四倍體刺槐組織培養(yǎng)研究

1、    四倍體刺槐組織培養(yǎng)研究    蘇立琢摘要 選擇當(dāng)年生長發(fā)育旺盛的幼嫩枝條帶腋芽莖段作為四倍體刺槐組織培養(yǎng)材料，研究組織培養(yǎng)的最佳條件。結(jié)果表明，最佳啟動培養(yǎng)基為ms+6-ba 0.5 mg/l+0.3 mg/l，最佳增殖培養(yǎng)基為ms+6-ba 0.8 mg/l+naa 0.3 mg/l，最佳生根培養(yǎng)基為1/2 ms+iba 0.5 mg/l+n aa 0.1 mg/l。在對試管苗移栽過程中應(yīng)做好遮蔭并控制溫室內(nèi)溫度和濕度條件，確保成活率在90%左右。關(guān)鍵詞 四倍體刺槐；組織培養(yǎng)；快速繁殖s792.27 a 1007-5739（2017）17-01

2、40-01四倍體刺槐根萌蘗性較強(qiáng)、根系發(fā)達(dá)，自身含有豐富的根瘤菌，可提升土壤內(nèi)有機(jī)質(zhì)含量、改良土壤、形成土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，還具有耐低溫、耐貧瘠、速生豐產(chǎn)特性，在治理沙漠化、防風(fēng)固沙、水土保持和綠化上具有優(yōu)勢，屬優(yōu)質(zhì)蜜源植物，有利于促進(jìn)地方養(yǎng)蜂業(yè)發(fā)展，經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益顯著。為確保優(yōu)良四倍體刺槐品種快速繁殖，對四倍體刺槐組織培養(yǎng)加強(qiáng)研究具有重要意義。1 材料與方法1.1 試驗材料四倍體刺槐生長的季節(jié)在春季，此時應(yīng)選取萌發(fā)的幼嫩帶芽莖段。1.2 外植體滅菌將葉片去除并用自來水清洗干凈，在超凈工作臺無菌條件下，使用70%酒精對四倍體刺槐消毒30 s，使用0.1%升汞消毒7 min，再利用無菌水清洗34遍

3、，使用無菌濾紙將材料表面水分吸收干凈，在帶腋芽莖段切取1 cm并將其在啟動培養(yǎng)基上接種1-3。1.3 啟動培養(yǎng)啟動培養(yǎng)基主要是將ms作為基本培養(yǎng)基，在啟動培養(yǎng)基上分別添加不同濃度的6-ba和 naa，每瓶接種1株，每處理完30瓶，在生長30 d后觀察啟動培養(yǎng)基上四倍體刺槐生長情況，做好誘導(dǎo)率統(tǒng)計。1.4 培養(yǎng)基的篩選1.4.1 增殖培養(yǎng)基的篩選。將誘導(dǎo)成功的試管苗，分別切割成為單個小苗，接種在附加6-ba 0.11.5 mg/l、naa 0.10.5 mg/l幾種組合的ms培養(yǎng)基上。將5株小苗放置在1個小瓶上，每完成20瓶后重復(fù)1次，在生長30 d后，觀察小苗生長，計算平均增值系數(shù)和生長量，找

4、出最佳組合。1.4.2 生根培養(yǎng)基的篩選。將試管苗生長到2 cm的莖段切下，接種到生根培養(yǎng)基上，將iba 0.10.5 mg/l、naa 0.10.3 mg/l的幾種組合中分別附加到生根培養(yǎng)基1/2ms上，將5株小苗放置在小瓶上，每完成20瓶后重復(fù)1次，生長30 d后，觀察小苗生長，計算平均生根條數(shù)、根長、生根率，找出最佳生根條件。1.5 培養(yǎng)條件分別將白糖30 g/l、瓊脂0.6 g/l加入到增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基內(nèi)，ph值6.3，培養(yǎng)溫度為25 左右，光照強(qiáng)度2 000 lx，光照時間12 h/d。1.6 移栽4月上旬將試管苗移栽到溫室內(nèi)，選取根系生長較好的試管苗，洗凈根部培養(yǎng)基，移入72

