消毒劑消毒效果的驗證報告

1、消毒劑消毒效果的驗證組長：*組員：* * * * *編號： 201412151135 版次： 2014 年 第 1 版消毒劑消毒效果的驗證2目錄目錄1概述概述 .31.1 消毒劑.31.2 消毒劑使用說明.32驗證目的驗證目的 .33驗證內(nèi)容驗證內(nèi)容 .44驗證組織驗證組織 .44.1 驗證小組.44.2 驗證委員會.45驗證實施步驟驗證實施步驟 .55.1 驗證前準備.55.2 驗證所需文件資料.55.3 懸液法定量殺滅試驗.65.4 對裸手消毒效果試驗.75.5 消毒劑對佩戴手套后的消毒效果驗證.95.6 消毒劑對物體表面消毒效果驗證.115.7 消毒劑消毒效果驗證結論.156驗證主要依據(jù)

2、驗證主要依據(jù) .157驗證合格標準驗證合格標準 .157.1 判斷標準.157.2 現(xiàn)場考察試驗合格標準.158. 再驗證周期再驗證周期 .15附錄附錄 .16附錄一 驗證方案會審記錄.16附錄二 驗證方案修改申請及批準書.17附錄三 漏項和偏差處理記錄.18附錄四 懸液法定量殺滅試驗記錄.19附錄五 消毒劑對佩戴手套后人員手現(xiàn)場試驗記錄.22消毒劑消毒效果的驗證31概述概述1.1 消毒劑消毒劑的作用原理：破壞細胞膜類，阻斷細胞食物攝取和廢物排泄，鈍化關鍵酶。以下是幾種常用的消毒劑：（1）新潔爾滅(苯扎溴銨)：是一種常用的季銨鹽類消毒劑，在濃度較低時即可有抑菌的作用；當濃度較高時，可以殺滅多種

3、細菌繁殖體和部分的病毒，但是不能殺滅細菌芽孢，屬于低效消毒劑。（2）75%乙醇：適用于一般物體表面消毒以及手和皮膚的消毒，它無法殺滅細菌芽孢和病毒。（3）優(yōu)潔：屬于長效、強效、廣譜殺菌劑，是一種新型消毒劑，其有效成分為復合季銨鹽和六亞甲基四胺，可有效快速地殺滅細菌繁殖體、芽孢、真菌和部分病毒等，各種微生物對其均無抗藥性，抑菌時間較長，可用于一般物體表面消毒，穩(wěn)定性好，無腐蝕性，無毒無害，并且由于殺菌時不受蛋白質及有機物的干擾，故使用衰減周期長，可循環(huán)使用，相對使用成本低。本次驗證以優(yōu)潔消毒劑的殺滅效果為主，同時也可根據(jù)此驗證方案對 75%乙醇、新潔爾滅等消毒劑的殺滅效果進行評價。1.2 消毒劑

4、使用說明對于不同的消毒對象，應使用不同的消毒劑，并制訂消毒程序，消毒程序中應明確規(guī)定：（1）消毒劑的濃度及配制方法；（2）消毒劑使用的條件；（3）消毒使用的設備、設施；（4）消毒操作的詳細步驟；（5）消毒周期；（5）消毒效果的監(jiān)測方法。制訂的消毒程序的消毒效果應經(jīng)過驗證后，才能批準使用。本驗證具體規(guī)定了評價消毒劑消毒效力的生物學檢測方法及其效果評價方法。2驗證目的驗證目的藥品在生產(chǎn)過程中會遭到來自微生物的污染，因此必須要采取一定措施使微生物污染處于受控狀態(tài)或者完全被消除，這就需要對消毒劑消毒效果進行驗證以確定相應的方案來處理這些問題。在對消毒劑進行消毒效果驗證的過程中，主要是要用特定的微生物與

5、消毒劑在規(guī)定的使用濃度下接觸規(guī)定的時間后，對微生物進行培養(yǎng)計數(shù)，考察該消毒劑的消毒效果，確定消毒劑消毒后的最長有效時間，并對消毒劑對微生物的殺滅效果進行評價。確認潔凈區(qū)按照規(guī)定的清潔、消毒程序進行清潔消毒后，能夠達到防止交叉污染的目消毒劑消毒效果的驗證4的，并在消毒有效期內(nèi)能確保達到生產(chǎn)工藝所需要的效果。本次驗證以優(yōu)潔消毒劑的殺滅效果為主，同時也可根據(jù)此驗證方案對75%乙醇、新潔爾滅等消毒劑的殺滅效果進行評價。3驗證內(nèi)容驗證內(nèi)容消毒劑消毒效果驗證包括兩項考察：實驗室考察和現(xiàn)場考察。實驗室考察通常以懸液定量法為主，且試驗須重復3次，而現(xiàn)場考察可用來評估消毒劑對相應設施的實際消毒效果。在消毒劑消毒

