土壤理化性質(zhì)實(shí)驗(yàn)方法總結(jié)

1、目 錄1 土壤11.1土壤樣品制備11.2土壤pH值測定電位法11.3有機(jī)質(zhì)重鉻酸鉀法31.4全N半微量開氏法51.5堿解N擴(kuò)散法71.6全P酸溶法81.7有效P碳酸氫鈉法101.8速效K火焰光度法131.9銨態(tài)N靛酚藍(lán)比色法141.10硝酸鹽N紫外分光光度法152 水172.1 水樣采集和預(yù)處理172.2 pH值電位法172.3總N堿性過硫酸鉀氧化紫外分光光度法182.4銨態(tài)N靛酚藍(lán)比色法192.5硝酸鹽N紫外分光光度法202.6總P過硫酸鉀氧化鉬酸銨分光光度法202.7可溶P鉬酸銨分光光度法222.8高錳酸鹽指數(shù)（CODMn）223 植物243.1植物樣品制備243.2全N開氏法243.2

2、全P、全K光譜法254 注意事項(xiàng)264.1反復(fù)強(qiáng)調(diào)的p.s.264.2常用儀器說明274.2.1天平274.2.2移液槍274.3 washing issues284.3.1glass things284.3.2消化罐28參考文獻(xiàn)29311 土壤1.1土壤樣品制備土壤樣品采集就不說了，根據(jù)研究目的，采樣方法也各不相同。下面介紹的是針對實(shí)驗(yàn)中的樣品制備方法。在所有土壤實(shí)驗(yàn)開始之前，都要先進(jìn)行相應(yīng)樣品的制備。師兄師姐們不止一次提過，研究生剛?cè)雽W(xué)應(yīng)該每人發(fā)一件白大褂和一根搟面杖。做土壤侵蝕研究的怎么能不會(huì)磨土呢？土樣經(jīng)風(fēng)干后，用木棍碾碎，然后過2mm篩，剩下的礫石稱重。這一部分樣品可以直接進(jìn)行pH值

3、和土壤機(jī)械組成的測定。對于不同的土壤指標(biāo)，所需制備的樣品粒徑是不相同的。速效養(yǎng)分的測定往往不能研磨過細(xì)，因?yàn)檫@樣土壤礦物晶粒會(huì)遭到破壞，使得分析結(jié)果偏高。全量養(yǎng)分則相反，磨細(xì)一些可以使樣品更易分解或熔化，有益于測定。對于土壤硝態(tài)氮和銨態(tài)氮這類指標(biāo)，則不能風(fēng)干，而是采樣后直接經(jīng)2mm篩，然后冷凍保存，盡快測定。根據(jù)目前實(shí)驗(yàn)室所采用的比較成熟的方法，測試不同指標(biāo)所需的土壤用量和粒徑如下表所示。注意，這里的用量是以我測的北京褐土為標(biāo)準(zhǔn)，測部分指標(biāo)的時(shí)候根據(jù)養(yǎng)分含量需要適當(dāng)調(diào)整用量。表1 測試不同指標(biāo)對應(yīng)粒徑及用量指標(biāo)pH機(jī)械組成有機(jī)質(zhì)全N全P全K堿解N有效P速效KNH4-NNO3-N狀態(tài)風(fēng)干風(fēng)干風(fēng)干

4、風(fēng)干風(fēng)干風(fēng)干風(fēng)干風(fēng)干風(fēng)干新鮮新鮮粒徑（mm）220.1490.1490.1490.1490.251122用量（g）10300.510.10.122.5510201.2土壤pH值測定電位法1.原理土壤pH值的測定是最沒技術(shù)含量，也最煩人的實(shí)驗(yàn)。它的測定原理很簡單，往土里加水，充分混合后用pH計(jì)測一下，讀個(gè)數(shù)，搞定。pH值其實(shí)就是H+濃度的負(fù)對數(shù)，既然能通過電子儀器讀的出來，那就是把濃度和電動(dòng)勢之類的聯(lián)系起來。這個(gè)和翻斗式雨量計(jì)有異曲同工之處，小翻斗一動(dòng)，就有電子脈沖了省去若干原理解釋。2. 主要儀器燒杯、移液管或小量筒、攪拌器、pH計(jì)、濾紙3. pH計(jì)標(biāo)定和天平一樣，在用pH計(jì)測定前，必須先用標(biāo)

5、準(zhǔn)溶液進(jìn)行標(biāo)定。市場上可以買得到現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)試劑，一般包括3種，pH值分別為4.01的鄰苯二甲酸氫鈉，6.87的磷酸氫二鈉+磷酸二氫鈉，9.18的四硼酸鈉。將對應(yīng)的基準(zhǔn)試劑用小漏斗沖入250mL的容量瓶中，加入一些蒸餾水，不停地?fù)u晃，直至充分溶解后定容至標(biāo)線就可以了。這些基準(zhǔn)試劑在不同溫度下的pH值略有不同，具體見表2。標(biāo)定時(shí)一般采用兩種緩沖溶液就夠了，兩點(diǎn)能夠確定一條直線嘛。當(dāng)待測液為堿性時(shí)，采用pH6.87和pH9.18兩種緩沖溶液標(biāo)定即可；當(dāng)待測液為酸性時(shí)，則采用4.01和6.87兩種標(biāo)準(zhǔn)液。不同的pH計(jì)，其標(biāo)定方法略有不同，使用前要仔細(xì)閱讀說明書，下面就以現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室常用的方舟pHS-3C

6、+酸度計(jì)為例進(jìn)行介紹。一般而言，開機(jī)后，用蒸餾水沖洗電極，中間帶一個(gè)小球那個(gè)，另外一個(gè)探頭是測溫度的。然后放在蒸餾水中，讓機(jī)器預(yù)熱一會(huì)。用濾紙將探頭上的水分吸干，插入裝有pH值為6.87的緩沖溶液的燒杯中，并在儀表盤上按7鍵，指示燈開始閃時(shí)，就表示儀器開始自動(dòng)標(biāo)定了，待指示燈穩(wěn)定發(fā)亮，表示標(biāo)定完成。然后用蒸餾水沖洗探頭，用濾紙吸干，再插入pH值為4.01或9.18的緩沖溶液中，按4或9鍵，讓其自動(dòng)標(biāo)定。標(biāo)定完成即可進(jìn)行土壤樣品的測定。4.測定步驟4.1稱取通過2mm孔徑篩的風(fēng)干土壤10.0g于50mL高型燒杯中，稱這個(gè)土的時(shí)候用精度為0.1或0.01g的天平就足夠了，用移液管或小量筒加入25

7、mL蒸餾水。將燒杯置于攪拌器上。攪拌子用蒸餾水沖洗干凈，并用濾紙擦干后放入燒杯中。用秒表開始計(jì)時(shí)，攪拌1min，使土粒充分分散。4.2用塑料鑷子取出攪拌子，因?yàn)槔镞吺菐Т判缘模苋菀自诒砻嬲加谢疑呐K物。建議先用濾紙擦干后在放入一旁準(zhǔn)備好的蒸餾水中。浸泡后取出，用蒸餾水沖洗、濾紙擦干，進(jìn)行下一輪的攪拌。4.3攪拌完成后，靜置30min，其實(shí)我也不明白為什么要靜置，因?yàn)檫@一款pH計(jì)需要不停攪動(dòng)讓其穩(wěn)定。4.4將電極插入待測液中，注意電極不能觸及燒杯底或壁。輕輕搖動(dòng)使電極與待測液充分接觸，直到讀數(shù)穩(wěn)定記下對應(yīng)數(shù)字。最煩人的事情就在此了，讀數(shù)可能很久都穩(wěn)定不下來，你就認(rèn)命地?fù)u吧。一般它30s讀數(shù)不變

