楊浦五角場(chǎng)新王牌補(bǔ)習(xí)班微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)（二）

1、第2課時(shí)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)（二）h標(biāo)導(dǎo)讀1.通過閱讀教材掌握配制培養(yǎng)基的步驟和倒平板操作的過程。2. 理解并掌握利用平板劃線法和稀釋涂布平板法來純化微生物的方法。重難點(diǎn)擊1.學(xué)握制備牛肉膏蛋白腺固體培養(yǎng)基的方法。2 .學(xué)會(huì)用平板劃線法和稀釋涂布平板法純化微生物。一制備牛肉膏蛋白月東固體培養(yǎng)基n知識(shí)梳理夯實(shí)基礎(chǔ)突破要點(diǎn) 牛肉膏蛋白月東固體培養(yǎng)基是細(xì)菌培養(yǎng)中常用的一種培養(yǎng)基，人腸桿菌的純化是用該培養(yǎng)基。i. 牛肉膏蛋白月東固體培養(yǎng)基的成分及各成分提供的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基組分提供的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)牛肉膏5.0 g碳源、磷酸鹽和維生素蛋白腺10.0 g氮源和維生素nacl 5.0 g無機(jī)鹽蒸館水定容至1 000

2、ml盤兀素、氧兀素2. 實(shí)驗(yàn)過程（1）培養(yǎng)基的配制計(jì)算：根據(jù)牛肉膏蛋白月東培養(yǎng)基配方的比例,計(jì)算配制100 ml培養(yǎng)基時(shí)各成分的用量p.5g牛肉膏：比較黏稠，用稱量紙稱取12蛋白腺：易吸潮，要迅速稱?。ㄅＨ飧嘁彩牵?稱量s0.5 g nacl、2 g瓊脂一卜肉膏和稱量紙+水i加熱溶化后取出稱量紙加蛋白腺和nacli微火加熱、不斷攪拌溶化后加瓊蜃（需不斷用玻棒攪拌，防止瓊脂糊底 而導(dǎo)致燒杯破裂）j熔化后，補(bǔ)加蒸館水至100 ml調(diào)節(jié)ph： 1 mol的naoh、ph試紙，將ph調(diào)為7.47.6分裝:趁熱分裝到潔凈錐形瓶中i加棉塞：用棉花不用脫脂棉，脫脂棉吸水,包扎：外包牛皮紙,且掛標(biāo)簽(2)滅菌

3、 培養(yǎng)基: 培養(yǎng)皿:高壓蒸汽滅菌干熱滅菌(3)倒平板待培養(yǎng)基冷卻至50 °c左右時(shí)，在酒精燈火焰附近進(jìn)行操作:在火焰旁五手拿錐形瓶,圖2 使錐形瓶的瓶口迅速通過火焰，目的是進(jìn)行滅菌,防止瓶口微生物污染培養(yǎng)基(如圖2)。 左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙,左手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，立刻蓋上皿蓋(如圖3)。圖4 等待平板冷卻凝固后,將平板倒過來放置(如圖4)。3. 培養(yǎng)基的選擇：培養(yǎng)基配制好后，要放在恒溫箱中保溫12 d,若無菌落生長(zhǎng)則說明制備的培養(yǎng)基是合格的。4. 平板倒置的原因：平板冷凝后，1111蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)

4、,又可以防止血蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染?！練w納提煉】 培養(yǎng)基的配制原則(1) 目的要明確(根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等)，如生產(chǎn)用培養(yǎng)基內(nèi)可加入化學(xué)成分不明確的天然 物質(zhì)，而分類鑒定用培養(yǎng)基內(nèi)必須加入已知化學(xué)成分的物質(zhì)。(2) 營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)，注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過低不能滿足微生物的營(yíng)養(yǎng)需求，過高對(duì)微生物的生長(zhǎng)有抑制作用，另外，培養(yǎng)基中 各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度比直接影響微生物的生長(zhǎng)繁殖和代謝產(chǎn)物的形成和積累，其中碳氮比(c/n)的影響較 大。例如，在谷氨酸生產(chǎn)中，當(dāng)培養(yǎng)基中的碳源與氮源的比為4 ： 1時(shí)，菌體大量繁殖，而產(chǎn)生的谷 氨酸少；當(dāng)碳源與氮源的比為3 ： 1時(shí)，菌體繁殖

