2022年2022年微生物思考題及參考答案

1、精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載微生物摸索題及參考答案1. 用油鏡觀看時應(yīng)留意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間加滴什么油.起什么作用？答：應(yīng)當先用擦鏡紙將鏡頭擦潔凈、 以防上次試驗的污染. 操作時 、 先低倍再高倍 . 用完要擦掉油 . 加香柏油 、 作用為增加折光率、 也就為增加了顯微鏡的辨論率. 油的折光率和辨論率成反比 有公式 、 同時與波長成正比.2. 什么為物鏡的同焦現(xiàn)象？它在顯微鏡觀看中有什么意義？答：在一般情形下,當物像在一種物鏡中已清晰聚焦后,轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn) 到工作位置進行觀看時,物像將保持基本準焦的狀態(tài),這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦；利用 這種同焦現(xiàn)象, 可以保證在使用高

2、倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高.工作距離短的物鏡時僅用細調(diào)劑器即可對物像清晰聚焦,從而防止由于使用粗調(diào)劑器時可能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片；3. 影響顯微鏡辨論率的因素有哪些？答：物鏡的na值（物鏡的數(shù)值孔徑）與照明光源的波長.4. 美藍染色液作用時間的不同、 對酵母菌死細胞數(shù)量有何影響、 試分析緣由答：會造成更多的死細胞,在顯微鏡下觀看,活的為透亮無色,衰老的為淡藍色,死亡的為藍色,假如美藍染色液作用時間過長,會造成細胞脫水死亡并滲透染液,影響試驗結(jié)果；5. 鏡檢時如何區(qū)分放線菌基內(nèi)菌絲,氣生菌絲以及孢子絲一般氣生菌絲顏色較深,直生或分枝絲狀,比基內(nèi)菌絲粗；而基內(nèi)菌絲色淺.發(fā)亮,可看到橫隔膜,繼而斷

3、裂成球狀或桿狀小體；6. 在進行細菌涂片時應(yīng)留意哪些環(huán)節(jié) 1.載玻片應(yīng)當冷卻后再涂片；2 .假如為涂布液體,可以用毛細管或接種環(huán)滴一小滴, 然后輕輕抹開,一圈足夠；3 .假如為涂布菌落或菌苔,應(yīng)當在載玻片上先滴一滴水, 再將菌落或菌苔涂布上去,接種環(huán)的尖蘸一點點即可；4 .為了節(jié)約時間,可以將干燥和熱固定合并成一步；但為應(yīng)當防止高溫,由于溫度一高,細菌會變形；5 .染色時間視染色液種類而定；如結(jié)晶紫只需幾十秒,亞甲基藍就需一到兩分鐘；6 .沖洗時,水流不能太大,而且盡量防止水流直接沖在涂片上；7 .沖洗后干燥,可以用酒精燈加熱 以節(jié)約時間,同樣的,應(yīng)當防止高溫,由于溫度一高,細菌會變形；7.

4、進行細菌制片時為什么要進行加熱固定.在加熱固定時應(yīng)留意什么.固定的目的有三個：1）殺死微生物,固定細胞結(jié)構(gòu)；2）保證菌體能更牢的粘附在載玻片上,防止標本被水沖洗掉；3）轉(zhuǎn)變?nèi)玖蠈毎耐ㄍ感?由于死的原生質(zhì)比活的原生質(zhì)易于染色；固定時應(yīng)留意： 手持玻片, 菌膜朝上, 在微火過 3 次（手指觸摸玻片反面, 不燙手為宜） ,固定時應(yīng)盡可能維護細胞原有形狀,防止細胞膨脹或收縮；精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載8. 為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀看1. 由于用油鏡觀看時 、 鏡頭離玻片會很近 . 假如未完全干燥 、 載玻片上的液體會污染油鏡鏡頭 . 鏡頭特別精密 、 被污染后不利于

5、下次觀看 .2 .如未完全干燥,水滴會影響油與玻璃之間折光率,造成視野不夠清晰；9. 哪些環(huán)節(jié)會影響革蘭色染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)為什么？ 答：涂片環(huán)節(jié).加熱固定環(huán)節(jié).脫色環(huán)節(jié)；其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)為脫色環(huán)節(jié)；10. 進行革蘭氏染色時,為什么特殊強調(diào)菌齡不能太老,用老齡細菌染色會顯現(xiàn)什么問題.答：菌齡太老,細胞壁通透性轉(zhuǎn)變；著色不均,染色成效不好；陰性陽性不明顯分不太清晰 、 問題為：不便于顯微鏡下觀看為陽性菌仍為陰性菌；11. 革蘭氏染色中那一步為關(guān)鍵.為什么？你為如何操作的？革蘭氏染色的關(guān)鍵步驟為：乙醇脫色（為脫色時間）；假如脫色過度,革蘭氏陽性菌也可被脫色而被誤認為為革蘭氏陰性菌；