8、我就從了。如果讀數(shù)一直穩(wěn)定不下來，你實(shí)在煩的不行了，就用標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液再標(biāo)定一次，貌似有一點(diǎn)收效。這是師兄的經(jīng)驗(yàn)，我沒有驗(yàn)證過。4.5測完一個(gè)樣品后，取出電極，仍然是蒸餾水洗滌，濾紙條吸干，然后進(jìn)行下一輪測定。全部樣品測完，仍需洗滌、吸干，然后插入3mol/L的氯化鉀（KCl）溶液中保養(yǎng)，就是套在電極上的那個(gè)小杯子。保養(yǎng)液怎么配，自己算吧，初中化學(xué)這是，反正可以很負(fù)責(zé)任地說，KCl很好溶解。表2 標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液在不同溫度下的變化溫 度（）pH4.016.879.1804.0036.9849.46453.9996.9519.395103.9986.9239.332153.9996.9009.2762

9、04.0026.8819.225254.0086.8659.180304.0156.8539.139354.0246.8449.102384.0306.8409.081404.0356.8389.068454.0476.8349.0381.3有機(jī)質(zhì)重鉻酸鉀法1.原理測有機(jī)質(zhì)還蠻快的，系里的硬質(zhì)試管少說有一百來根吧。雖然每一次消煮只能測6個(gè)左右，但每次只要煮上5分鐘，然后集中滴定或者找人配合同時(shí)滴定，速度會(huì)很快的。有機(jī)質(zhì)測定的原理是：土壤中的有機(jī)碳在高溫下會(huì)被重鉻酸鉀氧化，多余的重鉻酸鉀以鄰菲羅琳為指示劑，用硫酸亞鐵滴定，用消耗的重鉻酸鉀體積計(jì)算出被氧化的有機(jī)碳的量。有機(jī)質(zhì)的含碳量一般為58%，

10、所以用有機(jī)碳結(jié)果乘以1.724，即為土壤有機(jī)質(zhì)的含量。具體的反應(yīng)式如下。消煮反應(yīng)： 2K2Cr2O7+8H2SO4+3C2Cr2(SO4)3+2K2SO4+3CO2+8H2O滴定反應(yīng)： K2Cr2O7+6FeSO4+7H2SO4Cr2(SO4)3+3Fe2(SO4)3+K2SO4+7H2O指示劑變色的氧化還原狀態(tài)： 鄰啡羅啉：氧化態(tài)(無色)還原態(tài)(棕紅色)2.主要儀器硬質(zhì)試管、移液管（移液槍）、油浴鍋、三角瓶、酸式滴定管3.試劑3.1重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液（1/6K2Cr2O7為0.8mol/L）：稱取39.2245g烘干的重鉻酸鉀（K2Cr2O7）溶解于水中，加熱溶解，冷卻后用蒸餾水定容至1L。重

11、鉻酸鉀必須稱取準(zhǔn)確，后邊要用它來標(biāo)定硫酸亞鐵的濃度。3.2鄰菲羅啉指示劑：稱取1.485g鄰菲羅啉（C12H8N2·H2O）及0.695g硫酸亞鐵（FeSO4·7H2O）溶于100mL水中，貯于棕色瓶中。3.3硫酸亞鐵溶液（0.2mol/L）：稱取56.0g硫酸亞鐵（FeSO4·7H2O）溶于水中，加15mL濃硫酸，用蒸餾水定容至1L。由于硫酸亞鐵在空氣中并不穩(wěn)定，因此每次使用前都需用重鉻酸鉀溶液進(jìn)行標(biāo)定。方法是移取5mL重鉻酸鉀溶液和5 ml濃硫酸加于三角瓶中，滴入3滴鄰菲羅啉指示劑，用硫酸亞鐵溶液滴定，直至溶液變成棕紅色。記錄硫酸亞鐵的用量，根據(jù)反應(yīng)式計(jì)算其濃

12、度。（初中化學(xué)-_-;）3.4濃硫酸（H2SO4）：1.84g/cm33.步驟3.1稱取通過0.149mm孔徑篩的風(fēng)干土樣0.5000g放入硬質(zhì)試管中，用移液管或移液槍依次加入5mL重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液和5mL濃硫酸，輕輕搖勻。注意，一定要搖勻，讓土粒和試劑充分混合，否則消煮不完全。3.2將油浴鍋加熱至185190，待溫度穩(wěn)定下來后，將試管插入帶網(wǎng)孔鐵絲籠中，管口放一小漏斗（用以冷凝蒸出的水汽，減少蒸發(fā)），放入油浴鍋中。漏斗可重復(fù)使用，用蒸餾水沖洗干凈后稍晾一會(huì)即可，一般一批樣品只有46個(gè)，再加12個(gè)空白和重復(fù)，一共8根試管，置于鐵絲籠的中部。3.3把鐵絲籠上下?lián)u動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)幾次，使溫度均勻，此時(shí)溫度

13、下降至170180，從試管內(nèi)液體開始翻動(dòng)起計(jì)算，沸騰5min。消煮完成后立即把鐵絲籠提起，稍停，使油沿管壁留下，然后放在托盤上?？梢栽谕斜P內(nèi)鋪上報(bào)紙，當(dāng)試管從油浴鍋中取出之后，放在托盤之上，以免蠟油濺在別處，不易去除。將試管取下，用紙擦去表面油質(zhì)，消煮好的溶液顏色是黃橙色或帶綠色，若是以綠色為主，說明重鉻酸鉀用量不足，應(yīng)調(diào)整土樣質(zhì)量后重做。3.4用蒸餾水將試管中的消煮液洗入250毫升的三角瓶中，洗液體積保持6070毫升，冷卻，加鄰菲羅啉指示劑3滴，將0.2mol/L的 FeSO4溶液加入酸式滴定管中進(jìn)行滴定，顏色由桔黃草綠深綠棕紅色即為終點(diǎn)。記錄FeSO4用量。3.5每批樣品測定的同時(shí)，作空白

14、標(biāo)定，即用純石英砂或灼燒過的土壤代替土樣，記錄FeSO4用量。4.計(jì)算土壤有機(jī)碳%=（VoV）×c×0.003×1.08×100/m有機(jī)質(zhì)%=有機(jī)碳%×1.724Vo：空白標(biāo)定時(shí)所消耗FeSO4標(biāo)準(zhǔn)液的體積（ml）；V：土壤標(biāo)定時(shí)所消耗FeSO4標(biāo)準(zhǔn)液的體積（ml）；c：硫酸亞鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（mol/LFeSO4）；0.003：1/4C的摩爾質(zhì)量（kg/mol）；1.724：由有機(jī)C換算為有機(jī)質(zhì)的因數(shù)；1.08：氧化校正系數(shù)；m：風(fēng)干土樣質(zhì)量（g）。1.4全N半微量開氏法1.原理土壤中的含氮化合物，利用濃硫酸和催化劑，在高溫條件下轉(zhuǎn)變?yōu)镹H4