6、效果試驗中，消毒方法和消毒對象有很多。常用的方法有：噴灑法，浸泡法，擦拭法等。常見的對象有：皮膚，潔凈區(qū)的地面、墻面，設備表面等。此次試驗我們采用的消毒方法為噴灑法，消毒對象為人員裸手皮膚、人員佩戴無菌手套后的手套表面和物體表面。根據(jù)消毒對象所制定相應的試驗方案有：懸液法定量殺滅試驗、消毒劑對裸手消毒現(xiàn)場試驗、載體噴霧定量殺菌試驗、消毒劑對佩戴手套后的手消毒現(xiàn)場試驗以及消毒劑對物體表面現(xiàn)場鑒定試驗。通過以上幾種試驗來對消毒劑消毒的效果進行驗證。4驗證組織驗證組織4.1 驗證小組表表 4-1 驗證小組及職責驗證小組及職責人員人員部部 門門職職 務務職職 責責組長質保部部門負責人（1）負責成立驗證

7、小組，明確各驗證成員職責（2）負責組織起草驗證方案、驗證記錄和驗證報告（3）負責驗證方案、驗證記錄和驗證報告的審核工作驗證管理員（1）負責起草驗證方案（2）負責對試驗結果進行統(tǒng)計分析（3）負責起草驗證報告質保部質保員（1）負責現(xiàn)場取樣（2）負責驗證過程在線監(jiān)督質檢部部門經(jīng)理（1）負責組織對樣品的檢驗（2）負責驗證所需試劑、試液等的準備。質檢部質檢員（1）負責樣品的檢驗（2）負責檢驗數(shù)據(jù)的收集、整理。部門經(jīng)理負責組織現(xiàn)場操作，確保驗證按進度進行。衛(wèi)生員負責消毒液的配制和發(fā)放。生產(chǎn)部各工序操作人員（1）負責潔凈廠房的清潔（2）負責按消毒程序進行消毒。組員設備部部門經(jīng)理（1）負責儀器、儀表、量具的校

8、正（2）負責驗證所用儀器、設備的安裝、調(diào)試，并做好相應的記錄（3）負責純化水的供給。消毒劑消毒效果的驗證54.2 驗證委員會4.2.1人員組成：由企業(yè)質量副總、生產(chǎn)副總及生產(chǎn)部、質量保證部、質量檢驗部、設備動力部經(jīng)理或主管組成。4.2.2職責：負責驗證方案的審批；負責驗證的協(xié)調(diào)工作，以保證驗證方案的順利實施；負責驗證數(shù)據(jù)及結果的審核；負責驗證報告的審核；負責確定該項驗證的再驗證周期；負責驗證證書的發(fā)放。5驗證實施步驟驗證實施步驟5.1 驗證前準備在進行消毒劑消毒效果驗證前，潔凈廠房空氣凈化系統(tǒng)應經(jīng)驗證合格并正常運行，設備動力部應提供潔凈廠房空氣凈化系統(tǒng)的驗證報告、空氣凈化系統(tǒng)操作程序；與驗證相

9、關的各種設備、儀器均需通過相應驗證，所需儀表、計量器具均需校驗合格并具備校驗證書。5.2 驗證所需文件資料表表5-5-1 驗證所需的文件資料及存放處驗證所需的文件資料及存放處資料名稱資料名稱編號編號存放處存放處活菌數(shù)檢測操作規(guī)程ZL-03-066GMP 辦公室菌落計數(shù)操作規(guī)程ZL-03-070GMP 辦公室培養(yǎng)基配制操作規(guī)程ZL-03-073GMP 辦公室培養(yǎng)基配制、使用管理規(guī)程ZL-03-110GMP 辦公室消毒劑配制操作規(guī)程WS-04-029GMP 辦公室消毒劑的使用操作規(guī)程WS-04-030GMP 辦公室致病菌陽性菌株傳代操作規(guī)程ZL-03-075GMP 辦公室實驗器具清洗操作規(guī)程ZL-

10、03-087GMP 辦公室實驗器具滅菌、消毒及使用操作規(guī)程ZL-03-088GMP 辦公室進出微生物限度實驗室操作規(guī)程ZL-03-259GMP 辦公室CHK 型顯微鏡操作規(guī)程SB-03-153GMP 辦公室厭氧罐操作規(guī)程SB-03-156GMP 辦公室MS1 型振蕩器操作規(guī)程SB-03-381GMP 辦公室BL610 型電子天平操作規(guī)程SB-03-324GMP 辦公室SKP-02B 型電熱恒溫箱操作規(guī)程SB-03-375GMP 辦公室SKP-02B 型電熱恒溫箱清潔規(guī)程SB-03-376GMP 辦公室微生物實驗室清場操作規(guī)程ZL-03-064GMP 辦公室破傷風桿菌檢測操作規(guī)程ZL-03-22

11、0GMP 辦公室DELTA-320PH 計操作規(guī)程SB-03-234GMP 辦公室消毒劑消毒效果的驗證6致病菌陽性菌管理規(guī)程ZL-03-112GMP 辦公室微波爐的操作規(guī)程SB-03-177GMP 辦公室潔凈區(qū)情場操作規(guī)程ZL-03-112GMP 辦公室設備清潔操作規(guī)程SB-03-187GMP 辦公室5.3 懸液法定量殺滅試驗5.3.1 試驗所需要用的試劑中和劑：0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液（0.9%N.S）活菌計數(shù)用培養(yǎng)基：TSA培養(yǎng)基稀釋液：磷酸鹽緩沖液（PBS 0.03mol/L消毒劑配制用水：純化水有機干擾物質5.3.2 試驗所需要用的儀器移液器、電動混勻器、計時器、生化培養(yǎng)箱5.

