沉淀反應(yīng)試驗(yàn)報(bào)告

1、實(shí)驗(yàn) 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)與顏色反應(yīng) 一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握鑒定蛋白質(zhì)的原理和方法。 熟悉蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)，進(jìn)一步熟悉蛋白質(zhì)的有關(guān)反應(yīng)。 二、 實(shí)驗(yàn)原理 蛋白質(zhì)分子中某種或某些集團(tuán)可與顯色劑作用，產(chǎn)生顏色。不同的蛋白質(zhì)由于所含的氨 基酸不完全相同，顏色反應(yīng)亦不完全相同。顏色反應(yīng)不是蛋白質(zhì)的專一反應(yīng)，一些非蛋白物 質(zhì)也可產(chǎn)生同樣的顏色反應(yīng)，因此不能根據(jù)顏色反應(yīng)的結(jié)果來(lái)決定被測(cè)物是否為蛋白質(zhì)。另 外，顏色反應(yīng)也可作為一些常用蛋白質(zhì)定量測(cè)定的依據(jù)。蛋白質(zhì)是親水性膠體，在溶液中的 穩(wěn)定性與質(zhì)點(diǎn)大小、電荷、水化作用有關(guān)，但其穩(wěn)定性是有條件的，相對(duì)的。如果條件發(fā)生 了變化，破壞了蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，蛋白質(zhì)就會(huì)從溶液

2、中沉淀出來(lái)。 三、 實(shí)驗(yàn)儀器 1 、吸管2、滴管3、試管4、電爐5、ph試紙6、水浴鍋7、移液管 四、 實(shí)驗(yàn)試劑 1 、卵清蛋白液：雞蛋清用蒸儲(chǔ)水稀釋 10-20倍，3-4層紗布過(guò)濾，濾液放在冰箱里冷藏 備用。 2 、0.5%苯酚：1g苯酚加蒸儲(chǔ)水稀釋至 200ml。 3 、millon s試劑：40g汞溶于60ml濃硝酸（水浴加溫助溶）溶解后，冷卻，加二倍體 積的蒸儲(chǔ)水，混勻，取上清夜備用。此試劑可長(zhǎng)期保存。 4 、尿素晶體 5 、1%cuso： 1g cuso晶體溶于蒸留水，稀釋至 100ml 44 6 、10%naoh 10g naoh溶于蒸留水，稀釋至 100ml 7 、濃硝酸 8 、

3、0.1%前三酮溶液：0.1g前三酮溶于95%勺乙醇并稀釋至100ml. 9 、冰醋酸 10 、濃硫酸 11 、飽和硫酸鉉溶液：100ml蒸儲(chǔ)水中加硫酸鉉至飽和。 12 、硫酸鉉晶體：用研缽研成碎末。 13 、95%醇。 14 、醋酸鉛溶液：1g醋酸鉛溶于蒸儲(chǔ)水并稀釋至 100ml 15 、氯化鈉晶體 16 、10%氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸儲(chǔ)水中并稀釋至 100ml 17 、飽和苦味酸溶液：100ml蒸儲(chǔ)水中加苦味酸至飽和。 18、1%醋酸溶液。 五、 實(shí)驗(yàn)步驟 蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng) （一） 米倫（millon s）反應(yīng) 1 、苯酚實(shí)驗(yàn)：取0.5%苯酚溶液1ml于試管中，加 millon s

4、試劑0.5ml ,電爐小心加熱 觀察顏色變化。 2 、蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)：取2ml蛋白液，加millon s試劑0.5ml ,出現(xiàn)白色的蛋白質(zhì)沉淀，小 心加熱，觀察現(xiàn)象。 （二） 雙縮脈反應(yīng) 1 、取少量尿素晶體放在干燥的試管中，微火加熱熔化，至重新結(jié)晶時(shí)冷卻。然后加 10%naoh溶液1ml,搖勻，再加2-4滴1% cuso4溶液，混勻，觀察現(xiàn)象。 2 、取蛋白液1ml,加10%naoh溶液1ml,搖勻，再加2-4滴1%cuso4溶液，混勻，觀察 現(xiàn)象。 （三） 黃色反應(yīng) 取一支試管，加入 1ml蛋白液及濃硝酸5滴。加熱，冷卻后注意顏色變化。然后再加入 10%naoh溶液1ml,觀察顏色有什么變化。