15、+進(jìn)入溶液。隨后加入NaOH使其轉(zhuǎn)變?yōu)镹H3逸出，經(jīng)蒸餾用硼酸液吸收，再用酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，由其消耗量計(jì)算出氨量。土壤全N測定其實(shí)是最省心的實(shí)驗(yàn)，不過要冒一定的風(fēng)險(xiǎn)。學(xué)院有全套開氏定氮儀，包括消煮、蒸餾和滴定。雖然滴定用的電極壞了換，換了壞，現(xiàn)在已經(jīng)全部變成手動(dòng)滴定了，但還是相對convenient。自動(dòng)消煮的時(shí)間很長，可以去配制試劑；蒸餾的時(shí)間也有4min左右，足以把之前的消煮管洗刷干凈了。所以這個(gè)實(shí)驗(yàn)做起來相當(dāng)經(jīng)濟(jì)，一點(diǎn)都不費(fèi)時(shí)間。建議一天一批，一批16個(gè)樣品+2個(gè)重復(fù)+2個(gè)空白。當(dāng)然如果人多，配合好，一天做兩批也不成問題。但是實(shí)驗(yàn)所涉及到的試劑卻不是那么好說話的，而且消煮管也需要特別注意，

16、很容易損壞，還有傳說中的吸收池。估計(jì)后面的同學(xué)是看不到了，因?yàn)橐呀?jīng)被我失手毀了，淚奔對了，實(shí)驗(yàn)開始之前必須先向王曉嵐老師申請，王老師會(huì)就具體儀器的操作進(jìn)行詳細(xì)地講解。2.主要儀器消煮管、消煮爐、定氮儀、酸式滴定管、三角瓶3.試劑3.1混合催化劑：硫酸鉀（K2SO4）、硫酸銅（CuSO4）、硒（Se）按照100:10:1的比例混合，在研缽中研細(xì)后，混合。硫酸銅最難磨，建議先處理它，然后加入硫酸鉀，繼續(xù)研磨，最后加入硒粉，攪拌混合就可以，注意，硒粉有毒，要做好防護(hù)措施?；靹蚝蠓湃朐噭┢恐斜４?。大概估算好用量，現(xiàn)在的專用研缽最多只能磨300g左右，而且難度很大，極容易溢出，最好將每次研磨量控制在20

17、0g左右。3.2濃硫酸（H2SO4，1.84g/cm3）3.3氫氧化鈉溶液（10mol/L）：稱取1600.0g氫氧化鈉（NaOH）溶于水中，用蒸餾水定容至約4L，直接用燒杯定容即可。氫氧化鈉遇水放熱，而且氣味也很嗆人。配制時(shí)最好有全套裝備，并用盆裝好自來水放置在通風(fēng)櫥中。在5L的大燒杯內(nèi)倒入3L左右的蒸餾水，置于盆中，一邊用玻璃棒攪拌，一邊加入氫氧化鈉。由于用量較大，常采用的方法是藥品連盒稱重，倒完后再稱盒重，記錄倒入的氫氧化鈉的量。一定要計(jì)算清楚，因?yàn)橐黄克幤返馁|(zhì)量并不等于瓶上標(biāo)注的量。1600g氫氧化鈉大概是3瓶+1/2瓶，最后半瓶要準(zhǔn)確稱取。由于濃度大，溶解所需的時(shí)間較長，請耐心等待。

18、冷卻后倒入對應(yīng)的塑料桶中。3.4硼酸溶液（約2.3%）：稱取70.0g硼酸（H3BO3）溶于水中，用蒸餾水定容至約3L，可直接用燒杯定容，因?yàn)槠錆舛炔⒉粎⑴c計(jì)算。硼酸溶解較快，不用加熱促溶，之前有同學(xué)認(rèn)為加熱促溶會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)，我沒有進(jìn)行過對比，但建議還是常溫溶解為宜。配制完成后倒入相應(yīng)的塑料桶中。3.5定氮混合指示劑：稱取0.5g溴甲酚綠和0.1g甲基紅于研缽中，加入少量95乙醇，研磨至指示劑全部溶解后，加95乙醇至100ml。3.6鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.01mol/L）：吸取0.85mL濃鹽酸，用蒸餾水定容至1L。如果土壤含N量較高，則適當(dāng)提高鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。但都需用碳酸鈉（Na2CO

19、3）溶液或四硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O）溶液標(biāo)定，即吸取10mL碳酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于三角瓶中，滴入兩滴定氮混合指示劑，用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由綠色變?yōu)榘导t色，即為終點(diǎn)，由此計(jì)算鹽酸濃度。4.步驟4.1稱取1.0000g通過0.149mm孔徑的風(fēng)干土樣，小心地送入開氏管底部，同時(shí)做2個(gè)空白和2個(gè)重復(fù)。加入2.0g混合催化劑和8mL濃硫酸，搖勻后將其置于消煮用的架子上，然后掛在溫控消煮爐上。將上部的漏斗對應(yīng)扣在開氏管上，然后輕按下移鍵，消煮架會(huì)隨之向下移動(dòng)。注意調(diào)整架子的位置，保證開氏管與底部吻合，不然極容易造成破碎。有師兄因?yàn)檫@個(gè)毀了兩個(gè)開氏管，一個(gè)$25。4.2設(shè)定溫度為200

20、1小時(shí)，而后3752.5小時(shí)。打開通風(fēng)櫥和排水管，開啟程序。消煮完成后，開氏管會(huì)自動(dòng)上移。待其冷卻后取下，關(guān)閉儀器。4.3在試樣蒸餾之前，先檢查定氮儀，執(zhí)行0程序，空蒸23次清洗管道。待消煮液冷卻后，將開氏管置于定氮儀上，吸收池（現(xiàn)在是燒杯）置于定氮儀冷凝器承接管下，向池內(nèi)注入適量硼酸，使液面沒過冷凝管末端，執(zhí)行1程序。4.4程序執(zhí)行完成之后，取下吸收池，加入兩滴定氮混合指示劑，用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定，顏色由藍(lán)綠色剛轉(zhuǎn)變?yōu)樽霞t色即達(dá)到終點(diǎn)。與此同時(shí)進(jìn)行空白消煮液的蒸餾和滴定，以校正試劑等誤差。然后取下開氏管，注意帶兩層手套，因?yàn)檎麴s放熱，而且管內(nèi)的液體容易溢出。用蒸餾水清洗儀器后換上下一個(gè)樣品

21、。4.5全部試驗(yàn)做完之后，再空蒸一次清洗管道。將開氏管洗干凈后置于定氮儀中，關(guān)閉定氮儀，用蒸餾水沖洗儀器內(nèi)部。并整理清洗外部殘余的各種溶液。由于高濃度的氫氧化鈉極易結(jié)晶呈白色，很容易被看出來，然后被罵，所以好自為之吧5.計(jì)算全氮（N），mg·kg1c·（V-V0）×14/mV：滴定待測液消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，ml；V0：滴定空白消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，ml；C：酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol·L1；m：風(fēng)干試樣質(zhì)量，g；1.5堿解N擴(kuò)散法1.原理在一定濃度的堿溶液和一定的溫度條件下，易水解態(tài)氮和硝態(tài)氮水解轉(zhuǎn)化為氨，并不斷擴(kuò)散逸出，被硼酸吸收。用標(biāo)準(zhǔn)酸滴定被硼酸溶液吸收

