土壤農(nóng)化分析實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

1、 萬(wàn)鐘公司香蕉枯萎病防控研究所常規(guī)分析指導(dǎo)手冊(cè)土壤農(nóng)化分析常用指標(biāo)測(cè)定方法土壤有機(jī)質(zhì)測(cè)定一、原理 170-180條件下，用一定濃度的K2Cr2O7- H2SO4溶液（過(guò)量）氧化土壤有機(jī)質(zhì)，剩余的K2Cr2O7用FeSO4滴定，由消耗的K2Cr2O7量計(jì)算出有機(jī)碳量，再乘以常數(shù)1.724，即為土壤有機(jī)質(zhì)含量。二、試劑1、0.4mol/L（1/6 K2Cr2O7-濃H2SO4）標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取經(jīng)130烘干的K2Cr2O7(AR)39.2245g溶于水中，加熱溶解后加入1000ml濃H2SO4定容至2000ml。2、0.2mol/L FeSO4溶液：稱取FeSO4（AR）56g溶于水中，加濃硫酸5ml

2、，稀釋至1L。 標(biāo)定：吸取10.00mL重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液置于250mL錐形瓶中，加入40mL水和3mL濃硫酸，再加3滴鄰菲啰啉指示劑，用FeSO4標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由橙黃色經(jīng)藍(lán)綠色至棕紅色為終點(diǎn)。3、鄰菲啰啉指示劑：稱取1.485g鄰菲啰啉（C12H8N2·H2O）和0.695g硫酸亞鐵（FeSO4·7H2O），溶于100mL水中，形成的紅棕色絡(luò)合物貯于棕色瓶中。4、石英砂：粉末狀三、實(shí)驗(yàn)步驟稱取0.25mm風(fēng)干土0.5xxx-1.0xxxg于干燥試管中，加入少量水潤(rùn)濕樣品，準(zhǔn)確沿壁緩慢加入10.0ml K2Cr2O7- H2SO4溶液，搖分散土樣，蓋上小漏斗，放入鐵絲籠中

3、。將鐵絲籠放入已開(kāi)啟185-190油浴鍋中（使溫度在170-180）沸騰準(zhǔn)確5分鐘，取出稍冷，擦凈試管外壁油污（同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)）；冷卻后把溶液全部轉(zhuǎn)移到200-250ml三角瓶中（最后體積控制在60-70ml），加入指示劑3滴，用已知濃度的FeSO4溶液滴定。四、結(jié)果計(jì)算 （V0-V）×C×3.0×1000×1.1×1.724有機(jī)質(zhì)%= ×100 W 式中：V0：滴定空白所用的FeSO4溶液體積（ml）V ：滴定樣品所用的FeSO4溶液體積（ml）C ：0.2mol/L FeSO4溶液準(zhǔn)確濃度3.0：1/4碳原子的摩爾質(zhì)量（g/mol

4、）1000：將ml換算為L(zhǎng)1.1：氧化校正系數(shù)1.724：土壤有機(jī)碳換算成土壤有機(jī)質(zhì)的平均換算系數(shù)。W：烘干土質(zhì)量（g） 注1：土樣稱取量視有機(jī)質(zhì)含量而定：含有機(jī)質(zhì)5%左右的土壤稱取0.5g；含有機(jī)質(zhì)3%4%的土壤稱取0.5g1g；含有機(jī)質(zhì)1%3%的土壤稱取1g2.5g；含有機(jī)質(zhì)1%以下的稱取2.5g以上。如土樣滴定數(shù)小于空白試驗(yàn)滴定數(shù)的1/3時(shí)，須減少稱樣量重做。有機(jī)質(zhì)含量過(guò)低的土樣，稱樣量最多不要超過(guò)10g。 土壤全氮測(cè)定一、原理 樣品在加速劑的參與下，用濃硫酸消煮時(shí)，各種含氮有機(jī)化合物，經(jīng)過(guò)復(fù)雜的高溫分解，轉(zhuǎn)化為氨與硫酸結(jié)合成硫酸銨。堿性條件下蒸餾出來(lái)的氨用硼酸吸收，以標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定，求

5、出全氮的含量。二、試劑1、濃硫酸（CP）2、10mol/LNaOH:稱取400gNaOH（AR）溶于水中定容至1L3、2% H3BO3指示劑溶液：20gH3BO3溶于1L水中，每升H3BO3溶液中加入甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑5ml，并用稀酸或稀堿調(diào)節(jié)至微紫紅色，宜現(xiàn)配，不宜久置。4、混合加速劑：K2SO4：CuSO4：Se=100：10：1即100g K2SO4（CP）、10g CuSO4（cp） 和1g Se粉混合研磨，通過(guò)80目篩充分混勻（注意戴口罩），消煮時(shí)每毫升硫酸加0.37g混合加速劑。5、0.02mol/L（1/2H2SO4）標(biāo)準(zhǔn)溶液：吸取濃H2SO42.83ml，加水稀釋至50

6、00ml，然后用0.0100mol/L硼砂標(biāo)定。標(biāo)定：稱取1.9068g硼砂（Na2B4O7·10H2O），精確至0.0001g，加水溶解后稀釋至500mL，得0.0200mol/L硼砂標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取20.00mL 0.0200mol/L硼砂標(biāo)準(zhǔn)溶液置于100mL錐形瓶中，加1滴甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑，用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由藍(lán)色變?yōu)樽霞t色為終點(diǎn)。同時(shí)做空白試驗(yàn)。6、甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑：稱取0.099g溴甲酚綠和0.066g甲基紅，溶于100mL乙醇中，變色范圍pH 4.4(紅)5.4（藍(lán)），貯存期不超過(guò)2個(gè)月。三、步驟1、消煮 稱取0.15mm風(fēng)干土樣1.×

