10004菌種管理規(guī)程

1、文件名稱菌種管理規(guī)程文件編號QB-WI/10-004-00版本號00頁碼制定人制定日期審核人審核日期批準人批準日期生效日期管理部門質(zhì)量部分發(fā)部門總經(jīng)理口 技術部口 質(zhì)量部口 生產(chǎn)部口 管理者代表口 商務部口 銷售部口 行政部口 倉庫口序號修訂原因及目的修訂內(nèi)容01文件新建/文件名稱菌種管理規(guī)程文件編號QB-WI/10-004-00版本號00頁碼1、目的規(guī)范微生物學檢定用菌種的管理，最大限度降低變異率，確保菌種的溯源性與穩(wěn)定性，從而確保微生物學檢驗結(jié)果的準確可靠。2、適用范圍適用于微生物實3用菌種管理 ，包括菌種的申購、傳代、使用及銷毀等。3、引用/參考文件ChP2015實用藥品微生物檢驗檢測技

2、術指南4、 職責質(zhì)量控制實驗室負責菌種的申購、傳代、使用、銷毀等工作，QA負責監(jiān)控與參與 OO麗查。5、 程序5、1術語與定義5、1、1標準菌株由中國藥品生物制品檢定所醫(yī)學微生物菌種保藏管理中心或者其她經(jīng)認可的機構(gòu)提供的冷凍干燥菌。5、1、2傳代菌株用標準菌種制備的采用特定保存方法長期固定保存的菌種，用于傳代及制備工作用菌種 ,3代后的傳代菌株在需要時可以作為工作菌株使用。5、1、3工作菌株用標準菌種或傳代用菌種接種至普通瓊脂斜面培養(yǎng)后，作為日常工作使用的菌種。5、1、4菌種的代將菌種接種至一新鮮培養(yǎng)基上或培養(yǎng)基內(nèi)，每萌發(fā)一次即稱為一代，從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代。5、2菌種來源

3、5、2、1標準菌株由中國藥品生物制品卞定所醫(yī)學菌種保藏中心(CMCC或者其她經(jīng)認可的機構(gòu)提供的冷凍干燥菌種。5、2、2質(zhì)量控制實驗室涉及到的菌種種類、代碼、保存方法及保存條件如下。菌種名稱菌種代碼保存方法保存溫度保存期限金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003TSA斜面28 c1個月冷凍干燥管-20 C1年銅綠假單胞菌CMCC(B)10104TSA斜面28C1個月冷凍干燥管-20 C1年枯草芽抱桿菌CMCC(B)63501TSA斜面28C1個月冷凍干燥管-20 C1年白色念珠菌CMCC(F)98001SDAM 面28C3個月冷凍干燥管-20 C1年黑曲霉菌CMCC(F)98003SDAM 面28

4、C3個月冷凍干燥管-20 C1年生抱梭菌CMCC(B)64941TSA斜面28C1個月冷凍干燥管-20 C1年5、3菌種的申購、驗收、保存5、3、1菌種的申購5、3、1、1微生物室QC依據(jù)菌種的庫存及菌種的使用情況 ，提出采購申請，申請需明確菌種的名稱，標 準編號以及申購數(shù)量等信息。5、3、1、2質(zhì)量部經(jīng)理對申購計劃進行審批 ，審批后由公司的商務部按要求進行采購，采購過程執(zhí)行采購控制程序。5、3、1、3菌種的采購需向法定的業(yè)務部門或者認可的機構(gòu)采購。5、3、1、4購買菌種的同時應保留相關證明資料,說明菌種的名稱、代數(shù)、數(shù)量等。5、3、2菌種的驗收5、3、2、1微生物室QC負責對采購回的菌種以及

5、相關的證明資料進行驗收；5、3、2、2驗收應包括菌種外包裝的完好性、具體驗收的依據(jù)為批準后的申購計劃。5、3、2、3驗收符合后簽字確認并領回菌種 ，及時填寫菌種驗收、入庫記錄，并將菌種的相關證明資料貼在菌種接收登記表當頁背面留存。如驗收不符合則拒絕簽字領用，商務部負責退貨處理。5、3、3菌種的保存5、3、3、1驗收合格的冷凍干燥菌種，應保存在溫度設定為-20 C冰箱中保存，有效期可至1年。5、3、3、2驗收后的菌種需在驗收合格接收后14天內(nèi)完成轉(zhuǎn)種。5、4菌種的傳代5、4、1菌種的傳代次數(shù)不得超過 5代，從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥的菌種為第0代（G0）,冷凍干燥的原始菌種開啟后轉(zhuǎn)種，為第1代