22、的氨，由此計(jì)算堿解氮的含量。說實(shí)話，兩年的堿解N實(shí)驗(yàn)都不是我一個(gè)人獨(dú)立完成的，主要倚仗實(shí)驗(yàn)專家趙玉明師兄。從堿性膠液的配置，到毛玻璃片的固定，再到滴定，我基本上只能算是個(gè)打下手的。和全N測定很像，做好準(zhǔn)備工作，愛干嘛干嘛去，然后取出，滴定?；旧?，如果計(jì)劃合理的話，中間可以做另一項(xiàng)指標(biāo)的測定了。2.主要儀器擴(kuò)散皿+毛玻璃片、橡皮筋、半微量滴定管、烘箱3.試劑3.1氫氧化鈉溶液（1.8mol/L）：稱取72.0g氫氧化鈉（NaOH）溶解于水，用蒸餾水稀釋至1L。3.2硫酸亞鐵還原劑：根據(jù)所需用量（大概1個(gè)樣1g），稱取并磨細(xì)硫酸亞鐵（FeSO4·7H2O），使其通過0.25mm孔徑篩，

23、貯于玻璃瓶中，說是說要過0.25mm篩啦，其實(shí)磨得差不多就行了，主要是為了和土壤充分接觸，促進(jìn)反應(yīng)。3.3堿性膠液：稱取40g阿拉伯膠放入裝有50mL水的燒杯中，攪拌促溶。再加入20mL甘油和20mL飽和碳酸鉀水溶液，攪勻。一般于堿解氮測定前配制。其實(shí)各種藥品的比例并不是嚴(yán)格固定不變的。根據(jù)趙師兄的經(jīng)驗(yàn)，重要的是在配制過程中快速充分?jǐn)嚢?，別讓膠液中出現(xiàn)阿拉伯膠的硬核，而甘油和碳酸鉀則可以根據(jù)自己的需要適當(dāng)調(diào)整，多加入甘油則膠液較稀，下次實(shí)驗(yàn)仍可使用，但當(dāng)次使用的效果不好。3.4定氮混合指示劑：稱取0.5g溴甲酚綠和0.1g甲基紅于研缽中，加入少量95乙醇，研磨至指示劑全部溶解后，加95乙醇至1

24、00mL。3.5硼酸溶液（20g/L）：稱取硼酸（H3BO3）20.00g溶于水中，稀釋至1L。3.6鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1mol/L）：吸取9mL濃鹽酸，用蒸餾水定容至1L。滴定前用0.1mol/L的碳酸鈉或四硼酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定，即吸取10mL碳酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于三角瓶中，滴入兩滴定氮混合指示劑，用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由藍(lán)色變?yōu)樽霞t色，即為終點(diǎn)，由此計(jì)算鹽酸濃度。怎么配這兩種標(biāo)液？自己算去4.步驟4.1檢查擴(kuò)散皿是否有明顯的缺口或凹痕，如果有，該扔的就扔，不要舍不得哦然后稱取過0.25mm孔徑篩的風(fēng)干土樣2.000g和1.0g硫酸亞鐵還原劑，均勻平鋪于擴(kuò)散皿的外室內(nèi)，或者輕輕地在桌面上晃動(dòng)，讓其

25、分布均勻。同時(shí)根據(jù)具體情況作空白和重復(fù)，一般至少各2個(gè)。4.2在擴(kuò)散皿內(nèi)室加入2mL硼酸溶液，并滴入兩滴定氮混合指示劑。在擴(kuò)散皿的外室邊緣涂上堿性膠液，蓋上毛玻璃，旋轉(zhuǎn)數(shù)次，使毛玻璃與擴(kuò)散皿的邊緣完全黏合。這個(gè)一定要注意，千萬不能漏氣了。4.3慢慢轉(zhuǎn)開毛玻璃的一邊，使擴(kuò)散皿外室露出一條狹縫，在擴(kuò)散皿外室迅速加入10mL氫氧化鈉溶液，立即用毛玻璃蓋嚴(yán)。然后小心地用橡皮筋兩根交叉成十字形圈緊，使毛玻璃固定。放在烘箱中于40保溫24h±0.5h。注意，在烘箱中放置若干盛有蒸餾水的大燒杯，保證箱內(nèi)的濕度。4.4將擴(kuò)散皿取出，小心轉(zhuǎn)開毛玻璃。用0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定內(nèi)室硼酸中吸收的氨

26、，顏色由藍(lán)色剛轉(zhuǎn)變?yōu)樽霞t色即達(dá)到終點(diǎn)。滴定時(shí)應(yīng)用細(xì)玻璃棒攪動(dòng)內(nèi)室溶液，不宜搖動(dòng)擴(kuò)散皿，以免逸出。5.計(jì)算堿解氮（N），mg·kg1c·（V-V0）×14×1000/mV：滴定待測液消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，ml；V0：滴定空白消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，ml；C：酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol·L1；m：風(fēng)干試樣質(zhì)量，g；1.6全P酸溶法1.原理危險(xiǎn)的實(shí)驗(yàn)又來了，準(zhǔn)備好全套裝備哦，實(shí)驗(yàn)服、膠皮手套、線手套、口罩，一個(gè)都不能少。看看實(shí)驗(yàn)原理就明白了。在高溫條件下，土壤中含磷礦物及有機(jī)磷化合物與濃硝酸、高氯酸及氫氟酸作用，使之完全分解，全部轉(zhuǎn)化為正磷酸鹽而進(jìn)入溶液，然后

27、用鉬銻抗比色法測定。2.試劑消化罐+鋼外套、移液管或移液槍、烘箱、電熱板、比色管、分光光度計(jì)注意：消化罐要用稀硝酸浸泡過夜，將殘余附著的P去除。實(shí)驗(yàn)室有酸缸，貌似是硝酸（1+3），就是一份酸三分水啦。手碰到了貌似沒有什么感覺，但瞬間就會(huì)發(fā)黃、蛻皮所以不管是放入還是取用消化罐的時(shí)候一定要戴膠皮手套，而且要檢查一下手套有沒有破洞之類的俺就吃過這種苦頭消化罐取出后用蒸餾水沖洗幾次，烘干備用3.試劑3.1鉬酸鹽溶液：將208.8mL濃硫酸加入400mL水中，不斷攪拌，冷卻至室溫，濃硫酸稀釋會(huì)放熱，這個(gè)應(yīng)該都知道吧，備好盛有自來水的盆哦。另溶解20g鉬酸銨（NH4）6Mo7O24·4H2O于2

