人細(xì)胞凋亡相關(guān)基因(BCL-2)ELISA試劑盒

1、人細(xì)胞凋亡相關(guān)基因(bcl-2)elisa試劑盒(用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心abc-elisa法。用抗人bcl-2 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的bcl-2與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人bcl-2 ，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，最后加終止液硫酸，在450nm 處測 od 值， bcl-2濃度與 od 值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中bcl-2 濃度。試劑盒組成（2-8保存）酶標(biāo)板（ coated wells ）96孔酶標(biāo)抗體工作液（ enzyme conjug

2、ate）12ml 10標(biāo)本稀釋液（sample buffer ）12ml 20濃縮洗滌液（ wash buffer ）50ml 標(biāo)準(zhǔn)品（ standards ）： 40ng/ 瓶2瓶底物工作液（ tmb solution ）12ml 第一抗體工作液 （biotinylated antibody ）12ml 終止液（ stop solution ）12ml 準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本：血清、血漿（edta、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8 保存 48 小時(shí)；更長時(shí)間須冷凍（-20 或 -70 ）保存，避免反復(fù)凍融。正常標(biāo)本測定前用標(biāo)本稀釋液作 1：5-10 稀釋（取 4

3、0ul，加標(biāo)本稀釋液160ul, 稀釋 5 倍） 。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入1ml 蒸餾水混勻，配成40ng/ml 的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8 管，第一管加標(biāo)本稀釋液900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul 。在第一管中加入40ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出500ul ，移至第二管。 如此反復(fù)作對倍稀釋， 從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10 倍稀釋（示例： 1ml 濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。4. 洗滌液：用重蒸水1:20 稀釋（示例： 1ml 濃縮洗滌液加入19ml 的重蒸水）檢測程序1.加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)

4、品或待測樣品100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置37120 分鐘。2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6 次，向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入第一抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置37 60 分鐘。4.洗板：同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置3730 分鐘。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul ，置 37暗處反應(yīng)15 分鐘。8.每孔加入 100ul 終止液混勻。9.30 分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm 處測吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有 od 值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品 4000 、2000 、1000 、500、250 、125 、62.5 、

5、0 pg/ml 為橫坐標(biāo)， od 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品 od 值在該曲線圖上查出相應(yīng)bcl-2 含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1. 靈敏度：最小的bcl-2 檢測濃度小于30pg/ml 。2.特異性：可同時(shí)檢測重組或天然的人bcl-2 。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10。注意事項(xiàng)1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔，每次測定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2. 洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及od 值錯(cuò)誤地升高。3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥 。4. 本試劑盒宜置4oc 冰箱保存。5. 本試劑盒僅用于

6、科研，不能用于臨床診斷！春天的風(fēng)是有靈性的，依著風(fēng)的眼眸，我看到了那一株株桃花讀信的倩影，在桃林深處，紫色的青藤爬滿那個(gè)小屋。我的小城，桃花已然開成海，像是一場粉色的春夢。是否，可以赴一場最美的相逢，如是，便不負(fù)曾經(jīng)許下的約定。守住心底最美風(fēng)景，是一種風(fēng)度，一種期望。讓心，隨花兒輕舞，讓夢，隨蝶兒翩躚。等一縷柔風(fēng)載滿詩意，落滿我的小院，好想，牽著你的手走在花開的路上，臨摹又一個(gè)春的相遇，陌上綠色蔓延，讓深情的詩句落在眉彎，打開靈魂的心門，寫盡情意綿綿。春雨如絲，暖了一季寒涼露出溫暖，碧水映藍(lán)天，云朵兒似乎摸到嫩草尖尖。花香十里，暗香盈袖。我們微笑著，不說話，就十分美好。生命里，總會有一些人，漸

7、行漸遠(yuǎn)，偶爾想起，卻只是停留在文字里，那一抹淡淡的回憶。唯有春天，總那么詩意明亮，始終暈染著眉心，讓澀澀的往事隨風(fēng)，讓一些溫暖的記憶溫潤著心房。珍惜眼前的幸福，緊握手中的暖意，面向青山綠水，一路微笑，一路行走情暖山水間，盈一份詩意于心田，以云的飄逸輕盈過往，以花的姿態(tài)擁馨香滿懷，以文字的杯盞邀約一曲細(xì)水長流。煮一壺春色，與時(shí)光對語。窗前，柳枝兒發(fā)芽，玉蘭含苞，時(shí)光一直繞指馨香。心念如這徐徐春風(fēng)，蕩漾成一片流云。春落人間，一種別樣的景致美了心境，所有的疲憊與憂愁也隨風(fēng)而去，微笑著面對生活，用內(nèi)心的那份熱情，那份純真來經(jīng)營生活，來創(chuàng)造幸福，何嘗不是一種快樂？我的流年，風(fēng)過，紅塵入畫；雨落，纏綿入心

8、。行走在春天里，眼里滿是明麗與清澈，一樹一樹的花開，細(xì)碎而芬芳；一片一片的綠地，靜美而清新。嗅著陽光的味道，把自己置身于大自然中，真好！只要心足夠明媚，縱然有小小的陰霾也無妨。我們一路走來，沿途總會有美麗的風(fēng)景。于喧囂紅塵中，守著心靈的一方山水。不亂于心，不困于情，不畏將來，不念過往。春水初生，耐人尋味。春雨如絲，絲如媚，綿綿的不著一點(diǎn)兒聲息。踏春而去，不知是哪一處的紅塵山水在心間已布滿了雅致，心如花開，一朵嫻雅的光陰，柔軟著眼角的笑意，置身于安暖的春天，一抹淺喜，一懷深愛。一顆心，便在另一顆心的相隨里靜好。春光無限溫柔地灑滿山川，我愿，生命里所有的遠(yuǎn)方，都開滿春天的芬芳，待一輪明月悄悄爬上西窗，歸來的都是安詳。三月，陽光明媚，草色青青，小鳥兒也靈動