探討麥芽醇對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后NO的影響

1、探討麥芽醇對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后NO的影響摘要：目的 觀察麥芽醇對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后 NO的影響。方法 建立大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞 （ MCAO）再灌注模型， 應(yīng)用亞硝酸鹽還原法測(cè)定腦組織中NO的含量。結(jié)果 腦缺血再灌注損傷后，腦組織中 NO水平異常增高，給予麥芽醇后， NO水平明顯下降。結(jié)論 麥芽醇可抑制 NO水平，對(duì)腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用。關(guān)鍵詞：麥芽醇；腦缺血再灌注；一氧化氮；大鼠腦缺血再灌注損傷實(shí)質(zhì)是一個(gè)涉及多方面因素的復(fù)雜的病理生理過(guò)程。NO作為一種神經(jīng)毒性分子， 可通過(guò)與超氧化物陰離子結(jié)合形成過(guò)氧化亞硝酸鹽，以及通過(guò)干擾鐵離子代謝促進(jìn)氧化損害在腦缺血再灌注損傷中發(fā)揮著重

2、要的作用。麥芽醇是從紅參中提取的單體化合物， 其在體內(nèi)外可與自由基結(jié)合， 對(duì)腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用 1 ，2 。為了深入研究麥芽醇抗腦缺血的機(jī)制， 本實(shí)驗(yàn)觀察了麥芽醇對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后 NO的影響。1 材料與方法試驗(yàn)動(dòng)物和分組成年健康雄性 SD大鼠 36 只，體質(zhì)量 230280g，清潔級(jí)，武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院試驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 隨機(jī)分為對(duì)照組、 缺血再灌注組和麥芽醇組， 每組12 只。MCAO及再灌注模型的建立參照 Koizumi 等方法制作大鼠左側(cè) MCAO及再灌流模型。 采用 10水合氯醛（ /100g ）麻醉 , 術(shù)中維持動(dòng)物肛溫 ( ±) ，頸部正中切口，分離

3、并結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈 , 注意避免刺激迷走神經(jīng)。從頸總動(dòng)脈分叉處插入號(hào)絲線 ,沿頸內(nèi)動(dòng)脈進(jìn)入距頸總動(dòng)脈分叉處略感阻力時(shí)停止， 30min 后拔出絲線缺血再灌流 24h。術(shù)后在約 20的空調(diào)環(huán)境下單籠飼養(yǎng), 自由進(jìn)食、進(jìn)水。對(duì)照組只暴露血管。麥芽醇給藥參考有關(guān)文獻(xiàn)，麥芽醇組分別在缺血前和缺血后30min 經(jīng)尾靜脈注射2ml 700 mol/L 麥芽醇生理鹽水。腦組織 NO含量測(cè)定再灌流 24h 后動(dòng)物處死，取出全腦迅速置于冰盤(pán)上， 分離左側(cè)海馬及皮質(zhì)缺血中心區(qū)，分別稱(chēng)重，后置于勻漿機(jī)上制成10%的腦勻漿， 3000r/min 離心10min，取上清液作檢測(cè)標(biāo)本。檢測(cè)標(biāo)本加55nm NaO

4、H和 1ml 75nm ZnSO4溶液混勻，靜置10min，3000r/min離心5min，取上清液，再加甘氨酸緩沖液1ml，混勻后加進(jìn)4g 活化鎘，放置90min 后取1ml，加進(jìn)1%黃胺和%的萘基乙二胺鹽酸顯色，靜置反應(yīng)20min，用 721 分光光度計(jì)，以 =546nm，靈敏度 1，空白調(diào) 0，測(cè) OD值。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差( ±s) 表示。采用SPSS 統(tǒng)計(jì)軟件處理。各組組間差異比較采用t檢驗(yàn) ,以 P< 為差異有顯著性。2結(jié)果腦缺血再灌注 24h 后，缺血再灌注組皮層、海馬的 NO含量異常升高，與正常對(duì)照組相比有顯著性差異 (P<)

