細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)PPT課件

1、 1. 取取0.1TMB乙醇溶液乙醇溶液1ml，加亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液，加亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液10l，溶液呈淡，溶液呈淡 棕黃色。染色液應(yīng)在臨用前配制。棕黃色。染色液應(yīng)在臨用前配制。2. 在新鮮干燥的涂片上，加在新鮮干燥的涂片上，加0.1TMB-亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液的混合試亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液的混合試劑劑0.5ml，放置，放置1min后，再加稀過(guò)氧化氫溶液后，再加稀過(guò)氧化氫溶液0.7ml，吹勻，染色，吹勻，染色6min。3. 直接用流水沖洗，待干，再用瑞氏染液復(fù)染直接用流水沖洗，待干，再用瑞氏染液復(fù)染1520min。4. 流水沖洗后，待干，用油鏡鏡檢。流水沖洗后，待干，用油鏡鏡檢。5.

2、 結(jié)果判斷結(jié)果判斷 在細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)黑色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)。在細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)黑色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)。 陰陰 性：無(wú)顆粒。性：無(wú)顆粒。 弱陽(yáng)性：顆粒小，分布稀疏。弱陽(yáng)性：顆粒小，分布稀疏。 陽(yáng)陽(yáng) 性：顆粒略粗，分布較密集。性：顆粒略粗，分布較密集。 強(qiáng)陽(yáng)性：顆粒粗大，密布于整個(gè)胞質(zhì)中。強(qiáng)陽(yáng)性：顆粒粗大，密布于整個(gè)胞質(zhì)中。 方法步驟方法步驟第1頁(yè)/共10頁(yè) 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 1.1. 涂片應(yīng)新鮮制作、厚薄適宜。涂片應(yīng)新鮮制作、厚薄適宜。2.2. TMB TMB 配制在配制在85858888的乙醇溶液中染色效果較好，勿用的乙醇溶液中染色效果較好，勿用90909595乙醇，否則細(xì)胞表面蛋白質(zhì)很快凝

3、固，妨礙試劑向胞乙醇，否則細(xì)胞表面蛋白質(zhì)很快凝固，妨礙試劑向胞內(nèi)滲入而使顯色反應(yīng)減弱或消失。內(nèi)滲入而使顯色反應(yīng)減弱或消失。3.3. 過(guò)氧化氫溶液需新鮮配制，其濃度與加入量不能隨意更改。涂過(guò)氧化氫溶液需新鮮配制，其濃度與加入量不能隨意更改。涂片中粒細(xì)胞看不見陽(yáng)性顆粒，紅細(xì)胞呈棕色或綠色，即表示過(guò)片中粒細(xì)胞看不見陽(yáng)性顆粒，紅細(xì)胞呈棕色或綠色，即表示過(guò)氧化氫過(guò)濃。若過(guò)氧化氫加于血片上不產(chǎn)生氣泡，則示無(wú)效。氧化氫過(guò)濃。若過(guò)氧化氫加于血片上不產(chǎn)生氣泡，則示無(wú)效。4.4. 染色液適宜染色液適宜pHpH值應(yīng)為值應(yīng)為5.55.5，若，若pHpH值值 5.05.0會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。5.5. 試

4、劑應(yīng)置于低溫暗處，防止光線照射失效。試劑應(yīng)置于低溫暗處，防止光線照射失效。6.6. 染色時(shí)加稀過(guò)氧化氫溶液之后必須與染色液充分混勻，否則同染色時(shí)加稀過(guò)氧化氫溶液之后必須與染色液充分混勻，否則同一片子上細(xì)胞染色情況不一致。一片子上細(xì)胞染色情況不一致。第2頁(yè)/共10頁(yè) 臨床意義臨床意義 POX染色是鑒別急性粒細(xì)胞白血病染色是鑒別急性粒細(xì)胞白血病(acute myeloblastic leukemia, AML)、急性單核細(xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞白血病(acute monocytic leukemia, AMOL)、 急急性淋巴細(xì)胞白血病性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphocytic leuk

5、emia, ALL)的重要細(xì)胞化學(xué)的重要細(xì)胞化學(xué)染色方法。染色方法。AML時(shí)白血病細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)白血病細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng), 陽(yáng)性顆粒一般較多，陽(yáng)性顆粒一般較多， 較粗大，較粗大，常呈局限性分布；常呈局限性分布；ALL時(shí)白血病細(xì)胞呈陰性反應(yīng)；時(shí)白血病細(xì)胞呈陰性反應(yīng)；AMOL時(shí)白血病細(xì)胞呈時(shí)白血病細(xì)胞呈陰性或弱陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性時(shí)顆粒稀少、細(xì)小，呈彌散分布。陰性或弱陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性時(shí)顆粒稀少、細(xì)小，呈彌散分布。第3頁(yè)/共10頁(yè)過(guò)碘酸過(guò)碘酸- -雪夫反應(yīng)雪夫反應(yīng)(PAS)(PAS) 目的目的: 了解過(guò)碘酸了解過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)的原理、方法、注意事項(xiàng)和臨床意義。雪夫反應(yīng)的原理、方法、注意事項(xiàng)和臨床意義。原理