7、××× g送入干燥的消煮管底部，加入加速劑2g和濃硫酸5ml，搖勻。將消煮管放置電爐上用低溫加熱10-15分鐘，管內(nèi)反應(yīng)緩和時(shí)可加強(qiáng)火力使消煮管的土液保持微沸，加熱的部位不超過(guò)瓶中的液面，以防瓶壁溫度過(guò)高使銨鹽受熱分解。消煮的溫度以硫酸蒸汽在瓶頸上部1/3處冷凝回流為宜。待消煮液和土粒全部變?yōu)榘咨詭ЬG色后，再繼續(xù)消煮1h。消煮完畢，待消煮液稍冷，加水至約消煮管2/3處，冷卻后定容。2、蒸餾 檢查裝置是否漏氣，并通過(guò)水的餾出液將管道洗干凈。吸取10ml消煮液加入蒸餾器中，于出口處放置一裝有5ml 2%H3BO3-指示劑溶液的三角瓶，從蒸餾器的另一入口加入20ml

8、10mol/L的NaOH，開(kāi)始蒸餾，至餾出液為60-70ml時(shí)可停止蒸餾。3、用0.02mol/L（1/2H2SO4）標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定餾出液由藍(lán)綠色至剛變?yōu)樽霞t色，記錄所用的酸標(biāo)準(zhǔn)液體積（ml）四、結(jié)果計(jì)算 （V-V0）×C（1/2H2SO4）×14.0×10-3土壤全氮N（g/kg）= ×1000 m式中：V滴定樣品時(shí)所用的酸標(biāo)準(zhǔn)液體積（ml）；V0滴定空白時(shí)所用的酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積（ml）；C0.02mol/L（1/2H2SO4）酸標(biāo)準(zhǔn)液的濃度；14.0氮原子的摩爾質(zhì)量（g/mol）；10-3將ml換算成L；m烘干土的質(zhì)量（g）土壤銨態(tài)氮、硝態(tài)氮測(cè)定一、原理

9、 土壤用氯化鉀溶液浸提，浸提液中的銨態(tài)氮在強(qiáng)堿性介質(zhì)中與次氯酸鹽和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚藍(lán)，借以光度法測(cè)定。含氮量在0.05mg/L0.5mg/L范圍內(nèi)，吸光度與銨態(tài)氮含量成正比。 二、試劑 1、氯化鉀溶液：2mol/L，稱取149.1g氯化鉀，溶于水中，再稀釋至1000mL。 2、Buffer（R1）:稱取酒石酸鉀鈉（KNaC4H4O6. 4H2O）25g，磷酸氫二鈉（Na2HPO4.12H2O）17.9g ,氫氧化鈉（NaOH）27g用超純水定容至500ml，加brij-35 6-8滴；數(shù)周內(nèi)穩(wěn)定3、Salycilate B（R2）：稱取水楊酸鈉（NaC7H5O3）150g，硝普鈉（

10、Na2Fe(CN)5NO, 5H2O）0.3g，用超純水溶解定容至1000ml；3周內(nèi)穩(wěn)定4、Dichloroisocyanuric acid Na salt C（R3）：吸取次氯酸鈉（NaClO）6ml，用超純水定容至100ml，1周內(nèi)穩(wěn)定5、100ppm NH4-N標(biāo)液：稱取經(jīng)60烘干8h的NH4Cl 0.3822g溶于800ml超純水，定容至1000ml三、實(shí)驗(yàn)步驟稱取1mm風(fēng)干土樣5.00g于50ml塑料瓶，加入25ml 2mol/LKCl提取液，蓋緊瓶蓋，搖勻，在振蕩機(jī)上于20-25振蕩30min（振蕩頻率：180±20r/min），干過(guò)濾于50ml三角瓶中，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)

11、。上連續(xù)流動(dòng)分析儀測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)曲線：銨態(tài)氮標(biāo)曲：吸取20ml 100PPM氨氮標(biāo)液于100ml容量瓶，用2mol/LKCl浸提液定容，即20ppm氨氮標(biāo)液，分別吸取20ppm氨氮標(biāo)液0，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00ml于50ml容量瓶，用2mol/LKCl浸提液定容，即：0，0.4，0.8，1.2，2.4，3.2，4.0ppm硝態(tài)氮標(biāo)曲：吸取20ml 100PPM硝氮標(biāo)液于100ml容量瓶，用2mol/LKCl浸提液定容，即20ppm硝氮標(biāo)液，分別吸取20ppm硝氮標(biāo)液0，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00ml于50ml容量瓶，用2mol/

12、LKCl浸提液定容，即：0，0.4，0.8，1.2，2.4，3.2，4.0ppm原液上機(jī)，若有超標(biāo)則吸取5ml待測(cè)液于25ml容量瓶，用2mol/LKCl浸提液定容。四、結(jié)果計(jì)算 .V .D銨態(tài)氮或硝態(tài)氮（N mg/kg）= ×1000 m×1000 查標(biāo)準(zhǔn)曲線所得待測(cè)液中銨態(tài)氮或硝態(tài)氮的濃度，g/mlV顯示液體積，mlD分取倍數(shù)1000分別將g換算成mg和將g換算成kgm土壤樣品質(zhì)量，g土壤堿解氮的測(cè)定一、原理 堿解擴(kuò)散法，使堿解、還原和擴(kuò)散吸收各反應(yīng)同時(shí)進(jìn)行，操作簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果再現(xiàn)性好，與作物需氮情況有一定相關(guān)性。用氫氧化鈉溶液處理土壤，硝態(tài)氮含量較高的土壤，須加還原劑

