皮膚真菌檢查技術(shù)(1)

1、編輯ppt病原性真菌檢驗(yàn)病原性真菌檢驗(yàn)河北省望都皮膚病防治院編輯ppt真菌（Fungus）具有典型細(xì)胞結(jié)構(gòu)（細(xì)胞核、細(xì)胞器、細(xì)胞壁）細(xì)胞壁含幾丁質(zhì)和（或）纖維素?zé)o根、莖、葉，不含葉綠素以腐生或寄生方式攝取養(yǎng)料能進(jìn)行有性生殖和（或）無(wú)性繁殖第一部分 病原性真菌概述編輯ppt 對(duì)人類(lèi)致病的真菌分為： 淺部真菌淺部真菌：侵犯皮膚、毛發(fā)、指甲，為慢性，對(duì) 治療有頑固性，但影響身體較小， 深部真菌深部真菌：可侵犯全身內(nèi)臟，嚴(yán)重的可引起死亡。此外有些真菌寄生于糧食、飼料、食品中，能產(chǎn)生毒素引起產(chǎn)生毒素引起中毒性真菌病中毒性真菌病。 編輯ppt一、生物學(xué)性狀（一）形態(tài)結(jié)構(gòu) 真菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)比細(xì)菌復(fù)雜 細(xì)胞壁為幾

2、丁質(zhì)幾丁質(zhì)(Chitin)（多聚N乙酰葡萄糖組成），并含葡聚糖，甘露聚糖及蛋白質(zhì)，某些酵母菌還含類(lèi)脂體。 細(xì)胞內(nèi)有較為典型的核結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器核結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器。 編輯ppt真菌形態(tài)分單細(xì)胞和多細(xì)胞兩類(lèi) 單細(xì)胞真菌主要為酵母和類(lèi)酵母菌（如隱球菌、念珠菌），呈圓形或橢圓形圓形或橢圓形。以出芽方式繁殖。 多細(xì)胞真菌由菌絲和孢子組成多細(xì)胞真菌由菌絲和孢子組成 菌絲分枝交織成團(tuán)，形成菌絲體（Mycelium），并長(zhǎng)有各種孢子，這類(lèi)真菌即一般稱(chēng)為霉菌（Mold）。 由于生活環(huán)境（如營(yíng)養(yǎng)、溫度、氧氣等）的改變，有些真菌的孢子與菌絲兩種形態(tài)可以孢子與菌絲兩種形態(tài)可以互變互變，這類(lèi)真菌稱(chēng)為二相性真菌二相性真菌（dim

3、orphic fungus），如球孢子菌、組織胞漿菌及芽生菌。 編輯ppt真菌孢子和細(xì)菌芽胞的區(qū)別真菌孢子細(xì)菌芽胞抵抗力不強(qiáng)，60-70短時(shí)間殺死強(qiáng)，煮沸短時(shí)間不死數(shù)目一條菌絲可產(chǎn)生多個(gè)孢子一個(gè)細(xì)菌體只形成一個(gè)芽孢作用為繁殖方式之一不是繁殖方式形成位置可在細(xì)胞內(nèi)外形成只在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)形成形狀形態(tài)、色澤多樣圓形或橢圓形編輯ppt真菌的形態(tài)構(gòu)成菌 絲營(yíng)養(yǎng)菌絲氣生菌絲 生殖菌絲孢 子有性孢子由同一菌體或不同菌體上的二個(gè)細(xì)胞融合形成 絕大多數(shù)屬于非致病性真菌所具有 無(wú) 性 孢 子分生孢子分生孢子梗的頂端或側(cè)面大分生孢子小孢子菌屬、表皮癬菌屬小分生孢子毛癬菌屬葉狀孢子菌絲細(xì)胞直接形成芽生孢子 隱球菌、念珠

4、菌 關(guān)節(jié)孢子 厚膜孢子 新型隱球菌子囊孢子菌絲末端形成膨大的囊狀結(jié)構(gòu)即孢子囊，內(nèi)含很多孢子 根霉菌 編輯ppt真菌菌絲形態(tài)編輯ppt真菌孢子形態(tài)編輯ppt編輯ppt編輯ppt（二）培養(yǎng)特性大多數(shù)真菌營(yíng)養(yǎng)要求不高營(yíng)養(yǎng)要求不高，常用沙保氏培養(yǎng)基 （SDA）培養(yǎng)。淺部病原性真菌的最適溫度為淺部病原性真菌的最適溫度為2228，生長(zhǎng)緩慢，大多于14周出現(xiàn)典型菌落。深部病原性真菌培養(yǎng)深部病原性真菌培養(yǎng)在37中生長(zhǎng)最好，生生長(zhǎng)較快，長(zhǎng)較快，經(jīng)3-4天即長(zhǎng)出菌落。 編輯ppt真菌菌落類(lèi)型類(lèi)型定義特征顏色舉例酵母型菌落為單細(xì)胞真菌的菌落，形態(tài)與一般細(xì)菌菌落相似，以出芽形式繁殖光滑、濕潤(rùn)，一般為乳白色新型隱珠菌類(lèi)

