無菌檢查法演示實驗ppt課件

1、無菌檢查法演示實驗無菌檢查法演示實驗抗生素室抗生素室 易大為易大為遼寧省藥品檢驗所遼寧省藥品檢驗所提綱提綱1.定義定義2.常見檢驗種類常見檢驗種類3. 4.培育基及培育基的適用性檢查培育基及培育基的適用性檢查5.稀釋液以及沖洗液稀釋液以及沖洗液6. 無菌檢查法實例無菌檢查法實例7.方法學驗證實驗方法學驗證實驗1.定義定義:系指用于檢查藥典要求無菌的藥系指用于檢查藥典要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他種品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他種類能否無菌的一種方法。類能否無菌的一種方法。 的意義的意義: 僅闡明了供試品在該檢驗條件下未發(fā)僅闡明了供試品在該檢驗條件下未發(fā)現(xiàn)被微生物污染?，F(xiàn)被微生物污染

2、。 2.常見檢驗種類 注射劑 (水針、粉針、油乳注射劑 眼用以及非注射產(chǎn)品 手術、燒傷、嚴重創(chuàng)傷面給藥制劑 無菌封裝的原料藥 醫(yī)療器具和醫(yī)用資料3.培育基培育基 硫乙醇酸鹽流體培育基硫乙醇酸鹽流體培育基 3035 紅色氧化層紅色氧化層h深度的深度的1/5， 100水浴加熱除去氧化層，水浴加熱除去氧化層， 時間不超越時間不超越20分鐘分鐘 改良馬丁培育基改良馬丁培育基 2328沸水浴加熱10min滅菌后放置滅菌后放置3天的培育基天的培育基4. 培育基的適用性檢查培育基的適用性檢查 無菌性檢查無菌性檢查 每批培育基隨機取不少于每批培育基隨機取不少于5支瓶支瓶,培育培育14天天,應無菌生長。應無菌生

3、長。靈敏度檢查靈敏度檢查 硫乙醇酸鹽流體培育基硫乙醇酸鹽流體培育基 12ml，9支，支，4種菌，種菌，35 培育培育3天；天； 改良馬丁培育基改良馬丁培育基 9ml，5支，支，2種菌，種菌，25 培育培育5天。天。結果判別結果判別:空白管應無菌生長空白管應無菌生長,加菌管均加菌管均生長良好生長良好菌液制備菌液制備100 cfu/ml 的菌懸液的菌懸液生孢梭菌生孢梭菌64901銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌10104枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌 63501金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌26003硫乙醇酸鹽流體培育基靈敏度檢查硫乙醇酸鹽流體培育基靈敏度檢查 實驗實驗5.稀釋液以及沖洗液稀釋液以及沖洗液0.1%

4、蛋白胨水溶液蛋白胨水溶液 稀釋液稀釋液假設蛋白胨溶液渾濁，應過濾假設蛋白胨溶液渾濁，應過濾聚山梨酯聚山梨酯80-0.1%蛋白胨水溶液蛋白胨水溶液 非水溶液制劑供試品的沖洗非水溶液制劑供試品的沖洗十四烷酸異丙酯十四烷酸異丙酯 膏劑和粘性膏劑和粘性油劑的溶劑油劑的溶劑 ，膜濾除菌，膜濾除菌6.供試品的無菌檢查供試品的無菌檢查明確檢驗數(shù)量明確檢驗數(shù)量 與檢驗量與檢驗量 根據(jù)供試品的情況，確定檢樣數(shù)量根據(jù)供試品的情況，確定檢樣數(shù)量批出廠批出廠or上市抽檢；上市抽檢；固體制劑固體制劑or液體制劑；液體制劑；直接接種法直接接種法or薄膜過濾法薄膜過濾法參考藥典附錄參考藥典附錄90-91頁表頁表1，表，表2

5、，表，表3 檢驗流程：取規(guī)定量供試品 例如：紅霉素眼膏無菌檢查十四烷酸異丙酯溶解 0.1%蛋白胨水溶液萃取 取水相作為供試液薄膜過濾 0.5%聚山梨酯80-0.1%胨水溶液沖洗薄膜加培育基培育14天 上市抽檢樣品 膏劑和粘性油劑供試品 規(guī)格：2.5g：12.5mg紅霉素 薄膜過濾法陽性對照添加1/2最小檢驗量 根據(jù)以上的檢品信息，查表3確定最少檢驗數(shù)量以及最少取樣量知信息： 本品裝量2.5g ：300mg M 5g 最少檢驗數(shù)量 供試品 + 陽性對照： 10 + 5 = 15 支 每支最少取樣量 ：150mg 每支實踐取樣量：1g左右 約為裝量的2/5 合計的接入量15克左右 十四烷酸異丙酯的