6、（G1）;5、4、2標準菌種的復蘇、確認及傳代5、4、2、1標準菌種的復蘇5、4、2、1、1將一次性吸管數(shù)支、培養(yǎng)皿、鐐子、凍干菌種管、裝有TSB試管或SDB試管等移入生物安全柜中，開啟生物安全柜的紫外燈滅菌30min后關閉紫外燈，備用。5、4、2、1、2將凍干菌種管外壁用75%勺乙醇棉球擦拭一遍，放入培養(yǎng)皿中，待干。點/酒精燈，將標準菌種管封口的一端過火后開啟，用一次性吸管吸取少量相應液體培養(yǎng)基或者稀釋液，加入凍干管內(nèi)將菌種溶解。黑曲霉的菌種因為就是抱子懸液管不需要加入液體培養(yǎng)基，直接擰開即可。5、4、2、1、3將菌種加入到相應的液體培養(yǎng)基中，根據(jù)菌種類型的不同將其置于不同溫度下培養(yǎng)不同時間

7、。原凍干菌種管、使用過的一次性吸管待 121c ,30min高溫濕熱滅活后處理。不同菌種稀釋液與培 養(yǎng)條件見下表。菌種名稱菌種代碼稀釋液培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003TSB30-35 C72h銅綠假單胞菌CMCC(B)10104TSB30-35 C72h枯草芽抱桿菌CMCC(B)63501TSB30-35 C72h生抱梭菌CMCC(B)64941硫乙醇酸鹽流體/口加小30-35 C18-24h白色念珠菌CMCC(F)98001SDB20-25 C120h黑曲霉菌CMCC(F)98003SDB20-25 C120h5、4、2、1、4取出培養(yǎng)物，觀察液體培養(yǎng)基就是否渾濁，渾

8、濁說明菌種復蘇，若不生長，應繼續(xù)延長培養(yǎng) 時間（細菌：至少7天，真菌與酵母菌至少 15天），仍不渾濁,121 C,30min高溫濕熱滅菌后廢棄，需要時, 啟動偏差調(diào)查。5、4、2、2菌種的確認用已經(jīng)過消毒的接種環(huán)挑取上述培養(yǎng)物接種到TSA（細菌）或SDA真菌與酉母菌）平板上，然后在相應溫度下培養(yǎng)相應的時間（細菌:3035C ,48-72h;酵母菌:2025C ,72120h;黑曲霉:2025C ,57d）,觀察菌落形態(tài)，與標準形態(tài)進行比對確認，確認結(jié)果應及時記錄在菌種確認記錄。5、4、2、3標準菌種的傳代5、4、2、3、1按照菌種說明書要求復溶菌粉，轉(zhuǎn)種至適宜的液體增菌培養(yǎng)基內(nèi)復蘇后的培養(yǎng)物稱

9、為第1代（G1）,菌種傳代應填寫菌種傳代記錄。5、4、2、3、2菌種確認后，如確認符合，則從液體培養(yǎng)物中挑取培養(yǎng)物第1代（G1）轉(zhuǎn)接至相應瓊脂培養(yǎng)基斜面上各數(shù)支（每種菌種至少3支），經(jīng)過相應溫度培養(yǎng)時間（細菌:3035C,72h;酵母菌:2025 C ,120h;黑曲霉:2025C,57d）培養(yǎng)；同時G1在121c ,30min高溫濕熱滅菌后廢棄。5、4、2、3、3取出其中2支作為傳代菌種，此為第2代（G2）,保存在溫度設定為 28c冷藏柜中保存； 另外1只G2進行彳代，此為第3代（G3）,G3根據(jù)檢測需要確定傳代數(shù)量，斜面菌株均保存在 28c冷藏 柜中，工作菌種與傳代用菌種分別包扎后保存。5

10、、4、2、3、4按照上述操作，G5為最后一代，不得繼續(xù)進行傳代，需要重新申購冷凍干燥菌種管，重復上述操作，保存與使用菌種。5、4、2、3、5細菌每1個月傳代1次；霉菌、酵母菌及芽抱每3個月傳代一次。5、4、2、4菌種傳代時注意無菌操作，使菌株不死亡、不污染、不丟失。同時微生物室QC也應采取有效的預防措施進行自我保護，如工作時須穿工作服，佩戴手套，口罩等。實驗完成后對實驗區(qū)域、設施設 備、用具等進行適當方式消毒。如發(fā)生意外，如菌種泄漏或人員受傷，微生物室QCS及日向QA報告以便 及時處理。5、4、2、5工作菌種與傳代菌種無實質(zhì)區(qū)別 ，必要時，可作為另一種的備用菌種使用。5、4、3菌種的編號5、4