5、受到抑制，但谷氨酸合成量大增。(3) ph要適宜，各種微生物適宜生長(zhǎng)的ph范圍不同，細(xì)菌6.57.5、放線菌7.5&5、真菌5.06.0?；顚W(xué)活用即時(shí)訓(xùn)練嘰固提升1. 下列關(guān)于制備牛肉膏蛋白腺固體培養(yǎng)基的敘述，錯(cuò)誤的是()a. 操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌b. 將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯c. 待培養(yǎng)基冷卻至50 °c左右時(shí)進(jìn)行倒平板d. 待平板冷卻凝固約510 min后，將平板倒過來放置問題導(dǎo)析操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、調(diào)ph、分裝、滅菌、倒平板。解析制備牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，不能顛倒。牛肉 膏容易吸潮，所以當(dāng)牛

6、肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻棒取出稱量紙。待培養(yǎng)基冷卻至50 °c,用 手觸摸錐形瓶剛剛不燙手，并且培養(yǎng)基處于溶化狀態(tài)時(shí)，進(jìn)行倒平板。平板冷卻51() min后還需 倒置。2. 下列敘述錯(cuò)誤的是()a. 右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞，為避免污染需放在酒精燈火焰附近b. 倒平板整個(gè)過程應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行c. 打開培養(yǎng)皿皿蓋，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋d. 為避免水滴滴入培養(yǎng)基，平板應(yīng)倒過來放置問題導(dǎo)析(1)左手將培養(yǎng)皿打開條稍大于瓶i i的縫隙,右手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，立刻蓋上皿生jttl o(2) 平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的生分更好地

7、揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的遜落入培養(yǎng)基，造成 污染。二純化大腸桿菌n知識(shí)梳理夯實(shí)基礎(chǔ)突破要點(diǎn)純化人腸桿菌就是為了獲得大腸桿菌的純種菌落，這需在培養(yǎng)時(shí)，盡量使菌落中的菌體來自于一個(gè) 人腸桿菌的分裂，即這個(gè)菌落的細(xì)菌群體由一個(gè)人腸桿菌繁殖而來,這就需要接種時(shí)盡量接種單個(gè) 的大腸桿菌，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。1. 平板劃線法(1) 原理：通過塾坯在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。(2) 結(jié)合示意圖，完成下面步驟:操作示意圖as £操作將接種環(huán)放在酒 精燈火焰上灼 燒，直到接種環(huán) 燒紅在火焰旁冷卻接 種環(huán)，并打開盛 有菌液的試管的 棉塞將

8、試管口通過酒精燈的火焰將己冷卻的接種環(huán)伸入菌液中， 沾収一環(huán)菌液操作示意圖操作將試管口通過酒精燈的火焰，并迅速塞上棉塞左手將培養(yǎng)皿皿 蓋打開一條縫 隍，右手將沾冇 菌種的接種環(huán)迅 速伸入平板內(nèi)， 劃=至五條平行 線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆?養(yǎng)基灼燒接種環(huán)，冷 卻后，從第i區(qū) 域劃線的末端開 始往第二區(qū)域內(nèi) 劃線。重復(fù)以上 操作，在三、四、 五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后 一區(qū)的劃線與筆 一區(qū)相連將平板倒置,放 入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2. 稀釋涂布平板法(1) 原理：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)呈的表 面，進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時(shí)，即可獲得由里個(gè)細(xì)胞形成的

9、菌落。(2) 結(jié)合示意圖，完成下面步驟： 系列稀釋操作1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 mla. 將分別取盛有9ml水的6支試管滅菌，并按1(?10&的順序編號(hào)。b. 用移液管吸取lml培養(yǎng)的菌液，注入1(/倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。c. 從1(?倍稀釋的試管中吸取1 ml稀釋液，注入102倍稀釋的試管內(nèi)吹吸均勻，獲得址倍液。依次類推，直到完成最后一只試管的稀釋。 涂布平板操作操作示意圖.涂布器z操作將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中取不紹過0.1 ml 的菌液，滴加到 培養(yǎng)慕表而將沾有少量酒 精的涂布器在 火焰上引燃，待