12、3.3 試驗所需要用的菌種可根據(jù)消毒技術規(guī)范2008年版4“細菌定量殺滅試驗”中指導，本次試驗選擇金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉。再增加車間常見的菌：洋蔥伯克霍爾德菌。5.3.4 試驗所需要用的消毒液的濃度及作用時間根據(jù)優(yōu)潔消毒液說明書建議濃度為1%-3%，作用時間為1-2min，但根據(jù)廠家驗證報告0.1%及0.2%的濃度作用5min和15min也能符合規(guī)定，因此本次試驗濃度選擇0.2%，作用時間選擇2.5min、5min以及7.5min的條件進行確認，又因車間裸手消毒作用時間可能只有30s，故本次試驗同時對0.2%消毒劑作用15s、30s以及45s的條件進行確認

13、。5.3.5 試驗所需要用到的場所微生物實驗室陽性間5.3.6 懸液定量殺菌試驗操作程序（1）菌懸液：濃度為1108cfu/ml-5108cfu/ml（2）消毒液的配制：用純化水按體積比配制濃度為0.2%的消毒液500ml（3）磷酸鹽緩沖液的配制：磷酸鹽緩沖液（PBS 0.03mol/L）稱取無水磷酸氫二鈉2.83g、磷酸二氫鉀1.36g加入到1000ml蒸餾水中，待完全溶解后，調(diào)PH至7.2-7.4，滅菌后使用。（4）有機干擾物質的配制：按30g牛血清白蛋白中加入1000ml蒸餾水的比例配制約100ml，溶解后用0.45um的無菌濾膜進行過濾除菌后使用，未用完的可于2-8冰箱中保存。（5）試

14、驗過程（以濃度為0.2%優(yōu)潔消毒劑對金黃色葡萄球菌作用2.5min為例）試驗組：取無菌大試管加入0.5ml金黃色葡萄球菌菌懸液，再加入0.5ml的有機干擾物質，分別用無菌吸管吸取0.2%的優(yōu)潔消毒液4.0ml，加入試管中，迅速混勻并立即計時。待金黃色葡萄球菌與0.2%的優(yōu)潔消毒液相互作用2.5min時，吸取0.5ml試驗菌與消毒劑的混合消毒劑消毒效果的驗證7液，加于4.5ml經(jīng)滅菌的0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液中，混勻。金黃色葡萄球菌與消毒劑混合液經(jīng)硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液作用10min后，吸取1.0ml樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)測定方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個平皿即可。如果菌液濃度較高時

15、，可進行10倍系列稀釋后，在進行活菌培養(yǎng)計數(shù)，作為試驗組，其計數(shù)結果為CX。陽性對照組：用4.0ml磷酸鹽緩沖液代替4.0ml0.2%的優(yōu)潔消毒液與0.5ml金黃色葡萄球菌菌懸液、0.5ml有機干擾物質混合2.5min后，取0.5ml混合液與4.5ml0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液反應，作用10min后。計數(shù)方法同試驗組，計數(shù)結果為C0。陰性對照組：吸取此次試驗用的純化水0.5ml、0.5ml有機干擾物質、4.0ml磷酸鹽緩沖液混勻，混勻后取0.5ml混合液與4.5ml0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液作用10min后，吸取1.0ml混合液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)測定方法測定存活菌數(shù)，作為陰性對照。培

16、養(yǎng)：所有用細菌試驗的樣品均放入30-35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)48小時觀察結果；用真菌試驗的樣品放入23-28培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)72小時觀察結果。5.3.7 試驗要求作用于不同試驗菌不同作用時間后的消毒效果試驗均須進行3次，每次進行時應注意所用的試劑等物品均應重新配制，防止系統(tǒng)誤差的發(fā)生。5.3.8 活菌計數(shù)結果應換算為對數(shù)值（N）按計算公式殺滅對數(shù)值KL=陽性對照組平均濃度對數(shù)值（N0）-試驗組活菌濃度對數(shù)值（NX） 。計算殺滅對數(shù)值的時候，取小數(shù)點后兩位值，可以進行數(shù)字修約。如果消毒試驗組消毒處理后平均生產(chǎn)菌落數(shù)小于等于1時，其殺滅對數(shù)值，即大于等于試驗前對照組平均活菌濃度的對數(shù)值。5.3.9