6、如脫色時間過短, 革蘭氏陰性菌也可被脫色而被誤認為為革蘭氏陽性菌；脫色時間的長短仍受涂片的厚薄,脫色為玻片晃動的快慢及乙醇用量的多少等因素的影響,難以嚴格規(guī)定 （脫色為應(yīng)當掌握速度,脫色時間一般為2030s）；12. 革蘭氏染色中 、 哪個步驟可以省略.在什么情形下采納媒染目的為在全部的細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物；脫色后使革蘭氏陰性菌變?yōu)闊o色；復(fù)染使革蘭氏陰性菌染成紅色；所以鑒別細菌的革蘭氏陰陽性只須媒染,復(fù)染的目的為為了看清革蘭氏陰性菌；13. 你主要依據(jù)哪些形狀特點來區(qū)分四種不同的霉菌曲霉 : 具有分隔； 氣生菌絲的一部分形成長而粗糙的分生孢子梗,頂端膨大成球狀頂囊, 表面

7、輻射出一層或兩層小梗,小梗上著生成串的球形分生孢子；分生孢子梗生于足細胞上,并通過足細胞與養(yǎng)分菌絲相連；根霉 : 菌絲無隔.多核.分枝狀,有匍匐菌絲和假根；在假根的上方直立地生長出一至數(shù)根孢囊梗, 其頂端膨大成球形孢子囊；囊的基部有囊托, 中間有球形或半球形囊軸；毛霉 : 菌絲無隔.多核.分枝狀,無假根或匍匐菌絲；菌絲體上直接生出單生.總狀分枝或假軸狀分枝的孢囊梗；各分枝頂端著生球形孢子囊,無囊托；青霉 : 菌絲有橫隔,分生孢子梗亦有橫隔,光滑或粗糙；基部無足細胞,頂端不形成膨大的頂囊,其分生孢子梗經(jīng)過多次分枝,產(chǎn)生幾輪對稱或不對稱的小梗,形如掃帚,稱為帚狀體；孢子顏色：黑曲霉為黑色,青霉為青

8、色,根霉為白菌絲黑孢子,毛霉就為淡黃色；以上為試驗室觀看1）菌絲特點：青菌與曲霉菌絲與膈；毛霉與根霉就無；2）菌絲的特化結(jié)構(gòu)： 曲霉有足細胞, 其它霉菌無； 根霉有假根與匍匐枝, 其它霉菌無；3）孢子頭特點：青霉的孢子頭為掃帚狀；根霉與毛霉的孢子頭為囊狀；曲霉為菊花狀孢子頭；精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載14. 為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時,必需用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正 .目鏡測微尺中每小格代表的實際長度為不固定的,它為隨所使用目鏡和物鏡的放大率的不同而轉(zhuǎn)變的, 故在測量前必需先用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正,以得出在顯微鏡的特定放大倍率下,目鏡測微尺

9、每小格所代表的相對長度；15. 在不轉(zhuǎn)變目鏡和目鏡測微尺,而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測定同一細菌的大小時,其測定結(jié)果為否相同？為什么？答: 相同 ; 目鏡測微尺為一塊圓形玻片,其中心刻有精確等分的刻度,有把毫米刻成為50 等分或把10 毫米長度刻成100 等分；測量時,將其放在接目鏡中的隔板上來測量經(jīng)顯微鏡放大后的細胞物象；由于在不轉(zhuǎn)變目鏡和目鏡測微尺,而改用不同放大倍數(shù) 的物鏡來測定同一細菌的大小時,物象的放大倍數(shù)與每小格目鏡測微尺所代表的長度 在變化比例上為同步的,故而測定結(jié)果相同；16. 哪些因素會造成血細胞計數(shù)板的計數(shù)誤差,應(yīng)如何防止.操作時沒有先蓋蓋玻片再滴加懸液,導(dǎo)致體積不精確；防

