_血清免疫球蛋白IgG提取1

1、整理ppt 鹽析法純化鹽析法純化血清血清中中IgGIgG類抗體類抗體整理ppt實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆照莆整}析法鹽析法提取血清免疫球蛋白提取血清免疫球蛋白IgGIgG抗體的原理抗體的原理熟悉血清熟悉血清IgGIgG提取純化操作過程和方法提取純化操作過程和方法整理ppt二、實(shí)驗(yàn)原理 蛋白質(zhì)在不同濃度的鹽溶液中相對溶解度不同，它在一蛋白質(zhì)在不同濃度的鹽溶液中相對溶解度不同，它在一定濃度的中性鹽溶液中易于沉淀，而其他蛋白質(zhì)組分在定濃度的中性鹽溶液中易于沉淀，而其他蛋白質(zhì)組分在此時(shí)不易沉淀，通過離心可將兩者分離。此時(shí)不易沉淀，通過離心可將兩者分離。整理ppt透析法脫鹽: 透析透析是將含有小分子雜是將含有小

2、分子雜質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液裝在半透質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液裝在半透膜（玻璃紙、火綿紙等）膜（玻璃紙、火綿紙等）制的透析袋里放在透析緩制的透析袋里放在透析緩沖液中進(jìn)行，可不斷更換沖液中進(jìn)行，可不斷更換緩沖液，直至雜質(zhì)被除去緩沖液，直至雜質(zhì)被除去整理ppt四、四、操操作作步步驟驟室溫靜置室溫靜置30min,4離心，離心，4000rpm,10min上清液（上清液（球蛋白）球蛋白）沉淀為沉淀為球蛋白球蛋白紫外分光光度計(jì)測定紫外分光光度計(jì)測定蛋白蛋白含量含量沉淀溶于沉淀溶于1mL生理鹽水生理鹽水移入透析袋，充分透析，移入透析袋，充分透析，沉淀溶于沉淀溶于1mL生理鹽水生理鹽水,滴加飽和硫酸銨溶液滴加飽和硫酸銨溶液0.5

3、mL棄去上清液（含清蛋白）棄去上清液（含清蛋白）棄去上清液（棄去上清液（、球蛋白）球蛋白）沉淀溶于沉淀溶于1mL生理鹽水生理鹽水,滴加飽和硫酸銨溶液滴加飽和硫酸銨溶液0.5mL室溫靜置室溫靜置30min,4離心，離心， 4000rpm,10min1mL血清血清1mL生理鹽水生理鹽水滴加飽和硫酸銨溶液滴加飽和硫酸銨溶液2mL 室溫靜置室溫靜置30min,4離心，離心， 4000rpm,10min整理ppt五、結(jié)果判斷 分別測分別測OD280和和OD260處的光密度值，按照公式計(jì)算處的光密度值，按照公式計(jì)算蛋白質(zhì)濃度（蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）= 1.45OD2800.74 OD260 IgG正常參

4、考值正常參考值 ：8001600gLl效價(jià)可用免疫雙擴(kuò)散試驗(yàn)判斷；效價(jià)可用免疫雙擴(kuò)散試驗(yàn)判斷；l特異性則可通過雙擴(kuò)、免疫電泳或交叉凝集試驗(yàn)進(jìn)行考察；特異性則可通過雙擴(kuò)、免疫電泳或交叉凝集試驗(yàn)進(jìn)行考察；1.濃度也濃度也 可通過免疫濁度法等檢測?？赏ㄟ^免疫濁度法等檢測。整理ppt六、注意事項(xiàng)鹽的飽和度：鹽的飽和度：影響鹽析的重要因素，不同蛋白質(zhì)的鹽析 要求鹽的飽和度不同pHpH值值：在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)溶解度最小越易沉淀析出。蛋白質(zhì)濃度蛋白質(zhì)濃度：越大越易沉淀，使用鹽的飽和度的極限愈低。過高也易引起其他雜蛋白共沉。溫度溫度：一般可在室溫下進(jìn)行，某些對熱特別敏感的酶，則宜低溫。整理ppt脫鹽脫鹽：透析

5、時(shí)間較長，常在低溫下進(jìn)行，并加入防腐劑避免變性或微生物的污染。飽和硫酸銨溶液的滴加方式：飽和硫酸銨溶液的滴加方式：逐滴，攪拌鹽析后放置時(shí)間、離心操作的速度、時(shí)間鹽析后放置時(shí)間、離心操作的速度、時(shí)間透析袋的使用透析袋的使用 整理ppt七、方法學(xué)評價(jià)硫酸銨水中溶解度高，受溫度影響小，不易使蛋白質(zhì)硫酸銨水中溶解度高，受溫度影響小，不易使蛋白質(zhì)變性，操作簡單，為鹽析中常用的中性鹽變性，操作簡單，為鹽析中常用的中性鹽硫酸銨中含有氮，會干擾蛋白質(zhì)的測定，且溶液的緩硫酸銨中含有氮，會干擾蛋白質(zhì)的測定，且溶液的緩沖能力差，故多用于大量蛋白的粗提。若要獲得純化沖能力差，故多用于大量蛋白的粗提。若要獲得純化的免疫球蛋白，必須經(jīng)過凝膠過濾、離子交換層析和的免疫球蛋白，必須經(jīng)過凝膠過濾、離子交換層析和親和層析進(jìn)一步提純