28、00mL水中。鉬酸銨不易溶解，需要60水浴，在實(shí)驗(yàn)室可以選擇用超聲波清洗器（可以調(diào)溫的），也可以用水浴鍋，調(diào)到60，用玻璃棒攪拌，很快也就溶解了。溶解0.5g酒石酸銻鉀KSbC4H4O7·1/2H2O于100mL水中，這個(gè)很快。在不斷攪拌下將硫酸溶液徐徐加入鉬酸銨溶液中，再加入酒石酸銻鉀溶液，用蒸餾水稀釋至1L，此時(shí)無色，貯于棕色瓶中。3.2鉬銻抗混合顯色劑：在100mL鉬酸鹽溶液中，加入1.5g抗壞血酸，使用前配制。這個(gè)大概準(zhǔn)確就可以了，用一個(gè)燒杯，大致倒入100mL鉬酸鹽溶液，然后用硫酸紙稱上1.5g抗壞血酸，呃，抗壞血酸粉末狀的，需要溶解。用玻璃棒攪拌，讓其溶解。溶解速度也不慢

29、，要注意，此時(shí)呈黃色。如果發(fā)藍(lán)，說明已經(jīng)混入P了，或者是水有問題，或者是藥品配置有問題。3.3二硝基酚指示劑：稱取0.2g二硝基酚（C6H3OH（NO2）2）溶于水中，用蒸餾水定容至100mL。3.4氫氧化鈉溶液（4mol/L）：稱取40.0g氫氧化鈉（NaOH）溶于水中，用蒸餾水定容至250mL。3.5硫酸溶液（1mol/L）：吸取6mL濃硫酸（H2SO4）至50mL水中，用蒸餾水定容至100mL。3.6濃硝酸（HNO3）3.7高氯酸（HClO4，7072%）3.8氫氟酸（HF）3.9磷貯備液：稱取0.2197g烘干的KH2PO4用水溶解后轉(zhuǎn)移至1L的容量瓶中，加入大約800mL的蒸餾水，加

30、入2.5mL濃硫酸（H2SO4），然后定容。此貯備液的P濃度為50mg/L。3.10磷標(biāo)準(zhǔn)液：測定當(dāng)天將25mL磷貯備液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線，即為磷標(biāo)準(zhǔn)液（5mg/L）。p.s.所需試劑很多，特別是鉬酸鹽溶液，配制較麻煩，一定要提前做好準(zhǔn)備。此外，高氯酸和氫氟酸一般沒辦法在市場上買到，求助高師兄吧4.步驟4.1稱取0.1000g通過0.149mm孔徑的風(fēng)干土樣置于消化罐中，依次加入3mL濃硝酸、1mL高氯酸和1mL氫氟酸，旋緊后放入烘箱中。記住，一定要旋緊，否則有什么其他雜質(zhì)混入就功虧一簣了。將溫度調(diào)至160，當(dāng)溫度達(dá)到160時(shí)開始計(jì)時(shí)，56h后停止加熱。同時(shí)做空白試驗(yàn)。注

31、意，加熱時(shí)間可以延長，但不能縮短，以保證土壤充分熔化。這種方法是當(dāng)時(shí)學(xué)校的分析測試中心采用的，雖然我覺得0.1g的土樣很可能沒有什么代表性，誤差較大，但現(xiàn)在只有這種辦法，還是從了吧。磨土的時(shí)候一定要充分混合。由于消煮所用的都是強(qiáng)酸，極具腐蝕性，只能用高溫熔融室（237）角落里的舊烘箱。一般從室溫升到160需要1個(gè)多小時(shí)，而總的消煮時(shí)間又較長，所以可以用兩種計(jì)劃。Plan A：晚上臨走前放入烘箱，第二天一早來關(guān)，馬上打開箱門讓其冷卻，然后去吃個(gè)早飯、上上網(wǎng)，就差不多了，可以進(jìn)行下一步，全P測定比較麻煩，一天時(shí)間差不多完成一批；Plan B：早晨放入，下午取出，這樣時(shí)間比較緊張，一整天就耗在實(shí)驗(yàn)室

32、吧個(gè)人根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整啦4.2將電熱板置于通風(fēng)櫥中，溫度調(diào)至180（剛開始調(diào)高點(diǎn)也無所謂，讓電熱板快點(diǎn)升溫）。待消化罐冷卻后，將其置于電熱板上加熱去硅及殘留的氫氟酸，將有大量白煙冒出。加熱至罐內(nèi)液體呈半個(gè)指甲蓋大小時(shí)取下，放在通風(fēng)櫥內(nèi)，白煙冒盡取出。做這項(xiàng)工作的時(shí)候一定要全副武裝，氣味很嗆，強(qiáng)酸很危險(xiǎn)，電熱板上還很燙4.3用蒸餾水將消化罐內(nèi)的消解液洗入50mL的比色管內(nèi)，用蒸餾水定容至標(biāo)線，搖勻，靜置。（至此可以按照速效K方法利用火焰光度計(jì)測定土壤全K含量。不用醋酸銨浸提，在比色管中吸取1mL，然后加入10mL氯化鋰，記錄檢流計(jì)讀數(shù)。當(dāng)然，別忘了作標(biāo)線。呃，速效K測定放后邊了，自己找吧）到這一

33、步也可以選擇拿著比色管到分析測試中心去測，￥5一個(gè)樣，很省心省力，也不貴。如果想要親力親為，就吸取10mL稀釋的消解液至50mL比色管中，用蒸餾水稀釋至25mL，加二硝基酚指示劑2滴，先滴入幾滴氫氧化鈉溶液使其呈黃色，再用稀硫酸調(diào)至無色，此時(shí)溶液pH值約為3。加入5mL鉬銻混合顯色劑，定容至標(biāo)線，搖勻。吸液時(shí)個(gè)人習(xí)慣都不同，我的習(xí)慣是用大肚的10mL移液管，據(jù)說這個(gè)比直筒身材的準(zhǔn)，吸取待測液前先用其潤洗一遍（就是第一遍吸的不要），移液之后先用蒸餾水潤洗，然后用濾紙稍微吸干外圍的水分，然后進(jìn)行下一個(gè)樣品的吸取。同時(shí)，也要配置標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，用移液槍分別取0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、

34、5.0mL磷標(biāo)準(zhǔn)溶液于50mL的比色管中，用蒸餾水稀釋至25mL，利用二硝基酚、氫氧化鈉和稀硫酸調(diào)節(jié)pH值，然后加入5mL鉬銻混合顯色劑，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。4.4定容完成之后，讓其靜置顯色，國標(biāo)上的說法是在20室溫下顯色15min，考慮到溫度可能存在差異，也為了讓其充分顯色，一般30min1hour都沒有問題。此時(shí)，可以打開分光光度計(jì)了，反正也要預(yù)熱30min。預(yù)熱時(shí)可以洗洗瓶子、比色管之類的，注意哦，由于轉(zhuǎn)了兩次比色管，還要配置標(biāo)線，需要的比色管大概是（待測樣品個(gè)數(shù)+4）*2+7，請預(yù)先準(zhǔn)備好。預(yù)熱差不多了，就可以進(jìn)行分光光度計(jì)的配準(zhǔn)了（我也不知道能不能叫“配準(zhǔn)”，管他呢）4.5將分