17、 判斷標準陰性對照應無菌生長；細菌各次試驗的殺滅對數(shù)值均應5.00，可判斷為對細菌消毒合格；真菌各次試驗的殺滅對數(shù)值為4.00，可判定該產(chǎn)品對真菌污染物消毒合格。5.3.10 試驗記錄附件四附件四 懸液法定量殺滅試驗記錄懸液法定量殺滅試驗記錄 第一次第一次 表表5-25-2第二次第二次 表表5-35-3第三次第三次 表表5-45-45.3.11 試驗結作用于不同試驗菌不同作用時間后的消毒效果試驗進行了3次，且每次試驗結果均符合標準，所以判定0.2%優(yōu)潔消毒劑通過懸液定量殺滅試驗，對細菌、真菌消毒合格。5.4 對裸手消毒效果試驗 5.4.1 試驗所需要用的試劑Rodac 碟培養(yǎng)基平板5.4.2

18、試驗所需要用的儀器計時器、生化培養(yǎng)箱5.4.3 試驗所需要用的消毒液濃度為0.2%的優(yōu)潔消毒劑作用0.5min消毒劑消毒效果的驗證85.4.4 試驗所需要用到的場所抗腫瘤粉針車間5.4.5 試驗的操作程序從車間抽取6名生產(chǎn)人員，均按照標準洗手操作規(guī)程進行洗手，將手烘干，用0.2%的優(yōu)潔消毒劑對雙手進行噴灑消毒，自然晾干，于消毒后的0.5min將一手五指尖在Rodac平板上按壓取樣，于30-35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)三天，觀察最終結果。5.4.6 試驗的判斷標準在消毒劑作用0.5min后6份樣品的菌落數(shù)均須5cfu/皿，可判為合格，本次試驗應重復進行三次，用來判斷該方法是否穩(wěn)定。5.4.7 試驗記錄表表5

19、-55-5 對裸手消毒效果試驗第一次試驗記錄對裸手消毒效果試驗第一次試驗記錄培養(yǎng)時間（培養(yǎng)時間（cfu/皿）皿）試驗人員試驗人員第一天第一天第二天第二天第三天第三天可接受標準可接受標準（cfu/皿）皿）結果判斷結果判斷80010295不合格8002039395不合格80030135合格8004040405不合格8005016145不合格80060245合格QA 左手0000合格QA 右手0000合格表表5-65-6 對裸手消毒效果試驗第二次試驗記錄對裸手消毒效果試驗第二次試驗記錄培養(yǎng)時間（培養(yǎng)時間（cfu/皿）皿）試驗人員試驗人員第一天第一天第二天第二天第三天第三天可接受標準可接受標準（cfu

20、/皿）皿）結果判斷結果判斷8001033315不合格80020865不合格800301001055不合格8004055515不合格8005033365不合格80060435合格QA 左手0000合格QA 右手0000合格表表5-75-7 對裸手消毒效果試驗第三次試驗記錄對裸手消毒效果試驗第三次試驗記錄培養(yǎng)時間（培養(yǎng)時間（cfu/皿）皿）試驗人員試驗人員第一天第一天第二天第二天第三天第三天可接受標準可接受標準（cfu/皿）皿）結果判斷結果判斷800101071055不合格8002060605不合格80030455合格8004063615不合格消毒劑消毒效果的驗證98005036365不合格800

21、6028325不合格QA 左手0000合格QA 右手0000合格5.4.8 試驗結論對車間人員進行了三次（每次6名）裸手消毒試驗，試驗結果顯示基本不符合標準，因此判定0.2%濃度優(yōu)潔消毒劑對人員裸手消毒0.5min試驗不合格。5.5 消毒劑對佩戴手套后的消毒效果驗證5.5.1 無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗 （1）試驗所需要用的試劑中和劑：0.1M 硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液（0.9%N.S） ；活菌計數(shù)用培養(yǎng)基：TSA 培養(yǎng)基；稀釋液：磷酸鹽緩沖液（PBS0.03mol/L） ；消毒劑配制用水：純化水（2）試驗所需要用的儀器刻度吸管、數(shù)字可調(diào)移液器、電動混勻器、計時器、培養(yǎng)箱、無菌手套及無菌剪刀

22、（3）試驗所需要用的菌種本次試驗主要是驗證該消毒劑對手部微生物的消毒效果，故選擇金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌作為試驗菌。（4）試驗所需要用的消毒液的濃度及作用時間濃度為0.2%優(yōu)潔消毒劑作用0.5min（5）試驗所需要用到的場所微生物實驗室陽性間（6）試驗的操作步驟菌懸液：濃度為1108cfu/ml-5108cfu/ml消毒液：用純化水按體積比配制濃度為0.2%的消毒液500ml稀釋液：磷酸鹽緩沖液（PBS0.03mol/L）試驗組:取無菌剪刀從無菌手套上剪取三個手指樣品，大小為10mm10mm以三角形陣列，均勻排布于一塊未沾有任何消毒劑的無菌平皿內(nèi)，逐片滴加10d的金黃色葡萄球菌，

