高中生物難點(diǎn)剖析 12 基因工程的基本操作程序?qū)W案 新人教版選修3

1、互動課堂疏導(dǎo)引導(dǎo)1.基因、基因文庫、目的基因基因是有遺傳效應(yīng)的dna片段，是控制性狀的遺傳物質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)和功能單位，基因的脫氧核苷酸序列代表遺傳信息?；蛭膸焓菍⒑心撤N生物不同基因的許多dna片段，導(dǎo)入受體菌的群體中通過克隆而儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，叫做基因文庫。建立基因文庫的目的就是為獲得大量的目的基因作準(zhǔn)備。如果基因文庫中含有一種生物的所有基因，這個基因文庫就叫做基因組文庫。如果基因文庫中含有一種生物的部分基因，這個基因文庫就叫做cdna文庫。基因文庫就相當(dāng)于某種生物的基因倉庫，儲備著大量的同種基因。目的基因是基因工程操作中需要的外源基因，它是編碼某種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因

2、，如生物的抗逆性基因、抗蟲基因等。2.dna復(fù)制、pcr技術(shù)與基因克隆dna復(fù)制主要在細(xì)胞內(nèi)完成，以dna的兩條鏈為模板，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則合成兩個完全相同的dna分子的過程。復(fù)制的條件是：以dna雙鏈作模板，以四種脫氧核苷酸為原料，需要線粒體供應(yīng)，還需要多種酶，如解旋酶、dna聚合酶等。pcr技術(shù)是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定dna的核酸合成技術(shù)。它遵循的原理與dna復(fù)制原理相同，條件是有一段已知目的基因的核苷酸序列和根據(jù)核苷酸序列合成的引物；原料是四種脫氧核苷酸，也需要多種酶，如dna聚合酶。在pcr擴(kuò)增儀上自動復(fù)制。克?。河枚喾N限制性內(nèi)切酶或者機(jī)械的方法，將某種生物的細(xì)胞dna切成不同片段，

3、并把所有片段隨機(jī)地分別連接到用同樣內(nèi)切酶切過的基因運(yùn)載體上，然后分別轉(zhuǎn)移到適當(dāng)受體細(xì)胞如細(xì)菌中，通過細(xì)胞增殖而構(gòu)成各個片段的無性繁殖系。3.基因表達(dá)載體的構(gòu)建由于單獨(dú)的dna片段目的基因是不能穩(wěn)定遺傳的，因此若要使目的基因在受體細(xì)胞中保持穩(wěn)定和表達(dá)，就需要將目的基因與相應(yīng)載體結(jié)合，形成重組結(jié)構(gòu)，即基因表達(dá)載體。以保證目的基因?qū)胂鄳?yīng)受體細(xì)胞后，一方面能穩(wěn)定存在并遺傳，另一方面能表達(dá)和發(fā)揮作用。基因表達(dá)載體的組成必須要有目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因等。在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，主要考慮以下幾方面的因素。（1）基因的特點(diǎn)：如果一個來自動物的目的基因含有內(nèi)含子，就不能用于轉(zhuǎn)基因植物，因?yàn)閯游镏袃?nèi)含

4、子的剪接系統(tǒng)與植物的不同，植物不能將動物基因的內(nèi)含子剪切掉，只能用該基因的cdna。基因的產(chǎn)物如果是一個糖蛋白，那么該基因在原核生物細(xì)菌中表達(dá)出來的蛋白就可能不具備天然狀態(tài)下的活性，因?yàn)樘堑鞍咨系奶擎準(zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體上加上的，而細(xì)菌無這些細(xì)胞器。（2）要選擇強(qiáng)啟動子或組織特異性啟動子。啟動子有強(qiáng)有弱，選擇強(qiáng)啟動子可以增加轉(zhuǎn)錄活性，使基因產(chǎn)物量增多。如果希望基因在生物的某個組織表達(dá)，如只在植物種子中表達(dá)，就要選擇種子中特異表達(dá)的啟動子。（3）要有選擇標(biāo)記基因，如抗生素基因，以便選擇出真正的轉(zhuǎn)基因生物。4.目的基因的檢測內(nèi)容和方法的比較類型步驟檢測內(nèi)容方法結(jié)果顯示分子檢測第一步目的基因是否進(jìn)入

5、受體細(xì)胞dna分子雜交（dna和dna之間）是否成功顯示出雜交帶第二步目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mrna分子雜交技術(shù)（dna和mrna之間）是否成功顯示出雜交帶第三步目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)抗原抗體雜交是否成功顯示出雜交帶個體水平鑒定包括抗蟲、抗病的接種實(shí)驗(yàn)，以確定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的活性比較，以確定功能是否相同等活學(xué)巧用【例1】 基因工程科學(xué)家常采用細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受體細(xì)胞，原因是（）a.結(jié)構(gòu)簡單，操作方便b.繁殖速度快c.遺傳物質(zhì)含量少，簡單d.性狀穩(wěn)定，變異少解題提示：基因工程的最終目的是要運(yùn)用于生產(chǎn)，因此要有利于生產(chǎn)。微生物可以利用發(fā)酵工程進(jìn)行大量生產(chǎn)。答

6、案：b【例2】 pcr技術(shù)擴(kuò)增dna，需要的條件是（）目的基因atp四種脫氧核苷酸dna聚合酶等mrna核糖體a.b.c.d.解題提示：pcr技術(shù)擴(kuò)增dna的過程實(shí)質(zhì)就是體外復(fù)制dna的過程，所以dna復(fù)制的條體都必須具備。答案：a【例3】 科學(xué)家在培育抗蟲棉時(shí)，經(jīng)過了許多復(fù)雜的過程和不懈的努力，才獲得成功。起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達(dá)。然后在插入抗蟲基因的質(zhì)粒中插入啟動子（抗蟲基因首端），導(dǎo)入棉花受精卵，長成的棉花植株還是沒有抗蟲能力?？茖W(xué)家又在有啟動子、抗蟲基因的質(zhì)粒中插入終止子（抗蟲基因末端），導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果長

7、成的植株有了抗蟲能力。由以上過程推知，作為目的基因的運(yùn)載體應(yīng)具備的結(jié)構(gòu)是（）a.目的基因、啟動子b.目的基因、終止子c.目的基因、啟動子、終止子d.目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因解題提示：一個基因表達(dá)載體的組成，除了目的基因外，還必須有啟動子、終止子以及標(biāo)記基因等。有了啟動子，rna聚合酶與啟動子結(jié)合驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mrna。終止子在目的基因的尾端，作用是終止轉(zhuǎn)錄。標(biāo)記基因是為了鑒別受體細(xì)胞中是否有目的基因。答案：d【例4】 正確表示基因操作“四步曲”的是（）解題提示：基因操作“四步曲”包括提取目的基因，目的基因與運(yùn)載體結(jié)合，目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，目的基因的檢測和表達(dá)。提取目的基因和目的基因與運(yùn)載體結(jié)合，要用同一種限制酶切割dna片段和質(zhì)粒。目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，要用cacl2（細(xì)菌）改變細(xì)胞壁通透性，用到顯微注射等技術(shù)。目的基因的檢測和表達(dá)，是檢測運(yùn)載體標(biāo)記基因的表達(dá)和目的基因的表達(dá)。答案：c【例5】 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性，只有通過鑒定和檢測才能知道。下列屬于目的基因檢測和鑒定的是（）檢測受體細(xì)胞是否有目的基因檢測受體細(xì)胞是否有致病基因檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄mrna檢測目的基因是否翻譯蛋白質(zhì)a.b.c.d.解題提示：目的基因