35、光光度計(jì)的坡長調(diào)至700nm處，選擇OA/100%處，貌似是這樣，然后調(diào)歸100。用蒸餾水清洗2個(gè)及以上比色皿，倒入超過其體積2/3的蒸餾水，放入儀器中比色。我一般用2個(gè)，多了也顧不過來。如果這兩個(gè)比色皿的讀數(shù)一致，說明其干凈程度相同，即提供了一個(gè)可以比較待測液的標(biāo)準(zhǔn)。如果不同或是距100過低，則需用擦鏡紙仔細(xì)擦拭，用稀酸或洗液（重鉻酸鉀+硫酸）浸泡，或用超聲波清洗器清洗干凈。符合要求后，將對應(yīng)值調(diào)至100。然后選擇AT/CF鍵，此時(shí)兩個(gè)比色皿都為0.000。一個(gè)比色皿留在分光光度計(jì)內(nèi)，做基準(zhǔn)之用，另一個(gè)取出，倒去蒸餾水，倒入待測液。一般先對標(biāo)準(zhǔn)溶液按其濃度從低到高進(jìn)行測定，防止高濃度影響低濃

36、度的吸光值。但每次測定最好都先用待測液潤洗，然后用濾紙小心吸取比色皿外邊的液體。4.6根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測液的吸光值，計(jì)算其P濃度，再根據(jù)分取倍數(shù)這算土壤全P含量。由于全P進(jìn)行了多次稀釋，這里不詳細(xì)介紹其計(jì)算方法。在后文會(huì)提到如何用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算對應(yīng)養(yǎng)分濃度，并折算其土壤含量。方法類似，注意分取倍數(shù)就是了。1.7有效P碳酸氫鈉法1.原理中性、石灰性土壤中的速效磷，多以磷酸一鈣和磷酸二鈣狀態(tài)存在，可用碳酸氫鈉提取到溶液中，同時(shí)使浸提液中鈣離子形成碳酸鈣沉淀，然后將待測液用鉬銻抗混合顯色劑在常溫下進(jìn)行還原，使黃色的銻磷鉬雜多酸還原成為磷酸鉬藍(lán)，可通過比色測

37、定。2.主要儀器三角瓶（250mL和150mL）、量筒、振蕩機(jī)、漏斗、移液管、比色管、分光光度計(jì)、定量濾紙（12.5cm+18cm）3.試劑3.1碳酸氫鈉浸提液（0.5mol/L）：稱取42.0g碳酸氫鈉（NaHCO3）于水中，用蒸餾水定容至1L。在有效磷的測定中，碳酸氫鈉的用量很大，泡濾紙和活性炭，做浸提液，建議先準(zhǔn)備一個(gè)5L左右的試劑瓶或容量瓶若干。3.2無磷活性炭：將活性炭用0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液浸泡過夜，在平瓷漏斗上抽氣過濾。方法是將抽氣漏斗洗干凈，并用蒸餾水沖洗數(shù)次。將兩張定量濾紙（18cm）交疊鋪于抽氣漏斗底部，噴上少許蒸餾水，使濾紙緊貼漏斗底部和旁邊。將浸泡后的活性炭倒入

38、，同時(shí)，將連通抽氣漏斗的水龍頭開到最大。用蒸餾水多淋洗幾次，以防烘干后的無磷活性炭含有碳酸氫鈉白色結(jié)晶。3.3鉬酸鹽溶液：將208.8mL濃硫酸加入400mL水中，不斷攪拌，冷卻至室溫。另溶解20g鉬酸銨（NH4）6Mo7O24·4H2O于200mL水中。溶解0.5g酒石酸銻鉀KSbC4H4O7·1/2H2O于100mL水中。在不斷攪拌下將硫酸溶液徐徐加入鉬酸銨溶液中，再加入酒石酸銻鉀溶液，用蒸餾水稀釋至1L，貯于棕色瓶中。注意事項(xiàng)參照全P測定。3.4鉬銻抗混合顯色劑：在100mL鉬酸鹽溶液中，加入1.5g抗壞血酸，使用前配制。3.5無磷濾紙：把定量濾紙置于碳酸氫鈉溶液中浸

39、泡過夜，使用時(shí)取出使用即可。取出的時(shí)候把手洗凈，輕輕擠出水分。3.6磷貯備液：稱取0.2197g烘干的KH2PO4溶于水，并加入2.5mL濃硫酸，定容于1L，則P濃度為50mg/L。3.7磷標(biāo)準(zhǔn)液：測定當(dāng)天將磷貯備液稀釋10倍，即為磷標(biāo)準(zhǔn)液（5mg/L）。4.步驟4.1稱取通過1mm孔徑篩的風(fēng)干土樣2.5000g于250mL三角瓶中，用漏斗加入50mL碳酸氫鈉溶液，再加入1.5g無磷活性炭，在振蕩機(jī)上振蕩30min，立即用無磷濾紙過濾至150mL三角瓶中。4.2吸取濾液10mL于50mL比色管中，用蒸餾水稀釋至25mL，加入5mL鉬銻混合顯色劑，定容至標(biāo)線，搖勻。注意，由于NaHCO3與混合顯

40、色劑中的酸反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生大量CO2，必須輕輕搖晃比色管，直至CO2全部放出才可進(jìn)行定容和充分搖勻。如果CO2未放完，就蓋上比色管的蓋子，很容易噴出，造成損失。4.3在室溫下放置30min1hour后，于700nm波長處，使用1cm玻璃比色皿測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上對照得到有效磷含量。4.4標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別取0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL磷標(biāo)準(zhǔn)溶液于50mL的比色管中，分別加入碳酸氫鈉溶液10mL（與所取濾液體積一致），然后用蒸餾水稀釋至25mL，分別加入5mL鉬銻混合顯色劑，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。于700nm波長處，用1cm玻璃比色皿測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。附：土壤全P

41、記錄表格及計(jì)算（淋溶褐土-2009.12.14）表2是標(biāo)準(zhǔn)曲線的記錄表。例如，在50 mL的比色管中加入1.0 mL磷標(biāo)準(zhǔn)液（5mg/L），則比色管內(nèi)磷的濃度為：1.0*5/50=0.1mg/L。以吸光值為橫坐標(biāo)，比色管中的磷濃度為縱坐標(biāo)，得到圖1。磷濃度與吸光值呈線性關(guān)系，一般決定系數(shù)R2在3個(gè)9以上。得出的一次線性方程即可用于計(jì)算土壤的磷濃度。表2 土壤有效P測定標(biāo)準(zhǔn)曲線加入（mL）吸光值濃度（mg/L）0.00.00600.50.0330.051.00.0580.12.00.1080.23.00.1590.34.00.2100.45.00.2610.5圖1 土壤有效P測定標(biāo)準(zhǔn)曲線將土壤測

42、定所得的吸光值帶入擬合方程，可以得到各土壤樣品對應(yīng)比色管的磷濃度。但是，由于存在系統(tǒng)誤差，如蒸餾水或過濾環(huán)節(jié)中存在P，需要把空白部分減去?？梢杂脴悠返奈庵禍p去空白吸光值，也可以用計(jì)算出來的磷濃度減去空白計(jì)算出來的磷濃度，本計(jì)算中采用后者。由于比色時(shí)只吸取了10 mL濾液，將其定容至50 mL，即濾液被稀釋了5倍，因此，濾液的濃度等于比色管磷濃度*5。濾液中的磷含量等于濾液磷濃度乘以50 mL，也就是所取的土壤樣品中可以浸提出的有效磷。因此，土壤有效磷含量=濾液濃度*50/土樣質(zhì)量。表3 土壤有效P記錄和計(jì)算土樣編號(hào)采樣深度 （cm）質(zhì)量(g)吸光值比色管濃度 （mg/L）比色管-空白 （mg

