專(zhuān)題一微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用講義

1、專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔專(zhuān)題一微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用垮綱咚求1.微生物的分離和培養(yǎng)(n)。2. 某種微生物數(shù)量的測(cè)定(I)。3. 培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用(n)。4. 利用微生物發(fā)酵來(lái)生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的應(yīng)用(n)。專(zhuān)題知識(shí)檢測(cè)I 培養(yǎng)基(1)培養(yǎng)基一般含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī) _ 培養(yǎng)基按物理狀態(tài)分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基；按功能分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。2 常見(jiàn)的兩種接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。3.三種常用的滅菌方法(1) 灼燒滅菌，如接種環(huán)、接種針。(2) 干熱滅菌，如玻璃器皿和金屬用具等。(3) 高壓蒸汽滅菌，如培養(yǎng)基等。4 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)

2、數(shù)過(guò)程土壤取樣T樣品稀釋T將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上T篩選能生長(zhǎng)的微生物菌落。5 分解纖維素的微生物分離的實(shí)驗(yàn)原理纖維索分解菌6. 微生物計(jì)數(shù)的“ 2”種方法(1) 直接計(jì)數(shù)法：需用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板借助顯微鏡觀察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏大。(2) 間接計(jì)數(shù)法：稀釋涂布平板法，計(jì)數(shù)結(jié)果偏小。7. 菌種的保存方法(1) 對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保存的方法。(2) 對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。剛果紅纖維素紅色復(fù)合物纖維素酶紅色消汕出現(xiàn)透明圈專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔核心考點(diǎn)突破考點(diǎn)微生物的培養(yǎng)、分離與計(jì)數(shù)直點(diǎn)解讀。1 消毒和滅菌的比較項(xiàng)目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍煮沸消毒法日常用品較為

3、溫和僅殺死物體表面或內(nèi)部巴氏 消毒法不耐高溫的液體消毒的 物 理 或化學(xué)方法的部分對(duì)人體有害的微生物化學(xué)藥劑 消毒法用酒精擦試 雙手,用氯氣 對(duì)水源進(jìn)行 消毒等殺死物體內(nèi)外所有的微生物， 包括 芽抱和抱子灼燒滅菌法接種工具滅菌強(qiáng) 烈 的 理化因素干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具等咼壓蒸汽 滅菌法培養(yǎng)基及容 器的滅菌2 平板劃線法每次灼燒的目的專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔第一次操作每次劃線之前、劃線結(jié)束口的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種 環(huán)上殘留的菌種使 下次劃線的菌種直接 來(lái)源于上次劃線的末 端懐使每次劃線菌種 數(shù)目減少殺死接種環(huán)上 殘留的菌種佯 避免細(xì)菌污染 環(huán)境和感染操作者3純化微生物的接種方

4、法項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法原理通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固 體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃 線的操作，將聚集的菌 種逐步稀釋分散到培 養(yǎng)基的表面。在數(shù)次 劃線后培養(yǎng)，可以分離 到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì) 胞群體，即菌落將菌液進(jìn)行一系列的梯 度稀釋?zhuān)缓髮⒉煌?釋度的菌液分別涂布到 瓊脂固體培養(yǎng)基的表 面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋 度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被 分散成單個(gè)細(xì)胞從而 能在培養(yǎng)基表面形成單 個(gè)的菌落:項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法”優(yōu)點(diǎn)可以觀察菌落特征，對(duì) 混合菌進(jìn)行分離可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌 落特征缺點(diǎn)1不能計(jì)數(shù)吸收量較少，較麻煩，平 板不干燥效果不好，容 易蔓延4 選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)

5、基的比較專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔類(lèi)種廠一mE.理原一例舉選擇培養(yǎng)基中些質(zhì)基某物養(yǎng)入學(xué)培加化厶微分的多中需物眾物所生從生離微霉得菌青離母菌入分酵霉加素到和鑒別培養(yǎng)基-產(chǎn)謝基劑反的計(jì)物代養(yǎng)試品顯設(shè)生種培定藥明皿微某與特學(xué)嗆剜據(jù)的物的化/底依生產(chǎn)中或應(yīng)特藍(lán)可大美基別菌紋養(yǎng)鑒桿伊培以腸為頻題酣題型一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)及無(wú)菌操作技術(shù)1 在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物，一方面需要為培養(yǎng)的微生物提供合適的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件，另一方面需要確保無(wú)處不在的其他微生物無(wú)法混入。請(qǐng)回答下列相關(guān)問(wèn)題：(1) 培養(yǎng)基能為培養(yǎng)的微生物提供營(yíng)養(yǎng)。各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有_、_、_ 、_;另外，培養(yǎng)基還需要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)、_的要求。(

