烤煙葉對(duì)鯽魚的毒性研究

1、    烤煙葉對(duì)鯽魚的毒性研究    王春勇+劉開潤+王翠蓮+張映芬+徐紅星+張四春+夏黎亮摘要 采用靜態(tài)生物毒性試驗(yàn)方法研究廢棄烤煙葉對(duì)鯽魚的急性毒性，為養(yǎng)殖戶提供一個(gè)參考的使用濃度。結(jié)果表明，水溫20 時(shí)，采用浸泡法的烤煙葉對(duì)148 g鯽魚的96 h lc50為132.71 g/m3，安全濃度為13.3 g/m3；用掛袋法的烤煙葉對(duì)148 g鯽魚的96 h lc50為118.84 g/m3，安全濃度為11.9 g/m3，對(duì)25.3 g鯽魚的96 h lc50為104.23 g/m3，安全濃度為10.4 g/m3。關(guān)鍵詞 鯽魚；烤煙葉；半數(shù)致死濃度；安

2、全濃度；浸泡法；掛袋法s942 b 1007-5739（2017）11-0222-02toxicity study of flue-cured tobacco leaves on carassius auratuswang chun-yong 1 liu kai-run 1 wang cui-lian 1 zhang ying-fen 1 xu hong-xing 2 zhang si-chun 3 xia li-liang 4 *（1 tonghai county aquatic workstation in yunnan province，tonghai yunnan 652700； 2

3、yuxi city hongta district reservoir management office； 3 jiang chuan fishery technology extension station in yuxi city； 4 yuxi city aquatic workstation）abstract the static biotoxicity test method was applied to research acute toxicity to carassius auratus of waste flue cured tobacco in order to prov

4、ide a reference concentration for farmers.the results showed that when the water temperature was 20 ，the 96 h lc50 of flue cured tobacco by soaking method on 148 g carassius auratus was 132.71 g/m3，the safe concentration was 13.3 g/m3.the 96 h lc50 of flue cured tobacco by hang bag method on 148 g c

5、arassius auratus was 118.84 g/m3，safe concentration was 11.9 g/m3，the 96 h lc50 on 25.3 g carassius auratus was 104.23 g/m3，and the safe concentration was 10.4 g/m3.key words carassius auratus；flue cured tobacco；lc50；safe concentration；soaking method；hang bag method等級(jí)外的廢棄烤煙葉能有效預(yù)防和治療魚類細(xì)菌性疾病1和殺滅魚體寄生蟲2

6、，防治魚病方法簡便、成本低廉，在漁業(yè)生產(chǎn)上應(yīng)用比較廣泛，使用劑量、方法盡管有許多參考，如潑灑（0.25 g/m31）、掛袋（扎成小捆堆放在進(jìn)水口處3），但養(yǎng)殖戶在實(shí)際應(yīng)用中劑量使用隨意性較強(qiáng)，用量過大造成養(yǎng)殖魚類死亡的事件時(shí)有發(fā)生。為了給養(yǎng)殖戶提供一個(gè)極限的劑量參考值，減少養(yǎng)殖戶超劑量使用造成的損失，通海縣水產(chǎn)工作站選擇不同規(guī)格的鯽魚，采用浸泡和掛袋2種給藥方式，開展了等級(jí)外廢棄烤煙葉對(duì)鯽魚的毒性試驗(yàn)研究。1 材料與方法1.1 試驗(yàn)材料1.1.1 試驗(yàn)魚缸。試驗(yàn)魚缸6個(gè)，規(guī)格：長×寬×高為1.2 m×0.6 m×0.7 m。1.1.2 恒溫棒。柏卡樂牌自

7、動(dòng)恒溫棒，額定電壓220240 v，額定頻率5060 hz，額定功率500 w，用于恒定試驗(yàn)過程中試驗(yàn)水體溫度，保證各試驗(yàn)水體水溫一致。1.1.3 增氧設(shè)備。松寶sb-988增氧泵，額定電壓220240 v，額定頻率5060 hz，額定功率12 w，出氣量4×4 l/min。使用增氧泵是為了使試驗(yàn)過程中試驗(yàn)水體有充足的溶氧，保證試驗(yàn)魚不受缺氧干擾意外死亡。1.1.4 試驗(yàn)水源。試驗(yàn)水源采用飲用自來水。1.1.5 供試魚類。品種為2齡鯽魚，平均尾重（148±5）g；1齡鯽魚魚苗，平均尾重（25.3±2.0）g。1.1.6 供試烤煙葉。試驗(yàn)用烤煙葉為去年收集的當(dāng)年廢棄

