實驗設(shè)計書3頁

1、【研究題目】肝功能受損對凝血功能的影響【理論依據(jù)及研究現(xiàn)狀】 根據(jù)啟動凝血反應的原因和凝血酶原復合物形成途徑的不同，可將血液凝固分為內(nèi)源性凝血途徑和外源性凝血途徑。內(nèi)源性凝血途徑是指參與凝血過程的全部凝血因子存在于血漿中，而不需要組織因子的參與。本實驗采用頸總動脈取血，血液幾乎未與組織因子接觸，其發(fā)生的凝血過程基本上可以看作是由血漿中凝血因子啟動的內(nèi)源性凝血。內(nèi)源性凝血需多種凝血因子的參與，其中凝血因子、是在肝臟合成的維生素K依賴因子。當肝功能嚴重受損時，此三種凝血因子減少，延長了凝血時間。此時加入人工合成的水溶性維生素K3，雖能促進凝血因子激活，卻無法顯著縮短凝血時間。而加入凝血酶，可促進纖

2、維蛋白多聚體的形成，顯著促進凝血。對照組加入維生素K和凝血酶都將顯著減少凝血時間。 目前維生素K主要用于梗阻性黃疸、膽瘺、慢性腹瀉、早產(chǎn)兒、新生兒出血等患者及香豆素類、水楊酸類藥物或其他原因?qū)е履冈^低而引起的出血者。 凝血酶用于通常止血困難的小血管、毛細血管以及實質(zhì)性臟器出血的止血，也用于創(chuàng)面、口腔、泌尿道以及消化道等部位的止血，還可縮短穿刺部位出血的時間?！狙芯績?nèi)容】 建立肝功能受損模型，頸總動脈取血，并觀察維生素K和凝血酶縮短凝血時間的效果。【實驗對象】 6只家兔【實驗組與對照組的處理】 實驗組進行肝大部分結(jié)扎術(shù)，對照組進行假手術(shù)?！居^察指標】 凝血時間【實驗步驟】1、取體重相近的6

3、只家兔，分兩組進行實驗，并對家兔進行標記和編號。2、兩組均將家兔稱重后，用20%氨基甲酸乙酯按5ml / kg 體重注入兔耳緣靜脈，待家兔麻醉后，仰臥位固定。3、上腹部手術(shù)（1）實驗組：兔131） 減去腹壁正中的被毛。2）上腹正中切口：從胸骨劍突起沿腹白線向下做一6cm長的切口。3）逐層切開，剪開腹膜后，即可見位于右上腹的紅褐色肝臟，向下壓肝，剪斷肝與橫膈之間的鐮狀韌帶。再將肝葉上翻，用手剝離肝胃韌帶。4）用粗絲線結(jié)扎肝左外葉、左中葉、右中葉和方形葉的根部，使之血液阻斷，僅留下右外葉和尾狀葉（由于供應右外葉及尾狀葉的門靜脈血管為獨立分支，不會同時被結(jié)扎，因而得以保留），完成肝大部分結(jié)扎術(shù)。 （

4、2）對照組：兔46 除肝葉不結(jié)扎外，其余操作步驟與實驗組基本相同。 4、頸部手術(shù)：兔16 （1）剪去頸前部兔毛。 （2）沿頸部正中線做一5cm長的切口。（3）分離出一側(cè)頸總動脈，頭端用線接扎阻斷血流，近心端用動脈夾夾閉動脈，在結(jié)扎線下方剪一斜行切口，向心方向插入動脈插管，予以結(jié)扎固定，備取血之用。5、注射（1）兔1及兔4：靜脈注射0.9%生理鹽水2ml/kg。（2）兔2及兔5：取維生素K3 8mg/kg于試管7，并加入0.9%生理鹽水直至2ml，輕輕混勻?；靹蚝箪o脈注射。（3）兔3及兔6：取凝血酶氯化鈉注射液溶解成50200單位ml的溶液，靜脈注射2ml/kg。 6、準備好試管并標記為試管16

5、。 7、取血：兔16 注射完成10分鐘后，放松家兔動脈夾，給對應的6支試管各加血液2ml。每15秒鐘傾斜試管一次，直到血液凝固而不再流動為止。記錄血液凝血時間。【儀器與藥品】家兔急性手術(shù)器械一套、兔固定臺、絲線（1#、7#）頸動脈插管、動脈夾、試管7支、2ml注射器6支。20%氨基甲酸乙酯、維生素K3、凝血酶、0.9%生理鹽水、肝素生理鹽水【預期實驗結(jié)果】1、實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計表 肝功能受損、維生素K3、凝血酶對家兔凝血時間的影響 試管編號 對應家兔實驗處理 凝血時間/秒 1 肝大部分結(jié)扎術(shù)+注射0.9%生理鹽水 2 肝大部分結(jié)扎術(shù)+注射維生素K3-生理鹽水溶液 3 肝大部分結(jié)扎術(shù)+注射凝血酶-生理

6、鹽水溶液 4 肝假手術(shù)+注射0.9%生理鹽水 5 肝假手術(shù)+注射維生素K3-生理鹽水溶液 6 肝假手術(shù)+注射凝血酶-生理鹽水溶液 2、預期結(jié)果（1）實驗組凝血時間皆長于對應對照組（2）凝血時間：兔1>兔2 >兔3 ; 兔4>兔5>兔6【注意事項】1、剪鐮狀韌帶時，謹防刺破肝臟。游離肝臟時，動作宜輕柔，以免肝葉破裂出血。結(jié)扎線應扎于肝葉根部，避免攔腰勒破肝臟。2、動脈插管內(nèi)要充滿肝素生理鹽水，以防動脈插管內(nèi)血液凝固。3、判斷凝血的標準要力求一致。一般以傾斜試管45度角時，試管內(nèi)血液不見流動為準?！緟⒖嘉墨I】 1、龔永生、陳醒言醫(yī)學機能學實驗教程(供臨床口腔檢驗眼視光預防影像麻醉和護理等醫(yī)學類專業(yè)用)；出版社：人民衛(wèi)生出版社；出版日期：2008年01月 2、郭益民生理學課