23、必要時用無菌接種環(huán)涂布均勻。使制備后樣品上的菌片濃度在5105cfu/片-5106cfu/片，用0.2%的優(yōu)潔消毒劑對制備好含有金黃色葡萄球菌的樣本進行均勻噴霧，噴霧的距離約為10cm，以盡量使噴到樣本上的霧粒大小和數(shù)量一致。噴霧量以不使樣本濕透、流液為度，計時。待金黃色葡萄球菌與消毒劑相互作用至0.5min，取出樣本1片，放入一含有5.0ml0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液的無菌試管中。將試管用電動混勻器混合20s，使菌片上的細菌被洗脫進入0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液中。吸取1.0ml上述洗液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)法測定存活菌數(shù)，每管接種2個平皿。消毒劑消毒效果的驗證10陽性對照組：取無菌剪刀

24、從無菌手套上剪取3個大小為10mm10mm的手指樣品，均勻排布于一塊未沾有任何消毒劑的無菌平皿內(nèi)，用制備好的符合菌液濃度的金黃色葡萄球菌滴加進去，必要時用涂布棒涂布均勻。用磷酸鹽緩沖液代替0.2%的優(yōu)潔消毒劑對制備好的金黃色葡萄球菌的樣本進行均勻噴霧，噴霧的距離約為10cm，以盡量使噴到樣本上的霧粒大小和數(shù)量一致。噴霧量以不使樣本濕透、流液為度，計時。待金黃色葡萄球菌與磷酸鹽緩沖液相互作用至0.5min，取出樣本1片，放入一含有5.0ml0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液的無菌試管中。將試管用電動混勻器混合20s，使菌片上細菌被洗脫進入0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液中。吸取1.0ml上述洗液，

25、按活菌培養(yǎng)計數(shù)法測定存活菌數(shù)，每管接種2個平皿。陰性對照組：取無菌剪刀從同批無菌手套上剪取三個手指樣品，大小為10mm10mm均勻排布于一塊未沾有任何消毒劑的無菌平皿內(nèi)用。用純化水代替0.2%的優(yōu)潔消毒劑對手套樣本進行均勻噴霧，噴霧的距離約為10cm，以盡量使噴到樣本上的霧粒大小和數(shù)量一致。噴霧量以不使樣本濕透、流液為度，計時。0.5min后取出樣本一片，放入一含5.0ml0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液的無菌試管中。將試管用電動混勻器混合20s。吸取1.0ml上述洗液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管接種2個平皿，作為陰性對照。培養(yǎng)：所有細菌試驗用樣本均在30-35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)至4

26、8h，觀察最終結果；真菌試驗用樣本在23-28培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)至72h，觀察最終結果。（7）試驗要求及計算試驗重復3次，計算各組的活菌數(shù)（cfu/片） ，并換算為對數(shù)值（N） ，然后按計算公式殺滅對數(shù)值KL=陽性對照組平均濃度的對數(shù)值（N0）-試驗組活菌濃度的對數(shù)值（NX）（8）試驗的判斷標準陰性對照組應無菌生長，消毒劑作用于各菌的不同作用時間的殺滅對數(shù)值3.00，即判定結果合格。（9）試驗的記錄表表5-85-8 無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第一次試驗記錄無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第一次試驗記錄驗證菌種驗證菌種C0(cfu/片片)N0CX(cfu/片片)NXKL(N0-NX)接受標準接受標

27、準結果判斷結果判斷金黃色葡萄球菌5.81055.76005.763.00合格大腸埃希菌1.11066.04221.344.703.00合格白色念珠菌5.41044.73004.733.00合格表表5-95-9 無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第二次試驗記錄無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第二次試驗記錄驗證菌種驗證菌種C0 (cfu/片片)N0CX(cfu/片片)NXKL(N0-NX)接受標準接受標準結果判斷結果判斷金黃色葡萄球菌5.81055.76005.763.00合格大腸埃希菌1.11066.04111.045.003.00合格白色念珠菌5.41044.73004.733.00合格表表5-105-

28、10 無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第三次試驗記錄無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第三次試驗記錄驗證菌種驗證菌種C0(cfu/片片)N0CX(cfu/片片)NXKL(N0-NX)接受標準接受標準結果判斷結果判斷金黃色葡萄球菌6.21044.79004.793.00合格消毒劑消毒效果的驗證11大腸埃希菌2.01055.30121.084.223.00合格白色念珠菌2.71044.43004.433.00合格（10）試驗的結論濃度為0.2%優(yōu)潔消毒劑，三次對無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗均符合標準，判定手套載體噴霧定量殺菌試驗合格。5.5.2 消毒劑對佩戴手套后人員手現(xiàn)場消毒試驗（1）試驗所需要用的試劑R

29、odac 碟培養(yǎng)基平板（2）試驗所需要用的儀器計時器、生化培養(yǎng)箱（3）試驗所需要用的消毒液的濃度及取樣時間取5.5.1中符合規(guī)定的消毒劑濃度對人員手套消毒后0.5min、15min、35min分別取樣（4）試驗所需要用到的場所抗腫瘤分針車間或普通分針車間（5）試驗的操作步驟從車間抽取12名生產(chǎn)人員，分別在A級區(qū)安排6名，B級區(qū)安排6名。各自按照標準洗手操作規(guī)程進行洗手，將手烘干。用試驗濃度的優(yōu)潔消毒劑對雙手進行噴灑消毒，自然晾干，分別于消毒后0.5min、15min、35min將五指手指尖在Rodac平板上按壓取樣，取樣后于30-35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)三天，觀察最終結果（0.5min取樣后生產(chǎn)人員對

