藥學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文金銀花和金銀花露中綠源酸和4種黃酮含量的測定.doc

1、.金銀花和金銀花露中綠原酸和4種黃酮含量的測定    金銀花為忍冬科多年生半常綠纏繞植物忍冬的花蕾及初開的花，又名忍冬花、銀花、雙花等，其主要成分有機(jī)酸綠原酸具有抗菌、抗病毒及抗真菌、增強(qiáng)機(jī)體防御機(jī)能的作用，也是鑒定金銀花品質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)金銀花中含有木犀草素、金絲桃苷、槲皮素、芹菜素等多樣黃酮類化合物。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，黃酮類化合物具有降低心肌耗氧量，使冠脈、腦血管流量增加，軟化血管，降血糖、血脂等作用。同時(shí)黃酮還是一類天然的抗氧化劑，具有抗衰老，增加機(jī)體免疫力的生理活性作用。鑒于此，金銀花中黃酮的含量也可以作為金銀花品質(zhì)檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)。目前對以上這5種物質(zhì)已經(jīng)建立的

2、分析方法已經(jīng)有：阻抑催化褪色光度法 、分光光度法、高效液相色譜法、共振瑞利散射光譜法、催化動力學(xué)光度法、流動注射化學(xué)發(fā)光法、毛細(xì)管電泳法等但文獻(xiàn)中多為一種或兩種物質(zhì)的測定，而同時(shí)對金銀花中綠原酸和黃酮類化學(xué)物進(jìn)行測定的報(bào)導(dǎo)還未曾出過。本文則建立了一種反相高效液相色譜法同時(shí)對綠原酸、金絲桃苷、木犀草素、槲皮素、芹菜素進(jìn)行測定，旨為增加對金銀花質(zhì)量檢測的補(bǔ)充。 1  實(shí)驗(yàn)部分1.1 儀器與試劑    Agilentl100高效液相色譜儀(美國，Agilent公司)；DF一101s集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(中國，鄭州 長城科工貿(mào)有限公司)；DZF一6021真空

3、干燥箱(中國，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)；pHs一3c酸度計(jì)(中國， 成都世紀(jì)方舟科技有限公司) 綠原酸、金絲桃苷對照品(98%)，槲皮素對照品 (98%,中國藥品生物制品檢定)，木犀草素對照品(99%,中國藥品生物制品檢定),芹菜素對照品。甲醇(分析純)、磷酸(分析純)、金銀花樣品(購于重慶市)和金銀花露(每 500 mL相當(dāng)于金銀花31.25 g)。水為二次蒸餾水。1.2 實(shí)驗(yàn)方法 1.2.1 色譜條件    Eclipse XDB-C8柱(4.6×150 mm，5mm)；流動相為甲醇-水(用磷酸調(diào)節(jié)pH-2.60)。采用梯度洗脫

4、,檢測波長340 nm；流 速0.8 mLmin；進(jìn)樣量為20uL。 1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制    分別精密稱取干燥至恒重的綠原酸、槲皮素、木犀草素和金絲桃苷對照品適量加甲醇溶解制成1.0 g/L的貯備液，芹菜素用熱的乙醇溶解制成1.0 g/L的貯備液。臨用前用貯備液配制一系列不同濃度的5種標(biāo)樣的混合溶液進(jìn)樣20uL,以各組分峰面積y對其質(zhì)量濃度X(g/L)進(jìn)行線性回歸分析，得到的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及其檢測限。 1.2.3 樣品含量測定 精密稱取金銀花試品粉末(過60目篩)2.000g，置圓底燒瓶中，加30 mL 70%

5、乙醇(磷酸調(diào)pH- 26)，于86水浴回流1h，過濾，濾渣加2OmL 7O%乙醇(磷酸調(diào)pH-2.6)，重復(fù)上述步驟兩次，合并3 次提取液，放冷，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶，稀釋至刻度，搖勻，取2.5 mL稀釋至100 mL，用0.45 m微孔 濾膜過濾，作為供試品溶液1；取金銀花露1 mL稀釋至10 mL作為供試品溶液2，按2.1色譜條件分析，外標(biāo)法計(jì)算含量。1.2.4 精密度實(shí)驗(yàn)    取同一濃度對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測得峰面積，計(jì)算得綠原酸的標(biāo)準(zhǔn)相對偏差(RSD)為 2.8 96，金絲桃苷的RSD為1.4 ，槲皮素的RSD為2.O，木犀草素的RSD為1.1

6、 9/6表明該方法的精密度良好。 1.2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)    按照23項(xiàng)下樣品的預(yù)處理過程分別同時(shí)處理金銀花樣品5份，測得綠原酸含量的RSD為1.69%；金 絲桃苷含量的RSD為2.4 ；槲皮素含量的RSD為2.1；木犀草素含量的RSD為1.8%。表明該方法的重現(xiàn)性良好。1.2.6 加樣回收實(shí)驗(yàn)    精密量取已知含量的金銀花試液5份，分別精密加入綠原酸、金絲桃苷、槲皮素和木犀草素對照品，測定樣品的平均加標(biāo)回收率。 1.2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一樣品溶液，分別于0、4、8、12、24 h進(jìn)樣測定，綠原酸的RSD為0

7、.87 ，金絲桃苷的RSD為 0.63% ，槲皮素的RSD為0.95% ，木犀草素的RSD為0.77% ，表明樣品在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。 2 結(jié)果與討論2.1 流動相的選擇    黃酮類成分在HPLC測定中易出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，在流動相中加入磷酸，抑制其拖尾，提高峰形對稱性。通過對不同比例的有機(jī)相及磷酸濃度的實(shí)驗(yàn)選擇，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇-水(磷酸調(diào)pH-26)系統(tǒng)比乙腈-水(磷酸調(diào)pH-26)系統(tǒng)分離效果好，故選擇甲醇-水(磷酸調(diào)pH=26)為流動相。并根據(jù)這5種物質(zhì)的極性和分離情況，調(diào)整流動相的配比，采用梯度洗脫。 2.2 實(shí)驗(yàn)測定波長的選擇 

8、   掃描各對照品在200700 nm范圍內(nèi)的紫外吸收光譜，分析結(jié)果，實(shí)驗(yàn)選擇在330，340，350，360nm 處對混合樣測定，比較發(fā)現(xiàn)在340nm處所測定的峰面積相對較大，靈敏度較高，峰形較好，因此本實(shí)驗(yàn)采 用340nm作為測定波長 2.3 樣品處理方法的選擇     金銀花樣品分別用水浴回流提取與超聲提取處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)水浴回流法提取的金絲桃苷、槲皮素和 木犀草素的總含量比超聲法的高出一倍，因?yàn)榛亓鞲欣谲盏乃猓瑢?shí)驗(yàn)比較選定磷酸緩沖，V (磷酸)：V(乙醇)-30：70水浴回流提取的方法。3  結(jié)  論     文獻(xiàn)中的高效液相色譜法的測定結(jié)果線性范圍窄，靈敏度低；而其他方法也存在一定的不足，如：分