5、 （四） 前三酮反應(yīng) 取蛋白液1ml于試管中，加4-8滴前三酮溶液，加熱至沸，即有藍(lán)紫色出現(xiàn)。 蛋白質(zhì)的沉淀 （一） 蛋白質(zhì)的鹽析作用 1 、試管中加蒸儲(chǔ)水 3ml，加固體硫酸鉉至飽和。另一支試管加蛋白液 2ml,再加入飽和 硫酸鉉溶液2ml,搖勻靜置觀察現(xiàn)象。 2 、將上述混合液過(guò)濾。 向?yàn)V液中逐漸加入少量固體硫酸鉉， 直至飽和為止，此時(shí)析出為 清蛋白。再加入少量蒸儲(chǔ)水，觀察沉淀是否溶解。 （二） 有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì) 試管中加蛋白液1ml,加晶體氯化鈉少許，溶解后加 95%醇3ml,搖勻，觀察現(xiàn)象。 （三） 重金屬鹽與某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì) 1 、取試管2支，各加蛋白液2ml, 一支管中滴加1

6、%醋酸鉛溶液，另一支管中滴加 1%充 酸銅溶液，至有沉淀產(chǎn)生。 2 、取一支試管加蛋白液 2ml，再加入10氯乙酸1ml,充分混勻，觀察結(jié)果。 （四） 生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì) 取一支試管，加入蛋白液 2ml及醋酸4-5滴，再加飽和苦味酸數(shù)滴，觀察現(xiàn)象。 六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng) （一） 米倫（millon s）反應(yīng) 1 、苯酚實(shí)驗(yàn)： 溶液即出現(xiàn)玫瑰紅色。 2 、蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)： 出現(xiàn)白色的蛋白質(zhì)沉淀，小心加熱后凝固的蛋白質(zhì)出現(xiàn)紅色。 （二） 雙縮脈反應(yīng) 1 、有紫色出現(xiàn)。 2 、溶液有藍(lán)紫色出現(xiàn) （三） 黃色反應(yīng) 先有黃色沉淀生成，加入 10%naoh溶液1ml后顏色變?yōu)殚冱S色。 （四） 前三

7、酮反應(yīng) 有藍(lán)紫色出現(xiàn)。 蛋白質(zhì)的沉淀 （一）蛋白質(zhì)的鹽析作用 1 、有蛋白析出。 2 、有蛋白質(zhì)析出，加水后可復(fù)溶。 （六） 有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì) 取一試管加蛋白液1ml,，加入晶體氯化鈉少許，待溶解后再加 95%醇3ml,搖勻，觀察 現(xiàn)象 （七） 重金屬鹽與某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì) 取試管2支，各加蛋白液2ml, 一支管中滴加1%醋酸鉛溶液，另一支管中滴加 1%硫酸銅 溶液，至有沉淀產(chǎn)生。 （八） 生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì) 取一支試管，加入蛋白液 2ml及醋酸4-5滴，再加飽和苦味酸和糅酸數(shù)滴，觀察現(xiàn)象。 七、實(shí)驗(yàn)分析 蛋白質(zhì)分子中某種或某些集團(tuán)可與顯色劑作用，產(chǎn)生顏色。不同的蛋白質(zhì)由于所含的氨 基酸