6、2) 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵。對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，需進(jìn)行清潔和_(填“消毒”和“滅菌”);對(duì)用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等需進(jìn)行 _ (填“消毒”和“滅菌”)。(3) 微生物接種的方法很多，其核心都是要防止雜菌的污染，保證培養(yǎng)物的純度。微生物接種最常用的方法是_和_ 。(4) 對(duì)分離的微生物作進(jìn)一步的鑒定，常需要借助生物化學(xué)的方法。如在以_ 為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入 _，可用來(lái)鑒定分解尿素的細(xì)菌；在以 _ 為唯一碳源的培養(yǎng)基中加入_ ，可用來(lái)鑒定纖維素分解菌。答案(1)水碳源氮源無(wú)機(jī)鹽 pH 特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 氧氣專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔(2)消毒 滅菌(3)平

7、板劃線法稀釋涂布平板法專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔（4）尿素酚紅指示劑纖維素剛果紅解析（1）各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH 特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。（2）獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，需進(jìn)行清潔 和消毒，對(duì)用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等需進(jìn)行滅菌。（3）常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。（4）微生物的鑒定常用鑒別培養(yǎng)基，在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，觀察是否變紅，可 用來(lái)鑒定分解尿素的細(xì)菌； 在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中加入剛果紅， 觀察是否有透明圈產(chǎn)生， 可用 來(lái)鑒定纖維素分

8、解菌。2. 2016 年 7 月鄭州市衛(wèi)生計(jì)生委發(fā)布的第3 期衛(wèi)生監(jiān)測(cè)信息顯示有 15 家美容美發(fā)場(chǎng)所的毛巾、理發(fā)（美容）用具大腸桿菌嚴(yán)重超標(biāo)。如圖甲為大腸桿菌含量檢測(cè)操作簡(jiǎn)圖，圖乙為伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基配方?；卮鹣铝邢嚓P(guān)問(wèn)題：（1）圖甲中濾膜的孔徑應(yīng) _（填“大于”或“小于”）大腸桿菌。受此啟發(fā)，對(duì)某些不耐高溫的試劑可以怎樣除菌？ _ 。配制圖乙中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基時(shí)，除了水分、無(wú)機(jī)鹽以外，還應(yīng)加入_（一種營(yíng)養(yǎng)成分），以及_。待各成分都溶化后和分裝前，要進(jìn)行的是 _和滅菌，對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的常用器具倒平板時(shí)要待平板冷凝后， 將平板倒置，其主要目的是 _。伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色，從功能

9、上劃分，該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。（3）用平板劃線法分離樣液中的大腸桿菌，操作時(shí)，接種環(huán)通過(guò)灼燒滅菌，在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次的末端開(kāi)始劃線的目的是 _。要檢測(cè)樣液中的大腸桿菌含量，取 25 cm2毛巾樣本，加 5 mL 蒸餾水，浸潤(rùn)半小時(shí)，然后在3 個(gè)平板上用稀釋涂布平板法分別接入0.1mL 樣液；在 37C的培養(yǎng)箱中放置 48 小時(shí)，3 個(gè)平板上的黑色菌落數(shù)分別為49、48 和 47。據(jù)此可得出 25cmf 毛巾樣液中的活菌數(shù)為 _ 。答案（1）小于用濾膜過(guò)濾除菌（2）氮源瓊脂調(diào)整 pH 高壓蒸汽滅菌鍋防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染鑒別（3）將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)