5、酵母型菌落外觀似酵母菌落，但可見(jiàn)伸入培養(yǎng)基中的假菌絲伸入培養(yǎng)基中的假菌絲，由伸長(zhǎng)的芽生孢子形成光滑、濕潤(rùn)，一般為乳白色白色念珠菌絲狀菌落為多細(xì)胞真菌的菌落，由許多管狀、分枝菌絲體組成絨毛狀、絮狀、粉末狀、顆粒狀、石膏狀。 可產(chǎn)生各種色素。毛癬菌編輯ppt編輯ppt（三）變異性真菌易發(fā)生變異，在人工培養(yǎng)基中多次傳代或孵育過(guò)久，可出現(xiàn)形態(tài)結(jié)構(gòu)、菌形態(tài)結(jié)構(gòu)、菌落性狀、色素及毒力等改變落性狀、色素及毒力等改變。編輯ppt（四）抵抗力 真菌對(duì)干燥、陽(yáng)光、紫外線及一般化學(xué)消毒劑有一定的耐受力有一定的耐受力，但充分暴露于陽(yáng)光，紫外線及干燥情況下大多數(shù)真菌可被殺死，且對(duì)2.5%碘酒，10%福爾馬林都敏感，一般

6、可用福爾馬林薰蒸被真菌感染的房間。 對(duì)熱敏感對(duì)熱敏感，一般601小時(shí)可殺死真菌菌絲和孢子。編輯ppt二、致病性與免疫性（一）致病性真菌引起的疾病大致包括 真菌性感染：真菌性感染：主要是外源性感染 淺部真菌淺部真菌侵犯皮膚、指甲及須發(fā)等組織，頑強(qiáng)繁殖，發(fā)生機(jī)械刺激損害，同時(shí)產(chǎn)生酶及酸等代謝產(chǎn)物，引起炎癥反應(yīng)和細(xì)胞病變。 深部真菌深部真菌侵犯皮下，內(nèi)臟及腦膜等處，引起慢性肉芽腫及壞死。2條件致病性真菌感染：條件致病性真菌感染： 主要是內(nèi)源性感染（如白色念珠菌），亦有外源性感染（如曲霉菌）。編輯ppt3過(guò)敏性真菌病： 由真菌性過(guò)敏原（如孢子抗原）引起過(guò)敏癥，如哮喘，變態(tài)反 應(yīng)性肺泡炎和癬菌疹等。4真

7、菌毒素中毒癥： 侵犯害肝、腎、腦、中樞神經(jīng)系統(tǒng)及造血組織。如黃曲霉毒素、某些鐮刀菌素和黑葡萄穗素。編輯ppt（二）免疫性1非特異性免疫：人類(lèi)對(duì)真菌感染有天然免疫力。皮膚分泌短鏈脂肪酸和乳酸、血液中轉(zhuǎn)鐵蛋白、中性粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞的吞噬作用，以及正常菌群的拮抗作用。2特異性免疫：真菌感染中細(xì)胞免疫是機(jī)體排菌殺菌及復(fù)原的關(guān)鍵，T細(xì)胞分泌的淋巴因子、以T細(xì)胞為主導(dǎo)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)引起免疫病理?yè)p傷能局限和消滅真菌，以終止感染。編輯ppt三、微生物學(xué)診斷（一） 直接檢查1不染色標(biāo)本的直接鏡檢： 直接采取標(biāo)本制片、顯微鏡下直接觀察，若發(fā)現(xiàn)真菌菌絲或孢子存在時(shí)，即可初步判定為真菌感染。 1）標(biāo)本制備： 2

8、）檢查方法： 3）封固液：編輯ppt KOH溶液：本液適于檢查致密的難以透明的材料（如毛發(fā)、指甲、鱗屑等）。 墨汁：主要用于檢查有莢膜的真菌（如新型隱球菌等）。 水合氯醛石炭酸乳酸封固液：此液透明力較強(qiáng)，只限于不透明的標(biāo)本。 生理鹽水：為觀察真菌的出芽現(xiàn)象可用生理鹽水代替氫氧化鉀溶液。 編輯ppt編輯ppt編輯ppt2染色標(biāo)本檢查：1）革蘭氏染色： 各種真菌均為革蘭氏陽(yáng)性革蘭氏陽(yáng)性，為深藍(lán)色，為深藍(lán)色。常用于酵母菌、白色念珠菌、孢子絲菌、諾卡菌及組織胞漿菌等。 2）乳酸酚棉藍(lán)染色3）糖原染色：菌體均染成紅色。用于標(biāo)本直接涂片及組織病理切片染色。4）嗜銀染色（GMS）：染成黑色。 編輯ppt5）