43、/L）濾液濃度（mg/L）土壤含量（mg/kg）MY0-202.50040.0210.0280.0160.0791.574MY20-402.50060.0400.0650.0530.2665.312MY40-602.50010.0900.1640.1520.75815.151MYC40-602.50000.0920.1680.1550.77715.545MY60-802.50020.0880.1600.1480.73814.757MY80-1002.50040.0790.1420.1300.64912.985MY0-52.50060.0230.0320.0200.0981.967MY5-102

44、.50030.0190.0240.0120.0591.180MY10-152.50020.0200.0260.0140.0691.377MY15-202.50010.0230.0320.0200.0981.968空白10.0130.012空白20.0130.012空白平均0.0121.8速效K火焰光度法1.原理速效K是最好測的土壤化學(xué)指標(biāo)之一，除了醋酸銨的醋味，其實(shí)還可以忍受啦其原理是用中性的醋酸銨（CH3COONH4，1mol/L）溶液浸提土壤時(shí)，NH4+與土壤膠體表面的K+進(jìn)行交換，連同水溶性K+一起進(jìn)入溶液。浸提液中的K可直接用火焰光度法測定。2.主要儀器三角瓶（250mL和150mL）

45、、量筒、振蕩機(jī)、漏斗、移液管或移液槍、比色管（50mL的小容量瓶也可以，用于配制標(biāo)準(zhǔn)曲線）、火焰光度計(jì)、10 mL小燒杯（火焰光度計(jì)專用）、定性濾紙（12.5cm）3.試劑3.1醋酸銨溶液（1mol/L）：稱取77.08g醋酸銨（CH3COONH4）溶于水中，用蒸餾水定容至1L。很多化學(xué)分析講義上要求調(diào)節(jié)pH值，但本身醋酸銨接近中性，目前的測定中基本沒有必要。3.2氯化鋰溶液（0.003mol/L）：稱取0.1272g無水氯化鋰（LiCl）溶于水中，用蒸餾水定容至1L。3.3鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.1907g烘干的氯化鉀（KCl）溶于1mol/L的醋酸銨溶液中，并用此溶液定容至1L，則K濃度為

46、100mg/L。注意，使用醋酸銨溶液配制，不是蒸餾水。4.步驟4.1稱取通過1mm孔徑篩的風(fēng)干土樣5.00g于250mL三角瓶中，加入50mL醋酸銨溶液，在振蕩機(jī)上振蕩30min，用干的定性濾紙過濾至150mL三角瓶中。同時(shí)做空白和重復(fù)樣品。4.2吸取10mL氯化鋰溶液于小燒杯中，加入1mL濾液，用于在火焰光度計(jì)上進(jìn)行速效K測定。同時(shí)，分別取0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液于50mL的比色管中，用醋酸銨溶液稀釋至標(biāo)線，搖勻。注意，在配制標(biāo)準(zhǔn)溶液前要采用醋酸銨溶液對比色管進(jìn)行潤洗。與樣品一致，先吸取10 mL氯化鋰溶液于小燒杯中，再加入1 mL標(biāo)準(zhǔn)液。4.3打開火焰光度計(jì)

47、時(shí)要先仔細(xì)閱讀儀器操作指南，先打開煤氣，點(diǎn)火時(shí)注意調(diào)節(jié)空氣和煤氣的氣壓，當(dāng)打開的火焰呈藍(lán)色時(shí)即可。在測定前，先預(yù)熱30min。然后先用蒸餾水潤洗探頭，保證水分連通，排水口有水排出。4.4先測定標(biāo)準(zhǔn)曲線的在火焰光度計(jì)上的讀數(shù)，將取用0 mL和20.0 mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)燒杯置于測試臺(tái)上，輕輕上移，將讀數(shù)分別調(diào)至0.0和20.0。然后將其余標(biāo)準(zhǔn)溶液依次進(jìn)行測定，記錄讀數(shù)，擬合速效K濃度和火焰光度計(jì)讀數(shù)線性方程。4.5將其余樣品依次進(jìn)行測定，記錄讀數(shù)，利用擬合方程進(jìn)行速效K含量的計(jì)算。4.6關(guān)閉火焰光度計(jì)嚴(yán)格按照相關(guān)儀器說明進(jìn)行，依次關(guān)閉儀器、閥門和煤氣開關(guān)。1.9銨態(tài)N靛酚藍(lán)比色法1.原理NH4+

48、在強(qiáng)堿性介質(zhì)中與次氯酸鹽和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚藍(lán)。溶液的藍(lán)色很穩(wěn)定，在NH4-N濃度為0.05mg/L0.5mg/L范圍內(nèi)，其深淺與NH4-N含量成正比。在一般的實(shí)驗(yàn)手冊上，多采取苯酚和硝普鈉混合配制酚溶液，但后者有劇毒，實(shí)驗(yàn)室多不采用。本文參照相關(guān)文獻(xiàn)，采用異丙醇和丙酮替代硝普鈉，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合結(jié)果顯示，其效果也不錯(cuò)。其實(shí)，很多涉及比色的實(shí)驗(yàn)都牽涉到一個(gè)顯色范圍的問題。因此，不能武斷地相信實(shí)驗(yàn)書或這里所描述的稱取土樣質(zhì)量和浸提液體積。這里僅針對北京的普通褐土，相對而言，其養(yǎng)分含量值較低。根據(jù)所采土樣的情況，可以做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，只是在計(jì)算的時(shí)候要注意分取倍數(shù)，將其折算進(jìn)去。2.主要儀器三角

49、瓶（250mL和150mL）、量筒、振蕩機(jī)、漏斗、移液管、移液槍、比色管、分光光度計(jì)、定量濾紙（12.5cm）3.試劑3.1氯化鉀溶液（2mol/L）：稱取149.1g氯化鉀（KCl），溶于水，用蒸餾水定容至1L。3.2 5%乙二胺四乙酸二鈉鹽（EDTA）溶液：稱取5gEDTA溶于水，定容于100mL。3.3酚鈉溶液（126g/L）：稱取126g結(jié)晶苯酚溶解在20mL異丙醇和40mL丙酮中，并用異丙醇稀釋到200mL；另外稱取54gNaOH溶解于200mL水中，與苯酚溶液混合，用蒸餾水定容至1L，貯于棕色瓶中，存放在4冰箱中備用。注意，苯酚有毒，在常溫下呈結(jié)晶態(tài)，不易取用。可以將改錐清洗干凈，