10、菌落2.4X103個(gè)解析（1）圖甲中濾膜的孔徑應(yīng)小于大腸桿菌，濾膜過(guò)濾才能獲得大腸桿菌，對(duì)不耐高溫的試劑除菌時(shí)無(wú) 法用高壓蒸汽滅菌法，可以用濾膜過(guò)濾達(dá)到除菌目的。濾膜n r濾液!將濾膜轉(zhuǎn)移至伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上基礎(chǔ)培養(yǎng)基IE mL 20%乳糖溶液2 mL 2%伊紅水溶液2mL0.5%美藍(lán)水溶液1 mL專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔配制圖乙中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基時(shí)，除了水分、無(wú)機(jī)鹽以外，還應(yīng)加入氮源以及瓊脂。配制的培養(yǎng)基在溶化 后和分裝前需要先進(jìn)行調(diào)pH 和滅菌。高壓蒸汽滅菌法常用高壓蒸汽滅菌鍋對(duì)培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。倒平板后將平板倒置的主要原因是防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染。從功能上劃分，伊紅美藍(lán)培養(yǎng) 基屬于鑒

11、別培養(yǎng)基。(3)接種環(huán)灼燒滅菌后，在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次的末端開(kāi)始劃線的目的是將聚集的菌體逐 步稀釋以便獲得單個(gè)菌落。在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈黑色，據(jù)題意可知，25 cm2 3毛巾樣本3中的活菌數(shù)為(49 + 48 + 47) - 3-0.1X5= 2.4X10 個(gè)。技法提升1. 快速確認(rèn)兩類(lèi)培養(yǎng)基(1) 鑒別培養(yǎng)基：加入的物質(zhì)起“鑒別”作用(該物質(zhì)可能與被鑒別菌種發(fā)生特殊顏色反應(yīng))，該物質(zhì)加入后并未殺死其他微生物，其培養(yǎng)基中可生存多種微生物。(2) 選擇培養(yǎng)基：加入的物質(zhì)起“篩選”作用，該物質(zhì)可抑制或殺死其他微生物，只有被選擇的“目的菌 種”才能生存下來(lái)。2. 微生物

12、實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的注意事項(xiàng)(1) 平板劃線法只適用于微生物的提純，不適合進(jìn)行計(jì)數(shù)，并且在最后一次劃線的末端處的菌種最純。(2) 倒平板的溫度一般在 50C左右適宜，溫度過(guò)高會(huì)燙手，溫度過(guò)低培養(yǎng)基又會(huì)凝固。(3) 平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成培養(yǎng) 基污染。題型二微生物的分離與計(jì)數(shù)3 土壤中微生物種類(lèi)繁多，功能強(qiáng)大，比如：最顯著的作用是分解有機(jī)質(zhì)；把植物的殘枝敗葉和施入土壤中的有機(jī)肥料分解，改善土壤的結(jié)構(gòu)和供給植物吸收。若利用其中某種微生物，則需要進(jìn)行菌種的分離和純化。以下示意圖是從土壤中分離出分解尿素的微生物的流程圖。請(qǐng)分析相關(guān)問(wèn)題：2從用途上來(lái)

13、說(shuō)，1 號(hào)培養(yǎng)基屬于 _ 培養(yǎng)基，制備該培養(yǎng)基的步驟是：計(jì)算T稱(chēng)量T溶化T_ 倒平板。3該實(shí)驗(yàn)中“酶活性鑒定”鑒定的是 _的活性，可以加入 _ 指示劑，如果指示劑變?yōu)開(kāi)色，說(shuō)明該酶的檢測(cè)為陽(yáng)性。答案(1)稀釋涂布平板法 30300 少有的菌落會(huì)重疊被計(jì)數(shù)為一個(gè)菌落(2)選擇滅菌(3)脲專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔_。用該接種方法對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，通常選用菌落數(shù)在_個(gè)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目_ ，原因是土壤樣液31-J -/挑岀菌落、1廿培養(yǎng)基 2乃培養(yǎng)基酶活性鑒定(1)過(guò)程所使用的接種方法是專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔酶酚紅紅解析(1)在分離微生物時(shí)，是將土壤樣液連續(xù)稀釋?zhuān)遣捎孟♂屚坎计桨?/p>

