基因操作原理PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1基因操作原理基因操作原理第1頁(yè)/共98頁(yè)核酸的凝膠電泳 它是一種分析鑒定重組DNA分子及蛋白質(zhì)與核酸相互作用的重要實(shí)驗(yàn)手段，同時(shí)也是分子生物學(xué)研究方法的技術(shù)基礎(chǔ)。 第2頁(yè)/共98頁(yè)彼此分開。第3頁(yè)/共98頁(yè)第4頁(yè)/共98頁(yè)第5頁(yè)/共98頁(yè)瓊脂糖凝膠電泳 瓊脂糖是一種從紅色海藻中提取出的線性多糖聚合物。 分為常熔點(diǎn)的瓊脂糖和低熔點(diǎn)（LMP）瓊脂糖。 第6頁(yè)/共98頁(yè)第7頁(yè)/共98頁(yè)第8頁(yè)/共98頁(yè)第9頁(yè)/共98頁(yè)Separation Range Vs. % AgaroseLow Geling Agarose 第10頁(yè)/共98頁(yè)第11頁(yè)/共98頁(yè)第12頁(yè)/共98頁(yè)Sample Well 2

2、5 ng 1 kb ladder0.8% Agarose124681012kbAgarose Gel ElectrophoresisEtBr Detection Limit: 5-10 ng DNA第13頁(yè)/共98頁(yè)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)DNA相對(duì)遷移距離推測(cè)待測(cè)定的DNA片段的大小第14頁(yè)/共98頁(yè)Agarose gel electrophoresis第15頁(yè)/共98頁(yè)Agarose gel electrophoresis第16頁(yè)/共98頁(yè)第17頁(yè)/共98頁(yè)P(yáng)olyAcrylamide Gels第18頁(yè)/共98頁(yè)第19頁(yè)/共98頁(yè)第20頁(yè)/共98頁(yè)P(yáng)FGE can resolve large DNA fr

3、agments第21頁(yè)/共98頁(yè)第22頁(yè)/共98頁(yè)第23頁(yè)/共98頁(yè)第24頁(yè)/共98頁(yè)第25頁(yè)/共98頁(yè)P(yáng)arameterConcentrationTemplatepHdNTPsGelatinPrimersMg2+ oncentrationEnzymeTotal volume10 attomoles(1106 molecules)8.4（10mM Tris-Hcl）200 M(each one)100 g/ml (optional)0.5 M(each one);(0.11.0M)0.5mM50% at 95 for 40 min1.110-4 substitutions per cycle0

4、.5mM10mM5 to 3only5 adenosines第29頁(yè)/共98頁(yè)第30頁(yè)/共98頁(yè)第31頁(yè)/共98頁(yè)第32頁(yè)/共98頁(yè)第33頁(yè)/共98頁(yè)第34頁(yè)/共98頁(yè)第35頁(yè)/共98頁(yè)第36頁(yè)/共98頁(yè)第37頁(yè)/共98頁(yè)第38頁(yè)/共98頁(yè)第39頁(yè)/共98頁(yè)核酸雜交常用幾種膜的核酸雜交常用幾種膜的性能比較性能比較第40頁(yè)/共98頁(yè)第41頁(yè)/共98頁(yè)第42頁(yè)/共98頁(yè)第43頁(yè)/共98頁(yè)第44頁(yè)/共98頁(yè)（a）（b）（c）（d）（e）基因組基因組DNADNA限制片段限制片段硝酸纖維素濾膜硝酸纖維素濾膜同探針同源雜交的同探針同源雜交的基因基因DNA片段片段X光底片光底片第45頁(yè)/共98頁(yè)第46頁(yè)/共

5、98頁(yè)第47頁(yè)/共98頁(yè)第48頁(yè)/共98頁(yè)第49頁(yè)/共98頁(yè)第50頁(yè)/共98頁(yè)第51頁(yè)/共98頁(yè)第52頁(yè)/共98頁(yè)第53頁(yè)/共98頁(yè)第54頁(yè)/共98頁(yè)第55頁(yè)/共98頁(yè)第56頁(yè)/共98頁(yè)第57頁(yè)/共98頁(yè)第58頁(yè)/共98頁(yè)第59頁(yè)/共98頁(yè)足跡實(shí)驗(yàn)（足跡實(shí)驗(yàn)（footprinting footprinting assayassay） 第60頁(yè)/共98頁(yè)第61頁(yè)/共98頁(yè)第62頁(yè)/共98頁(yè)第63頁(yè)/共98頁(yè)第64頁(yè)/共98頁(yè)凝膠電泳凝膠電泳和和第65頁(yè)/共98頁(yè)me硫酸二甲酯分離分離DNA并用并用六氫吡啶切割六氫吡啶切割第66頁(yè)/共98頁(yè)第67頁(yè)/共98頁(yè)第68頁(yè)/共98頁(yè)核苷酸鏈的核苷酸鏈的3-末端，從而終末端，從而終止止DNA鏈的延長(zhǎng)。鏈的延長(zhǎng)。第69頁(yè)/共98頁(yè)第70頁(yè)/共98頁(yè)第71頁(yè)/共98頁(yè)第72頁(yè)/共98頁(yè)第73頁(yè)/共98頁(yè)第74頁(yè)/共98頁(yè)第75頁(yè)/共98頁(yè)第76頁(yè)/共98頁(yè)第77頁(yè)/共98頁(yè)第78頁(yè)/共98頁(yè)第79頁(yè)/共98頁(yè)顯示的相應(yīng)譜帶，直接讀出顯示的相應(yīng)譜帶，直接讀出待測(cè)待測(cè)DNA片斷的核苷酸序列。片斷的核苷酸序列。第80頁(yè)/共98頁(yè)第81頁(yè)/共98頁(yè)第82頁(yè)/共98頁(yè)第83頁(yè)/共98頁(yè)(A)的的N3 410倍倍第84頁(yè)/共98頁(yè)第85頁(yè)/共98頁(yè)第86頁(yè)/共98頁(yè)第87頁(yè)/共98頁(yè)第88頁(yè)/共98頁(yè)第89頁(yè)/共98頁(yè)第90頁(yè)