 2005;123:43944525影響影響nt-nt-probnpprobnp的分析后因素的分析后因素26年齡和性別是影響正常人群年齡和性別是影響正常人群nt-nt-probnpprobnp數(shù)值的因素（數(shù)值的因素（14a 14a figure1figure1）clin biochem 2004;37:210216eur heart j2005;26:2269 2276.27bnpbnp和和nt-nt-probnpprobnp的生物學(xué)變異的生物學(xué)變異 對(duì)連續(xù)檢測(cè)中的差異是否有顯著意義進(jìn)行解釋時(shí)，需要考慮到整體的生物學(xué)變異 一組得到良好控制的hf患者中， nt-probnp 的1周參考變異值為23 一組得到良好控制的hf患者中， bnp 的1周參考變異值為43 nt-probnp濃度的最低生物學(xué)變異出現(xiàn)在nt-probnp1300ng/l時(shí)。28nt-probnp化驗(yàn)室指標(biāo)應(yīng)用的小結(jié)小結(jié)nt-probnp在臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)非常方便，在各種溫度下