14、法進(jìn)行分離，實(shí)際操作時(shí) 通常選用菌落數(shù)在 30300 之間適于計(jì)數(shù)的平板。因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只 是一個(gè)菌落，因此統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往偏低。(2) 此圖用于分離分解尿素的微生物，因此1 號(hào)培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，制備的步驟是計(jì)算T稱(chēng)量T溶化T滅菌T倒平板。(3) 分解尿素的細(xì)菌可以合成脲酶分解尿素生成氨，加入酚紅指示劑后變紅色。4. 2017 貴陽(yáng)一檢某研究小組的同學(xué)用所學(xué)的微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的方法進(jìn)行“變質(zhì)牛奶中金黃色葡 萄球菌的分離和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)”，部分實(shí)驗(yàn)處理和結(jié)果如圖所示。(注：培養(yǎng)皿旁的數(shù)字代表菌落數(shù)目；實(shí)驗(yàn)條件適宜；實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范等)請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題：(1) 在實(shí)驗(yàn)室培

15、養(yǎng)微生物，一方面需要為培養(yǎng)的微生物提供合適的_和_條件；另一方面需要確保無(wú)處不在的其他微生物無(wú)法混入。(2) 據(jù)圖，研究小組采用的是 _ 法分離和計(jì)數(shù)金黃色葡萄球菌。由樣品到4 號(hào)試管的操作中，第一步，將分別盛有 9mL 生理鹽水的 4 支試管_ ，并編號(hào) 14 號(hào)；第二步，用移液管從樣品中吸取 1 mL 牛奶，注入 1 號(hào)試管中，充分搖勻；第三步，重復(fù)第二步驟操作，以此類(lèi)推。4 號(hào)試管的稀釋倍數(shù)是_。資料顯示，金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10%15%NaCI 肉湯中生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)可配制含10%氯化鈉的培養(yǎng)基，使之成為 _ 培養(yǎng)基，以利于金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)，抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)。(4

16、)在統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，需按照菌落計(jì)數(shù)的要求計(jì)數(shù)，以保證計(jì)數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確。據(jù)圖可得出1 mL 牛奶樣品中金黃色葡萄球菌的活菌數(shù)為 _個(gè)。答案營(yíng)養(yǎng) 環(huán)境(2)稀釋涂布平板滅菌 104(3)選擇(4)3.6X105解析(1)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物，既要為微生物提供營(yíng)養(yǎng)和適宜溫度等環(huán)境條件，還要防止被其他微生物污 染。1 rnL I nil. 1 ml專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔(2)圖示所用的分離方法是稀釋涂布平板法；圖示中每一次稀釋都稀釋了10 倍，因此 4 號(hào)試管的稀釋倍數(shù)為 104倍。(3) 含有較高濃度 NaCl 的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(4) 圖示中 2 號(hào)試管和 4 號(hào)試管稀釋度下各有 2 個(gè)和 1 個(gè)培養(yǎng)皿，

17、偶然性較大，應(yīng)以 3 號(hào)試管稀釋度的數(shù) 據(jù)進(jìn)行計(jì)算，即(32 + 39 + 37) - 3-0.1X103= 3.6X105個(gè)。技法提升統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目方法的比較(1) 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法1原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。2方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。3缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。(2) 間接計(jì)數(shù)法 ( 活菌計(jì)數(shù)法 )1原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過(guò) 統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。2計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=(C + V)XM 其中，C 代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌

18、落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL), M 代表稀釋倍數(shù)。3操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。同時(shí)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔高考真題再現(xiàn)1.2017 全國(guó)卷I某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO 和 NH,供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1) 有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生_。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的 分 解 產(chǎn) 物 CO2作 為 碳 源 ， 原 因是_但可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是 _( 答出兩點(diǎn)即可 )。為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇_ (填“尿素”“ N

19、H4NO”或“尿素+NH4NO3” )作為氮源，不選擇其他兩組的原因是 _ 。(3)用 來(lái) 篩 選 分 解 尿 素 細(xì) 菌 的 培 養(yǎng) 基 含 有 KH2PO4和 Na2HPO4， 其 作 用 有( 答出兩點(diǎn)即可 ) 。 答案(1)脲酶 分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不能利用 CO 來(lái)合成有機(jī)物為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，為其他有機(jī)物的合成提供原料尿素 其他兩組都含有 NHNO,能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NHNO,不能起到篩選作用(3)為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH 穩(wěn)定解析(1)有些細(xì)菌能分解尿素是因?yàn)檫@些細(xì)菌能產(chǎn)生脲酶，將尿素分解成CO 和 NH。能分解