10、止：先蓋蓋玻片再滴加懸液；細胞密度太高；防止：稀釋溶液；溶液不勻稱；防止：滴加溶液前混勻懸液；1.儀器誤差：所用器材均應(yīng)清潔潔凈,并且計數(shù)板計數(shù)區(qū)不應(yīng)當有擦痕；2.計數(shù)室內(nèi)可能有氣泡；由于酵母細胞并沒有染色,看起來為透亮的,有氣泡很簡單被計入,使數(shù)值偏高；并且,氣泡會影響菌懸液的隨機分布；改進：如產(chǎn)憤怒泡,就用吸水紙吸出；3.菌體在計數(shù)板上分布不均,當用選取5 格計數(shù)時,會造成很大誤差；改進：應(yīng)使菌液自然流入并混勻,進行觀看時盡可能多數(shù)幾個格子；4.配制稀釋液時吸取的濃度過高或過低,導(dǎo)致稀釋液濃度和原液不成正確比例,運算時產(chǎn)生誤差；應(yīng)將原液搖動勻稱后取中部的液體進行稀釋；5.由于數(shù)菌體數(shù)目時視

11、覺疲憊而導(dǎo)致的視覺誤差；應(yīng)多人觀看,取記錄平均數(shù)；6.計數(shù)時可能將格四周的菌都運算在內(nèi)了,使數(shù)值偏高；改進：謹遵一個規(guī)章,計上不計下,計左不計右,不行以重復(fù)計數(shù)；7.可能顯現(xiàn)有出芽的酵母菌,將出芽的酵母菌按兩個計數(shù)了,使數(shù)值偏高；改進：計數(shù)時,只有當芽體于母細胞一樣大的時候,才能計為兩個；17. 培育基配好后, 為什么必需立刻滅菌.如何檢查滅菌后的培育基為否無菌？為什么要倒置培育？答：由于配制培育基的各類養(yǎng)分物質(zhì)和容器等含有各種微生物,因此,已配制好的培育基必需立刻滅菌,假如來不及滅菌,應(yīng)暫存冰箱內(nèi),以防止其中的微生物生長系列而消耗養(yǎng)分和轉(zhuǎn)變培育基的酸堿度所帶來的不利影響；將滅菌的培育基放入3

12、7溫箱中培育2448h,無菌生長即可證明滅菌后的培育基無 菌；倒置培育的主要目的：1）由于重力的作用使培育基表面及次層能富集微生物生長所需的養(yǎng)分物質(zhì),利于微生物生長；2）防止空氣中微生物的污染培育基及培育物：倒置時平板內(nèi)的空氣為不流淌的、 雜菌不會沉降到培育基表面、 假如不倒置 、 很快平板周邊會長起雜菌； 3）倒置培育使瓊脂里水分不易蒸發(fā)出去,而充分的保持瓊脂的彈性與細菌容易繁衍和生存的環(huán)境；假如不倒置,大致3 天左右培育基就會顯現(xiàn)龜裂等水分散失的情精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載況；而一些落菌等試驗,需驗證培育基無菌,就要先倒置培育48 小時才可作為模板做落菌,水分散失為很重

13、要的；19. 在配制培育基的操作過程中應(yīng)留意些什么問題？為什么？ 答：一般而言,培育基的配置要留意如下幾點原就： 1）養(yǎng)分成分的配比：碳源和氮源的比例（c/n）要適當； 2）相宜的酸堿度（ph值）：配制培育基時ph 的調(diào)劑； 3）滲透壓：養(yǎng)分物質(zhì)要有適合的濃度； 4）培育基不能反復(fù)高溫滅菌；5稱不溶性固形物時,應(yīng)單獨稱,如量少的可以與無機鹽一起稱,但肯定要混勻再分裝；6）一般情形下培育基用自來水配制；操作細節(jié)上就要留意：1）稱藥品用的牛角匙不要混用,稱完藥品應(yīng)準時蓋緊瓶蓋2）調(diào) ph 值不要調(diào)過頭, 以免回調(diào)而影響培育基內(nèi)各離子的濃度3）分裝時留意不要污染棉塞.試管口,以免染菌；4）準時滅菌,

