中原牡丹組織培養(yǎng)及植株再生探究

1、中原牡丹組織培養(yǎng)及植株再生探究摘要 以中原牡丹品種鱗芽為外植體，以改良ms培養(yǎng)基 為基本培養(yǎng)基，探討了不同激素配比對(duì)中原牡丹誘導(dǎo)、繼代 及生根的影響。結(jié)果表明：適宜于中原牡丹初代培養(yǎng)的最佳 培養(yǎng)基為 ms+6-ba 0.5-1.0 mg/l+kt 0.5 mg/l+iaa 0 0.5 mg/l+ga3 0.2 0.5 mg/l 最佳繼代培養(yǎng)基為 ms+6-ba 0.5 1.0 mg/l+kt 0.3 mg/l+ga3 0.2 mg/l ;最佳生根培養(yǎng)基為 1/2 ms+iba4.0 mg/l+iaa 1.0 mg/lo關(guān)鍵詞牡丹；組織培養(yǎng)；誘導(dǎo)；繼代；生根中圖分類號(hào)s685.11文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼a文

2、章編號(hào)1007-5739 ( 2012 ) 20-0159-02牡丹(paeonia suffruticosa ander)為芍藥科芍藥屬牡 丹組多年生灌木，是原產(chǎn)于我國(guó)的傳統(tǒng)名花1。傳統(tǒng)牡丹繁 殖方式有種子繁殖、分株繁殖和嫁接繁殖等。但傳統(tǒng)繁殖方 法存在實(shí)生苗變異性強(qiáng)、無(wú)性繁殖系數(shù)極低、耗時(shí)、耗材、 占地多及受繁殖季節(jié)限制等問題2,難以滿足牡丹產(chǎn)業(yè)化生 產(chǎn)需求。而采用組織培養(yǎng)法繁殖，是解決傳統(tǒng)繁殖方式弊端、 實(shí)現(xiàn)牡丹快速繁殖和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的有效途徑。近20多年來(lái)，許多國(guó)內(nèi)外學(xué)者就牡丹的組織培養(yǎng)開展了 相應(yīng)的工作34,在牡丹鱗芽誘導(dǎo)、愈傷組織誘導(dǎo)、體胚誘導(dǎo)以及對(duì)牡丹組織培養(yǎng)過(guò)程中外植體分化、生根

3、條件、移栽 環(huán)境等進(jìn)行了大量的研究，并取得了一些成果，但還存在許多問題，如試管苗褐化嚴(yán)重、生根率低、根系質(zhì)量差、移栽 階段成活率低等問題5-6o中原牡丹是中國(guó)牡丹中起源最 早、分布最廣泛、品種最多且變異最豐富的品種群7。該試 驗(yàn)選用洛陽(yáng)國(guó)家牡丹園6個(gè)中原品種的牡丹鱗芽作為外植體,通過(guò)研究無(wú)體系的建立、增殖培養(yǎng)和生根過(guò)程中的基本培養(yǎng)基、激素配比的影響，來(lái)探索適合牡丹組培苗生長(zhǎng)、 生根的最佳激素條件，以期提高組培苗生長(zhǎng)質(zhì)量及生根能 力，為牡丹工廠化生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。1材料與方法 1.1試驗(yàn)材料試驗(yàn)材料采自洛陽(yáng)國(guó)家牡丹園的洛陽(yáng)紅、菱花湛露、烏龍捧盛、脂紅、瑠珞寶珠、如花似玉等中原牡丹品種的鱗芽。1.

4、2試驗(yàn)方法 1.2.1材料處理。將牡丹鱗芽外層干枯鱗片用鑲子輕輕剝?nèi)?，然后置于燒杯中，加適量洗潔精，在流水下沖洗20 min , 再用定性濾紙吸去鱗芽表面水分，放置到無(wú)菌操作臺(tái)上，用 0.1% hgci2消毒8 12 min ,無(wú)菌水反復(fù)沖洗45次，用 鑲子及手術(shù)刀小心取出鱗片里面的嫩芽，接種到相應(yīng)培養(yǎng)基 中。1.2.2初代培養(yǎng)。初代培養(yǎng)以改良ms培養(yǎng)基為基本培養(yǎng) 基，附加不同濃度6-ba. kt、ga3、iaa的組合（表1 ）, 均添加0.6%瓊脂和3%蔗糖。ph值5.8 - 6.0 ,溫度 （24±1 ） °c ,光照時(shí)間12 h/d ,光照強(qiáng)度2 000 lx。各處