13、還原；在擴(kuò)散皿中，土壤于堿性條件下進(jìn)行水解，使易水解態(tài)氮經(jīng)堿解轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮，擴(kuò)散后由硼酸溶液吸收，再用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定而計(jì)算水解性氮量。潛育土壤由于硝態(tài)氮含量較少，不須加還原劑還原，可降低氫氧化鈉溶液濃度。二、試劑1、1.07mol/L NaOH溶液：稱取42.8gNaOH溶于水中，定容至1L2、0.02mol/L（1/2 H2SO4）酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 標(biāo)定：稱取0.9534g硼砂（Na2B4O7·10H2O），精確至0.0001g，加水溶解后稀釋至500mL，得0.0100mol/L硼砂標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取20.00mL 0.0100mol/L硼砂標(biāo)準(zhǔn)溶液置于100mL錐形瓶中，加1滴甲基紅-

14、溴甲酚綠混合指示劑，用酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由藍(lán)色變?yōu)樽霞t色為終點(diǎn)。同時(shí)做空白試驗(yàn)。3、2%H3BO3：20g H3BO3溶于1L水中，每100ml H3BO3溶液中加入甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑2ml并用稀酸或稀堿調(diào)節(jié)至微紫紅色（PH=4.5）, 硼酸指示劑溶液如混合過(guò)久，將有終點(diǎn)不靈敏的現(xiàn)象發(fā)生。 4、甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑：稱取0.099g溴甲酚綠和0.066g甲基紅，溶于100mL乙醇中，變色范圍pH 4.4(紅)5.4(藍(lán))，貯存期不超過(guò)2個(gè)月。5、堿性膠：取阿拉伯膠40.0g和水50ml在燒杯中熱溫至70-80攪拌促溶，約1h后放冷。加入甘油20ml和飽和K2CO3水溶液20ml

15、，攪拌，放冷。離心除去泡沫和不溶物，清液貯于具塞玻璃瓶中備用。6、FeSO4·7H2O粉末：將FeSO4·7H2O（CP）磨細(xì)，裝入密封瓶，存于陰涼處7、AgSO4飽和溶液三、步驟稱取1mm風(fēng)干土樣2.00g及FeSO4·7H2O粉末0.20g，置于潔凈的擴(kuò)散皿外室，輕輕轉(zhuǎn)擴(kuò)散皿，使土樣與FeSO4·7H2O粉末均勻地鋪平。在擴(kuò)散皿外室加入0.1ml飽和AgSO4溶液。在擴(kuò)散皿內(nèi)室加入2%H3BO3 2ml，然后在擴(kuò)散皿外室邊緣涂抹堿性膠，蓋上毛玻璃，旋轉(zhuǎn)數(shù)次，使皿邊緣與毛玻璃完全粘合。在漸漸轉(zhuǎn)開(kāi)毛玻璃一邊，使擴(kuò)散皿外室露出一條狹縫，迅速加入1.07mo

16、l/L NaOH溶液10ml，立即蓋嚴(yán)，輕輕旋轉(zhuǎn)擴(kuò)散皿，讓堿液蓋住左右土壤。再用橡皮筋固定，隨后小心平放在40±1恒溫箱中，堿解擴(kuò)散24±0.5h后取出。內(nèi)室吸收液中的NH3用酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。注1：由于堿性膠液的堿性很強(qiáng)，在涂膠液和洗滌擴(kuò)散皿時(shí)，必須細(xì)心，慎防污染內(nèi)室，致使造成誤差。也可采用堿性甘油（甘油中溶解數(shù)十粒固體氫氧化鈉），易清洗堿性污染。 注2：滴定時(shí)要用細(xì)玻棒小心攪動(dòng)吸收液，切不可搖動(dòng)擴(kuò)散皿。接近終點(diǎn)時(shí)，可用細(xì)玻棒少沾滴定管尖端的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，以防滴過(guò)終點(diǎn)。四、結(jié)果計(jì)算 C×（V-V0）×14.0堿解氮N（mg/kg）= ×1000

17、 m式中：C0.02mol/L（1/2H2SO4）酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/LV樣品滴定時(shí)用去酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mlV0空白實(shí)驗(yàn)滴定時(shí)用去酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml14.0氮原子的摩爾質(zhì)量，g/mol1000將L換算成mlm烘干土質(zhì)量，g兩次平行測(cè)定允許誤差為5mg/kg土壤有效硫測(cè)定一、 原理 酸性土壤用磷酸鹽（石灰性土壤用氯化鈣）浸提，浸出液中少量有機(jī)質(zhì)用過(guò)氧化氫去除，硫酸根用硫酸鋇比濁法測(cè)定。二、 試劑1，磷酸鹽浸提劑：稱取Ca（H2PO4）2.H2O(CP) 2.04g溶于水中，稀釋至1L2，30%H2O23，HCl 1：4溶液4，氯化鋇晶粒，0.25mm5，100g/L S標(biāo)液：稱取K2

18、SO4（AR）0.5436g溶于水，定容至1L三、 步驟1、 浸提稱取風(fēng)干土10.00g于100ml三角瓶中，加浸提劑50ml，振蕩1h，干過(guò)濾2、 比濁吸取濾液25ml于100ml三角瓶中，在電熱板或沙浴上加熱，用過(guò)氧化氫3-5滴氧化有機(jī)物。待有機(jī)物分解完全后繼續(xù)煮沸，除盡過(guò)氧化氫。加入1：4鹽酸1ml，用水洗入25ml容量瓶中，加入阿拉伯膠溶液2ml，用水定容。倒入100ml燒杯中，加氯化鋇晶粒1g，用電磁攪拌器攪拌1min。5-30min內(nèi)用3cm比色槽440nm比濁，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。3工作曲線 將硫標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至（s）=10g/ml。吸取0.00，1.00，3.00，5.00，8.00

