農(nóng)業(yè)微生物復(fù)習(xí)題

1、顯微鏡的實(shí)用1. 調(diào)節(jié)光照步驟：1.將低倍物鏡旋到鏡筒下方，旋轉(zhuǎn)粗調(diào)螺，使鏡頭和載物臺相距0.5cm左右。2.無菌操作目的：微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但某些細(xì)菌的芽孢即使煮沸12h仍能存活，因此徹底滅菌需要更高的溫度。原理：蒸氣的溫度隨壓力的增加而提高，壓力越大，溫度越高。構(gòu)造：外鍋，熱源，內(nèi)鍋，壓力表，排氣閥，安全閥。操作過程：1. 加水。加水量可從水位玻管處觀察，至要求的水位刻度。2. 裝鍋。將待滅菌物品裝入鍋內(nèi)，不要裝的太緊太滿，留有空隙以利蒸氣流通。3. 蓋上鍋蓋，按對稱位置擰緊螺栓以不漏氣為準(zhǔn)。4. 加熱。接通電源加熱，手提式滅菌鍋可放在電爐上加熱，打開排氣閥。5.排盡冷

2、空氣。從排氣閥開始有蒸氣排出，計時15min，以徹底排盡鍋內(nèi)冷空氣，然后關(guān)閉排氣閥。6.繼續(xù)加熱至所要求的滅菌溫度（或壓力），并維持1530min。7.切斷電源，使其自然冷卻，待壓力退回“0”位時打開排氣閥，然后方可打開滅菌鍋蓋。8.取出鍋內(nèi)物品，若需放置斜面應(yīng)立即擺好。9.如滅菌鍋長期不使用，將夾層水放出，保持鍋內(nèi)清潔。思考題：1. 為什么加壓的蒸氣能提高滅菌效果？升溫使蛋白質(zhì)變性從而殺死微生物。2. 使用高壓蒸汽滅菌應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？物品不要過多，加熱后排除冷空氣，到時降壓回零取物。革蘭氏染色：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫J(rèn)識細(xì)菌的基本形態(tài)及排列方式，掌握細(xì)菌的染色制片技術(shù)。實(shí)驗(yàn)材料：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌

3、 顯微鏡 草酸銨結(jié)晶紫染液革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個步驟，具體操作方法是：1）涂片固定。2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。3）自來水沖洗。4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。5）水洗，用吸水紙吸去水分。6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動進(jìn)行脫色，20秒后水洗，吸去水分。7）蕃紅染色液（稀）染1分鐘后，自來水沖洗。干燥，鏡檢。原理：紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫

4、色；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。革蘭氏染色反應(yīng)的機(jī)理是什么？解釋染色體過程中各步驟的作用？革蘭氏染色的步驟： 結(jié) 晶紫初染、 碘液媒染、 95 乙醇脫色、 紅色染料復(fù)染 4 步 革蘭氏染色的機(jī)制： 革蘭氏染色結(jié)果的差異主要基 于細(xì)菌細(xì)胞壁的構(gòu)造和化學(xué) 組分不同。 通過初染和媒染， 在細(xì)菌細(xì)胞膜或原生質(zhì)體上染上了不溶于水的結(jié)晶 紫與碘 的大分子復(fù)合物。 G + 細(xì)菌由于細(xì)胞壁較厚、肽聚糖含量較