20、尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO 作為碳源合成有機(jī)物，但這些細(xì)菌可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是作為能源物質(zhì)氧化分解為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，為其他有機(jī)物的合成提供原料。(2) 為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，這樣只有能分解尿素的細(xì)菌才能在培養(yǎng)基上生存。若選擇“ NH4NO”或“尿素+ NHNO”作為氮源，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿 素的細(xì)菌都能利用 NHNG,不能起到篩選作用。用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KHPC4和 NHPQ,它們可以為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)；同時(shí)，KHPQ和 NazHPQ 還可以作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH 穩(wěn)

21、定。2. 2016 全國(guó)卷I空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集 教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下：1配制培養(yǎng)基 (成分：牛肉膏、蛋白胨、 NaCl、X、H2O)；2制作無(wú)菌平板；3設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作；4將各組平板置于 37C恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。回答下列問(wèn)題：(1)_ 該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來(lái)源于。若要完成步驟，該培養(yǎng)基中的成分_ X 通常是專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔(2) 步驟中，實(shí)驗(yàn)組的操作是 _ 。(3) 若在某次調(diào)查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為 36 個(gè)/ 平

22、板，而空白對(duì)照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了 6個(gè)菌落，這種結(jié)果說(shuō)明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了 _ 現(xiàn)象。若將 30( 即 366) 個(gè)/ 平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法 _(填“正確”或“不正確”)。答案(1)牛肉膏、蛋白胨瓊脂(2) 將實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開(kāi)蓋暴露一段時(shí)間(3) 污染不正確解析(1)牛肉膏、蛋白胨都含有 N,可為微生物的生長(zhǎng)提供氮源。制作無(wú)菌平板所用培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基,所以 X 應(yīng)為瓊脂。(2) 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康目芍?，本?shí)驗(yàn)的自變量為教室的不同高度，因變量為微生物的分布情況，故實(shí)驗(yàn)組的操 作應(yīng)為將實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開(kāi)蓋暴露一段時(shí)間。(3) 空白培

23、養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落，說(shuō)明培養(yǎng)基被污染了，即調(diào)查中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中若培養(yǎng)基被污 染，必須將其拋棄，重新制作新的培養(yǎng)基進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3.2016 全國(guó)卷川某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中 因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)M(jìn)行梯度稀釋的理由是推測(cè)在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有_ 和_。分離純化時(shí)應(yīng)挑選出_的菌落作為候選菌。乳酸菌在20C長(zhǎng)期保存時(shí)，菌液中常需要加入一定量的 _ (填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。答案(1)無(wú)菌水 泡菜濾液中菌的

24、濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落鑒別乳酸菌中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)具有透明圈甘油解析(1)由于泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落，故分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用無(wú)菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋。(2) 由于乳酸菌代謝產(chǎn)生的乳酸可以溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣，形成透明圈，故培養(yǎng)基中加入碳酸鈣可用于 鑒另懼酸菌，同時(shí)碳酸鈣也可以中和乳酸菌產(chǎn)生的乳酸。(3) 乳酸菌在-20C長(zhǎng)期保存時(shí)，菌液中需要加入一定量的甘油，加甘油是為了避免水結(jié)冰產(chǎn)生冰晶損傷 細(xì)胞。4.2015 全國(guó)卷I已知微生物 A 可以產(chǎn)生油脂，微生物B 可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問(wèn)題：(1) 顯微觀察

25、時(shí)，微生物 A 菌體中的油脂通?？捎?_染色。微生物 A 產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用_(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔(2) 為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B 的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應(yīng)選用以 _ 為碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。(3) 若要測(cè)定培養(yǎng)液中微生物B 的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用 _ 直接計(jì)數(shù)；若要測(cè)定其活菌數(shù)量，可選用_法進(jìn)行計(jì)數(shù)。專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔為了確定微生物 B 產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學(xué)測(cè)得相同時(shí)間內(nèi)，在35C、40C、45C溫度下降解 10 g 油脂所需酶量依次為 4 mg、1 mg、6 mg,則上述三個(gè)溫度

