PCR實驗室設置儀器配置學習教案

1、會計學1PCR實驗室設置儀器實驗室設置儀器(yq)配置配置第一頁，共19頁。PCRPCR實驗室設計的一般原則實驗室設計的一般原則PCR實驗室安全防護等級實驗室安全防護等級0102各區(qū)的工作內(nèi)容及配置各區(qū)的工作內(nèi)容及配置03實驗室配置及預算實驗室配置及預算04第1頁/共18頁第二頁，共19頁。生物生物(shngw)安全的概念安全的概念生物安全是指由動物、植物、微生物等生物體給人類健康和自然環(huán)境造成的危害以及人們所采取(ciq)的防范措施。生物安全是一個廣義的概念，它涉及三個方面：外來物種遷入導致的原生態(tài)系統(tǒng)不良改變或破壞；人為(rnwi)造成的環(huán)境劇烈變化危機生物的多樣性；科學研究、開發(fā)、生產(chǎn)和

2、應用中，病原或變異生物體的泄露對人類健康或生存環(huán)境所造成的危害。第2頁/共18頁第三頁，共19頁。1. 1. 危害等級危害等級I I （低個體危害，低群體危害）不會導致健康工作者和動物致病的細菌、真菌、（低個體危害，低群體危害）不會導致健康工作者和動物致病的細菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。病毒和寄生蟲等生物因子。2. 2. 危害等級危害等級 ( (中等個體危害，有限群體危害中等個體危害，有限群體危害) )能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴重危害的病能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴重危害的病原體。實驗室感染不導致嚴

3、重疾病，具備有效治療和預防措施，并且傳播風險有限。原體。實驗室感染不導致嚴重疾病，具備有效治療和預防措施，并且傳播風險有限。3. 3. 危害等級危害等級 III III （高個體危害，低群體危害）（高個體危害，低群體危害）能引起人類或動物嚴重疾病，或造成嚴重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，能引起人類或動物嚴重疾病，或造成嚴重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原體?；蚰苁褂每股亍⒖辜纳x藥治療的病原體。4. 4. 危害等級危害等級 ( (高個體危害，高群體危害高個體危害，高群體危害) )能引起人類或動物非常能引起人類或動物非常(fic

4、hng)(fichng)嚴重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸嚴重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與動物間傳播的病原體。在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與動物間傳播的病原體。生物生物(shngw)(shngw)因子危害程度分級因子危害程度分級第3頁/共18頁第四頁，共19頁。根據(jù)安全防護等級，分子生物實驗室一般(ybn)分為以下四級：第4頁/共18頁第五頁，共19頁。依據(jù)： 衛(wèi)生部頒發(fā)的臨床(ln chun)基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)200210號） 醫(yī)療機構(gòu)臨床(ln chun)基因擴增管理辦法（衛(wèi)辦醫(yī)

5、政發(fā)2010194號） 第5頁/共18頁第六頁，共19頁。“十六字口訣(kuju)”第6頁/共18頁第七頁，共19頁。第7頁/共18頁第八頁，共19頁。標本制備區(qū)標本制備區(qū)擴增（及產(chǎn)物分析）區(qū)方向流動；擴增（及產(chǎn)物分析）區(qū)方向流動；第8頁/共18頁第九頁，共19頁。工作流向?qū)Ｓ米呃犬a(chǎn)物分析區(qū)擴增區(qū)標本制備區(qū)試劑準備區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向第9頁/共18頁第十頁，共19頁。第10頁/共18頁第十一頁，共19頁。傳遞傳遞(chund)窗：雙刃劍窗：雙刃劍方便試劑物品在不同實驗區(qū)間的傳遞方便試劑物品在不同實驗區(qū)間的傳遞(chund)；增加交叉污染的風險；增加交叉污染的風險

6、；設計原則：設計原則：1.必須為雙開門密封嚴實的；必須為雙開門密封嚴實的；2.兩邊門最好是連鎖裝置；兩邊門最好是連鎖裝置；3.傳遞傳遞(chund)窗內(nèi)應有紫外照射裝置；窗內(nèi)應有紫外照射裝置；第11頁/共18頁第十二頁，共19頁。試劑準備(zhnbi)區(qū)主要進行試劑的儲存、分裝和主反應混合液的制備。該區(qū)對于氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴格的要求。該區(qū)所需的主要物品包括：1、冰箱（2-8、-20），用于試劑的儲存；2、超凈工作臺（最好配備），試劑配制的區(qū)域(qy)；3、移液器一套（覆蓋1-1000ul，一般、5-50ul、20-200ul、100-1000ul）及配套吸頭（帶濾芯） ，用于試劑配制

7、；4、掌上迷你離心機；5、震蕩混勻儀；6、離心管架、廢液缸（利器盒）等；7、消耗品：一次性無粉乳膠手套、耐高壓處理的離心管、一次性吸水紙；8、安全級防護品：移動紫外線燈、專用工作服、9、專用辦公用品（簽字筆及記錄本等）；第12頁/共18頁第十三頁，共19頁。標本制備(zhbi)區(qū)主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域（擴增區(qū)）為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。該區(qū)所需的主要物品包括：1、冰箱（

8、2-8、-20或-80 ）；2、生物安全柜；3、移液器一套（覆蓋1-1000ul，一般、5-50ul、20-200ul、100-1000ul）及配套吸頭（帶濾芯） ；第13頁/共18頁第十四頁，共19頁。4、高速臺式離心機（冷凍）、掌上迷你離心機（雙轉(zhuǎn)子）；5、水浴鍋或金屬??；6、震蕩混勻儀；7、離心管架、廢液缸（利器盒）等；8、消耗品：一次性無粉乳膠手套、耐高壓處理的離心管、一次性吸水紙；9、安全級防護品：移動紫外線燈、專用工作服、10、專用辦公用品（簽字筆及記錄本等）；11、核酸提取儀；標本制備區(qū)是唯一直接與標本接觸的區(qū)域，因此要注意生物安全問題，應有洗眼器、并配備(pibi)一個急救箱，

9、箱內(nèi)可放置75%乙醇、棉簽、創(chuàng)可貼等急用藥具。第14頁/共18頁第十五頁，共19頁。該區(qū)主要進行PCR擴增，本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域（樣本制備區(qū)）為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。所需的主要物品包括：1、實時熒光PCR儀（含電腦打印機等）；2、移動(ydng)紫外線燈；3、專用工作服；4、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙第15頁/共18頁第十六頁，共19頁。第16頁/共18頁第十七頁，共19頁。第17頁/共18頁第十八頁，共19頁。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)會計學。人為造成的環(huán)境劇烈變化危機生物的多樣性。各區(qū)必須有明確的標記，避免不同區(qū)域內(nèi)的設備、物品混用。1. 工作流向（進入實驗室方向）：為避免交叉污染，進入各個