6、用量約為供試品總接入量的1倍2倍左右。 作用：溶解膏劑中的凡士林，使紅霉素分散均勻。 十四烷酸異丙酯實踐用量25ml 萃取液：0.1%蛋白胨水溶液200ml 沖洗液：檢細菌、檢真菌、陽性對照 0.5%聚山梨酯80-0.1%胨水溶液2100ml 陰性對照：沖洗液400ml小結：小結：薄膜過濾法：薄膜過濾法： 陽性對照添加陽性對照添加1/2最小檢驗量最小檢驗量 檢驗數(shù)量：檢驗數(shù)量： 15支，每支取樣支，每支取樣1克，總接入量克，總接入量15克克沖洗液用量：沖洗液用量：2100ml，700ml/筒筒陽性對照陽性對照金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌100 cfu 供試品供試品陰性對照陰性對照硫乙醇酸鹽流體

7、培育基硫乙醇酸鹽流體培育基改良馬丁培育基改良馬丁培育基結果判別結果判別 規(guī)定溫度，培育規(guī)定溫度，培育14天天供試品供試品a.無菌生長，同時陽性管有菌生長無菌生長，同時陽性管有菌生長 符合規(guī)定符合規(guī)定 b.有菌生長有菌生長 不符合規(guī)定不符合規(guī)定 c.實驗結果無效，須復試實驗結果無效，須復試 設備環(huán)境緣由設備環(huán)境緣由 實驗過程染菌實驗過程染菌陰性管有菌生長陰性管有菌生長 無菌操作不當無菌操作不當d.陽性管規(guī)定時間內無菌生長陽性管規(guī)定時間內無菌生長 23天內天內 須重新進展方法驗證須重新進展方法驗證7.方法學驗證實驗方法學驗證實驗 當供試品為新的產(chǎn)品或供試品的組分、檢驗條件發(fā)生改動時， 需進展方法學

8、驗證 直接接種法 6個菌株 調查供試品能否有抑菌作用 薄膜過濾法 選擇供試品對其生長有抑制造用的菌株做方法學調查調查沖洗量以及其他滅活方法的效果直接接種法直接接種法 方法學驗證實驗方法學驗證實驗 取紅霉素眼膏一支，無菌操作取出全部內容取紅霉素眼膏一支，無菌操作取出全部內容物，移入含適宜乳化劑的稀釋液中，充分物，移入含適宜乳化劑的稀釋液中，充分混合，作為供試液；混合，作為供試液；量取一定體積供試液相當于固體取樣量量取一定體積供試液相當于固體取樣量150mg置相應的培育基中；置相應的培育基中；(改良馬丁改良馬丁接入相應的實驗菌接入相應的實驗菌 黑曲霉黑曲霉 or 白色念珠白色念珠菌菌同時做陽性對照

9、同時做陽性對照25培育培育35天，逐日察看天，逐日察看結論1:紅霉素對黑曲霉生長無抑制造用.紅霉素對白色念珠菌生長無抑制造用. 薄膜過濾法薄膜過濾法調查沖洗量調查沖洗量 方法學驗證方法學驗證實驗實驗 實驗菌：實驗菌： (1)生孢梭菌生孢梭菌64901 (2)銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌10104 (3)枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌 63501 (4) 金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌26003 總取樣量：總取樣量：15g / 每株實驗菌每株實驗菌123+:對看管; 1:沒有沖洗; 2:沖洗液體積200ml; 3:沖洗液體積400ml.35,培育24小時. +:對看管; 1:沒有沖洗; 2:沖洗液體積200ml.35,培育48小時.12結論2:紅霉素對生孢梭菌生長無抑制造用.紅霉素對銅綠假單孢菌生長無抑制造用. :對看管對看管; 1:沒有沖洗沒有沖洗; 2:沖洗液體積沖洗液體積200ml; 3:沖洗液體積沖洗液體積400ml.35,培育培育72小時小時. 123結論3:紅霉素對枯草芽孢桿菌有抑制造用.每筒加樣量5g(相當于紅霉素25mg), 沖洗液體積400ml,枯草芽孢桿菌48小時后可見微弱生長,72小時生長良好.3. 在該檢驗條件下,沖洗400ml,三天內可檢出枯草芽孢桿菌.+:對看管; 1:沒