26、中， _C條件下該酶活力最小。為了進(jìn)一步確定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞_C設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。答案(1)蘇丹川(或蘇丹W)萃取法(2)油脂(3)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板稀釋涂布平板(4)45 40解析(1)觀察脂肪時(shí)可用蘇丹川或蘇丹W染色，蘇丹川使脂肪呈橘黃色，蘇丹W使脂肪呈紅色。對(duì)于不 易揮發(fā)的物質(zhì)可用萃取法提取。(2) 為從自然界獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B 的單菌落，應(yīng)以油脂為唯一碳源進(jìn)行選擇培養(yǎng)。(3) 若要測(cè)定微生物菌體數(shù)，可在顯微鏡下利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)，該方法不能區(qū)分細(xì)菌的死活；若要測(cè)定其活菌數(shù)量，可用稀釋涂布平板法獲得單菌落，選擇菌落數(shù)在30300 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。相同時(shí)間降解相等質(zhì)量油脂所需酶量

27、越多的溫度條件下酶的活力越小，即45C條件下酶的活力最小。而 40C條件下酶的活力相對(duì)最大，故應(yīng)圍繞此溫度設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)，以進(jìn)一步確定該酶的最適溫度。5.2017 江蘇高考苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)下 圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、_&HPQMgSO 苯酚和水，其中可作為碳源的有。將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸 _，以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過(guò)于密集，應(yīng)進(jìn)一步_,以便于菌落計(jì)數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還

28、必須添加 _ 。(3)_下圖為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中(填圖中序號(hào))區(qū)域更易獲得單菌落。專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔(4)采用比色測(cè)定法(使用苯酚顯色劑)檢測(cè)降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反應(yīng)，下表中 15 號(hào)比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為 _專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔AvV口呂號(hào)123456苯酚濃度（mg/L）1如果廢水為 50 mg/L 苯酚溶液，降解后約有 21%勺苯酚殘留，則需將殘留液稀釋_（填序號(hào)：51020）倍后，再進(jìn)行比色。答案（1）蛋白胨、苯酚（2）增加 稀釋涂布 凝固劑（3）（4）0、0.2、0.4、0.6、0.8解析（1）分析富集培養(yǎng)基的成分可知，培養(yǎng)基中蛋白胨、苯酚中含C,可

29、作為碳源。（2）轉(zhuǎn)接的目的之一是富集降解苯酚能力強(qiáng)的酚降解菌，隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增多，培養(yǎng)基中的苯酚含量應(yīng)逐漸增加。若接種培養(yǎng)后平板中菌落過(guò)于密集，應(yīng)繼續(xù)稀釋涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落計(jì)數(shù)與分離。稀釋涂布時(shí)所用的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加瓊脂等 物質(zhì)作為凝固劑。利用連續(xù)劃線法接種時(shí)，越在最后劃線區(qū)域，菌落的密度越小，越容易獲得單菌落，所以，圖中區(qū) 域更易獲得單菌落。根據(jù)表中6號(hào)比色管中苯酚濃度為 1 mg/L可以推知， 15號(hào)比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為 0 mg/L、 0.2 mg/L、 0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L。根據(jù)題意

30、，廢水為 50 mg/L 苯酚溶液，降解后約有 21%的苯酚殘 留，要使稀釋后的苯酚殘留液濃度介于01 mg/L 之間，需將殘留液稀釋 20 倍左右，再進(jìn)行比色。專(zhuān)題強(qiáng)化訓(xùn)練1. 2017 甘肅蘭州模擬微生物分離技術(shù)在研究環(huán)境保護(hù)、水質(zhì)凈化、糧食儲(chǔ)存和生物制藥等方面都有重 要作用，回答下列相關(guān)問(wèn)題：（1）_用纖維素粉作為唯一碳源制作培養(yǎng)基， 可以分離能分泌 _的微生物。滅菌的培養(yǎng)基在接種前，隨機(jī)取空白平板于適宜溫度下放置24 小時(shí)，目的是 _ 。（3）_劃線用的接種環(huán)、 涂布用的涂布器在接種之前都需要用 _法進(jìn)行滅菌。能分離出單個(gè)菌落，并能夠用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中微生物活菌數(shù)目的接種方法是 _ 。（4