11、、3、1菌種編號原則：英文縮寫字母-代次-順序號-傳代日期；5、4、3、1、1菌種的英文縮寫字母：金黃色葡萄球菌（S、a）、銅綠假單胞菌、（P、a）、枯草芽抱桿菌 （B、s）、白色念珠菌（C、a）、黑曲霉（A、n）。5、4、3、1、2代數(shù)的表示用帶有下標數(shù)字的字母表示，例如:G3表示菌種的第3代。5、4、3、1、3每種菌種每次傳代順序號從01開始，例如一種菌種一次性轉(zhuǎn)種到4支試管上，那么順序號一次為 01,02,03,04 。5、4、3、1、4傳代日期用八位數(shù)字表示：年份四位數(shù)，月、日分別用兩位數(shù)表示。5、4、3、1、5例如P、a-G2-03-20170306標識2017年03月06日傳代的第

12、2代銅綠假單胞菌的第 3 只。5、5菌種的保藏5、5、1菌種設專人加鎖保管，除銅綠假單胞菌于室溫保藏外，其她斜面菌種均在 2-8 C條件下保藏。5、5、2菌種的定期檢查與鑒定5、5、2、1日常檢查菌種在保藏期間，工作日應每天上午與下午兩次檢查保藏菌種冷藏柜的溫度就是否正常、必要檢查 菌種管的塞子就是否松動、就是否染菌，檢查結(jié)束應及時填寫菌種日常檢查記錄。5、6菌種的使用根據(jù)工作需要，領取工作用菌種或者傳代用菌種，同時填寫菌種使用記錄。菌液一般在制備完后當天使用，制備方法參照ChP2015執(zhí)行。5、7廢棄菌種的銷毀5、7、1下列情況的菌種、培養(yǎng)物或者被污染的器具等，必須經(jīng)過121c ,30min

13、高壓濕熱滅菌處理5、7、1、1新一代菌種制備成功后的上一代菌種；5、7、1、2使用完后的菌種與帶有標準菌種的器具與培養(yǎng)物；5、7、1、3超過有效期的菌種；5、7、1、4凡就是被污染、變異、可疑等異常情況菌種 ；5、7、1、5其她應廢棄的菌種。5、7、2被污染的器具在污染后，濕熱滅菌前應放置在密閉容器中防止對外界再污染。5、7、3廢棄菌種的銷毀須有兩個人以上同時在場進行，并及時填寫廢棄菌種、物品銷毀記錄5、8安全要求5、8、1菌種、菌液的保藏需要保藏于加鎖的冷藏柜或者冰箱中 ；5、8、2操作人員在操作前應該按照規(guī)定著裝，佩戴防護設施；5、8、3操作結(jié)束后，應及時對工作區(qū)域、工作服及其她儀器等進行

14、適當消毒；5、8、4非微生物室操作人員未經(jīng)質(zhì)量部經(jīng)理批準不得進入微生物室；6、 記錄菌種驗收、入庫記錄(QB-QR/10-008-00)菌種傳代記錄(QB-QR/10-009-00)菌種確認記錄(QB-QR/10-010-00)菌種日常檢查記錄 (QB-QR/10-011-00)菌種使用記錄(QB-QR/10-012-00)廢棄菌種、物品銷毀記錄 (QB-QR/10-013-00)醫(yī)療技術有限公司菌種驗收、入庫記錄日期入庫數(shù)量入庫代次入庫狀態(tài)國種來源驗收情況接收人菌種名稱：菌種代碼：儲存條件：記錄編號：QB-QR/10-008-00菌種傳代記錄記錄編號：QB-QR/10-009-00菌種名稱菌種代碼傳代前菌種代次傳代前菌種狀態(tài)傳代日期傳代數(shù)量預期用途數(shù)量（支）代次國種編號傳代用培養(yǎng)基工作用菌種傳代用菌種操作過程描述：操作人：備注：醫(yī)療技術有限公司菌種確認記錄記錄編號：QB-QR/10-010-00菌種名稱： 菌種代碼：確認日期確認用培喬基確認原因操作過程描述：確認結(jié)論：操作人/日期：菌種日常檢查記錄記錄編號：QB-QR/10-011-00日期時間溫度（C）塞子就是 否