50、一點(diǎn)一點(diǎn)取出來。實(shí)驗(yàn)服、手套和口罩一個(gè)都不能少，我實(shí)踐過苯酚濺到臉上的情況，呈粉紅色還有一點(diǎn)要注意，這東西味道很不好，每次一做實(shí)驗(yàn)，整個(gè)實(shí)驗(yàn)室包括整個(gè)走廊都是這個(gè)仿佛墨水一樣的味道3.4次氯酸鈉溶液：次氯酸鈉（NaClO）與蒸餾水大致按照1:3配置，用鹽酸調(diào)pH值至6.5-7.0。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天配制，次氯酸鈉也很嗆人，做好保護(hù)措施。3.5 NH4-N貯備液：稱取0.4717g烘干的（NH4）2SO4溶于水，定容于1L，則NH4-N濃度為100mg/L。3.6 NH4-N標(biāo)準(zhǔn)液：測定當(dāng)天將NH4+-N貯備液稀釋20倍，即為NH4-N標(biāo)準(zhǔn)液（5mg/L）。4.步驟4.1稱取10.00g過2mm篩的新鮮土

51、壤，置于250mL的三角瓶中，加入50mL氯化鉀溶液，放在振蕩機(jī)上振蕩1個(gè)小時(shí)。靜置半個(gè)小時(shí)，過濾。同時(shí)做空白試驗(yàn)。4.2吸取10mL濾液置于50mL的比色管中，依次加入EDTA1mL、酚鈉溶液4mL、新配制的次氯酸鈉溶液3mL，然后用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。4.3室溫下放置23小時(shí)后，于625nm波長處，用1cm玻璃比色皿測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上對照得到銨態(tài)氮含量。4.4標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別取0、0.5、1、2、3、4、5mL銨態(tài)氮標(biāo)準(zhǔn)溶液于50mL的比色管中，加入10mL氯化鉀溶液，再依次加入1mLEDTA、4mL酚鈉溶液、3mL次氯酸鈉溶液，并用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。室溫下放置23小時(shí)后，于

52、625nm波長處，用1cm玻璃比色皿測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.計(jì)算利用比色法測定土壤化學(xué)性質(zhì)時(shí)，其計(jì)算方法基本相同（具體見有效P測定）。但有兩點(diǎn)需要注意。一是考慮到靛酚藍(lán)比色法的顯色范圍，對于養(yǎng)分含量不同的土壤樣品的實(shí)驗(yàn)用量可能有所不同，計(jì)算時(shí)要注意分取倍數(shù)。二是銨態(tài)氮采用的是新鮮土壤樣品，在進(jìn)行試驗(yàn)的同時(shí)應(yīng)測定其土壤含水率，然后進(jìn)行折算：土壤銨態(tài)氮含量=所測含量*（1+土壤含水率）。1.10硝酸鹽N紫外分光光度法1.原理NO3-在220nm處有強(qiáng)吸收，在275nm處無吸收，而主要干擾因子土壤有機(jī)質(zhì)均有吸收，分別測定兩個(gè)波段的吸光度，利用校正因數(shù)進(jìn)行換算，從而得到NO3-N的校正吸光度，與

53、NO3-N濃度成正比。目前，校正因素多采用2。實(shí)驗(yàn)操作起來比較簡單，就是要測兩個(gè)波段，而現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室的分光光度計(jì)還沒有那么高級，所以，忍了吧2.主要儀器三角瓶（250mL和150mL）、量筒、振蕩機(jī)、漏斗、移液管、比色管、紫外分光光度計(jì)、定量濾紙（12.5cm）3.試劑3.1氯化鉀溶液（2mol/L）：稱取149.1g氯化鉀（KCl），溶于水，再稀釋至1000mL。3.2 NO3-N貯備液：稱取0.7221g烘干的KNO3溶于水，定容于1L，則NO3-N濃度為100mg/L。3.3 NO3-N標(biāo)準(zhǔn)液：測定當(dāng)天將NO3-N貯備液稀釋5倍，即為NO3-N標(biāo)準(zhǔn)液（20mg/L）。4.步驟4.1稱取20

54、.00g過2mm篩的新鮮土壤，置于250mL的三角瓶中，加入50mL氯化鉀溶液，放在振蕩機(jī)上振蕩1個(gè)小時(shí)。靜置半個(gè)小時(shí)，過濾。4.2吸取25mL濾液置于50mL的比色管中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。4.3分別于220nm和275nm波長處，用1cm石英比色皿測定吸光度，利用A220-2A275計(jì)算校正吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上對照得到硝態(tài)氮含量。注意哦，這里用的是石英比色皿和紫外分光光度計(jì)。因?yàn)?20nm和275nm屬于紫外波段，用玻璃比色皿是測不出來的。4.4標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別取0、0.1、0.5、1、2、5、10mL硝態(tài)氮標(biāo)準(zhǔn)溶液于50mL的比色管中，加入25mL氯化鉀溶液（加入多少浸提液和前面取用

55、了多少是對應(yīng)的，目的在于消除這部分的影響），用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。分別于220nm和275nm波長處，用1cm石英比色皿測定吸光度，利用A220-2A275計(jì)算校正吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。這里的計(jì)算也要注意用土壤含水量換算，因?yàn)橛玫男迈r土壤樣品2 水2.1 水樣采集和預(yù)處理目前，采集的水樣包括小區(qū)地表徑流和河流兩種。降雨產(chǎn)流后，均勻攪拌集流桶后采集水樣。如果含沙量較大時(shí)，則利用垂直剖面采樣器進(jìn)行采樣。河流采樣多選取適合的斷面，在橋上利用采樣器采集。Anyway，無論采集到的水樣多少，都以1L的塑料瓶舉例說明預(yù)處理方式。如果樣品含沙量不高，可以直接進(jìn)行過濾；否則，一般需靜置23個(gè)小時(shí)。過濾需要

56、準(zhǔn)備鐵架子、18cm定量濾紙、漏斗，還有空瓶。樣品靜置后，緩緩將其上清液倒入一個(gè)干凈的塑料瓶中，其余用蒸餾水沖至飯盒中再度靜置。濾紙疊好放在漏斗中，噴灑少量蒸餾水，讓其緊貼漏斗壁。將漏斗倒置于裝有上清液的瓶上，連同塑料瓶快速倒置，使瓶底斜靠在實(shí)驗(yàn)臺(tái)架子上，用鐵絲架固定，防止其向兩側(cè)傾斜。漏斗下部為承接濾液的塑料瓶，當(dāng)過濾的水樣達(dá)到一定量時(shí)，會(huì)沒過漏斗下部，氣壓平衡會(huì)使得過濾變慢。因此，多在承接的塑料瓶上加一個(gè)套，相當(dāng)于將漏斗位置墊高。如果樣品不是很渾濁，23個(gè)小時(shí)即可過濾完成。盛在飯盒中的泥沙樣品靜置后倒掉上清液，放在烘箱中以105烘24h，之后稱重，計(jì)算含沙量。如果需要對泥沙樣品進(jìn)行分析，小心的用小刷子將泥沙刷出，用密封袋封裝備用。詳細(xì)記錄樣品瓶號(hào)、上清液瓶號(hào)、濾液瓶編號(hào)以及飯盒編號(hào)，切忌弄亂。在濾液瓶上一般可多貼一個(gè)標(biāo)簽，表明采樣點(diǎn)和日期，方便日后實(shí)驗(yàn)測試分析。如果不能進(jìn)行及時(shí)的分析和檢測，馬上放入冰箱內(nèi)冷凍保存。2.2 pH值電位法