8、的等級(jí)外烤煙葉，收集后用塑料袋密封保存。1.1.7 電子天平。稱量用電子天平為上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的fb224電子天平，技術(shù)參數(shù)為max：220 g、e：1 mg、min：0.01 g、d：0.1 mg；電源：dc 12 v 1 000 ma；功耗：12 va。1.2 試驗(yàn)方法相同水源水質(zhì)、相同水溫條件下，利用同一品種不同規(guī)格、同一規(guī)格不同給藥方法，在不同濃度梯度下進(jìn)行試驗(yàn)。1.2.1 試驗(yàn)水質(zhì)處理。試驗(yàn)的前1 d把自來水分別注入試驗(yàn)的6個(gè)魚缸，放入恒溫棒，把溫度調(diào)節(jié)到22 ，同時(shí)向每個(gè)試驗(yàn)魚缸中放入2個(gè)增氧泵氣石，并打開增氧泵，進(jìn)行曝氣，消除自來水中殘留的有效氯，每次試驗(yàn)前統(tǒng)一曝

9、氣12 h。 1.2.2 烤煙葉給藥方法。浸泡法：在試驗(yàn)前把烤煙葉浸泡在水中一段時(shí)間后，過濾除去烤煙葉，用水溶液對(duì)148 g 2齡鯽魚進(jìn)行毒性試驗(yàn)。浸泡方法是按110的比例浸泡，把500 g烤煙葉放入5 000 g的水中浸泡24 h，過濾后及時(shí)使用。試驗(yàn)設(shè)計(jì)濃度為120、126、131、136、141、146 g/m3。掛袋法：把烤煙葉裝入袋子中，直接放入試驗(yàn)魚缸，對(duì)148 g 2齡鯽魚和25.3 g 1齡鯽魚進(jìn)行毒性試驗(yàn)，此種方法簡單方便，在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用廣泛。方法為用40目篩網(wǎng)制作成15 cm×20 cm的袋子，根據(jù)梯度濃度計(jì)算烤煙葉用量，稱量后放入袋子直接放入魚缸。為保證藥袋及

10、時(shí)沉入水中，在藥袋中放入一小石塊。試驗(yàn)設(shè)計(jì)濃度分別為106、111、116、121、126、131 g/m3和91、96、101、106、111、116 g/m3。1.2.3 烤煙葉加工。因?yàn)槊看卧囼?yàn)，每一個(gè)試驗(yàn)魚缸使用的烤煙葉數(shù)量較小，為了減少烤煙葉質(zhì)量差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，在試驗(yàn)之前把烤煙葉人工切割加工成2 cm×2 cm的烤煙葉碎塊，再把加工好的烤煙葉碎塊混合攪拌均勻，然后裝入大塑料袋密封待用。1.2.4 增氧。使用雷磁jpb-607a型溶解氧測(cè)定儀，定期測(cè)定試驗(yàn)水體含氧量并及時(shí)增氧，使溶解氧保持在56 mg/l之間。1.2.5 試驗(yàn)實(shí)施。預(yù)備試驗(yàn)：從7.5 g/m3開始通過1

11、4個(gè)梯度找出了鯽魚出現(xiàn)死亡及全部死亡的濃度范圍。正式試驗(yàn)：根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果按相等間距梯度開展烤煙葉對(duì)鯽魚的毒性試驗(yàn)，每個(gè)魚缸水量0.4 m3、魚數(shù)10尾，水溫22 ，試驗(yàn)觀察時(shí)間96 h，統(tǒng)計(jì)死亡數(shù)量，用bliss法計(jì)算lc50值。試驗(yàn)中定期監(jiān)測(cè)水溫和溶解氧，使水溫保持22 ，溶解氧保持在56 mg/l之間。1.3 評(píng)價(jià)計(jì)算方法1.3.1 半數(shù)致死量計(jì)算（bliss法）。試驗(yàn)中半致死量的計(jì)算是采用半致死量（lc50）bliss法的評(píng)價(jià)與計(jì)算4，通過bliss法分別計(jì)算出烤煙葉對(duì)鯽魚的96 h lc5、96 h lc50、96 h lc95值。1.3.2 安全濃度計(jì)算。安全濃度計(jì)算是根據(jù)blis

12、s法得出的烤煙葉對(duì)鯽魚的96 h lc50（半致死濃度），按照安全濃度（satfety concentration，sc）經(jīng)驗(yàn)公式，即安全濃度（sc）=96 h lc50×0.1，計(jì)算出試驗(yàn)烤煙葉對(duì)鯽魚的安全濃度。2 結(jié)果與分析2.1 規(guī)格為148 g 2齡鯽魚浸泡法試驗(yàn)采用浸泡法，對(duì)平均尾重為148 g的2齡鯽魚開展烤煙葉浸泡溶液毒性試驗(yàn)，結(jié)果見表1。根據(jù)浸泡法不同濃度對(duì)平均尾重為148 g的2齡鯽魚進(jìn)行攻毒試驗(yàn)后得出的死亡情況，按照bliss法計(jì)算96 h lc5、96 h lc50、96 h lc95值，并根據(jù)安全濃度經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算安全濃度。回歸方程y（probit）=-80.0