5、理接種30瓶，每瓶接種1個(gè)外植體。30 d后統(tǒng)計(jì)幼芽萌發(fā) 及生長(zhǎng)情況。1.2.3繼代培養(yǎng)。誘導(dǎo)培養(yǎng)30 d后，植株高度達(dá)到45 cm時(shí)，將誘導(dǎo)苗用手術(shù)刀切去基部組織，轉(zhuǎn)接入繼代培養(yǎng) 基，進(jìn)行最佳繼代培養(yǎng)基配方篩選。基本培養(yǎng)基為改良ms、 蔗糖 30 g/l、瓊脂 6 g/l.pvp 0.4 g/l ,ph 值 5.8。選擇 6-ba. kt、ga3 3種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì),2種濃度水平的正交試驗(yàn)（表 2 ）,每種處理轉(zhuǎn)接30瓶，每瓶轉(zhuǎn)接1株，30 d后觀察統(tǒng)計(jì) 長(zhǎng)勢(shì)與增殖系數(shù)。1.2.4生根培養(yǎng)?；九囵B(yǎng)基為1/2ms.蔗糖30 g/l、 瓊脂 5.5 g/l、pvp 0.4 g/l , ph 值

6、5.8。采用 iba、naa、iaa 3種激素，3種濃度水平的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)（表3 ）,將繼 代培養(yǎng)產(chǎn)生的分菓芽接種到生根培養(yǎng)基中。35 d后統(tǒng)計(jì)生根率及生根質(zhì)量，生根率計(jì)算公式如下：生根率（% ） =»x1001.2.5培養(yǎng)條件。培養(yǎng)條件為溫度（24±1 ） °c ,光照時(shí) 間12 h/d ,光照強(qiáng)度為2 000 ixo2結(jié)果與分析2.1初代培養(yǎng)由表4可知，9種培養(yǎng)基均能完成啟動(dòng)培養(yǎng)，但生長(zhǎng)狀況存在一定差異，隨ga3濃度的增加，莖高逐漸加大:iaa 濃度越大，基部越膨大；幼苗的玻璃化現(xiàn)象與6-ba濃度有 一定的相關(guān)性。2、3、6號(hào)培養(yǎng)基的莖生長(zhǎng)量適中，對(duì)繼續(xù) 培養(yǎng)

7、有利，適宜作初代培養(yǎng)。其中，6號(hào)培養(yǎng)基最適合。而 4、5、7號(hào)培養(yǎng)基葉柄較長(zhǎng)，莖葉不太協(xié)調(diào)，不適宜作初代培養(yǎng)。2.2繼代培養(yǎng)由表5可知，2、3號(hào)培養(yǎng)基生長(zhǎng)相對(duì)較差，1、4號(hào)培養(yǎng)基生長(zhǎng)相對(duì)較好，但由于1號(hào)培養(yǎng)基增殖系數(shù)低，所以最佳 增殖培養(yǎng)基為4號(hào)。試管苗隨ga3濃度增加，莖葉生長(zhǎng)變 弱。2.3生根培養(yǎng)由表6可知，6、7、9號(hào)培養(yǎng)基生根率相對(duì)較高，其中7號(hào)培養(yǎng)基生長(zhǎng)情況基本正常，而且根直接從莖上長(zhǎng)出。最佳 生根培養(yǎng)基為 1/2ms+iba4.0 mg/l+iaa 1.0 mg/lo 在一定iba濃度范圍內(nèi)，iba濃度越大，生根速度越快。3結(jié)論與討論該試驗(yàn)條件下，最佳初代培養(yǎng)基為ms+6-ba 0

8、.5-1.0mg/l+kt 0.5 mg/l+iaa 0 0.5 mg/l+ga3 0.2 0.5 mg/l ; 最佳繼代培養(yǎng)基為ms+6-ba 0.5 - 1.0 mg/l+kt 0.3 mg/l+ga3 0.2 mg/l ;最佳生根培養(yǎng)基為 1/2ms+iba 4.0mg/l+laa 1.0 mg/lo試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，改良ms培養(yǎng)基對(duì)中原牡丹品種均適合；6ba對(duì)各品種芽增殖效果均較理想，適用濃度0.515 mg/l ,增殖培養(yǎng)ga3濃度不宜超過(guò)0.5 mg/l ,否則抑制下一步生 根；1/2 ms添加iba或naa、iaa較適合生根培養(yǎng)，這與李玉龍等8認(rèn)為試管苗生根所需生長(zhǎng)素各類專一有差別，但

9、與孔祥生等9用iba誘導(dǎo)生根，生根質(zhì)量及生根率均高一 致。且3種生長(zhǎng)素濃度和不宜超過(guò)5 mg/l ,否則幼苗生長(zhǎng)受 到抑制。采用牡丹鱗芽誘導(dǎo)完整植株的方法，可以不受季節(jié)和外 界環(huán)境限制，在短時(shí)間內(nèi)培育出大量再生植株10;另外， 采用牡丹鱗芽誘導(dǎo)方法進(jìn)行快速繁殖，變異少，可用于牡丹 種質(zhì)資源的試管保存，具有其他繁殖方式不可取代的優(yōu)越 性，在牡丹種質(zhì)資源保存及種苗生產(chǎn)上得到越來(lái)越廣泛的應(yīng) 用。4參考文獻(xiàn)1 王蓮英中國(guó)牡丹與芍藥m.北京：金盾出版社,2006.2 李萍，成仿云牡丹組織培養(yǎng)技術(shù)的研究進(jìn)展j.北方 園藝，2007 ( 11 ): 102-106.3 bouza l , jacques m

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