6、原理: 過(guò)碘酸過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)雪夫反應(yīng)(Periodic acid Schiff reaction, PAS)又稱糖又稱糖原染色，其原理為過(guò)碘酸可將細(xì)胞內(nèi)含有原染色，其原理為過(guò)碘酸可將細(xì)胞內(nèi)含有1,2-乙二醇基的糖類氧化乙二醇基的糖類氧化而產(chǎn)生雙醛基，后者與雪夫而產(chǎn)生雙醛基，后者與雪夫(Schiff)染料作用，使無(wú)色品紅變?yōu)樽霞t染料作用，使無(wú)色品紅變?yōu)樽霞t色的化合物，定位于含有多糖類的胞質(zhì)中。根據(jù)胞質(zhì)中糖原種類及色的化合物，定位于含有多糖類的胞質(zhì)中。根據(jù)胞質(zhì)中糖原種類及含量多少，可呈現(xiàn)粗細(xì)不等紅色顆粒、塊狀物或均勻紅色。含量多少，可呈現(xiàn)粗細(xì)不等紅色顆粒、塊狀物或均勻紅色。第4頁(yè)/共10頁(yè) 方法

7、步驟方法步驟 1. 新鮮干燥的涂片用新鮮干燥的涂片用95乙醇固定乙醇固定10min，流水沖洗，待干。，流水沖洗，待干。2. 加入加入10g/L過(guò)碘酸氧化過(guò)碘酸氧化1520min，蒸餾水沖洗，待干。，蒸餾水沖洗，待干。3. 置雪夫染液中置雪夫染液中37(或室溫或室溫)染色染色3060min。4. 用亞硫酸溶液沖洗用亞硫酸溶液沖洗3次后，再用流水沖洗次后，再用流水沖洗23min，待干。，待干。5. 20g/L甲綠復(fù)染甲綠復(fù)染1020min。6. 水洗，待干，鏡檢。水洗，待干，鏡檢。7. 結(jié)果判斷：如在胞質(zhì)中出現(xiàn)彌散狀、顆粒狀或塊狀紅色為陽(yáng)性。胞質(zhì)無(wú)結(jié)果判斷：如在胞質(zhì)中出現(xiàn)彌散狀、顆粒狀或塊狀紅色為

8、陽(yáng)性。胞質(zhì)無(wú)色或無(wú)顆粒為糖原陰性。反應(yīng)強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：色或無(wú)顆粒為糖原陰性。反應(yīng)強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)如下： 第5頁(yè)/共10頁(yè) （1 1）中性粒細(xì)胞的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：）中性粒細(xì)胞的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)： 0 0分胞質(zhì)無(wú)色。分胞質(zhì)無(wú)色。 1 1分胞質(zhì)內(nèi)呈淡紅色，有極少顆粒。分胞質(zhì)內(nèi)呈淡紅色，有極少顆粒。 2 2分胞質(zhì)呈紅色，厚而不透明，或有少量顆粒。分胞質(zhì)呈紅色，厚而不透明，或有少量顆粒。 3 3分胞質(zhì)呈深紅色，顆粒較緊密，但尚有空隙。分胞質(zhì)呈深紅色，顆粒較緊密，但尚有空隙。 4 4分胞質(zhì)呈深紫紅色，顆粒緊密，無(wú)空隙。分胞質(zhì)呈深紫紅色，顆粒緊密，無(wú)空隙。（2 2）淋巴細(xì)胞分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：）淋巴細(xì)胞分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)： 0 0分胞質(zhì)內(nèi)無(wú)色

9、。分胞質(zhì)內(nèi)無(wú)色。 1 1分胞質(zhì)內(nèi)呈彌散淡紅或有少數(shù)細(xì)顆粒分胞質(zhì)內(nèi)呈彌散淡紅或有少數(shù)細(xì)顆粒(10(10個(gè)個(gè)) )。 2 2分胞質(zhì)內(nèi)呈彌散較深的紅色或有多數(shù)細(xì)顆粒分胞質(zhì)內(nèi)呈彌散較深的紅色或有多數(shù)細(xì)顆粒(10(10個(gè)個(gè)) )。 3 3分胞質(zhì)內(nèi)有較粗顆粒或少數(shù)小塊狀紅色物質(zhì)。分胞質(zhì)內(nèi)有較粗顆?；蛏贁?shù)小塊狀紅色物質(zhì)。 4 4分胞質(zhì)內(nèi)呈多數(shù)粗顆粒并有大塊紅色物質(zhì)。分胞質(zhì)內(nèi)呈多數(shù)粗顆粒并有大塊紅色物質(zhì)。第6頁(yè)/共10頁(yè) （3 3）幼紅細(xì)胞的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：）幼紅細(xì)胞的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)： 0 0分胞質(zhì)內(nèi)無(wú)色。分胞質(zhì)內(nèi)無(wú)色。 1 1分胞質(zhì)內(nèi)有少數(shù)分散細(xì)小顆?；驕\紅色彌漫物質(zhì)。分胞質(zhì)內(nèi)有少數(shù)分散細(xì)小顆?；驕\紅色彌漫物質(zhì)。 2