5、高和交聯(lián)緊 密，故用乙醇洗脫時，肽聚糖層網(wǎng)孔會因脫 水而明顯收縮，再加上的 G + 細(xì)菌 細(xì)胞壁基本上不含類脂，故乙醇處理不能在壁上溶出縫隙，因此，結(jié)晶紫與碘復(fù) 合物仍牢牢阻留在其細(xì)胞壁內(nèi)，使其呈現(xiàn)藍(lán)紫色。 G - 細(xì)菌因其細(xì)胞壁薄、肽 聚糖含量低和交聯(lián)松散，故遇乙醇后， 肽聚糖層網(wǎng)孔不易收縮，加上它的類脂含 量高，所以當(dāng)乙醇將類脂溶解后，在細(xì)胞壁上就會出現(xiàn)較大的縫，這樣結(jié) 晶紫與 碘的復(fù)合物就極易被溶出細(xì)胞壁。 因此， 通過乙醇脫色， 細(xì)胞又呈現(xiàn)無色。 這時， 再經(jīng)番紅等紅色染料 復(fù)染， 就使 G - 細(xì)菌獲得了新的顏色 紅色， G + 細(xì) 而 菌則仍呈藍(lán)紫色（實(shí)為紫中帶紅）培養(yǎng)基的制備：實(shí)

6、驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^配制幾類微生物常用的培養(yǎng)基，掌握培養(yǎng)基的配制方法和滅菌。實(shí)驗(yàn)材料：牛肉膏，蛋白胨，葡萄糖，馬鈴薯，可溶性淀粉。天平，稱量紙，燒杯，量筒高壓蒸汽滅菌鍋1. 選擇培養(yǎng)基2. 稱量：根據(jù)配制培養(yǎng)基總量，準(zhǔn)確稱取各成分置于燒杯中。3. 配制：1.先從總量水中，取少量水溶解藥品，遇不易溶解的藥品，加熱溶解。2.對易發(fā)生沉淀的藥品，會產(chǎn)生絮狀沉淀，應(yīng)分開溶解，最后加入培養(yǎng)基。3.馬鈴薯去皮后稱重，切成1CM3左右的小塊，加水煮沸20-30分鐘，用4層紗布過濾后，取其清液供配制用。4.可溶性淀粉先用少量水?dāng)噭?，然后徐徐倒入煮沸的溶液中溶解，邊倒入邊迅速攪勻?.待瓊脂融化后，若水量不足應(yīng)補(bǔ)足至培

7、養(yǎng)基的總體積。如果瓊脂質(zhì)量較好，也可直接按需要量加入，在培養(yǎng)基滅菌時自然融化。4. 調(diào)節(jié)pH值根據(jù)培養(yǎng)菌的要求用1.0mol/L HCL或NaOH溶液調(diào)節(jié)至要求的pH值。5. 分裝1. 配制好的培養(yǎng)基應(yīng)按量分裝，分裝于試管中，量為試管高度的1/5 ，量不應(yīng)超過瓶容量的1/2.2. 加塞3. 包扎 培養(yǎng)基制備過程中應(yīng)注意哪些問題？不同的生物需要不同培養(yǎng)基,注意配方的選取,稱取要準(zhǔn)確,誤差不能太大對于特殊物品,不能滅菌的要用過濾方法除菌配好后高溫高壓滅菌,可以在室溫下放置很久,如果打開使用過一次,請放置冰箱如果長時間不用,一定要重新配置,不能拿以前的用來培養(yǎng),避免污染。名次解釋：芽孢：某些細(xì)菌在起

8、生長發(fā)育后期，在細(xì)胞內(nèi)形成一個圓形成橢圓形，厚壁，含水量極低，抗逆性極強(qiáng)的休眠體。菌株：表示任何一個獨(dú)立分離的單C繁殖而成的純種群體及其一切后代。種：是一個基本分類單位，是一大群表型特征高度相似，親緣關(guān)系極其接近，與同屬內(nèi)其它種有明顯差別的總稱。菌根：真菌在植物根上發(fā)育，菌絲體包圍在根菌或侵入根內(nèi)或根組織，共同發(fā)育建立共生關(guān)系的共生體。放線菌：是介于細(xì)菌和真菌之間的單細(xì)胞微生物：1.細(xì)胞結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成與細(xì)菌同屬原核生物。2.菌體呈纖細(xì)的菌絲且分枝，又以外生孢子的形式繁殖，這些特征又與霉菌相似。病毒：是由一個核酸分子（DNA或RNA）與蛋白質(zhì)構(gòu)成的非細(xì)胞形態(tài)的營寄生生活的生命體。莢膜：有些細(xì)菌在