8、不完全相同，顏色反應(yīng)亦不完全相同。篇二：自由沉淀實(shí)驗(yàn)報(bào)告 六、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄與整理 1 、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄 沉降柱直徑 水樣來(lái)源 柱高 靜置沉淀時(shí)間/min 表面皿表面皿編號(hào) 質(zhì)量/g 表面皿 和懸浮物總質(zhì)量/g 水樣中懸浮物質(zhì)量/g 水樣體積/ml 懸浮物沉降柱濃度/工作水(g/ml )深/mm 顆粒沉沉淀效 速/ 率/ % ( mm/s) 殘余顆 粒百分比/% 0 5 10 20 30 60 120 0 1 2 3 4 5 6 79.0438 80.7412 1.6974 81.7603 83.2075 1.4472 64.1890 65.4972 1.3082 66.1162 67.3286

9、1.2124 73.7895 74.9385 1.1490 83.4782 84.6290 1.1508 75.0332 76.1573 1.1241 31.0 30.0 30.0 30.0 30.0 31.0 31.0 0.0548 0.0482 0.0436 0.0404 0.0383 0.0371 0.0363 846.0 808.0 780.0 724.0 664.0 500.0 361.0 I. 860 0.883 0.395 0.230 0.069 0.021 II. 40 20.44 26.28 30.11 32.30 33.76 100 87.96 79.56 73.72 69

10、.89 67.70 66.24 2 、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)整理 (2)繪制沉淀曲線：e-t 、e-u、uipi曲線如下：2-1、繪制去除率與沉淀時(shí)間的曲 線如下： 圖2.2 :沉淀時(shí)間t與沉淀效率e的關(guān)系曲線 2-2 、繪制去除率與沉淀速度的曲線如下： 圖2.2 :顆粒沉速u與沉淀效率e的關(guān)系曲線 2-3 、繪制去除率與沉淀速度的曲線如下： (1) 選擇t=60min時(shí)刻：(大家注意哦！這部分手寫的，不要直接打?。?)水樣中懸浮 物質(zhì)量=表面皿和懸浮物總質(zhì)量-表面皿質(zhì)量，如表格所示。原水懸浮物的濃度：c0? 水樣中懸浮物質(zhì)量 1.6974 ?0.0548g/ml 水樣體積31.0 懸浮物的濃度：c5? 水

11、樣中懸浮物質(zhì)量 1.1508 ?0.0371g/ml 水樣體積31.0 沉淀速率：u? h?10 (500-250)?0.069mm/s ti?6060?60 c0-c50.0548-0.0371 ?100%?100%?32.30 C00.0548 C50.0371 ?100%?100%?67.70 C00.0548 沉淀效率：e5? 殘余顆粒百分比p5?篇三：混凝沉淀實(shí)驗(yàn)報(bào)告 實(shí)驗(yàn)名稱：混凝沉淀實(shí)驗(yàn) 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1 、通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察混凝現(xiàn)象、加深對(duì)混凝沉淀理論的理解； 2 、掌握確定最佳投藥量的方法，選擇和確定最佳混凝工藝條件； 3 、了解影響混凝條件的相關(guān)因數(shù)。 二、實(shí)驗(yàn)原理 1. 混凝作

12、用原理 包括三部分：1)壓縮雙電層作用；2)吸附架橋作用；3)網(wǎng)捕作用。 這三種混凝機(jī)理在水處理過(guò)程中不是各自孤立的現(xiàn)象，而往往是同時(shí)存在的，只不過(guò)隨不同 的藥劑種類、投加量和水質(zhì)條件而發(fā)揮作用程度不同，以某一種作用機(jī)理為主。對(duì)高分子混 凝劑來(lái)說(shuō)，主要以吸附架橋機(jī)理為主。而無(wú)機(jī)的金屬鹽混凝劑則三種作用同時(shí)存在。 膠體表面的電荷值常用電動(dòng)電位 弋表示，又稱為zeta電位。 一般天然水中的膠體顆粒 的zeta電位約在-30mv以上，投加混凝劑之后，只要該電位降到 -15mv左右即可得到較好的 混凝效果。相反，當(dāng)電位降到零，往往不是最佳混凝狀態(tài)。因?yàn)樗械哪z體顆粒主要是帶負(fù) 電的粘土顆粒。膠體間存在

