第三章、細胞生物學(xué)研究方法(下)

1、第三章第三章 細胞生物學(xué)研究方法細胞生物學(xué)研究方法第四節(jié)第四節(jié) 細胞培養(yǎng)與細胞工程細胞培養(yǎng)與細胞工程一、細胞培養(yǎng)一、細胞培養(yǎng) 在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，培養(yǎng)從機體中取出的細胞，并使之生存和生長的技術(shù)。 體外細胞培養(yǎng)注意的幾個環(huán)節(jié)：體外細胞培養(yǎng)注意的幾個環(huán)節(jié)： 1、物質(zhì)營養(yǎng)：培養(yǎng)基 2、生存環(huán)境：無菌環(huán)境、合適的溫度、一定的滲透壓和氣體環(huán)境 3、廢物的排出：定時換培養(yǎng)基 原代培養(yǎng)原代培養(yǎng) （primary culture）：直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養(yǎng)。 將細胞轉(zhuǎn)移到新的容器中培養(yǎng)稱為傳代或傳代培養(yǎng)（passage）。（一）動物細胞培養(yǎng)組織塊培養(yǎng)；分散細胞培養(yǎng)。 細胞系細胞系（c

2、ell line）：原代培養(yǎng)細胞成功傳代即為細胞系。 克隆克隆（clone）：亦稱無性系。指由同一個祖先細胞通過有絲分裂產(chǎn)生的遺傳性狀一致的細胞群。 細胞株細胞株（cell strain）：從培養(yǎng)細胞中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細胞群。 細胞系（Cell line）篩選篩選細胞株（細胞株（cell straincell strain）表三、實驗室中常用的幾種細胞系細胞系名稱細胞類型來源3T3成纖維細胞小鼠HeLa宮頸癌上皮細胞Henrietta Lacks BHK21成纖維細胞敘利亞倉鼠PtKl上皮細胞袋鼠L6成肌細胞大鼠PCI2嗜鉻細胞大鼠SP2漿細胞小鼠SP20骨髓瘤漿細胞小鼠CHO卵巢

3、細胞中國地鼠Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 （二）植物細胞培養(yǎng)1.單倍體培養(yǎng)單倍體培養(yǎng)：通過花藥或花粉培養(yǎng)可獲得單倍體植株。2.原生質(zhì)體培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)：培養(yǎng)脫壁后的細胞，特點：比較容易攝取外來的遺傳物質(zhì)，如DNA；便于進行細胞融合，形成雜交細胞；適宜條件下可產(chǎn)生細胞壁，經(jīng)誘導(dǎo)分化成完整植株。二、細胞工程1、細胞融合 2、單克隆抗體 3、顯微操作1、細胞融合 通過培養(yǎng)和介導(dǎo)，兩個或多個細胞合并成一個雙核或多核細胞的過程稱為細胞融合（cell fusion）或細胞雜交。 同核體同核

4、體：相同基因型的細胞融合而成。 異核體：異核體：不同基因型的細胞融合而成。 自發(fā)融合：自發(fā)融合：同種細胞在培養(yǎng)過程中自發(fā)合并的現(xiàn)象。 誘發(fā)融合：誘發(fā)融合：異種間的細胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合。 誘導(dǎo)細胞融合的方法：生物方法生物方法（仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒 ）、化學(xué)方法化學(xué)方法（聚乙二醇PEG）、物理物理方法方法（電擊和激光）。B淋巴細胞能分泌特異抗體，但不能長期培養(yǎng)，瘤細胞可以在體外長期培養(yǎng)，但不分泌特異抗體。于是Kohler和Milstein 1975將兩種細胞雜交而創(chuàng)立了單克隆抗體技術(shù)，獲1984年諾貝爾獎。2、單克隆抗體技術(shù) 單克隆抗體技術(shù)單克隆抗體技術(shù)3、顯微操作技術(shù)micromanipulation technique 是在倒置顯微鏡下利用顯微操作器進行細胞或早期胚胎操作的一種方法。 包括細胞核移植、顯微注射、胚胎移植以及顯微切割等。 細胞核移植技術(shù)已有幾十年的歷史，1952 年，Briggs和King等將不同階段的蛙胚細胞核注入去核的蛙卵，構(gòu)建核移植胚。Gordon（1962）證明原腸胚以后的細胞核移植能發(fā)育到成體。1997年，Wilmut等克隆了綿羊Dolly。 顯微操作儀顯