皮膚淋巴瘤中cyclinE的表達(dá)及臨床意義

1、皮膚淋巴瘤中cyclinE的表達(dá)及臨床意義【摘要】 目的：探討cyclinE在皮膚淋巴瘤中的表達(dá)及其在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中的作用。方法: 收集武漢大學(xué)人民醫(yī)院病理科2006年2009 年手術(shù)切除及活檢經(jīng)病理明確診斷的皮膚淋巴瘤蠟塊40 例, 其中22 例MF、7 例皮膚間變性大細(xì)胞淋巴瘤、6 例其他類型的T 細(xì)胞淋巴瘤、5 例B 細(xì)胞淋巴瘤。另外20例皮膚炎癥病變,包括10例銀屑病、10例副銀屑病。采用免疫組織化學(xué)方法觀察各組組織內(nèi)cyclinE的表達(dá)。利用HPIAS2000圖像分析系統(tǒng)測定cyclinE在以上各組中表達(dá)的平均光密度和平均陽性面積率。結(jié)果：皮膚淋巴瘤中cyclinE呈高表達(dá);癌旁

2、組織中cyclinE呈低表達(dá)。圖像分析結(jié)果顯示：皮膚淋巴瘤與皮膚炎癥病變之間cyclinE的平均光密度及陽性面積率的差異有顯著性意義(P<0.05)。結(jié)論：cyclin E異常高表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞增殖,從而在皮膚淋巴瘤發(fā)病過程中起重要作用。 【關(guān)鍵詞】 皮膚淋巴瘤; cyclinE; 免疫組織化學(xué); 圖像分析皮膚淋巴瘤是皮膚惡性腫瘤之一,對皮膚淋巴瘤的分子生物學(xué)研究表明許多基因及細(xì)胞因子在皮膚淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用,有不可忽視的臨床意義1，2。細(xì)胞周期是細(xì)胞物質(zhì)積累和細(xì)胞分裂的循環(huán)過程, 其有序進(jìn)行受到嚴(yán)密的調(diào)節(jié)和控制。細(xì)胞無限性增殖是惡性腫瘤的重要特征,這與細(xì)胞周期運(yùn)行障

3、礙導(dǎo)致細(xì)胞生長失控有密切關(guān)系。cyclin E是細(xì)胞周期中重要的調(diào)控因子,主要作用于G1期和S期,是DNA復(fù)制的重要啟動因子。其異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切3，4。2 / 15為探討cyclinE 與皮膚淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及臨床意義,本研究采用免疫組化的方法對皮膚淋巴瘤中cyclinE表達(dá)情況進(jìn)行了檢測,以期為皮膚淋巴瘤的早期診斷提供參考指標(biāo)。1 材料和方法1.1 材料1.1.1 材料來源 收集武漢大學(xué)人民醫(yī)院病理科2006年2009 年手術(shù)切除及活檢經(jīng)病理明確診斷的皮膚淋巴瘤蠟塊40 例, 其中22 例蕈樣肉芽腫(MF)、7 例皮膚間變性大細(xì)胞淋巴瘤、6 例其他類型的T 細(xì)胞淋巴瘤、

4、5 例B 細(xì)胞淋巴瘤。另外20例皮膚炎癥病變,包括10例銀屑病、10例副銀屑病。1.1.2 材料分組 將所有標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)HE染色,將實(shí)驗(yàn)分為2組: 皮膚淋巴瘤組和皮膚炎癥病變組。1.2 方法1.2.1 常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋、切片及HE染色。1.2.2 免疫組織化學(xué)SP法檢測cyclinE相關(guān)抗原。1.2.3 具體步驟： 4m組織切片常規(guī)脫蠟至水后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min; 抗原修復(fù)(檸檬酸緩沖液微波抗原修復(fù)法)，室溫自然冷卻后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗5×3 min; 滴加3%過氧化氫，37濕盒孵育10min以抑制內(nèi)源性過氧化

5、物酶活性，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min; 正常羊血清37濕盒孵育10min以減少非特異性背景; 甩去多余血清，分別滴加一抗(cyclinE濃度1:50)，4孵育過夜，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×5 min; 滴加生物素標(biāo)記的二抗37濕盒孵育10min，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min; 滴加鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物復(fù)合物37濕盒孵育10min，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min; 滴加新鮮配置的DAB顯色液顯色，光鏡下控制反應(yīng)時間(約35 min)，自來水沖洗終止反應(yīng); 蘇木

6、素復(fù)染，流水沖洗，1%鹽酸酒精分色數(shù)秒，流水沖洗，0.1%氨水返藍(lán); 梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片并鏡檢; 用PBS代替一抗作為陰性對照組，購買的陽性片作為cyclinE的陽性對照組。1.2.4 免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷cyclinE以細(xì)胞核或胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)，陰性對照組除細(xì)胞核染成藍(lán)色外，應(yīng)無棕黃色反應(yīng)物。采用HPIAS1000 高清晰度彩色病理圖文報告管理系統(tǒng)(同濟(jì)千屏影像公司)對cyclinE的表達(dá)進(jìn)行定量分析，每張切片隨機(jī)選取5個完整而不重疊的高倍鏡視野(×400) ,測定每個視野下陽性反應(yīng)的平均光密度、陽性反應(yīng)面積和所有細(xì)胞總面積,計(jì)算陽性面積率(陽性面積