13、著靜電斥力，膠粒的布朗運(yùn)動(dòng)，膠粒表面的水化作用，使膠粒具 有分散穩(wěn)定性，三者中以靜電斥力影響最大，若向水中投加混凝劑能提供大量的正離子，能 加速膠體的凝結(jié)和沉降。 2. 混凝劑 向水中投加的能使水中膠體顆粒脫穩(wěn)的高價(jià)電解質(zhì)， 稱之為“混凝劑”?；?凝劑可分為無(wú)機(jī)鹽混凝劑和高分子混凝劑。水處理中常用的混凝劑有：三氯化鐵、硫酸鋁、 聚合氯化鋁(簡(jiǎn)稱pac)、聚丙烯酰胺等。本實(shí)驗(yàn)使用pac,它是介于alcl3 和al(oh)3 之間 的一種水溶性無(wú)機(jī)高分子聚合物，化學(xué)通式為 al2(oh)ncl(6-n)m 其中m代表聚合程度，n 表示pac產(chǎn)品的中性程度。 3. 投藥量 單位體積水中投加的混凝劑量

14、稱為“投藥量” ，單位為mg/l?；炷齽┑耐都?量除與混凝劑品種有關(guān)外，還與原水的水質(zhì)有關(guān)。當(dāng)投加的混凝劑量過(guò)小時(shí)，高價(jià)電解質(zhì)對(duì) 膠體顆粒的電荷斥力改變不大，膠體難以脫穩(wěn)，混凝效果不明顯；當(dāng)投加的混凝劑量過(guò)大時(shí)， 則高價(jià)反離子過(guò)多，膠體顆粒會(huì)吸附過(guò)多的反離子而使膠體改變電性，從而使膠體粒子重新 穩(wěn)定。因此混凝劑的投加量有一個(gè)最佳值，其大小需要通過(guò)試驗(yàn)確定。 4. 影響混凝作用的因素 投藥量、水中膠體顆粒的濃度、水溫、水的 ph值等。 5. 濁度儀 濁度是表現(xiàn)水中懸浮物對(duì)光線透過(guò)時(shí)所發(fā)生的阻礙程度。 水中含有泥土、粉 塵、微細(xì)有機(jī)物、浮游動(dòng)物和其他微生物等懸浮物和膠體物都可使水中呈現(xiàn)濁度。濁度儀

15、采 用90。散射光原理。由光源發(fā)出的平行光束通過(guò)溶液時(shí)，一部分被吸收和散射，另一部分透 過(guò)溶液。與入射光成 90 方向的散射光強(qiáng) 度符合雷萊公式，在入射光恒定條件下，在一定濁度范圍內(nèi)，散射光強(qiáng)度與溶液的混濁 度成正比。因此，我們可以通過(guò)測(cè)量水樣中微粒的散射光強(qiáng)度來(lái)測(cè)量水樣的濁度。 、實(shí)驗(yàn)儀器和試劑 1. 儀器 （1） 濁度儀一臺(tái)（sgz-2數(shù)顯濁度儀，上海悅豐儀器儀表有限公司） （2） 混凝試驗(yàn)攪拌儀（my3000-6普通型混凝試驗(yàn)攪拌儀，潛江梅寧儀器有限公司） （3） 電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器，北京有限公司） （4） 沉淀桶（ 600ml燒杯）6個(gè)；（5） 100ml取樣瓶6個(gè)；（6）乳膠