5、穴育苗盤，以珍珠巖為基質(zhì)，使用0.2%高錳酸鉀溶液消毒，澆水后，放入備好的塑料小拱棚，棚內(nèi)溫度2530 ，相對濕度大于85%，將遮陽網(wǎng)放置在拱棚上方。持續(xù)1周后，降低拱棚相對濕度，28 d后撤去拱棚，移栽植入大田，澆水，蓋遮陽網(wǎng)，5 d后去除4-6。2 結(jié)果與分析2.1 激素對啟動培養(yǎng)的影響在帶莖段接入啟動培養(yǎng)基后，若持續(xù)>10 d，腋芽處明顯萌動，后進(jìn)入芽膨大期，產(chǎn)生葉片；30 d后，生成3 cm高叢芽，最佳培養(yǎng)基組合為ms+6-ba 0.5 mg/l+naa 0.3 mg/l。2.2 激素對試管苗增殖的影響在將細(xì)胞分裂素6-ba加入增殖培養(yǎng)基后，出現(xiàn)增殖效果，增殖系數(shù)隨6-ba濃度增

6、加而加大，增殖培養(yǎng)基內(nèi)6-ba濃度達(dá)1.0 mg/l時，其增殖系數(shù)逐漸減少。這是由于6-ba濃度增加，易形成愈傷組織，有效苗數(shù)量減少，增殖系數(shù)降低。當(dāng)naa濃度達(dá)0.1 mg/l時，阻礙苗正常生長；當(dāng)naa濃度達(dá)0.3 mg/l時，苗生長較好。最佳增殖培養(yǎng)組合為ms+6-ba 0.8 mg/l+naa 0.3 mg/l。2.3 生長素對試管苗生根的影響若將生長素iba單一添加到培養(yǎng)基內(nèi)，會促進(jìn)試管苗生根，但莖部生長發(fā)育減緩，且根部側(cè)根數(shù)量少，若在培養(yǎng)基中添加生長素naa時，會促進(jìn)莖部生長，同時根部側(cè)根數(shù)量增加，提升移栽成活率。若將生長素iba 0.5 mg/l和 naa 0.1 mg/l配合使

7、用，其效果達(dá)到最佳，生根率達(dá)95%，平均生根4條/株左右，且根生長發(fā)育較好。2.4 苗木移栽及生長珍珠巖內(nèi)生長25 d的生根試管苗，移栽成活率達(dá)95%，移栽大田后，生長20 d后成活和移栽成活率均大于97%。試管苗移栽當(dāng)年，四倍體刺槐平均高度為20 cm左右，葉片數(shù)量為15枚；單株高度在30 cm左右，葉片數(shù)量也達(dá)40枚。3 結(jié)論選擇當(dāng)年生長發(fā)育旺盛的幼嫩枝條帶腋芽莖段作為四倍體刺槐組織培養(yǎng)材料。分化培養(yǎng)基種類為將ms+6-ba 0.5 mg/l+naa 0.3 mg/l作為啟動培養(yǎng)基，將ms+6-ba 0.8 mg/l+naa 0.3 mg/l作為增殖培養(yǎng)基，將1/2ms+iba 0.5 mg/l+naa 0.1 mg/l作為生根培養(yǎng)基。選擇4月上旬移栽，以珍珠巖為移栽基質(zhì)，移栽大田成活率大于90%。4 參考文獻(xiàn)1 李曉青，張曉申，王慧瑜.四倍體刺槐組織培養(yǎng)與快速繁殖j.陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（2）：57-58.2 陳桂芳，婁利華.四倍體刺槐組織培養(yǎng)快速繁殖實驗j.四川林業(yè)科技，2005，26（3）：88-89.3 張新葉，蔡晟，胡興宜，等.四倍體刺槐的組織培養(yǎng)研究j.湖北林業(yè)科技，2002（4）：4-6.4 郭軍戰(zhàn)，舒慶艷，王麗玲，等.四倍體刺槐組織培養(yǎng)中的外植體選擇和消毒研究j.西北林學(xué)院學(xué)報，2002（1）：15-18