31、）_ 需要振蕩培養(yǎng)的微生物，要為培養(yǎng)的空間環(huán)境提供 ，振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中 _的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液中的 _充分接觸，由此推測(cè)該種微生物的異化作用是 _ 。答案（1）纖維素酶（2）檢測(cè)培養(yǎng)基的滅菌效果（3）灼燒滅菌稀釋涂布平板法（4）無(wú)菌空氣氧氣營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需氧型解析（1）用纖維素粉作為唯一碳源制作培養(yǎng)基可以分離能分泌纖維素酶的微生物。（2）將滅菌后未接種的空白平板于適宜溫度下放置24 小時(shí)，觀察是否會(huì)有菌落產(chǎn)生，從而檢測(cè)培養(yǎng)基的滅菌效果。專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔（3）劃線用的接種環(huán)、涂布用的涂布器在接種之前都需要用灼燒滅菌法進(jìn)行滅菌。平板劃線法和稀釋涂布 平板法都能分離出單個(gè)菌落，但只有稀釋涂布

32、平板法能夠用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中微生物活菌數(shù)目。（4）需要振蕩培養(yǎng)的微生物，要為培養(yǎng)的空間環(huán)境提供無(wú)菌空氣，振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中氧氣的含量， 還可以使菌體與培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，由此推測(cè)該種微生物的異化作用是需氧型。2.2017 囊陽(yáng)四中質(zhì)檢某實(shí)驗(yàn)小組為了研究不同的碳源對(duì)纖維素分解菌分解纖維素能力的影響，以稻草粉、纖維素粉和濾紙漿為纖維素來(lái)源，研究了A、B、C D 四種纖維素分解菌，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：菌株1CMC 酶活性(mg mL/30 min)稻草粉纖維素粉濾紙漿A0. 270. 240. 56I B0. 680. 340+63C830. 330. 78DLCL 180. 30

33、0. 53/實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分除了碳源外還有_，培養(yǎng)基滅菌的常用方法為_(kāi)。接種微生物的常用方法有 _ 。(2) 實(shí)驗(yàn)室分離纖維素分解菌的培養(yǎng)基一般要加入 _ ，該物質(zhì)能和纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素分解菌將纖維素分解后，紅色復(fù)合物消失，形成的_的大小可作為判斷纖維素酶活性大小的依據(jù)。(3) 分析表格可知，該實(shí)驗(yàn)的自變量是 _，若要分解稻草粉中的纖維素，則最好選擇_菌株。(4) 通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)論是 _ 。答案(1)氮源、水和無(wú)機(jī)鹽高壓蒸汽滅菌法平板劃線法和稀釋涂布平板法(2)剛果紅 透明圈(3)纖維素的來(lái)源 C (4)不同菌株對(duì)同一碳源作用產(chǎn)生的酶活性不同，同一菌株對(duì)不同纖維

34、素碳源的分解能 力也不同解析(1)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分包括碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽四種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，培養(yǎng)基滅菌的常用方法為高壓蒸汽滅菌法。平板劃線法和稀釋涂布平板法是接種微生物的常用方法。(2) 在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅后，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅一纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，我們可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。透明圈越大，說(shuō)明纖維素酶活性越大。(3) 該實(shí)驗(yàn)研究不同的碳源對(duì)纖維素分解菌分解纖維素能力的影響，因此自變量為纖維素的來(lái)源。由表格可知，以稻草粉為碳源時(shí)，C 菌株的 CMC!活性最

35、高，因此要分解稻草粉中的纖維素，最好選擇C 菌株。專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔(4) 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，不同菌株對(duì)同一碳源作用產(chǎn)生的酶活性不同，同一菌株對(duì)不同纖維素碳源的分解能力 也不同。3 纖維素酶在生物燃料制作、布料處理中起重要作用。目前，利用微生物提高纖維素酶產(chǎn)量是主要發(fā)展 方向。如圖甲，用紫外線照射含有纖維素分解菌的土樣，分離、培養(yǎng)，再檢測(cè)各菌株的纖維素酶的產(chǎn)生量。請(qǐng)回答下列相關(guān)問(wèn)題：專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔(1)_ 紫外線照射的目的是, Ao組未經(jīng)紫外線處理，其作用是作為經(jīng)高壓滅菌鍋滅菌的培養(yǎng)基，需要冷卻后才能用來(lái)倒平板。常用于估計(jì)培養(yǎng)基已冷卻到50C左右的簡(jiǎn)便方法為_(kāi) 。(3)上述培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基除含有水