10、酒精燃盡后，逢 卻810 s用涂布器將菌液 均勻地涂布在捲 養(yǎng)基表面。涂布 時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng) 皿，使菌液分布 均勻3. 菌種的保存為了保持菌種的純凈，需對(duì)菌種進(jìn)行保藏。保存時(shí)間保存方法具體方法后續(xù)處理頻繁使用臨時(shí)保藏法將菌種接種到試管的業(yè) 斜面培養(yǎng)基上，在合適的條 件下培養(yǎng)，長(zhǎng)成菌落后，放 入4 °c的冰箱中保藏每36個(gè)月需重新接 種。否則菌種容易被污染 或產(chǎn)生變異長(zhǎng)期保存甘油管藏法在3ml的甘油瓶中，裝入1 ml甘油后滅菌。將丄ml菌 液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油 充分混合放入一20 °c的冷凍箱中保存將菌種放在低溫環(huán)境中保藏的冃的是降低微生物的新陳代謝速率?！練w納提煉】1 平板

11、劃線法中幾次灼燒接種環(huán)的目的燒灼時(shí)期目的取菌種前殺死接種環(huán)上原有微生物每次劃線前殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留菌種，使下次劃線的菌種直接來自于 上次劃線末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少，達(dá)到分離菌株的目的接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者2.稀釋涂布平板法稀釋涂布平板的操作比較復(fù)雜，且各個(gè)細(xì)節(jié)均需保證“無菌”，應(yīng)特別注意:(1) 酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適。(2) 吸管頭不要接觸任何其他物體。(3) 吸管要在酒精燈火焰周圉使用?；顚W(xué)活用即時(shí)訓(xùn)練嘰固提升1. 如圖為純化大腸桿菌的一個(gè)操作環(huán)節(jié)，下列相關(guān)敘述中，錯(cuò)誤的是()a. 該操作步驟是接種，方法是平板劃線法b. 除第一次劃

12、線外，以后的每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端c. 圖中細(xì)菌密度最小的是5處d. 該接種方法適用于細(xì)菌的計(jì)數(shù)問題導(dǎo)析(1)平板劃線時(shí)，除了第一次劃線外，其余每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的丞遍，隨 著劃線次數(shù)的增加，線上的細(xì)菌密度逐漸變塵，所以在圖中細(xì)菌密度最小處是二(2)由于平板劃線法只在最后一次劃線末端細(xì)菌呈單個(gè)存在，所以該方法不適合用于細(xì)菌的計(jì)數(shù)。 解析圖中所示的純化方法是平板劃線法，該方法要求要連續(xù)劃線多次，直到最后一次劃線的末端細(xì)菌呈單個(gè)存在，所以該方法僅用于細(xì)菌的純化，不適合用于細(xì)菌的計(jì)數(shù)。課堂小結(jié)配制培養(yǎng)基的原則培養(yǎng)s 的配制計(jì)算十建魚溶化a, 調(diào)ph a分裝亠加棉配制培養(yǎng)基的方法

13、f 塞包扎十滅*->倒平板純化大腸桿菌平板劃線法稀釋涂布平板法系列稀釋涂布平板1有關(guān)稀釋涂布平板法的敘述，錯(cuò)誤的是()a. 首先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋b. 然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面c. 在適宜條件下培養(yǎng)d. 結(jié)果都可在培養(yǎng)基表血形成單個(gè)菌落2. 如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?2345。下列操作方法正確的是()a. 只在操作前將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌b. 劃線操作須在火焰上進(jìn)行c. 在5區(qū)域中才可以得到所需菌落d. 在12345區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌3. 將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37 °c恒溫箱的目的是()a

14、. 對(duì)比觀察培養(yǎng)基有沒有被微生物利用 b.對(duì)比分析培養(yǎng)基上是否生有雜菌c.沒必要放入未接種的培養(yǎng)基d.為了下次接種時(shí)再使用4. 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是()a. 將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌b. 接種純種細(xì)菌c. 適宜環(huán)境條件下培養(yǎng) d.防止外來雜菌的入侵5. (1)在大腸桿菌培養(yǎng)過程屮，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮、和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、變異類型容易選擇、等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。(2) 在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進(jìn)行(消毒、滅菌);操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和;靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原