14、以免培育基及容器里的微生物生長繁衍消耗養(yǎng)分.轉(zhuǎn)變酸堿度；1.當然為留意濃度配比不要搞錯2.許多培育基的加料次序有講究、 否就會有沉淀產(chǎn)生3.有些培育基會有不溶物質(zhì)、 分裝前應(yīng)搖勻4.不要忘了調(diào)劑ph值（一般細菌都需要、 酵母可能自然ph 就行 、 不過不肯定）5.加熱溶解時盡量不要煮沸、 會缺失養(yǎng)分物質(zhì)20. 高壓蒸氣滅菌開頭之前,為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡？滅菌完畢后,為什么待壓力降低“ 0”時才能打開排氣閥,開蓋取物；答： 1）在使用高壓蒸汽滅菌時,滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除為否完全極為重要,由于空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓,所以,當水蒸氣中含有空氣時,在同一壓力下,含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽

15、的溫度；2）壓力未降至“ 0”便開蓋取物的可能后果：壓力鍋內(nèi)壓力突然降低,引起容器中的溶液噴出容器口導(dǎo)致污染或?qū)е氯藛T的燙傷；21. 干熱滅菌操作過程中應(yīng)留意哪些問題為什么1.物品不要擺放太擠、 以免阻礙空氣流通2.滅菌物品不要接觸干燥箱內(nèi)壁的鐵板、 以防包裝紙烤焦起火3.滅菌時人不能離開4.滅菌終止后不能遺忘關(guān)掉電源5.待溫度降到70 度以下再打開 、 否就冷熱空氣交替、 玻璃器皿簡單炸裂或發(fā)生燙傷事故22. 為什么干熱滅菌比濕熱滅菌所需溫度高時間長？在濕熱條件下,有水蒸汽的作用：a 高溫水蒸汽導(dǎo)熱比干空氣要快；b 高溫水蒸汽冷凝變水時有放熱過程；c 高溫水蒸汽能穿透細菌的細胞膜,直接進入細

16、胞內(nèi)破壞細胞；d 高溫水蒸汽能水解一部分細胞結(jié)構(gòu),加速導(dǎo)熱；精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載（濕熱中細菌菌體吸取水分,蛋白質(zhì)較易凝固,因蛋白質(zhì)含水量增加,所需凝固溫度降低；濕熱的穿透力比干熱大；濕熱的蒸汽有潛熱存在,每1 克水在 100時,由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時可放出226kj（千焦）的熱量；這種潛熱,能快速提高被滅菌物體的溫度,從而增加滅菌效力；）23. 設(shè)計試驗方案,比較干熱滅菌和濕熱滅菌的成效；以下試驗方案有關(guān)操作均遵循無菌操作條件和等量原就；（一）試驗材料試管鑷子酒精燈嗜熱脂肪芽孢桿菌atcc7053菌片紙片（與菌片同大小同材料）溴甲酚紫蛋白凍水培育基（已滅菌）等試驗材料（材料

17、有余）；（二）對比組取 9 支潔凈試管, 分為 a1b1c1三組（每 3 支一組）,將 a1組中放入菌片, b1組中放入紙片, c1 組中什么也不加；不經(jīng)滅菌,直接加入溴甲酚紫蛋白凍水培育基（等量）；（三）恒為培育將上述全部試管按分組在56恒溫條件下培育48 小時；24. 如何確定平板上某單個菌落為否為純培育請寫出試驗的主要步驟純培育的確定除觀看其菌落特點外,仍要結(jié)合顯微鏡檢測個體形狀特點后才能確定,有些微生物的純培育要經(jīng)過一系列分別與純化過程和多種特點鑒定才能得到；25. 配制牛肉膏蛋白胨培育基,有哪些操作步驟？那幾步易出錯,如何防止？稱取藥品加熱溶化分裝加棉塞包扎滅菌擱置斜面易出錯的步驟有

18、：a 稱取藥品稱取時鑰匙專用,瓶蓋不要錯蓋,易吸水的藥品要快速稱??；b 加熱溶化加入藥品后要用玻璃棒不停攪拌,以免糊底（在瓊脂熔化過程中,應(yīng)控 制火力,以免培育基因沸騰而溢出容器,同時,需不斷攪拌, 以防瓊脂糊底燒焦； ）；c 分裝分裝時培育基不能粘在三角瓶（或試管）口,以免接種時染菌；d 擱置斜面斜面長度約試管長度一半為宜；26. 平板菌落計數(shù)法的原理為什么.它適用于那些微生物的計數(shù)？平板菌落計數(shù)法為將等測樣品經(jīng)適當稀釋后,其中的微生物充分分散為單個細胞,取肯定量的稀釋液接種到平板上,經(jīng)過培育,由每個單細胞生長繁衍而形成的肉眼可見的菌落,即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個單細胞；統(tǒng)計菌落數(shù),依