36、和無(wú)機(jī)鹽、酵母膏、水解酪素、瓊脂等外，還應(yīng)有_，目的是選擇纖維素分解菌。上述檢測(cè)結(jié)果如圖乙所示。由圖可知，_ 組酶含量與 Ao組相同，最可能的原因是。AnA|A4乙A 5 A 石答案(1)誘發(fā)基因突變，提高突變頻率,獲得高產(chǎn)的纖維素分解菌對(duì)照(2)用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶剛剛不燙手(3)纖維素(4)A5沒(méi)有發(fā)生基因突變解析(1)紫外線屬于誘發(fā)基因突變的物理因素，通過(guò)紫外線照射后細(xì)菌突變頻率大大提高，從而可能篩 選出人類(lèi)需要的高產(chǎn)菌株；Ao組未經(jīng)紫外線處理，為對(duì)照組。(2) 用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶剛剛不燙手時(shí)的溫度是50C左右。(3) 以纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基上，只有產(chǎn)纖維素酶的細(xì)菌才

37、能存活。據(jù)圖乙可知 A5組纖維素酶的含量與對(duì)照組相同，由于基因突變具有低頻性的特點(diǎn)，該組可能沒(méi)有發(fā)生 基因突變。纖維素酶提取纖維索酶專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔4.普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的 到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種（過(guò)程如圖甲所示）。甲乙（1）圖甲中，過(guò)程需要的酶有 _ 。為達(dá)到篩選目的，平板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應(yīng)以 _ 作為唯一碳源。、過(guò)程需重復(fù)幾次，目的是（2）某同學(xué)嘗試過(guò)程的操作，其中一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖乙所示。該同學(xué)的接種方法是_；推測(cè)該同學(xué)接種時(shí)可能的操作失誤是_（3）以淀粉為原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的適宜條件下密閉發(fā)酵，接種_菌的發(fā)酵罐需

38、要先排氣，其原因是 _ 。答案（1）限制性核酸內(nèi)切酶、DNA 連接酶淀粉進(jìn)一步篩選純化獲得分解淀粉能力強(qiáng)的酵母菌（2）稀釋涂布平板法涂布不均勻（3）工程酵母工程酵母菌分解淀粉產(chǎn)生葡萄糖的能力強(qiáng)，導(dǎo)致酒精發(fā)酵產(chǎn)生 CO 的速率更快解析（1）圖甲過(guò)程表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，該過(guò)程先要用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割含有目的基因 的外源 DNA分子和質(zhì)粒，再用 DNA 連接酶將目的基因和載體連接起來(lái)形成重組質(zhì)粒，普通酵母菌直接利用 淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基可以選出工程 酵母菌。、過(guò)程重復(fù)幾次的目的是純化獲得分解淀粉能力強(qiáng)的酵母菌。（2）微生物接種最常

39、用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，根據(jù)圖乙菌落分布情況可確定該同學(xué)的接 種方法是后者；由圖乙中菌落分布不均勻可推測(cè)該同學(xué)接種時(shí)可能的操作失誤是涂布不均勻。（3）在以淀粉為原料的培養(yǎng)液中，普通酵母菌繁殖慢，產(chǎn)生氣體少；工程酵母菌繁殖快，產(chǎn)生氣體多。5.2017 荊門(mén)調(diào)研研究人員用有機(jī)化合物 X、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基成功地從土壤中 篩選出能高效降解有機(jī)化合物 X 的細(xì)菌（目的菌）。如圖是從土壤中篩選出該細(xì)菌的過(guò)程示意圖，下表是分 離純化的結(jié)果。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：a-淀粉酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌中，經(jīng)篩選得專(zhuān)業(yè)文檔珍貴文檔記錄項(xiàng)目：透明圈直徑/菌落直徑(1) 培養(yǎng)基中的有機(jī)化合物 X 主要為目的菌提供_ 等營(yíng)養(yǎng)要素。從土壤中富集能有效降解有機(jī)化合物 X 的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)選用 _ (填“固體”或“液體”)培養(yǎng)基。(2) 配制成 10 倍稀釋液時(shí)，用無(wú)菌移液管從富集液中吸取1 mL，移入盛有 _ mL 無(wú)菌水的試管中，2 10并依次配制 1010 的梯度稀釋液。(3) 在分離、純化過(guò)程中，圖中過(guò)