10、2分胞質(zhì)中有分胞質(zhì)中有1 12 2個(gè)濃的顆?；虬|(zhì)呈彌散紅色。個(gè)濃的顆?；虬|(zhì)呈彌散紅色。 3 3分胞質(zhì)中有較粗紅色顆粒直至小塊紅色物質(zhì)。分胞質(zhì)中有較粗紅色顆粒直至小塊紅色物質(zhì)。 4 4分胞質(zhì)中有粗大紅色塊或有粗大致密的紫紅色顆粒。分胞質(zhì)中有粗大紅色塊或有粗大致密的紫紅色顆粒。（4 4）巨核細(xì)胞的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：）巨核細(xì)胞的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)： 0 0分胞質(zhì)內(nèi)無(wú)紅色顆粒，但仍呈彌散性著色，此系其它多糖類物質(zhì)。分胞質(zhì)內(nèi)無(wú)紅色顆粒，但仍呈彌散性著色，此系其它多糖類物質(zhì)。 1 1分少量糖原包涵體，常定位于核膜附近。分少量糖原包涵體，常定位于核膜附近。 2 2分中等量糖原包涵體，定位于核膜處或分散在胞質(zhì)中，約占胞質(zhì)的

11、分中等量糖原包涵體，定位于核膜處或分散在胞質(zhì)中，約占胞質(zhì)的1/31/3。 3 3分大量糖原包涵體分散于胞質(zhì)中，占胞質(zhì)分大量糖原包涵體分散于胞質(zhì)中，占胞質(zhì)1/21/2。 4 4分糖原包涵體充滿整個(gè)胞質(zhì)。分糖原包涵體充滿整個(gè)胞質(zhì)。第7頁(yè)/共10頁(yè) 1.1. 所用染色缸及器具應(yīng)十分清潔、干燥。所用染色缸及器具應(yīng)十分清潔、干燥。2.2. 雪夫雪夫(Schiff)(Schiff)染液應(yīng)避光密封冰箱保存，一般染液應(yīng)避光密封冰箱保存，一般44下可保存下可保存6 6個(gè)月，個(gè)月，試劑應(yīng)為無(wú)色，變紅則失效。試劑應(yīng)為無(wú)色，變紅則失效。3.3. 10g/L10g/L過(guò)碘酸溶液質(zhì)量要保證，變黃則不能用。氧化時(shí)間要準(zhǔn)確，

12、以過(guò)碘酸溶液質(zhì)量要保證，變黃則不能用。氧化時(shí)間要準(zhǔn)確，以20min20min為宜。為宜。4.4. 染色時(shí)間和溫度應(yīng)相對(duì)恒定，一般以染色時(shí)間和溫度應(yīng)相對(duì)恒定，一般以3737染色染色30min30min最適宜。最適宜。5.5. 染色好的涂片應(yīng)及時(shí)檢查，以免褪色。染色好的涂片應(yīng)及時(shí)檢查，以免褪色。6.6. 偏重亞硫酸鈉易于分解，過(guò)碘酸易潮解，應(yīng)密封干燥保存。偏重亞硫酸鈉易于分解，過(guò)碘酸易潮解，應(yīng)密封干燥保存。7.7. 堿性品紅的質(zhì)量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響。堿性品紅的質(zhì)量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)第8頁(yè)/共10頁(yè) 1. 紅血病、紅白血病及貧血類型的鑒別：紅血病、紅白血病、缺鐵紅血病、紅白血病及貧血類型的鑒別：紅血病、紅白血病、缺鐵性貧血、重型地中海貧血及骨髓增生異常綜合征時(shí)幼紅細(xì)胞呈強(qiáng)性貧血、重型地中海貧血及骨髓增生異常綜合征時(shí)幼紅細(xì)胞呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)；溶血性貧血、急慢性白血病、淋巴瘤時(shí)幼紅細(xì)胞呈陰陽(yáng)性反應(yīng)；溶血性貧血、急慢性白血病、淋巴瘤時(shí)幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)或弱陽(yáng)性反應(yīng)；再生障礙性貧血、巨幼細(xì)胞貧血時(shí)幼紅細(xì)性反應(yīng)或弱陽(yáng)性反應(yīng)；再生障礙性貧血、巨幼細(xì)胞貧血時(shí)幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。胞呈陰性反應(yīng)。2. 白血病類型的鑒別：白血病類型的鑒別：AML