30、雙手重新進行消毒，之后應盡量模擬生產(chǎn)時的動作進行手部活動。15min取樣后無需重新消毒）（6）試驗的判斷標準在消毒劑作用不同時間后的菌落數(shù)的合格標準見下表5-11，每個時間段的6份樣品必須全部符合標準，才可判斷合格，本次試驗應重復進行三次，用來判斷該方法是否穩(wěn)定。表表5-11 菌落數(shù)的合格標準菌落數(shù)的合格標準潔凈度級別潔凈度級別5 指手套指手套A104cfu/ml）涂抹于不銹鋼設備表面、地面、墻面及呼吸袋，選擇回收率較高的載體作為物體表面消毒效果試驗室部分的試驗載體。判斷標準：回收菌液濃度：103cfu/ml。（1）試驗所需要用的試劑中和劑：0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液（0.9%N.S）活

31、菌計數(shù)用培養(yǎng)基：TSA培養(yǎng)基消毒劑配制用水：純化水（2）試驗所需要用的儀器刻度吸管、移液器、電動混勻器、計時器、培養(yǎng)箱、規(guī)格板（用不銹鋼材料制備，中央留一5.0cm5.0cm的空格作為采樣部位） 、無菌棉簽、無菌接種環(huán)（3）試驗所需要用的菌種本次試驗主要是驗證該消毒劑對物體表面微生物的消毒效果，故選擇金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌作為試驗菌（4）試驗所需要用的消毒液的濃度及作用時間0.2%的優(yōu)潔消毒液作用30s（5）試驗所需要用到的場所微生物實驗室陽性間（6）試驗的操作步驟（以濃度為0.2%的消毒劑對金黃色葡萄球菌作用30s為例）菌懸液：濃度為5105cfu/ml-5106cfu/ml試驗組：取大

32、小合適的無菌呼吸袋作為試驗樣本，將無菌規(guī)格板按壓在樣本上，用無菌棉簽沾以菌懸液均勻涂抹被試驗表面的6區(qū)塊（各區(qū)塊25cm2） 。用0.2%的消毒劑對三個區(qū)塊表面進行噴霧消毒，噴霧的距離約為10cm，以盡量使噴到樣本上的霧粒大小和數(shù)量一致，消毒后，將無菌棉簽在5ml的中和劑試管中沾濕，分別對3個消毒區(qū)塊進行涂抹采樣，每區(qū)塊橫豎往返各8次。采樣后以無菌操作方式將棉簽剪入原中和劑試管中，電動混勻器上混勻20s，吸取1.0ml上述洗液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管接種2個平皿，作為試驗組，必要時進行稀釋。陽性對照組：從6個區(qū)塊中選取其他3個區(qū)塊，用磷酸鹽緩沖液代替消毒劑對三個區(qū)塊表面同法操作，

33、之后將無菌棉簽在5ml的中和劑試管中沾濕，分別對3個區(qū)塊進行涂抹采樣，每區(qū)塊橫豎往返各8次。采樣后以無菌操作方式將棉簽剪入原中和劑中，電動混勻器上混勻20s，吸取1.0ml上述洗液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)法測定存活菌數(shù)，每管接種2個平皿，作為陽性對照組，必要時進行稀釋。陰性對照組：用一只棉簽，分別蘸取同批純化水，以無菌方式將棉簽采樣端剪入0.1M硫代硫酸鈉-生理鹽水溶液中，在混勻器上震蕩20s，做適當稀釋后，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管接種2個平皿，作為陰性對照。培養(yǎng)：所有試驗樣本均在30-35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)48h觀察最終結果。（7）試驗要求及計算試驗須重復三次，計算各組的活菌數(shù)（cfu/

34、片） ，并換算為對數(shù)值（N） ，然后按計算公消毒劑消毒效果的驗證13式殺滅對數(shù)值KL=對照組平均濃度的對數(shù)值（N0）-試驗組活菌濃度對數(shù)值（NX）（8）試驗的判斷標準陰性對照組應無菌生長，陽性對照組菌數(shù)符合要求，所有樣本的殺滅對數(shù)值均3.00，即判定結果合格。（9）試驗的記錄表表5-14 消毒劑對物體表面模擬現(xiàn)場鑒定試驗第一次試驗記錄消毒劑對物體表面模擬現(xiàn)場鑒定試驗第一次試驗記錄驗證菌種驗證菌種C0(cfu/片片)N0CX(cfu/片片)NXKL(N0-NX)可接受標準可接受標準結果判斷結果判斷金黃色葡萄球菌8.11055.91121.084.833.00合格大腸埃希菌8.41055.9200