19、，10.00，12.00ml分別放入25ml容量瓶中，加入1ml鹽酸和2ml阿拉伯膠溶液，用水定容。得到0.00，0.40，1.20，2.00，3.20，4.00，4.80g/ml S標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。轉(zhuǎn)入100ml燒杯，加入1g氯化鋇晶粒，電磁攪拌器攪拌1min后在5-30min內(nèi)440nm比濁。四、 結(jié)果計(jì)算 ×V×ts土壤有效硫 S（mg/kg）= m式中：測(cè)定液中硫的質(zhì)量濃度，g/mlV測(cè)定時(shí)定容體積，mlts分取倍數(shù)0-m烘干土質(zhì)量，g允許相對(duì)偏差10%土壤全磷的測(cè)定一、 原理 用高氯酸分解樣品,因?yàn)樗且环N強(qiáng)酸,又是一種強(qiáng)氧化劑,能氧化有機(jī)質(zhì),分解礦物質(zhì),而且高氯酸

20、的脫水作用很強(qiáng),有助于膠狀硅的脫水,并能與Fe3+ 絡(luò)合,在磷的比色測(cè)定中抑制了硅和鐵的干擾。硫酸的存在提高消化液的溫度，同時(shí)防止消化過(guò)程中溶液蒸干，以利于消化作用的順利進(jìn)行。本法用于一般土壤樣品分解率達(dá)97%98%，但對(duì)紅壤性土壤樣品分解率只有95%左右。溶液中的磷測(cè)定采用鉬銻抗比色法。二、 試劑1、 NaOH2、 無(wú)水乙醇3、 100g/L碳酸鈉溶液：10g無(wú)水碳酸鈉溶于水后，定容至100mL。4、 50mL/L硫酸溶液:吸取5mL濃硫酸稀釋定容至100 mL。5、 3moL/L硫酸溶液:量取160mL濃硫酸稀釋定容至1000 mL。6、 硫酸鉬銻貯備液：量取153mL濃硫酸，緩緩加入40

21、0mL水中，不斷攪拌，冷卻。加入10g鉬酸銨攪拌，溶解完全。然后加入0.5g酒石酸銻鉀攪拌溶解。定容至1000mL,貯存于棕色瓶中。7、 鉬銻抗顯色劑：稱取1.5g抗壞血酸溶于100mL鉬銻貯備液中，現(xiàn)配現(xiàn)用。8、 磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液：準(zhǔn)確稱取經(jīng)105烘干2h的磷酸二氫鉀（GR）0.4390g，用水溶解后，加入5mL濃硫酸，然后加水定容至1000mL，該溶液含磷100mg/L。三、 步驟1、 待測(cè)液的制備準(zhǔn)確稱取<0.15mm土樣0.50001.0000g,置于50mL消煮管中,以少量水濕潤(rùn)后,加濃硫酸8mL,搖勻后,再加70%72%HClO4 10滴,搖勻,管口加一小漏斗,置于電爐上消煮(至

22、溶液開(kāi)始轉(zhuǎn)白后繼續(xù)消煮)20min。全部消煮時(shí)間為4060min，同時(shí)做空白。將冷卻的消煮液加3040mL水轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，冷卻后定容。2、 測(cè)定吸取澄清液或?yàn)V液5mL至50mL容量瓶中，加水稀釋至30mL,加2，4-二硝基苯酚指示劑2滴，滴加4mol/LNaOH溶液直至溶液變成黃色，再加1N H2SO41滴，使溶液黃色剛好褪去。然后加鉬銻抗顯色劑5mL,加水定容至50mL,搖勻。30min后700nm波長(zhǎng)進(jìn)行比色。3、 標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確吸取5g/mL,P標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1、2、4、6、8、10mL,分別放入50mL容量瓶中，加水至約30mL,再加空白試驗(yàn)定容后的消煮液5mL，加入2，4-二

23、硝基苯酚指示劑2滴調(diào)節(jié)酸度，然后加入鉬銻抗顯色劑5mL，最后用水定容至50mL。30min后700nm比色。各瓶比色液磷的濃度分別為0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0g/mLP。四、 結(jié)果計(jì)算 ×V×V2 土壤全磷P(g/Kg)= ×10-3 m×V1 式中：-待測(cè)液中磷的質(zhì)量濃度，g/ mLV -樣品制備液的體積，mLm -烘干土質(zhì)量，gV1-吸取濾液體積，mLV2-待測(cè)液體積，mL10-3 將g換算成每千克土壤中含磷的克數(shù)的乘數(shù)。酸性土壤有效磷的測(cè)定一、 原理酸性土壤中磷的形態(tài)主要為各種磷酸鐵鋁化合物，用酸性氟化銨浸提，則形成氟鋁化銨

24、和氟鐵化銨的絡(luò)合物，磷酸根離子被釋放提取到溶液中來(lái)，翻譯如下：3NH4F+3HF+AlPO4H3PO4+（NH4）3AlF63NH4F+3HF+FePO4H3PO4+（NH4）3FeF6同時(shí)，浸提液自身所帶的酸性也能溶解土壤中一部分比較活潑的磷酸鈣類化合物，并防止在浸提過(guò)程中的磷酸鈣的次生沉淀反應(yīng)。被浸提出來(lái)的磷酸，在一定酸度下與鉬酸銨作用生成磷鉬雜多酸，當(dāng)用抗壞血酸還原時(shí)，可生成藍(lán)色的磷鉬藍(lán)，溶液藍(lán)色深淺與磷的含量成正比關(guān)系。二、 試劑1、0.5mol/L鹽酸溶液：20.2 mL濃鹽酸用蒸餾水稀釋至500 mL。2、1mol/L氟化銨溶液：溶解NH4F 37g于水中，稀釋至1L，貯存于塑料瓶

