過(guò)氧化氫酶(catalaseCAT)測(cè)定試劑盒(可見(jiàn)光法)南京建成

1、本試劑盒僅用于科硏、實(shí)驗(yàn)空南京 it 成 #本試劑盒僅用于科硏、實(shí)驗(yàn)空南京 it 成 過(guò)氧化氫酶(Catalase CAT)測(cè)定試劑盒(可見(jiàn)光法)一原理：過(guò)氧化氫酶(CAT)分解H2O2的反應(yīng)可通過(guò)加入鋁酸錢(qián)而迅速中止，剩余的H2O2與 鉗酸餃作用產(chǎn)生一種淡黃色的絡(luò)合物.在405nm處測(cè)定其生成lit可計(jì)算出CAT的活力二、試劑組成與配制：(lOOTube)試劑一：液體100ml X 1瓶.49保存6個(gè)月。試劑二：底物液體lOmIX 1瓶，4匸保存6個(gè)月試劑三：顯色粉劑一瓶，4C保存6個(gè)月.臨用前加蒸堰水至100ml溶解，4C保存1個(gè)月。 試劑四：液體lOmIX 1瓶，4弋保存6個(gè)月。天冷時(shí)會(huì)

2、凝固，臨用前須熱水浴至試劑透明方 可使用三、操作：C-X血清(漿)的檢測(cè):1、操作表：對(duì)照管測(cè)定管血清(漿)(ml)0試劑一(37匸預(yù)溫)(ml)1.01.0試劑二(37'C預(yù)溫)(ml)00混勻.37C準(zhǔn)確反應(yīng)1分鐘(60彳試劑三(mi)1.01.0試劑四(ml)00血消(漿)(ml)0混勻，o5cm光徑，405nm處，蒸憾水調(diào)零，測(cè)各管吸光度。2、血清中的過(guò)氧化氫酶活力的計(jì)算(2X冥樣本測(cè)試前X稀釋倍數(shù)定義：每亳升血清或血漿每秒鐘分解lgmol的H2O2的:&為一個(gè)活力單位 公式：=(對(duì)照管OD值-測(cè)定管OD值” 271"-60 x取樣顯注： 271為斜率的倒數(shù)(

3、3X計(jì)算舉例:血清中C4卩活力(U/ml)取血淸0lml作CAT活力測(cè)定，測(cè)得對(duì)照管的吸光度為0. 720,測(cè)定管吸光度 為0.675,則計(jì)算結(jié)果為：U/ml=(0.720 - 0.675) x271x ： x 1 = 2.0360 X 0為方便操作，您可將測(cè)試前的準(zhǔn)備工作做好.編好試管.加入樣本0.1ml及試劑一 lmb 然后將所有的管子均放入379水浴箱中預(yù)溫3-5分鐘.鴻試時(shí).管中加入試劑二O.lmb同時(shí) 準(zhǔn)確記時(shí).并立即混勻.放入37水浴中.當(dāng)反應(yīng)到1分鐘時(shí)立即加入顯色劑終止反應(yīng).混勻. 依次再測(cè)第二、第三對(duì)照管和測(cè)定管.毎次均要將對(duì)照管及測(cè)定臂同時(shí)測(cè)定.（-X 1 : 99的溶血液檢

4、測(cè)：1、1 ： 99溶血液的制備：収50gl全血加蒸館水至5ml充分混勻后放進(jìn)10分鐘，待測(cè)。試劑三（ml）|1.0|10|混勻，0.5cm405mii處，蒸諸水誠(chéng)零，測(cè)各管吸光度。血紅貴白中過(guò)氧化氫酶活力的計(jì)算:（1人定義：每毫克血紅蛋白每秒鐘分解Igmo!的H2O2的赧為一個(gè)活力單位。 （2X公式：3、溶血液中C7活力W/mgHb）（空白對(duì)照管0嗆自少對(duì)mODffi -測(cè)定管ODttt）x27宀1 血紅蛋白含量 60* 取樣壓（mgHb! ml）2、操作表：空白對(duì)照管測(cè)定管白身對(duì)做管蒸惚水（ml）.0.0521 : 99溶血液(ml)0.050.05試劑一（379預(yù)溫）（ml）1.01.0

5、試劑二（37C碩溫）（ml）00混勻，37X?準(zhǔn)確反應(yīng)1分鐘（60秒3本試劑盒僅用于科硏、實(shí)驗(yàn)空南京 it 成 注，* 271為斜率的倒數(shù)（3）、計(jì)算舉例：取1 ： 99小鼠溶血液0.05ml進(jìn)行CAT檢測(cè)，測(cè)得空白對(duì)照管吸光度為0.569,自身對(duì)照管吸光度為0.105,測(cè)定管吸光度為0.516.同時(shí)測(cè)得1 : 99溶血液的血紅蛋白含溶血液中CT活力（UlmgHb）敬為l324mgHb/mh則計(jì)算結(jié)果為:(0.569 + 0.105-0.516)x27lx+1.324 = 10.78 U/mgHb（三）、組織勻漿的檢測(cè)：1、組織勻漿的制備：準(zhǔn)確稱(chēng)取組織碇此 加9倍生理鹽水制成10%的組織勻漿，

6、2500轉(zhuǎn) /分離心10分鐘，取上淸，再用生理鹽水稀釋成最佳取樣濃度，待測(cè)（最佳取樣濃度摸 索見(jiàn)附錄）。2. 操作表：對(duì)照管測(cè)定管組織勻漿（ml）0.05試劑一（37C預(yù)溫）（ml）1.01.0試劑二（37預(yù)溫（ml）00混勻，37弋準(zhǔn)確反應(yīng)1分鐘（60彳少）試劑三（ml）1.01.0試劑四（ml）00組織勻漿（ml）0.05混勻，0.5cm光徑，405nm處.蒸飭水調(diào)零，測(cè)各管吸光度。3、組織勻漿中過(guò)氧化氫酶活力的計(jì)算:（IX定義：每亳克組織蛋白每秒鐘分解Wmol的出的墩為一個(gè)活力單位。（2X公式：組織勻漿中C/IT活力(U / mgprot)=（對(duì)照論值-測(cè)定管咖）x27宀站待測(cè)樣本勻漿蛋