35、5.923.00合格表表5-15 消毒劑對物體表面模擬現(xiàn)場鑒定試驗第二次試驗記錄消毒劑對物體表面模擬現(xiàn)場鑒定試驗第二次試驗記錄驗證菌種驗證菌種C0(cfu/片片)N0CX(cfu/片片)NXKL(N0-NX)可接受標準可接受標準結果判斷結果判斷金黃色葡萄球菌8.21055.91105.913.00合格大腸埃希菌7.91055.88451.654.233.00合格表表5-16 消毒劑對物體表面模擬現(xiàn)場鑒定試驗第三次試驗記錄消毒劑對物體表面模擬現(xiàn)場鑒定試驗第三次試驗記錄驗證菌種驗證菌種C0(cfu/片片)N0CX (cfu/片片)NXKL(N0-NX)可接受標準可接受標準結果判斷結果判斷金黃色葡萄

36、球菌3.21055.51005.513.00合格大腸埃希菌4.81055.68331.524.163.00合格（10）試驗結論濃度為0.2%優(yōu)潔消毒劑三次物體表面模擬現(xiàn)場鑒定試驗（作用0.5min）均符合標準，故判定合格。5.6.2 消毒劑對物體表面消毒現(xiàn)場鑒定試驗（1）試驗所需要用的試劑Rodac 碟培養(yǎng)基平板、無菌生理鹽水、TSA培養(yǎng)基、純化水（2）試驗所需要用的儀器計時器、培養(yǎng)箱；（3）試驗所需要用的消毒液的濃度及作用時間0.2%的優(yōu)潔消毒劑作用0.5min（4）試驗所需要用到的場所抗腫瘤粉針車間（5）試驗操作的步驟（以彩鋼板為例）選擇抗腫瘤粉針車間的潔凈區(qū)表面的彩鋼板，選擇不易清潔的部

37、位，取一塊潔凈區(qū)醫(yī)用無菌抹布，用試驗濃度的消毒劑，對其表面進行噴灑消毒（按車間消毒規(guī)程進行） 。消毒后，使用Rodac碟進行取樣（對于消毒后的不同時間的采樣，應于首次采樣的部位比較接近）培養(yǎng)：所有試驗樣本均在30-35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)三天觀察最終結果。（6）試驗的判斷標準消毒劑消毒效果的驗證14不同級別區(qū)域內(nèi)的不同消毒對象，每次采樣三個點，本次試驗重復進行3次，結果與下表進行對比，見表5-11。表表5-17 菌落數(shù)的合格標準菌落數(shù)的合格標準潔凈級別潔凈級別表面菌落數(shù)（非地面）表面菌落數(shù)（非地面）表面菌落數(shù)（地面）表面菌落數(shù)（地面）設備表面標準設備表面標準A 級3cfu/皿5cfu/皿1cfu

38、/皿B 級5 cfu/皿5 cfu/皿5 cfu/皿C 級25 cfu/皿25 cfu/皿25 cfu/皿D 級50 cfu/皿50 cfu/皿50 cfu/皿（7）試驗結果的記錄表表5-18 消毒劑對表面消毒現(xiàn)場鑒定試驗第一次試驗記錄消毒劑對表面消毒現(xiàn)場鑒定試驗第一次試驗記錄培養(yǎng)時間采樣區(qū)域及象采樣區(qū)域及象取樣點取樣點第一天第二天第三天判斷標準結果判斷結果判斷取樣點 1000合格取樣點 2000合格（A）級 面取樣點 30003合格取樣點 1002合格取樣點 2001合格（A）級 地面取樣點 30005合格取樣點 1000合格取樣點 2000合格（A）級設備取樣點 3000 1合格取樣點 1

39、000合格取樣點 2000合格（B）級墻面取樣點 30005合格取樣點 1002合格取樣點 2001合格（B）級地面取樣點 30015合格取樣點 1000合格取樣點 2010合格（B）級設備取樣點 30005合格取樣點 1101合格取樣點 2110合格(C)級墻面取樣點 301125合格取樣點 1101合格取樣點 201414合格(C)級地面取樣點 30141425合格取樣點 1100合格取樣點 2110合格(C)級設備取樣點 302325合格(D)級墻面取樣點 133350合格消毒劑消毒效果的驗證15取樣點 2010合格取樣點 3000合格取樣點 1000合格取樣點 2010合格(D)級地面

40、取樣點 300050合格取樣點 1000合格取樣點 2100合格(D)級清洗取樣點 300050合格由于第二次、第三次試驗結果相同，均合格，故此處略去表格。（8）試驗的結論濃度為0.2%優(yōu)潔消毒劑對物體表面消毒（作用0.5min）現(xiàn)場鑒定試驗共進行三次，結果均符合規(guī)定。5.7 消毒劑消毒效果驗證結論經(jīng)過本次確認，濃度為0.2%濃度優(yōu)潔消毒劑可用于車間無菌手套表面和物體表面消毒（作用0.5min） ，0.2%優(yōu)潔消毒劑作用0.5min不可用作人員裸手消毒。 6. 驗證主要依據(jù)驗證主要依據(jù)6.1藥品生產(chǎn)驗證指南（2003年版）6.2消毒技術規(guī)范（2008年版）6.3中國藥典（2010年版）7. 驗