15、因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能o(3) 若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)人腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀釋的。(4) 通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的o(5) 培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)釆用的檢測(cè)方法是。(6) 若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。強(qiáng)化訓(xùn)練扌石展拇升40分鐘課時(shí)作業(yè)基礎(chǔ)過關(guān)知識(shí)點(diǎn)一制備牛肉膏蛋白月東固體培養(yǎng)基1以下關(guān)于制備牛肉膏蛋白腺固體培養(yǎng)基的操作順序正確的是（）a. 計(jì)算一稱量一倒平板-&g

16、t; 溶化一滅菌b. 計(jì)算一稱量一溶化一倒平板一滅菌c. 計(jì)算一稱量一溶化一滅菌一倒平板d. 計(jì)算-> 稱量-> 滅菌一溶化一倒平板2. 制備牛肉膏蛋白月東固體培養(yǎng)基的過程中，關(guān)于倒平板的具體描述正確的是（） 等培養(yǎng)基冷卻至40 °c左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板 將滅過菌的培養(yǎng)皿放在桌血上，左手拔出棉塞 右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰 用左手的拇指和食指打開皿蓋 右手將錐形瓶屮培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上皿蓋 等待平板冷卻510s,將平板倒過來放置，使1111蓋在下，1111底在上a. b.c.d.解析 培養(yǎng)基冷卻至50 °c左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板

17、；將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的 桌面上，右手拿盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉寒；用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍 大于瓶口的縫隙，而不是打開皿蓋；等待平板冷卻510 min后，將平板倒過來放置，使皿蓋在 下，皿底在上。改正后的步驟為倒平板的具體操作。3. 在培養(yǎng)基的配制過程中，具有如下步驟，其正確順序?yàn)椋ǎ┤芑{(diào)ph加棉塞包扎分裝稱量a. b.c.d.解析上述步驟中，培養(yǎng)基的配制順序?yàn)榉Q量一溶化一調(diào)ph-分裝一加棉塞一包扎。知識(shí)點(diǎn)二純化大腸桿菌4. 用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品屮的活菌數(shù)時(shí)，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測(cè)出樣品屮的活菌 數(shù)，原因是（）a. 平板上的一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌b. 菌

18、落中的細(xì)菌數(shù)是固定的c. 此吋的一個(gè)菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌d. 此方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)一定與活菌的實(shí)際數(shù)相同5. 下列方法小，能夠測(cè)定樣品活菌數(shù)的是（）a. 稀釋涂布平板法b.重量法c.直接計(jì)數(shù)法d.比濁法解析 利用稀釋涂布平板法能夠在不影響生活的情況下，將細(xì)菌個(gè)體從固體培養(yǎng)基上分離出來，并 可以繁殖形成菌落，可根據(jù)菌落數(shù)測(cè)定樣品活菌數(shù)。6. 在接種操作的過程中，不正確的是（）a. 要將接種環(huán)灼燒滅菌b. 取下棉塞后要將試管口灼燒滅菌c. 將接種環(huán)伸入試管內(nèi)，先接觸長(zhǎng)菌多的部位d. 接種后還要將管口滅菌加塞7. 分離純化大腸桿菌最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。下列有關(guān)這兩種

19、方法的敘述錯(cuò) 誤的是（）a. 均將大腸桿菌接種在固體培養(yǎng)基的表面b. 獲得的每個(gè)菌落均是由一個(gè)細(xì)菌繁殖而來的子細(xì)胞群c. 都應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行操作，以防止雜菌污染d. 稀釋分散菌種的原理不同，均能達(dá)到分離純化人腸桿菌的目的解析 用稀釋涂布平板法時(shí)，如果稀釋得當(dāng)，在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落, 這個(gè)菌落可能是由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖形成的。8. 為了保持菌種的純凈，需要進(jìn)行菌種的保藏，下列有關(guān)敘述不正確的是（）a. 對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法b. 臨吋保藏的菌種一般是接種到試管的斜血培養(yǎng)基上c. 臨時(shí)保藏的菌種容易被污染或產(chǎn)生變異d. 對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以