7、白濃E +（mgprot /（nl）4本試劑盒僅用于科硏、實(shí)驗(yàn)空南京 it 成 #本試劑盒僅用于科硏、實(shí)驗(yàn)空南京 it 成 注* 271為斜率的倒數(shù)#木試劑盒僅用于科研.實(shí)驗(yàn)宅南京建成 、計(jì)算舉例：取0.5%大亂肝組織勻漿0.05ml作CAT檢測(cè)，測(cè)得對(duì)照管吸光度為0.671,測(cè)定管吸光度為0.445,同時(shí)測(cè)得0.5%肝組織勻漿蛋白濃度為048mgprot/ml.則計(jì)算結(jié)果為:組織勻漿中C7活力(U / mgprot)(0.671 - 0.445) x 271 x5木試劑盒僅用于科研.實(shí)驗(yàn)宅南京建成 #木試劑盒僅用于科研.實(shí)驗(yàn)宅南京建成 取5%蚯蚓組織勻漿0.05ml作CAT檢測(cè)，測(cè)得對(duì)照管吸

8、光度為0.605,測(cè)定管吸光度為0.425,同時(shí)測(cè)得5%蚯蚓組織勻漿蛋白濃度為3.ll58mgprot/ml則計(jì)算結(jié)果為:組織勻漿屮廠活力(U /mgprot)"605625)x2 小亦花+ 3.1158 = 5.2185 Ulmgprot#木試劑盒僅用于科研.實(shí)驗(yàn)宅南京建成 #木試劑盒僅用于科研.實(shí)驗(yàn)宅南京建成 組織勻漿CAT活力(U/mgprot)取10%水稻葉片勻漿0.05ml作CAT檢測(cè)，測(cè)得對(duì)照管吸光度為0.704.測(cè)定管 吸光度為0.332,同時(shí)測(cè)御10%水稻葉片勻漿蛋白濃度為3.1303mgprot/mL則計(jì)算結(jié)果 為：.(0.704.0332)x271x,3.1303

9、 = 10.735. UT取0.5%中華芻肝組織勻漿005ml作CAT檢測(cè)，測(cè)得對(duì)照管吸光度為0.580,測(cè) 定管吸光度為0.426,同時(shí)測(cè)得0.5%中華菊肝組織勻漿蛋白濃度為0.3063mgprot/mL則 計(jì)算結(jié)果為：組織勻漿中CT活力(U /mgprot)=(0.580 - 0.503) x 271 x60x0.65+ 0.3C63 = 22.7058 UI mgprot#木試劑盒僅用于科研.實(shí)驗(yàn)宅南京建成 #木試劑盒僅用于科研.實(shí)驗(yàn)宅南京建成 注：I測(cè)定血清和血漿時(shí)，如果樣本不溶血.每批樣本只需要隨機(jī)挑2個(gè)樣本做對(duì)照或者用雙蒸水代替樣本做對(duì)照；如果樣本溶血的話(huà).必須每個(gè)樣本都要做對(duì)照.

10、2. 測(cè)定組織勻漿時(shí)，如果樣本不是離脂.每批樣本只需要隨機(jī)挑2個(gè)樣本做對(duì)照或者用雙 蒸水代替樣本做對(duì)廉；如果樣本奇脂.必須每個(gè)洋本都要做對(duì)照3. 測(cè)定全血時(shí).必須每個(gè)樣本都要做對(duì)照.南京更成生場(chǎng)工程研究所南京建成科技有限公司#木試劑盒僅用于科研.實(shí)驗(yàn)宅南京建成 #木試劑盒僅用于科研.實(shí)驗(yàn)宅南京建成 址編人話(huà)系哋 地郵聯(lián)抓建成主頁(yè):南京市中央路258-27號(hào)電 話(huà): 新立基大廈11層1106室210009季建平傳 M：(025) 57713719短 信: (建成生物) 卩 【 www. njjctech com(建成科技)(025) 833603218336096983

11、11389083II2287(W務(wù))83360272(技術(shù)電話(huà))(025) 832279438360996013815858329 njjcbio & answer6本試劑盒僅用于科研、實(shí)驗(yàn)室南京建成 附錄（最佳取樣濃度摸索）一、試劑及配制：由南京建成生物工程研究所第一分所提供并按說(shuō)明書(shū)配制。二、樣本來(lái)源：取正常小鼠肝臟，制成10%勻漿，再用生理鹽水稀釋成不同濃度待測(cè)。三、操作單位：建成檢測(cè)部四、操作表：對(duì)照管測(cè)定管組織勻漿（ml）0.05試劑一 （37X?預(yù)溫）（mi）1.01.0試劑二（379預(yù)溫）（ml）00混勻，37C準(zhǔn)確反應(yīng)1分鐘（60彳少）試劑三（ml）1.01.0試劑四（ml）0.10.1組織勻漿（ml）0.05混勻，o5cm光徑，405mn處.蒸他水調(diào)零.測(cè)各管吸光度五、檢測(cè)結(jié)果:勻漿濃度（）測(cè)定05測(cè)定OD?平均OD0.1250.6130.6120.6130.0580.250.5560.5600.5580.1130.50.4400.4490.4450.22610.2580.2580.2580.41320.0580.0590.0590.61250.0210.0180.0200.651100.032