16、管或塑料軟管（直 徑 58mm 1520cm； （7） 100ml 燒杯 1 個(gè)；（8） 100ml 量筒 1 個(gè)； （9） 500ml 量筒 1 個(gè)；（10） 10ml 量筒 1 個(gè)； 2. 實(shí)驗(yàn)試劑 混凝劑：聚合氯化鋁 pac;原水（制備工作已由實(shí)驗(yàn)員完成）；自來(lái)水 四、 實(shí)驗(yàn)步驟 1 ）制備原水：事先用高嶺土配制濁度為 50 ntu左右的渾水，靜沉1天以上，取上清液 備用。（已由 實(shí)驗(yàn)員完成） 2 ）用電子天平稱取混凝劑（pac） 3g溶于1l自來(lái)水中，濃度為 3g/l。 3 ）取600ml原水倒入與攪拌儀配套的沉淀桶中。共六個(gè)沉淀桶。 4 ） 根據(jù)原水體積，按照投加量 80、120、1

17、60、200、300、400mg/l計(jì)算加藥量，并換 算成混凝劑溶 液的體積量。換算后，混凝劑溶液的體積分別為： 16、24、32、40、60、80ml。 5 ）設(shè)置攪拌儀程序： （1）轉(zhuǎn)速400轉(zhuǎn)/分，攪拌1.5 min ; （2）轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分，繼續(xù)攪拌 5 min ; （3）轉(zhuǎn)速60轉(zhuǎn)/分，繼續(xù)攪拌5 min ; （4）轉(zhuǎn)速0轉(zhuǎn)/分鐘，沉淀15min 6 ）用量筒量取步驟（3）計(jì)算的混凝劑量，快速加入沉淀桶中。貼好標(biāo)簽，將六個(gè)沉淀 桶放置在攪 拌儀上。 7 ）開(kāi)啟攪拌儀，按照設(shè)定程序運(yùn)行。 （注意觀察各個(gè)沉淀桶的絮凝沉淀情況） 8 ）程序結(jié)束后，打開(kāi)沉淀桶的小閥門， 取每個(gè)沉淀桶中上清

18、液 50100ml于清洗好的試 管中。 9 ）用濁度儀測(cè)定上清液濁度并進(jìn)行記錄（速度要快；使用前要調(diào)零；待濁度儀示數(shù)較 穩(wěn)定時(shí)讀數(shù)） 五、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄及處理 表.不同加藥量溶液的濁度 加藥量 mg/l pac 溶液 體積/ml 濁度 /ntu 8.23 3.30 2.20 以投藥量為橫坐標(biāo)，上清液濁度為縱坐標(biāo)繪制不同混凝劑混凝沉淀圖，從圖中求出最低 濁度時(shí)混凝的投加量。 2.43 4.70 110.00 16 24 32 40 60 80 80 120 160 200 300 400 圖.不同混凝劑混凝沉淀圖 從以上作圖結(jié)果可以看出，以四次方的多項(xiàng)式擬合效果較好（ r=1 ）,當(dāng)溶液的濁度達(dá)

19、到 最低點(diǎn)時(shí)對(duì)應(yīng)的投藥量約為 255mg/l，即該原水的最佳投藥量為 255mg/l。2 六、 結(jié)果與討論 1.實(shí)驗(yàn)時(shí)，在攪拌過(guò)程中發(fā)現(xiàn)不同沉淀桶中呈現(xiàn)的顏色深淺不一，形成的絮狀顆粒大小 也不同。這說(shuō)明，不同加藥量會(huì)對(duì)混凝效果產(chǎn)生不同影響。 2. 實(shí)驗(yàn)中，600ml原水未用量筒進(jìn)行量取，而是直接根據(jù)沉淀桶上的刻度進(jìn)行添加。沉 淀桶上的刻度相對(duì)不精確，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)產(chǎn)生一定的影響。 3. 測(cè)定上清液的濁度時(shí)，發(fā)現(xiàn)若是測(cè)定速度較慢，不同溶液的沉淀時(shí)間就不平行。較晚 測(cè)定的溶液沉淀時(shí)間較長(zhǎng)，這對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度也會(huì)造成影響。 4. 測(cè)定濁度時(shí)發(fā)現(xiàn)濁度儀的示數(shù)不穩(wěn)定，波動(dòng)較大。造成該結(jié)果的原因可能是由于