25、中。3、浸提劑：分別吸取1.0mol/LNH4F溶液15 mL和0.5mol/LHCl溶液25 mL，定容至500mL。4、鉬銻抗顯色劑。三、步驟 稱<1mm風(fēng)干土2.00g于干燥塑料瓶中加入20.0mL0.03mol/LNH4F-0.025mol/LHCl加塞，振蕩30min立即干過(guò)濾吸取濾液5.0 mL至50 mL容量瓶中加入10.0mL0.8mol/LH3BO3加純水20ml左右加3滴2，6-二硝基酚用4mol/LNaOH調(diào)至剛顯黃色加入12滴稀HCl至黃色剛好褪去加入5.0 mL鉬銻抗定容30min后在722分光光度計(jì)上以700nm波長(zhǎng)比色；同時(shí)做空白試驗(yàn)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的配置：分別吸

26、取標(biāo)準(zhǔn)液0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0(mL)放入50mL容量瓶中加純水至30ml左右調(diào)酸度加鉬銻抗定容30min后比色。四、結(jié)果計(jì)算 ×V×D土壤有效磷（P）的含量(mg/kg)= ×1000 m×103 待測(cè)液中磷的質(zhì)量濃度，g/mlV樣品待測(cè)液體積，mlD分取倍數(shù)m烘干土質(zhì)量，g 注1：鉬銻抗光度法要求顯色液中硫酸濃度為0.23mol/L0.33mol/L。如酸度小于0.23mol/L，雖然顯色加快，但穩(wěn)定時(shí)間較短。如酸度大于0.33mol/L，則顯色變慢。本法要求顯色溫度為15以上，如室溫低于15，可放置在3040的恒溫

27、箱中保持30min，冷卻后測(cè)定吸光度。土壤全鉀測(cè)定一、 原理 用NaOH熔融土壤與Na2CO3熔融土壤原理一樣，即增加鹽基成分，促進(jìn)硅酸鹽的分解，以利于各種元素的溶解。樣品經(jīng)堿熔后，使難溶的硅酸鹽分解成可溶性化合物，用酸溶解后可不經(jīng)脫硅和去鐵、鋁等手續(xù)，稀釋后即可直接用火焰光度計(jì)測(cè)定。二、 試劑1、 無(wú)水乙醇2、 H2SO4(1:3)溶液3、 HCl（1：1）溶液4、 0.2mol/L H2SO4溶液5、 100mg/L K標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取KCl(AR,110烘干2h)0.1907g溶于水定容至1L，存于塑料瓶中。三、 步驟1、 待測(cè)液制備稱取0.15mm烘干土樣約0.2500g于銀或鎳坩堝

28、底部，用無(wú)水酒精稍潤(rùn)濕樣品然后加固體NaOH 2.0g，平鋪于土樣的表面，暫放于大干燥器中，以防吸濕。將坩堝加蓋留一小縫放在高溫電爐內(nèi)，先以低溫加熱，然后逐漸升高溫度至450，保持此溫度15min，熔融完畢。轉(zhuǎn)動(dòng)坩堝，使熔融物均勻地附在坩堝壁上。將坩堝冷卻后，加入水10mL,加熱至80左右，待熔塊溶解后，再煮5min，轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，然后用少量0.2mol/LH2SO4溶液清洗數(shù)次，一起倒入容量瓶中，使總體積至約40mL,再加HCl（1：1）5滴和H2SO4(1:3) 5mL,用水定容，過(guò)濾。2、 測(cè)定吸取待測(cè)液5.00mL或10.00mL于容量瓶中，用水定容，直接在火焰光度計(jì)上測(cè)定，然

29、后從工作曲線上查得待測(cè)液的K濃度（g/mL）。四、 結(jié)果計(jì)算： ×V×ts土壤全鉀（K,g/kg）= ×1000 m×106式中：從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得待測(cè)液中鉀的質(zhì)量濃度（g/mL）；V 待測(cè)液的定容體積，mL；ts分取倍數(shù)；m 烘干土質(zhì)量，g106將g轉(zhuǎn)化為g的除數(shù)。樣品中含鉀量等于10g/kg時(shí)，兩次平行測(cè)定的結(jié)果允許差為0.5 g/kg。 土壤速效鉀測(cè)定一、 原理 土樣速效鉀包括交換性鉀和水溶性鉀。速效鉀的測(cè)定常采用乙酸銨作浸提劑，由于銨離子與鉀離子的離子半徑相似，以銨離子取代鉀離子，能將土壤膠體表面的交換性鉀和粘土礦物晶格層的非交換性鉀分開(kāi)，不因浸提

30、時(shí)間和淋洗次數(shù)的影響，測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。土樣以乙酸銨浸提劑浸提，銨離子與土壤膠體表面的鉀離子交換，連同水溶性鉀離子一起進(jìn)入溶液，原子發(fā)射光度法測(cè)定鉀量。本法測(cè)定結(jié)果在非石灰性土壤中為交換性鉀，在石灰性土壤中為交換性鉀和水溶性鉀。二、 試劑1、1mol/L中性NH4OAc（PH=7）溶液：稱取化學(xué)純CH3COONH4 77.09g加水稀釋，定容至1L，用HOAc或NH4OH調(diào)節(jié)至PH=7.02、K標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取KCl（AR，110烘干2h）0.1907g，用1mol/L中性NH4OAc溶液定容至1L，即為含K 100mg/L的中性NH4OAc溶液。三、步驟 稱取風(fēng)干土壤樣品2.00g放入塑料瓶中，加