19、據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣 接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)；（但為,由于待測樣品往往不易完全分散成單個細胞,所以,長成的一個單菌落也可能來自樣品中的23 或更多個細胞；因此平板菌落計數(shù)的結(jié)果往往偏低；現(xiàn)在常使用菌落形成單位）；平板計數(shù)法為依據(jù)微生物在固體培育基上所形成的一個菌落為由一個微生物繁衍而形成的現(xiàn)象進行的,也就為一個菌落可代表一種微生物（并不肯定 ；通常用來測定樣品中所含細菌.孢子.酵母菌等單細胞微生物的數(shù)量；8.微量移液器的最小量程太大,在加樣時,簡單加多,使蓋玻片鼓起,血球計數(shù)板所技術(shù)的體積變大,最終結(jié)果偏大；改進：用量程的小的微量移液器并少加一些；精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡

20、迎下載27. 假如一項科學(xué)討論內(nèi)容需從自然界中挑選到能產(chǎn)生高溫蛋白酶的菌株,你將如何完成？寫出試驗方案（產(chǎn)蛋白酶菌株在酪素平板上能形成降解酪素透亮圈）；以下試驗方案有關(guān)操作均遵循無菌操作條件一 材料預(yù)備1土壤【有機質(zhì)（特殊為蛋白質(zhì)）含量豐富的土壤】2 滅菌生理鹽水（0.85%nacl）3 滅菌移液管4 添加酪素的b 4（牛肉膏蛋白胨完全培育基）經(jīng)滅菌 5 b 4 斜面（經(jīng)滅菌）6 其他材料：接種環(huán)酒精燈等二 操作方法1 在盛有 10ml 滅菌生理鹽水的燒杯中添加1g 土壤,配成懸浮液；2 稍靜止后,用滅菌移液管移取部分上清液,將其制成104 106 倍的稀釋液；3 用滅菌移液管吸取各稀釋液用稀

21、釋倒平板法（或涂布平板法）將其接入添加酪素的b4 平板上；4 在 55 65下培育 1 2 天；5 挑取形成降解酪素透亮圈的菌落（透亮圈直徑d 與菌落直徑d 之比較大者）,轉(zhuǎn)接入b4 斜面上培育；（如無特定菌落形成,就需另取土樣從開頭重復(fù)試驗）6 將 b 4 斜面上的菌落再用平板純培育,依次重復(fù) 2 3 次后即可得到純培育 （鏡檢）；7 純培育細菌中蛋白酶的提取及活性鑒定【搖瓶培育（如提取蛋白酶及其活性正常,就純培育勝利,否就,重取土樣重復(fù)以上試驗）】；28. 為什么熔化后的培育基要冷卻至45左右才能倒平板？低于這個溫度瓊脂會凝固,溫度過高,假如為做傾倒瓊脂做菌落計數(shù),會殺死一部分細菌,假如只

22、為只為制備瓊脂平板,那么溫度太高就進行傾倒會導(dǎo)致瓊脂凝固后偏軟,水汽過多；29. 要使平板菌落計數(shù)精確,需要把握哪幾個關(guān)鍵？為什么？1 無菌操作 2稀釋良好,不會太濃或太??；3菌落生長時間掌握好,不會長的太大不便區(qū)分,也不至于太小影響計數(shù)；30. 當你的平板上長出的菌落不為勻稱分散的而為集中在一起時,你認為問題出在哪里？1. 太濃2.沒涂勻31. 用傾注法和涂布法計數(shù),其平板上長出的菌落有何不同？為什么要培育較長時間（48h）后觀看結(jié)果？傾注法為在培育皿中接種好樣品之后,傾注瓊脂并培育； 而涂布法就為在瓊脂表面接種并使用 l 型棒涂布；因此,傾注法的菌落將顯現(xiàn)在瓊脂的各個部位,包括底層和中層,但涂布法培育后形成的菌落只顯現(xiàn)在瓊脂表面；32. 你如何說明淀粉酶為胞外酶而非胞內(nèi)酶？答：淀粉為大分子物質(zhì),進入細胞特別困難,甚至需要高耗能的胞吞作用；因而通過胞外酶的作用,將淀粉水解為葡萄糖后運入細胞,較便利高效；精品學(xué)習(xí)資料精選學(xué)習(xí)資料 - - - 歡迎下載試驗中顯現(xiàn)透亮圈,說明培育基內(nèi)淀粉被水解,可估計為細菌產(chǎn)生的胞外的