20、靜置 沉淀的時(shí)間不夠長(zhǎng)，溶液中的顆粒還處于較為劇烈的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)，這樣測(cè)得光源被散射的散射 光強(qiáng)度就會(huì)有較大變化，導(dǎo)致濁度儀示數(shù)不穩(wěn)定。 5. 對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理時(shí)，發(fā)現(xiàn)可以使用不同次藉的多項(xiàng)式對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行擬合。本實(shí) 驗(yàn)用四次藉或五次藉的多項(xiàng)式進(jìn)行擬合時(shí)， r都等于1。而用三次藉的多項(xiàng)式進(jìn)行擬合的 r 則等于0.9999。根據(jù)觀察擬合曲線的情況，選擇以四次藉多項(xiàng)式擬合。最佳投藥量是根據(jù)曲 線進(jìn)行估計(jì)的，并未進(jìn)行精確地計(jì)算。這樣得出的結(jié)果可能會(huì)存在一定的偏差。 22 六、思考題 1. 選擇混凝劑種類及確定其投加量時(shí)應(yīng)考慮哪些因素？ 混凝劑的選擇主要取決于膠體和細(xì)微懸浮物的性質(zhì)和濃度。如水中污染物主

21、要呈膠體狀 態(tài)且電位較高則營(yíng)先投加無(wú)機(jī)混凝劑使其脫穩(wěn)凝聚；如絮體細(xì)小，還需投加高分子混凝劑或 配合使用活性硅酸等助凝劑。 同時(shí)，用于水處理的混凝劑要求混凝效果好， 對(duì)人類健康無(wú)害， 價(jià)廉易得，使用方便。對(duì)于混凝劑投加量的確定，主要考慮水中微粒種類、性質(zhì)和濃度以及 混凝劑品種、投加方式、介質(zhì)條件等。對(duì)任何廢水的混凝處理，都存在最佳混凝劑和最佳投 藥量的問(wèn)題，應(yīng)通過(guò)試驗(yàn)確定。 2. 混凝操作過(guò)程中應(yīng)注意哪些問(wèn)題？ 1 ）取原水時(shí)要攪拌均勻，要一次量取以盡量減少所取原水濃度上的差別。 2 ）混凝包括混合與凝聚，混合過(guò)程（即混凝劑剛加入水中的混合過(guò)程） 要求快速避免因 時(shí)間間隔較長(zhǎng)各水樣加藥后反應(yīng)時(shí)間

22、長(zhǎng)短相差太大而導(dǎo)致混凝效果懸殊。之后則要不斷減慢 速度，使脫穩(wěn)膠體粒子相互凝聚?；旌线^(guò)程大約要在 12分鐘內(nèi)完成，而凝聚過(guò)程則大約需 要2030分鐘，沉淀過(guò)程則大約需要 1個(gè)小時(shí)。試驗(yàn)室燒杯試驗(yàn)可適當(dāng)縮短試驗(yàn)時(shí)間。 3 ）混凝過(guò)程要保持?jǐn)嚢鑳x不被人為擾動(dòng)， 防止對(duì)混凝結(jié)果產(chǎn)生影響。篇四：實(shí)驗(yàn)二報(bào)告 北京中醫(yī)藥大學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 實(shí)驗(yàn)二 蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)，沉淀反應(yīng) 姓名： 王家偉 同組：湯殷飛 日期：2011/9/26 學(xué)號(hào)： 0901222 班級(jí)： 室溫： 教師： 09 針外 實(shí)驗(yàn)室： 成績(jī)： 實(shí)驗(yàn)室二 劉連起 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解蛋白質(zhì)的性質(zhì)。2.掌握蛋白質(zhì)的鑒定方法。 二. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1 .蛋