31、入20.0ml 1ml/L的NH4OAc，振蕩30min，干過(guò)濾，上機(jī)測(cè)定。 標(biāo)準(zhǔn)曲線：吸取100mg/L標(biāo)液0，0.5，1，2，4，8ml于50容量瓶，即為0.0，1.0，2.0，4.0，8.0，16.0ppm四，結(jié)果計(jì)算 C×V土壤速效鉀（mg/kg） m式中：C從標(biāo)曲上查得待測(cè)液中K的質(zhì)量濃度，mg/LV加入的浸提劑體積，mlm烘干土質(zhì)量，g 土壤有效硼測(cè)定一、原理 土壤用熱水浸提出的硼，與作物對(duì)硼的反映有較高的相關(guān)性。浸提液中硼在草酸存在下與姜黃素作用，經(jīng)脫水生成玫瑰紅色的絡(luò)合物。用乙醇溶解后，于550nm波長(zhǎng)處測(cè)量其吸光度。硼含量在0.0025g/mL0.05g/mL范圍，

32、符合朗伯-比爾定律。二、試劑 1，95%乙醇 2，無(wú)水乙醇 3，姜黃素-草酸溶液：稱取0.040g姜黃素和5.0g草酸(優(yōu)級(jí)純)溶于100mL 95%乙醇中。貯于塑料瓶中，此溶液在使用前一天配制好，密閉好存放在冰箱中可使用一周。 4，100mg/L B標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.5720g經(jīng)4050烘2h的硼酸(H3BO3，光譜純)溶于水中，溫?zé)崛芙夂?，移?000mL石英容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，貯于塑料瓶中。三、步驟 稱取過(guò)1mm篩風(fēng)干土樣10.00g于150ml石英三角瓶中，加去離子水20ml，連接回流冷凝裝置后，放在電熱板上煮沸5min，冷卻，加1mol/L1/2CaCl2溶液24滴，激烈搖動(dòng)

33、，放置5min左右，用定量濾紙過(guò)濾入塑料瓶中，濾液必須清亮。 吸取1.00ml濾液于瓷蒸發(fā)皿中，加入姜黃素-草酸溶液4ml。略加搖動(dòng)均勻，在55±3水浴上蒸干，繼續(xù)在水浴上蒸干15min以除去殘存水分，冷卻至室溫。在蒸發(fā)過(guò)程中現(xiàn)出紅色。用移液管加入95%乙醇20ml，用塑料棒攪拌使殘?jiān)耆芙?，?50nm波長(zhǎng)比色，用乙醇調(diào)零。 吸取50g/ml硼標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于50ml容量瓶，用超純水定容，即為0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00g/ml的硼標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。分別吸取硼標(biāo)準(zhǔn)系列溶液各1ml放入瓷蒸發(fā)皿中，加姜黃素-草酸溶液4ml，

34、銨上述步驟顯色和比色，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。注1：若土壤中硝酸根含量超過(guò)20g/g時(shí)，對(duì)顯色有干擾，須吸取一定量的濾液加飽和氫氧化鈣溶液，放在水浴上蒸干后灼燒破壞硝酸根，然后用0.1mol/L鹽酸溶解殘?jiān)?，再進(jìn)行顯色。 注2：待測(cè)液及空白溶液與標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的顯色條件(如溫度、容器的種類與體積、蒸發(fā)的速度)必須嚴(yán)格保持一致。 注3：由于乙醇易揮發(fā)，比色時(shí)需快速進(jìn)行。 注4：如果土壤有效硼含量較高時(shí)，待測(cè)液中硼超過(guò)1g/mL時(shí)，應(yīng)將濾液稀釋后進(jìn)行顯色。計(jì)算時(shí)乘以稀釋倍數(shù)。四、結(jié)果計(jì)算 土壤有效硼（B，g/ml）=2*式中：測(cè)定液中硼的質(zhì)量濃度（g/ml）2水土比，熱水浸提時(shí)所用的水的體積（ml）/稱取土樣

35、的質(zhì)量（g） 中性和酸性土壤有效銅、鋅測(cè)定一、原理 0.1mol/L HCl浸提土壤有效銅、鋅，不但包括了土壤水溶態(tài)和代換態(tài)的銅、鋅，還能釋放酸溶性化合物中的銅、鋅，后者對(duì)植物的有效性則很低。浸提溶液中的銅、鋅可直接用原子吸收分光光度法測(cè)定。二、試劑 1，0.1mol/L 鹽酸（GR）溶液 2，100mg/L Cu標(biāo)準(zhǔn)溶液：溶解純金屬銅0.1000g于1：1 HNO3 50ml溶液中，用超純水水稀釋定容至1L 3，100mg/L Zn標(biāo)準(zhǔn)溶液：溶解純金屬鋅0.1000g于1：1 HCl 50ml溶液中，用超純水稀釋定容至1L。三、步驟 稱取過(guò)1mm篩的風(fēng)干土樣10.00g于100ml塑料瓶中，

36、加0.1mol/L HCl50.0ml，25振蕩1.5h，過(guò)濾。濾液、空白液和標(biāo)準(zhǔn)溶液中的Cu、Zn用原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定。 標(biāo)準(zhǔn)曲線： 分別吸取50ppm Cu標(biāo)準(zhǔn)溶液：0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0ml，50ppm Zn標(biāo)準(zhǔn)溶液：0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于50ml容量瓶，用0.1mol/L HCl稀釋定容，即為Cu標(biāo)準(zhǔn)系列溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0ppm，Zn標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ppm。四、結(jié)果計(jì)算 土壤有效Cu、Zn（mg/kg）=（-0）*V/m式中：標(biāo)準(zhǔn)曲線查得