41、證合格標準驗證合格標準7.1 判斷標準在試驗結束后，通過判定標準來確定是否合格，判定標準是：在懸液定量殺滅試驗中，細菌各次試驗的殺滅對數(shù)值均應5.00時，可判定細菌消毒合格；真菌各次試驗的殺滅對數(shù)值均應4.00，可判定真菌污染物消毒合格；在載體定量殺滅試驗中，各次試驗的殺滅對數(shù)值均3.00，可判定消毒合格。7.2 現(xiàn)場考察試驗合格標準表表7-1 菌落數(shù)的合格標準菌落數(shù)的合格標準潔凈級別潔凈級別表面菌落數(shù)（非地面）表面菌落數(shù)（非地面） 表面菌落數(shù)（地面）表面菌落數(shù)（地面）設備表面標準設備表面標準A級3cfu/皿5cfu/皿1cfu/皿B級5 cfu/皿5 cfu/皿5 cfu/皿C級25 cfu

42、/皿25 cfu/皿25 cfu/皿D級50 cfu/皿50 cfu/皿50 cfu/皿消毒劑消毒效果的驗證168. 再驗證周期再驗證周期8.1當消毒劑的使用濃度和清潔消毒程序發(fā)生變更時應進行再驗證。8.2當環(huán)境中出現(xiàn)新類型的微生物時，應以該微生物為挑戰(zhàn)菌進行再驗證。8.3當有新的消毒劑被使用時應進行驗證。附錄附錄附錄一 驗證方案會審記錄會審日期：_年_月_日驗證方案名稱驗證方案編號姓 名部 門職 務會審意見修改內(nèi)容質量副總同意 不同意生產(chǎn)副總同意 不同意質保部部門負責人同意 不同意質保部質保員同意 不同意消毒劑消毒效果的驗證17質檢部部門主管同意 不同意生產(chǎn)二部部門經(jīng)理同意 不同意設備部部門

43、經(jīng)理同意 不同意附錄二 驗證方案修改申請及批準書驗證方案名稱驗證方案編號修改內(nèi)容修改原因及依據(jù)消毒劑消毒效果的驗證18修改后方案起草人_部門經(jīng)理_ 年 月 日 驗證委員會審批驗證委員會：年 月 日 附錄三 漏項和偏差處理記錄驗證方案名稱驗證方案編號漏項和偏差內(nèi)容漏項和偏差原因消毒劑消毒效果的驗證19漏項和偏差修改后內(nèi)容驗證委員會審批附錄四 懸液法定量殺滅試驗記錄表表5-25-2 懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記錄懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記錄驗證菌種驗證菌種作用時間作用時間C0(cfu/ml)N0Cx(cfu/ml)NxKL(N0-Nx)接受標準接受標準判斷標準判斷標準15s006.43合格3

44、0s006.43合格45s006.43合格2.5min006.43合格5min006.43合格金黃色葡萄球菌7.5min2.71066.43006.435.00合格15s006.67合格30s006.67合格45s006.67合格2.5min006.67合格5min006.67合格大腸埃希菌7.5min4.71066.67006.675.00合格15s106.49合格30s301.485.01合格45s20.306.19合格2.5min006.49合格銅綠假單胞菌5min3.1 1066.49006.495.00合格消毒劑消毒效果的驗證20表表5-35-3 懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記錄懸液

45、法定量殺滅試驗第一次試驗記錄驗證菌種驗證菌種作用時間作用時間C0 (cfu/ml)N0Cx(cfu/ml)NxKL(N0-Nx)接受標準接受標準判斷標準判斷標準15s006.36合格30s006.36合格45s006.36合格2.5min006.36合格5min006.36合格金黃色葡萄球菌7.5min2.31066.36006.365.00合格15s006.75合格30s006.75合格45s006.75合格2.5min006.75合格5min006.75合格大腸埃希菌7.5min5.61066.75006.755.00合格15s006.72合格30s006.72合格45s006.72合格2

46、.5min006.72合格5min006.72合格銅綠假單胞菌7.5min5.2 1066.72006.725.00合格7.5min006.49合格15s006.57合格30s006.57合格45s006.57合格2.5min006.57合格5min006.57合格洋蔥伯克霍爾德菌7.5min3.71066.57006.575.00合格15s005.45合格30s005.45合格45s005.45合格2.5min005.45合格5min005.45合格白色念珠菌7.5min2.81055.45005.454.00合格15s004.34合格30s20.304.04合格45s004.34合格2.5

47、min004.34合格5min004.34合格黑曲霉7.5min2.21044.34004.344.00合格陰性對照組00合格消毒劑消毒效果的驗證2115s006.15合格30s006.15合格45s006.15合格2.5min006.15合格5min006.15合格洋蔥伯克霍爾德菌7.5min1.41066.15006.155.00合格15s005.32合格30s005.32合格45s005.32合格2.5min005.32合格5min005.32合格白色念珠菌7.5min2.11055.32005.324.00合格15s004.34合格30s20.304.04合格45s004.34合格2.5min004.34合格5min004.34合格黑曲霉7.5min2.21044.34004.344.00合格陰性對照組00合格表表5-45-4 懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記錄懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記