23、白質(zhì)的呈色反應(yīng)。2.蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)。 三. 實(shí)驗(yàn)原理及操作 （一） 蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng) 蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)是蛋白質(zhì)中某些氨基酸特殊基團(tuán)與一定的化學(xué)試劑作用而呈現(xiàn)的各種 顏色反應(yīng)，可作為檢查蛋白質(zhì)是否存在的參考。另外，不同的蛋白質(zhì)中氨基酸的種類及含量 各不相同，而在某些蛋白質(zhì)內(nèi)還可能缺乏呈某種顏色反應(yīng)的氨基酸。因此不但不同蛋白質(zhì)呈 色反應(yīng)的強(qiáng)度不同，而且某些呈色反應(yīng)在某種蛋白質(zhì)可能不存在。 本實(shí)驗(yàn)操作兩種呈色反應(yīng)： 雙縮脈反應(yīng)與前三酮反應(yīng)，用以比較和鑒別不同的蛋白質(zhì)。 1 .雙縮脈反應(yīng) 【實(shí)驗(yàn)原理】 在濃堿液中，雙縮脈能與硫酸銅結(jié)合生成紫色或紫紅色的復(fù)合物，這一呈色反應(yīng)為雙縮 脈反應(yīng)，凡含有兩個(gè)及

24、多個(gè)肽鍵 （酰胺鍵） 的化合物都可能發(fā)生此反應(yīng)，故蛋白質(zhì)及二肽以 上的物質(zhì)都有此反應(yīng)，但除肽鍵外，有些基團(tuán)如一 csnh, c （nh2） nh等也有雙縮月尿反 應(yīng)，因此，一切蛋白質(zhì)或多肽都有雙縮脈反應(yīng)， 但有雙縮脈反應(yīng)的不一定都是蛋白質(zhì)或多肽。 【操作】 （1） 取小試管一支，加 1: 10雞蛋白液2滴，10%naoh溶液5滴及1%硫酸銅溶液1 滴，混勻，可見(jiàn) 溶液呈紫色。 （2） 另取一小試管，加一小匙尿素（綠豆大小），小火加熱至熔，嗅其氣味為（臭味）。 繼續(xù)加熱使之凝固，這固體是（雙縮脈） ，加水10滴，10%naoh溶液5滴，1%|酸銅溶 液1滴，可見(jiàn) 溶液變成紫紅色。 2 .前三酮反

25、應(yīng) 【實(shí)驗(yàn)原理】 凡含有自由氨基的化合物例如蛋白質(zhì)，多肽，各種氨基酸（脯氨酸和羥脯氨酸例外）和 其它伯胺化合物（包括氨）與前三酮共熱時(shí)，能生成紫藍(lán)色化合物， 這種反應(yīng)即前三酮反應(yīng)。 【操作】 注意：用酒精燈加熱時(shí)，酒精燈不要隨便移動(dòng)，加熱試管口不能對(duì)著人，不能用吹氣的 方式熄滅酒精燈，以免出現(xiàn)危險(xiǎn)情況。 當(dāng)維持蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定因素（水化膜和電荷）遭到破壞時(shí)，蛋白質(zhì)析出。如果是 非變性沉淀，例如加入中性鹽或者在低溫下加入有機(jī)溶劑脫水，則除去沉淀劑后，蛋白質(zhì)仍 可溶解，此即可逆的沉淀反應(yīng)。 如果是變性沉淀，例如加入重金屬鹽類， 生物堿試劑或加熱， 則沉淀劑不易除去， 沉淀常不能再溶解， 此即不