7、率=單位面積中陽性反應(yīng)的總面積/單位面積中細(xì)胞的總面積×100%)。以每例5個視野的平均光密度、陽性面積率的平均值作為該例的測量值。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS11. 5 軟件對各組免疫組織化學(xué)反應(yīng)陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率做單因素方差分析和SNK(q) 檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05。2 結(jié)果cyclinE的表達(dá) 皮膚炎癥病變組: 皮膚炎癥病變內(nèi)可見少量的棕黃色顆粒, cyclinE表達(dá)弱或無表達(dá);皮膚淋巴瘤組: 皮膚淋巴瘤內(nèi)可見密集分布的棕黃色顆粒，cyclinE表達(dá)強(qiáng)。圖像分析結(jié)果顯示：皮膚炎癥病變組cyclinE表達(dá)的平均光密度和陽性面積率分

8、別為0.0256±0.0014和0.0268±0.0020;皮膚淋巴瘤組cyclinE表達(dá)的平均光密度和陽性面積率分別為0.8473±0.0087和0.7967±0.006。皮膚炎癥病變組與皮膚淋巴瘤組比較,差異有顯著性意義(P<0.05)。見表1。表1 皮膚炎癥病變組與皮膚淋巴瘤組cyclinE表達(dá)的平均光密度和陽性面積率注：皮膚淋巴瘤組與皮膚炎癥病變組比較,* P<0.05。3 討論在惡性淋巴瘤與假性淋巴瘤的淋巴結(jié)外病變中, 皮膚是最常受侵犯的器官, 雖然皮膚淋巴瘤(Cutancous Lylmphoma，CL)在某些方面

9、比較特殊, 但仍屬于淋巴瘤一類疾病5。皮膚淋巴瘤分為原發(fā)性和繼發(fā)性，原發(fā)性皮膚淋巴瘤(Priary Cutancous Lymphoma，PCL)應(yīng)明確只限于皮膚，自診斷后至少6個月以內(nèi)，無任何可以檢測出的皮膚以外受累的證據(jù)6，7。繼發(fā)性皮膚淋巴瘤(secondary Cutancous Lymphoma， SCL)為淋巴瘤全身表現(xiàn)的一部分。皮膚可以是惟一受累部位,也可以是系統(tǒng)性病變之一。有些皮膚淋巴瘤,如蕈樣肉芽腫,只發(fā)生于皮膚,有些皮膚淋巴瘤與淋巴結(jié)發(fā)生的同類型腫瘤具有相似的組織學(xué)表現(xiàn),但在免疫表型、遺傳基因型、臨床生物學(xué)表現(xiàn)諸方面卻顯示相當(dāng)?shù)牟顒e8。近年來，CL的發(fā)病率逐年增加，PCL在

10、結(jié)外惡性淋巴瘤(Malignant，Lymphoma ，ML)中的發(fā)病率僅次于原發(fā)于胃腸道的淋巴瘤，居第2位。CL的發(fā)生、發(fā)展與其它腫瘤一樣是一個多因素參與的復(fù)雜過程，包括癌基因的激活、抑癌基因的失活、多種細(xì)胞因子的激活、病源微生物的感染等9，10。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞周期控制的分子機(jī)制聯(lián)系緊密。對細(xì)胞周期調(diào)控的研究使人們認(rèn)識到其核心是細(xì)胞周期蛋白激酶(cyclin dependenth，CDKs)的時相性激活，它們通過對相應(yīng)底物磷酸化，趨使著細(xì)胞完成細(xì)胞周期。這些蛋白激酶的時相性激活，依賴于一類呈細(xì)胞周期特異性表達(dá)，累積與分解的蛋白質(zhì)，稱之為細(xì)胞周期素(cyclins)1113。cyeli

11、ns的時相起伏(即細(xì)胞周期特異性的cyclins合成與降解)是細(xì)胞周期正常運(yùn)行的基本前提。CychnE(細(xì)胞周期素E)是細(xì)胞G1周期素之一，在細(xì)胞增殖方面起著重要作用14。研究已表明CychnE參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，在乳腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌及胃癌中表達(dá)增高，并與預(yù)后有關(guān)15，16。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)方法對CyclinE在40例皮膚淋巴瘤以及皮膚炎癥病變中的表達(dá)進(jìn)行了檢測，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：CyclinE在皮膚淋巴瘤組的表達(dá)明顯高于皮膚炎癥病變(P<0.05)，因此，我們認(rèn)為cyclin E的異常表達(dá)可能導(dǎo)致細(xì)胞周期G1/S檢測點(diǎn)功能異常,細(xì)胞增殖活躍,參與皮膚淋巴瘤的發(fā)生和發(fā)

12、展。cyclin E的異常表達(dá)在皮膚淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。cyclin E 在臨床上作為一種診斷及判斷預(yù)后指標(biāo)或聯(lián)合指標(biāo),可輔助臨床工作者的診治工作。所以進(jìn)一步研究cyclin E 抗體能否阻止培養(yǎng)的皮膚淋巴瘤細(xì)胞的增殖及其作用機(jī)制,將為防治皮膚淋巴瘤提供新的思路。【參考文獻(xiàn)】 1 Leroy S , Dubois S , Tenaud I , et al. Interleukin15 expression in cutaneous Tcell lymphoma (mycosis fungoides and Sezary syndrome).Br J Dermatol，2001，

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