37、待測(cè)液中Cu或Zn的質(zhì)量濃度（g/ml）0標(biāo)準(zhǔn)曲線查得空白液中Cu或Zn的質(zhì)量濃度（g/ml）V加入浸提劑的體積，mlm烘干土的質(zhì)量，g土壤交換性鈣、鎂測(cè)定一、原理 用1mol/L中性NH4Ac溶液反復(fù)處理土壤，使土壤成為飽和土。浸出液包含全部交換性鹽基，它們都以醋酸鹽狀態(tài)存在。浸出液中的鈣、鎂用中性乙酸銨定容后，加入釋放劑Sr消除鋁、硅、磷干擾后，可用原子吸收分光光度法測(cè)定。二、試劑 1、1mol/L中性NH4OAc（PH=7）溶液：稱取化學(xué)純CH3COONH4 77.09g加水溶解，定容至1L，用HOAc或NH4OH調(diào)節(jié)至PH=7.0 2、3%氯化鍶溶液，上機(jī)時(shí)使配制的溶液中含鍶1000m

38、g/L 3、1000mg/L Ca標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取CaCO3（AR，110烘4h）2.4972g溶于1mol/L HCl中，煮沸趕去CO2，用水洗入1L容量瓶中定容。 4、1000mg/L Mg標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取金屬鎂（光譜純）1.0000g溶于少量6mol/L HCl中，用水洗入1L容量瓶定容。三、步驟 1、制備待測(cè)液 稱取過(guò)1mm篩的風(fēng)干土樣1.00g，放入10ml離心管中，沿離心管壁加入少量1mol/L中性乙酸銨溶液，用橡皮頭玻璃棒攪拌土樣，使其成為泥漿狀態(tài)，然后用乙酸銨溶液洗滌橡皮頭玻璃棒，洗液收入離心管內(nèi)。 將離心管成對(duì)放在已調(diào)平的粗天平兩端，用乙酸銨溶液使之質(zhì)量平衡，平衡好的離心管對(duì)稱放

39、入離心機(jī)中，以3000400r/min的速度離心35min，將清液過(guò)濾到100ml容量瓶備用。如此用1mo/L的乙酸銨溶液反復(fù)處理35次，直到最后浸出液中無(wú)鈣離子反應(yīng)后，用1mol/L乙酸銨定容。 2、樣品測(cè)定 吸取1mol/L乙酸銨處理土壤的浸出液20.00ml于25ml容量瓶中，加入3%氯化鍶溶液2.5ml，用1mol/L乙酸銨溶液定容。定容后的溶液直接在原子吸收分光光度計(jì)上測(cè)定。 3、標(biāo)準(zhǔn)曲線配制 分別吸取50g/ml的Ca標(biāo)準(zhǔn)溶液：0、1、2、4、8、12ml和50g/ml的Mg標(biāo)準(zhǔn)溶液：0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.2ml于50ml容量瓶中，加入3%氯化鍶溶液5ml，用1m

40、ol/L乙酸銨溶液定容，即為含Ca：0、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0ppm，含Mg：0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.2ppm標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，直接在原子吸收分光光度計(jì)上測(cè)定。四、結(jié)果計(jì)算 ×V×ts 土壤交換性鈣（1/2Ca 2+ ，cmol/kg）= ×100 m×20.04×1000 ×V×ts 土壤交換性鎂（1/2Mg 2+ ，cmol/kg）= ×100 m×12.153×1000式中：從工作曲線上查得待測(cè)液的鈣、鎂質(zhì)量濃度，g/mlV上機(jī)檢測(cè)時(shí)的體積，mlts分取倍數(shù)m

41、烘干土質(zhì)量，g20.41/2 Ca 2+的摩爾質(zhì)量，g/mol12.1531/2 Mg 2+的摩爾質(zhì)量，g/mol1000將微克換算成毫克。植物全氮、全磷含量測(cè)定一、原理 植物樣品在濃硫酸溶液中，歷經(jīng)脫水碳化、氧化等一系列作用，而氧化劑過(guò)氧化氫在熱濃硫酸溶液中分解出的活性氧原子具有強(qiáng)烈的氧化作用，分解濃硫酸沒(méi)有破壞的有機(jī)物和碳。使有機(jī)氮、磷等轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)銨鹽和磷酸鹽等。生成的銨鹽可用納氏比色法測(cè)定，磷酸鹽可用鉬銻抗比色法測(cè)定。二、試劑 1、濃硫酸2、30%H2O23、納氏試劑：稱取HgI 9.0g溶于1000ml 1.2%KI溶液中4、螯合劑：稱取500g酒石酸鉀鈉和10gNaOH置于1000m

42、l燒杯，加蒸餾水500ml，沸水浴中加熱34h，冷卻定容至1L5、保護(hù)膠：稱取阿拉伯膠2.0g置于1000ml燒杯，加水500ml溶解，再加1.6mol/L NaOH 10ml和納氏試劑2ml，定容至1L6、1.6mol/L NaOH：稱取64.0gNaOH，溶解定容至1000ml7、100mg/L N（NH4-N）標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取烘干NH4Cl（AR，烘干2h）0.3817g溶于水中，定容至1000ml8、鉬銻抗顯色劑9、4mol/L NaOH溶液，1mol/L H2SO4溶液，2，4-二硝基酚指示劑。10、50mg/L P標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取經(jīng)105烘干的KH2PO4 0.2195g，溶解，移

43、入1000ml容量瓶，加水至約400ml，加濃硫酸5ml，用水定容。裝入塑料瓶中低溫保存?zhèn)溆谩Ｈ?、步驟 1、樣品的消煮 稱取樣品0.06*0.08*g于干燥的100ml消煮管中，加水潤(rùn)濕，沿壁緩緩加入濃硫酸3ml，邊加邊轉(zhuǎn)動(dòng)消煮管，蓋上彎頸小漏斗，低溫消煮，冒白煙時(shí)逐漸升高溫度（保證微沸狀態(tài)）。當(dāng)溶液呈棕色時(shí)加入5滴H2O2，再煮至完全清亮后再煮510min，取出，冷卻，定容。 2、樣品測(cè)定 ，氮的測(cè)定 法一、 用移液管準(zhǔn)確移取待測(cè)液1.0ml置于50ml容量瓶中，加蒸餾水25ml，加混合試劑16.5ml，定容，搖勻，半小時(shí)后，在722型分光光度計(jì)上用490nm波長(zhǎng)進(jìn)行比色。以空白實(shí)驗(yàn)液為參比