26、可逆的沉淀反應(yīng)。 1.蛋白質(zhì)的鹽析 【實(shí)驗(yàn) 原理】 水溶液中的蛋白質(zhì)在高濃度的中性鹽 硫酸鉉，硫酸鎂，氯化鈉等中析出的現(xiàn)象，稱為 鹽析作用。鹽析作用包括兩種過(guò)程：1）大量電解質(zhì)破壞了蛋白質(zhì)的水化膜從而出現(xiàn)沉淀。 2） 電解質(zhì)中和了蛋白質(zhì)分子所帶的電荷而沉淀。 中性鹽能否沉淀各種蛋白質(zhì)常決定于中性鹽的濃度， 蛋白質(zhì)的種類，溶液的ph值以及蛋 白質(zhì)的膠體顆粒。顆粒大者比顆粒小者容易沉淀， 如球蛋白多在半飽和的硫酸鉉溶液中析出， 而清蛋白常在飽和的硫酸鉉溶液中析出。 【操作】 （1） 取5ml雞蛋白溶液于試管中，加入等量飽和硫酸鉉溶液，混勻，靜置 20分鐘后, 觀察現(xiàn)象是 溶液中有白色沉淀析出。 （

27、2） 過(guò)濾，收集透明濾液，濾液中會(huì)有清蛋白，若溶液混濁，須重復(fù)過(guò)濾至透明為 止。 （3） 取1ml濾液加固體硫酸鉉（0.5g）使達(dá)到飽和，邊加邊振搖到溶液出現(xiàn)混濁， 再向混濁液加1.5-2.0ml水，觀察現(xiàn)象是 溶液中沉淀逐漸溶解 2 .重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì) 【實(shí)驗(yàn)原理】 蛋白質(zhì)在堿性溶液中帶有較多負(fù)電荷，當(dāng)它與帶正電荷的重金屬離子結(jié)合時(shí)即可生成不 溶解的沉淀，重金屬鹽類沉淀蛋白質(zhì)能引起蛋白質(zhì)的變性，而中性鹽類即使加入量很多也不 改變蛋白質(zhì)原來(lái)的性質(zhì)。 【操作】 【實(shí)驗(yàn)原理】 由于溫度升高破壞了蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的化學(xué)鍵，引起蛋白質(zhì)變性，因此幾乎所有蛋白質(zhì) 都可因加熱而凝固。 蛋白質(zhì)在其等電點(diǎn)時(shí)不

28、帶電荷， 或帶等量的正負(fù)電荷，此時(shí)若溫度升高則容易出現(xiàn)沉淀。 在酸性或堿性溶液中，蛋白質(zhì)分子帶有正或負(fù)電荷，較為穩(wěn)定。如果過(guò)酸或過(guò)堿則易變性， 此時(shí)若溫度升高，雖變性卻不沉淀。在冷卻后加酸或加堿調(diào)節(jié) ph值達(dá)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)時(shí)則有沉 淀析出。 【操作】 (1) 取4支試管，編號(hào)，按下表加入試劑 (2) 取出試管，冷卻后于第3管中慢慢滴入10%naoh溶液，觀察現(xiàn)象是溶液先變渾濁， 然后渾濁慢慢溶解，其原因是 加入堿溶液后使得溶液 ph值達(dá)到蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)， 所以有沉 淀析出，加入過(guò)量的堿溶液使溶液偏離等電點(diǎn)，沉淀溶解。 (3) 向第4管中慢慢滴入10洲酸，觀察現(xiàn)象為 溶液先變渾濁，然后渾濁慢慢溶解， 其原因是 加入酸溶液后使得溶液 ph值達(dá)到蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，所以有沉淀析出，加入過(guò)量的 酸溶液使溶液偏離等電點(diǎn)，沉淀溶解。 四.實(shí)驗(yàn)材料 (一) 試劑 1 . 1: 10雞蛋白溶液 2 . 10%naoh 3 . 1腕酸銅 4 .尿素 5 . 0. 1%第三酮 乙醇液 6 . 0. 25燦氨酸溶液 7 .飽和硫酸鉉溶液 8 .固體硫酸鉉 9 . 0. 5%naoh 10. 0. 5嘛酸鋅 11 . 10瞰基水楊酸 12 . 10%hcl 13 . 1%hac 14 . 10%hac (二) 儀器 水浴鍋(100攝氏度) (三) 其它 雞蛋，酒精燈，火柴，濾紙篇五：