9、細(xì)胞壁外存在被外多糖，如果其結(jié)構(gòu)較好，不易洗掉則稱之為莢膜。 菌落：單個細(xì)菌（或其他微生物）細(xì)胞或一堆同種細(xì)胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長繁殖到一定程度，形成肉眼可見的子細(xì)胞群落。連續(xù)培養(yǎng)：連續(xù)培養(yǎng)又叫開放培養(yǎng)，是相對分批培養(yǎng)或密閉培養(yǎng)而言的。讓微生物在某特定的環(huán)境中保持旺盛生長狀態(tài)的培養(yǎng)方法. 轉(zhuǎn)化：細(xì)菌轉(zhuǎn)化是一種常見的分子生物學(xué)技術(shù)，通過熱激、冰浴、復(fù)蘇等步驟后，把外源DNA轉(zhuǎn)入細(xì)菌感受態(tài)細(xì)胞，使外源基因在宿主細(xì)菌胞內(nèi)擴(kuò)增、表達(dá)等。轉(zhuǎn)導(dǎo)：由噬菌體將一個細(xì)胞的基因傳遞給另一細(xì)胞的過程。它是細(xì)菌之間傳遞遺傳物質(zhì)的方式之一微生物農(nóng)藥：直接利用細(xì)菌、真菌和病毒等產(chǎn)生的天然活性

10、物質(zhì)或生物活體本身開發(fā)的，對植物病蟲草害進(jìn)行防治的農(nóng)藥。Ti質(zhì)粒：根瘤土壤桿菌細(xì)胞中存在的一種獨(dú)立于染色體之外能自我復(fù)制的環(huán)狀雙鏈DNA分子。 菌苔：細(xì)菌在固體培養(yǎng)基接種線上由母細(xì)胞繁殖長成的一片密集的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)特征的細(xì)菌群落，一般為大批菌落聚集而成。 質(zhì)粒：是一類小型共價閉合環(huán)狀核外DNA，能獨(dú)立于細(xì)胞核進(jìn)行自主復(fù)制?？赏ㄟ^交換摻入細(xì)胞核成為附加體轉(zhuǎn)座因子：在染色體組中或染色體組間能改變自身位置的一段DNA順序，也稱作跳躍基因或可移動基因土壤團(tuán)聚體:由土壤礦物質(zhì)顆粒，微生物，植物殘體以及腐殖質(zhì)構(gòu)成的微團(tuán)聚體經(jīng)過多次復(fù)合和團(tuán)聚而成的結(jié)構(gòu)。光復(fù)活作用：把紫外線照射后的微生物立即

11、暴露于可見光時，可明顯降低其死亡率的現(xiàn)象放線菌：分類學(xué)上，是真菌的一大類群，是介于細(xì)菌和真菌之間的單細(xì)胞微生物立克次氏體：是一類轉(zhuǎn)性寄生于真核細(xì)胞內(nèi)的G-原核生物，是介于細(xì)菌與病毒之間的，接近細(xì)菌的一類原核生物。突變株：能穩(wěn)定存在，可在相應(yīng)的宿主或細(xì)胞中傳代與存貨。感染：病毒入侵機(jī)體并在易感細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖，與機(jī)體發(fā)生相互作用的過程。包涵體形成：有些病毒感染細(xì)胞，在普通顯微鏡下可見胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)圓形或不規(guī)則的斑塊結(jié)構(gòu)。孢囊:形成于孢子囊的孢子根際：指受植物根系活動的影響，在物理、化學(xué)和生物學(xué)性質(zhì)上不同于土體的那部分微域土區(qū)。純培養(yǎng)：在實(shí)驗(yàn)室條件下，由一個微生物細(xì)胞或一種細(xì)胞群繁殖得到的后代（純培養(yǎng)體）生長曲線:細(xì)菌在新的適宜的環(huán)境中生長，繁殖，衰老，死亡的動態(tài)變