5、；麥芽醇組皮層、海馬的 NO含量明顯下降，與缺血再灌組比較有顯著性差異 (P<), 見(jiàn)表 1。表 1 3 組大鼠皮層、海馬亞硝酸鹽 OD值的比較與對(duì)照組比較， *P<；與缺血再灌注組比較， P<3討論NO是一種自由性質(zhì)的氣體，為較小的生物活性分子，可自由穿過(guò)細(xì)胞膜，作用于細(xì)胞內(nèi)的靶分子。在生物體內(nèi)， NO生成后很快被氧化，以硝酸根和亞硝酸根的形式存在于細(xì)胞的內(nèi)外液中，使 NO失去生物學(xué)活性。低濃度的 NO能使血管擴(kuò)張，抑制血小板集聚與粘附，使谷氨酸調(diào)控的離子通道下調(diào) , 防止細(xì)胞內(nèi)鈣超載，因而對(duì)細(xì)胞有保護(hù)作用；但在高濃度下， NO可與超氧陰離子反應(yīng)生成超氧亞硝酸根離子， 超氧

6、亞硝酸根離子可以降解為 OH-和 NO2-自由基，使細(xì)胞膜發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化作用， 在細(xì)胞的膜水平造成強(qiáng)烈的神經(jīng)毒性， 甚至導(dǎo)致神經(jīng)元死亡等 5 ，6 。研究表明 NO在腦缺血性損傷的發(fā)病中起重要作用，缺血后數(shù)分鐘 NO含量明顯增高 , 之后緩慢下降，于再灌注期 NO再次升高。 NO含量增加的機(jī)制可能為： 腦缺血后神經(jīng)元受損， 細(xì)胞膜去極化過(guò)程增強(qiáng)， 突觸前谷氨酸等興奮性氨基酸生成大量增加，使細(xì)胞外谷氨酸濃度升高，激活甲基天門(mén)冬氨酸 (NMDA)受體， NMDA受體激活后使突觸后 Ca2+內(nèi)流增加，激活 NOS，促進(jìn)NO的生成；再次，腦缺血后， ATP大量消耗，使能量代謝障礙及 cAMP依賴(lài)蛋性白

7、激酶活性下降，使 NOS脫磷酸化， NOS的活性增強(qiáng)，促進(jìn) NO的生成。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果表明，大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后，腦組織中NO含量顯著增加，說(shuō)明NO參與了腦缺血再灌注損傷的發(fā)病機(jī)制，給予麥芽醇治療后， NO含量明顯下降。表明麥芽醇對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用與其對(duì)NO生成含量的調(diào)節(jié)有關(guān)，我們推測(cè)麥芽醇對(duì) NO生成的關(guān)鍵酶 NOS也進(jìn)行調(diào)節(jié)，麥芽醇通過(guò)對(duì) NOS活性和 NO含量進(jìn)行調(diào)節(jié)從而發(fā)揮腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，詳細(xì)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。【參考文獻(xiàn)】高艷，戴冀斌，李應(yīng)續(xù) . 麥芽醇對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)元凋亡的影響 J.咸寧學(xué)院學(xué)報(bào) ( 醫(yī)學(xué)版 ), 20XX,21(

8、01):4甘云波 , 胡松林 , 王亞威 . 麥芽醇治療大鼠不完全性腦缺血再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)研究 J. 咸寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) , 20XX,15(01):14Koizumi J, Yoshida Y, Nakazawa T,et studies of ischemic brain edema:anew experimentalmodel of cerebralembolism in ratsin which recirculationcan be introduced in the ischemia areaJ.Jpn J Stroke,1986,8:1 Bertholf RL,Herman MM,Savory J,et longterm intravenous model aluminum maltol toxicity in rabbits: tissuedistribution,hepatic,rental and neuronal cytokeletal changes associated with sys