13、25+40.051 log（d）。半數(shù)致死量lc50=132.71 g/m3，lc50（feiller校正）95%的可信限為129.36136.94 g/m3，lc5=120.74 g/m3，lc95=145.87 g/m3，安全濃度sc=13.3 g/m3。2.2 規(guī)格為148 g 2齡鯽魚掛袋法試驗(yàn)采用掛袋法，對(duì)平均尾重為148 g的二齡鯽魚開展烤煙葉浸泡溶液毒性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見表2。根據(jù)掛袋法不同濃度對(duì)平均尾重為148 g的2齡鯽魚進(jìn)行攻毒試驗(yàn)后得出的死亡情況，按照bliss 法計(jì)算96 h lc5、96 h lc50、96 h lc95 值，并根據(jù)安全濃度經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算安全濃度?；貧w方程

14、y（probit）=-70.14+36.213 log（d）。半數(shù)致死量lc50=118.84 g/m3，lc50（feiller校正）95%的可信限為115.64122.11 g/m3，lc5=107.03 g/m3，lc95=131.94 g/m3，安全濃度sc=11.9 g/m3。2.3 規(guī)格為25.3 g 1齡鯽魚掛袋法試驗(yàn)采用掛袋法，對(duì)平均尾重為25.3g的1齡鯽魚開展烤煙葉浸泡溶液毒性試驗(yàn)，結(jié)果見表3?；貧w方程y（probit）=-64.753+34.566 log（d）。半數(shù)致死量lc50=104.23 g/m3，lc50（feiller校正）95%的可信限為101.21107.

15、34 g/m3，lc5=93.409 g/m3，lc95=116.3 g/m3，安全濃度sc=10.4 g/m3。2.4 不同給藥方式、不同規(guī)格鯽魚的lc5、lc50、lc95及安全濃度值對(duì)比不同給藥方式、不同規(guī)格鯽魚的lc5、lc50、lc95及安全濃度值對(duì)比見圖1。不同給藥方式、不同規(guī)格的鯽魚，其lc5、lc50、lc95各不相同。同一給藥方式（掛袋法），魚體規(guī)格越小其耐藥性越低，即隨著魚體規(guī)格的變小，烤煙葉對(duì)鯽魚的毒性96 h內(nèi)致死濃度、半致死濃度、全部死亡濃度及安全使用濃度逐步降低；相同魚體規(guī)格浸泡法烤煙葉對(duì)鯽魚的96 h內(nèi)致死濃度、半致死濃度、全部死亡濃度及烤煙葉安全使用濃度大于掛袋

16、法。3 結(jié)論與討論3.1 在穩(wěn)定的試驗(yàn)環(huán)境下，不同規(guī)格鯽魚、不同給藥方式的96 h lc50值各不相同當(dāng)水溫維持在（22.0±0.2），溶解氧為56 mg/l時(shí)，浸泡法148 g 2齡鯽魚的96 h lc50為132.71 g/m3，96 h lc5為（下轉(zhuǎn)第226頁）（上接第223頁）120.74 g/m3，96 h lc95為145.87 g/m3；掛袋法148 g 2齡鯽魚的96 h lc50為118.84 g/m3，96 h lc5為107.03 g/m3，96 h lc95為131.94 g/m3；25.3 g 1齡鯽魚的96 h lc50為104.23 g/m3， 96

17、h lc5為93.41 g/m3，96 h lc95為116.3 g/m3。3.2 小規(guī)格魚體的耐藥性低于大規(guī)格魚體采用相同的給藥方法（掛袋法），發(fā)現(xiàn)148 g 2齡鯽魚的96 h lc50值（118.84 g/m3）大于1齡鯽魚的96 h lc50值（104.23 g/m3），說明小規(guī)格鯽魚對(duì)烤煙葉的耐藥性低于大規(guī)格鯽魚5-6。3.3 浸泡法96 h lc50值大于掛袋法相同規(guī)格的鯽魚（148 g 2齡鯽魚），采用浸泡法其96 h lc50為132.71 g/m3；采用掛袋法，其96 h lc50為118.84 g/m3，浸泡法96 h lc50值大于掛袋法的96 h lc50值。因?yàn)榻輹r(shí)烤煙葉與水的比例為110，藥物有效成分不能全部釋放在水中，還有部分殘留在烤煙葉中，導(dǎo)致不同給藥方式的96 h lc50值不一致。3.4 不同給藥方式、不同規(guī)格鯽魚的安全濃度水溫在（22.0±0.2）、溶解氧在56 mg/l之間時(shí)，浸泡法148 g 2齡鯽魚的安全濃度為13.3 g/m3；采用掛袋法的148 g 2齡鯽魚安全濃度為11.9 g/m3，25.3 g