44、調(diào)零。 標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確吸取10ppm標(biāo)準(zhǔn)液0、1、2、3、4、5、6、7ml分別注入7個(gè)50ml容量瓶，各加空白液1ml，蒸餾水25ml，上述混合試劑16.5ml，定容，搖勻，半小時(shí)后在722型分光光度計(jì)上用490nm波長(zhǎng)比色法二、用移液管準(zhǔn)確移取待測(cè)液5.0ml于25ml容量瓶，用去離子水稀釋定容至刻度，上連續(xù)流動(dòng)分析儀比色。 標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確吸取20ppm標(biāo)準(zhǔn)液0、0.5、1、2、4、6、8、10ml于50ml容量瓶，用去離子水定容至刻度，即為：0、0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2、4.0ppm，上連續(xù)流動(dòng)分析儀比色。 ，磷的測(cè)定 用移液管準(zhǔn)確吸取2.0ml待測(cè)液于50ml容量

45、瓶，用水稀釋至30ml，加2，4-二硝基酚2滴，用稀NaOH溶液和稀H2SO4溶液調(diào)節(jié)PH至溶液剛呈微黃色。然后加入鉬銻抗顯示劑5.0ml，搖勻，用水定容，放置30min，在分光光度計(jì)上用700nm比色。 標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別吸取5ppm標(biāo)準(zhǔn)P溶液：1、1、2、3、4、5、6ml于50ml容量瓶中，加水稀釋至約30ml，加空白液2ml，加指示劑，調(diào)酸度，加顯色劑，定容，搖勻，30min后比色。四、結(jié)果計(jì)算 C×V×ts植物全氮、磷%= ×100 m×106式中：C從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的顯色液N、P的質(zhì)量濃度，g/mlV顯色液體積，mlts分取倍數(shù)m干樣品質(zhì)量，g10

46、6克換算成微克植物樣品中K、Ca、Mg、Fe、Mn、Cu、Zn的測(cè)定一、原理 植物樣品經(jīng)過(guò)低溫加熱碳化和高溫灰化以后，以稀鹽酸煮沸，溶解灰分中的K、Ca、Mg、Fe、Mn、Cu、Zn等陽(yáng)離子，可用原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定。二、試劑 1、10%鹽酸 2、2%鹽酸 3、5%氯化鍶溶液 4、K、Ca、Mg、Fe、Mn、Cu、Zn標(biāo)準(zhǔn)溶液三、步驟 1、樣品的制備 準(zhǔn)確稱取1.*g樣品于瓷坩堝中，加蓋，留一小縫，放置電爐上先以低溫（電爐絲暗紅）加熱至不再冒煙。逐漸升高溫度至最大，灰化至樣品呈灰白色即為灰化完全。然后轉(zhuǎn)移至馬弗爐中以500±20加熱2h。冷卻后先用少量水潤(rùn)濕樣品，加入10ml 10

47、%鹽酸，放置低溫電爐上煮至微沸，用玻璃棒攪拌并迅速轉(zhuǎn)移過(guò)濾至100ml容量瓶中，剩下的樣品再加入10ml 10%鹽酸轉(zhuǎn)移一次。用去離子水反復(fù)洗滌坩堝至轉(zhuǎn)移完全，并洗滌濾紙，定容備用。 2、樣品的測(cè)定 aK的測(cè)定 吸取母液1ml至50ml容量瓶中，用水稀釋定容，可用火焰光度計(jì)測(cè)定。 bCa、Mg的測(cè)定 吸取母液1ml至50ml容量瓶中，加入5%氯化鍶溶液2ml，用去離子水定容，可用原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定 CFe、Mn、Cu、Zn測(cè)定 Fe、Cu、Zn可原液上機(jī)，用原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定，Mn需稀釋5倍上機(jī)3、標(biāo)準(zhǔn)曲線a鉀標(biāo)準(zhǔn)曲線分別吸取100mg/L K標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.5、1.0、2.0、4.0

48、、6.0、8.0、10.0ml于50ml容量瓶中，分別加入1ml或2ml 10%鹽酸，用水定容，即為：0、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0ppm，火焰光度計(jì)測(cè)定。bCa、Mg標(biāo)準(zhǔn)曲線分別吸取50mg/L Ca標(biāo)液，5mg/L Mg標(biāo)液：0、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0至50ml容量瓶，加入2%鹽酸1ml，5%氯化鍶溶液2ml，定容cFe、Mn、Cu、Zn標(biāo)準(zhǔn)曲線Fe標(biāo)線：分別吸取50mg/L Fe標(biāo)液：0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0ml至50ml容量瓶中，加入10%鹽酸10ml，定容，即為：0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0ppm標(biāo)準(zhǔn)系列溶液Mn標(biāo)線：分別吸取50mg/L Mn標(biāo)液：0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0ml至50ml容量瓶，加入10%鹽酸10ml（若樣品稀釋5倍，則至需要加鹽酸2ml），定容Cu標(biāo)線：分別吸取1.0mg/L Cu標(biāo)液0、1.25、2.5、5、7.5、10.0ml至50ml容量瓶中，加入10%鹽酸10ml，定容。Zn標(biāo)線：分別吸取5mg/L Zn標(biāo)液0、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0ml至50ml容量瓶中，加入10%鹽酸10ml，定容。