20、采用低溫一4 °c保藏的方法解析 對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可采用甘油管藏法，即在3ml甘油瓶中加入1 ml甘油后滅菌， 將lml培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在一20 °c的冷凍箱中保存。能力提升9. 平板劃線法和稀釋涂布平板法是常用的兩種接種方法。下列相關(guān)敘述中錯(cuò)誤的是（）a. 平板劃線法要求要連續(xù)多劃兒次，且除了第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)都是上一次劃線的終 點(diǎn)b. 除了第一次劃線需要將接種環(huán)灼燒滅菌外，以后的劃線可以不用滅菌即可劃線c. 如果菌液本來濃度不高，則可以適當(dāng)降低稀釋倍數(shù)d. 充分稀釋和連續(xù)劃線的目的都是為了使形成的菌落是由單一的細(xì)菌繁殖而

21、成解析 平板劃線法需要連續(xù)劃線的目的就是使得細(xì)菌的濃度降低，所以除了第一次劃線外，以后的 每次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的終點(diǎn)，a正確；為了防止被雜菌污染，每一次劃線前要將接種環(huán)都 進(jìn)行灼燒滅菌，b錯(cuò)誤；稀釋倍數(shù)要隨菌液的濃度而定，如果菌液的濃度太大，則需要更高的稀釋 倍數(shù)，否則就可以適當(dāng)降低稀釋的倍數(shù)，c正確；稀釋涂布平板法中的充分稀釋及平板劃線法中的 連續(xù)劃線，目的都是為了保證菌落是由單一的細(xì)菌繁殖而成，d正確。10做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是（）a. 高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針冋到零后，開啟鍋蓋b. 倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上c

22、. 為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落d. 用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上解析 a項(xiàng)錯(cuò)，高壓滅菌加熱結(jié)束后，讓其自然冷卻后再慢慢打開排氣閥以排除余氣，然后才能開 蓋取物；b項(xiàng)錯(cuò)，倒平板時(shí)左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐形瓶，左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫 隙，倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋；c項(xiàng)錯(cuò)，灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免 溫度太高殺死菌種；d項(xiàng)對(duì)，在微生物的培養(yǎng)中，一般將培養(yǎng)皿倒置，在皿底上用記號(hào)筆做標(biāo)記。11在涂布有大腸桿菌的培養(yǎng)基上進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，在a、b、c處分別貼浸有不同抗生素（濃度相同）的 無菌濾紙片，d處濾紙片浸有無菌水。培養(yǎng)后的結(jié)果如下圖。

23、以下判斷錯(cuò)誤的是（）a.a處抑菌效果小于b處b.b處的濾紙片沒有瀝干c.c處抗生素?zé)o效d.d為對(duì)照解析 透明圈大的抑菌效果好，透明圈小的抑菌效果弱。d為空白對(duì)照，與d處的比較可說明a處 抑菌效果與b處相當(dāng)，a錯(cuò)誤。12. 某研究小組從有機(jī)廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是（）a. 培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌b. 轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線c. 接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱屮培養(yǎng)d. 培養(yǎng)過程中每隔一周觀察一次解析 培養(yǎng)基滅菌后再分裝到培養(yǎng)皿中；轉(zhuǎn)換劃線角度后要灼燒接種環(huán)，冷卻后再?gòu)纳洗蝿澗€的末 端開始進(jìn)行劃線；接種后的培養(yǎng)皿必須放在恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，一般每隔12 h或

24、24 h觀察一次。13. 下列對(duì)無菌操作轉(zhuǎn)接培養(yǎng)物的操作順序的敘述，正確的是（）接種環(huán)在火焰上灼燒滅菌 在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞 打開棉塞的試管口通過火焰 將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液，沾取一環(huán)菌液轉(zhuǎn)移到一裝有無菌培養(yǎng)基的試管中 將試管口塞上 棉塞接種環(huán)進(jìn)行消毒a.b.c.d.14. 下表是用于從土壤屮分離純化土壤細(xì)菌的牛肉膏蛋白腺固體培養(yǎng)基的配方。請(qǐng)回答：試劑用量牛肉膏5.0 g蛋白月東lo.ognacl5.0 g瓊脂20.0 g定容至1 000 ml(1) 培養(yǎng)基的類型很多，但培養(yǎng)基屮一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。上述培養(yǎng)基配方屮能充當(dāng)碳源的成分是和。培養(yǎng)基配制完成以后，-般還要調(diào)節(jié)ph并對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行處理。(2) 分離純化微生物最常使用的接種方法是和兩種。在接種過程中，接種環(huán)或涂布器的滅菌方法是o(3) 假設(shè)某同學(xué)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上細(xì)菌數(shù)目過多