9、粘蛋白卡紅染色法（MCS）： 主要用于新型隱球菌莢膜的染色。隱球菌莢膜和細(xì)胞壁呈紅色，細(xì)胞核呈黑色。6）熒光染色： 主要使用吖啶橙和氫氧化鉀來(lái)染直接涂片、培養(yǎng)涂片及組織切片。編輯ppt編輯ppt（二）培養(yǎng)檢查 本法可確定菌種，輔助直接檢查的不足； 通常用沙保氏培養(yǎng)基（SDA）（2228）； 深部真菌可用血瓊脂或腦心葡萄糖血瓊脂37培養(yǎng)；編輯ppt（三）免疫學(xué)試驗(yàn) 用于檢測(cè)深部感染真菌的抗體抗體，作為輔助診斷組織胞漿菌、念珠菌、曲霉菌。 檢測(cè)深部感染真菌的抗原，抗原，用于早期、快速、特異的診斷。 v 乳膠凝集法檢測(cè)新型隱球菌病患者的莢膜多糖抗原v ELISA法檢測(cè)白色念珠菌感染者的甘露聚糖抗原v

10、 免疫熒光法檢測(cè)孢子絲菌病患者的可溶性抗原 編輯ppt四、防治原則 真菌感染尚無(wú)特異預(yù)防，主要注意公共衛(wèi)生和個(gè)人衛(wèi)生； 碘化物治療孢子絲菌病、毛霉菌病有一定療效； 制霉素、灰黃霉素、克霉唑（三苯甲霉唑）等外用或內(nèi)服對(duì)癬癥和白色念珠菌病等有較好療效； 近年報(bào)道5-氟胞嘧啶（5-FC）治療單細(xì)胞真菌感染療效顯著； 二性霉素B可用于深部全身真菌感染。編輯ppt第二部分淺部真菌 淺部真菌主要為皮膚絲狀菌（Dermatophytes），侵犯皮膚、毛發(fā)、指甲等角化組織引起癬癥，又稱(chēng)癬菌(Ringworm)，分為三屬，共37個(gè)種。編輯ppt(一)、生物學(xué)特征皮膚癬菌的特征 屬名種數(shù) 侵犯部位形態(tài)特征皮膚指甲

11、毛發(fā)大分生孢子小分生孢子菌 絲毛癬菌屬 21+細(xì)長(zhǎng)、棒形、壁薄，少見(jiàn)或無(wú)梨形、棒形，較多見(jiàn)較多見(jiàn)螺旋狀、鹿角狀、結(jié)節(jié)狀、球拍狀、破梳狀，單純細(xì)菌絲小孢子癬菌屬 15+-+紡錘形，壁較厚，較多見(jiàn)較多見(jiàn)棒形，卵圓形，較少見(jiàn)球拍狀及破梳狀菌絲表皮癬菌屬 1+梨形、壁較薄，多見(jiàn)多見(jiàn)無(wú)單純菌絲編輯ppt（二）檢驗(yàn)方法： 1直接鏡檢：直接采取病變部位的標(biāo)本，用顯微鏡檢查有無(wú)菌絲及孢子的存在，本法迅速簡(jiǎn)便，是臨床真菌檢查最常用的方法編輯ppt2分離培養(yǎng)： 取毛發(fā)、皮屑、甲屑等標(biāo)本，用70乙醇消毒，接種沙保氏瓊脂斜面培養(yǎng)基，25培養(yǎng)714天，根據(jù)菌落形態(tài)及顏色、并挑取菌落鏡檢菌絲及孢子的特征進(jìn)行鑒定。編輯pp

12、t毛癬菌屬編輯ppt小孢子菌屬編輯ppt表皮癬菌屬編輯ppt3熒光檢查：本法主要用于頭癬檢查。病發(fā)在濾過(guò)紫外燈照射下可發(fā)出不同色澤的熒光，如黃癬菌病發(fā)呈暗綠色熒光，白癬小孢子菌屬的病發(fā)呈亮綠色熒光等。編輯ppt第三部分深部感染真菌 深部真菌深部真菌是侵犯皮下組織和內(nèi)臟，引起全身性感染的真菌。 多數(shù)能引起慢性肉芽腫樣炎癥、潰瘍及壞死等病變編輯ppt深部感染真菌分兩大類(lèi)： 1. 致病性真菌致病性真菌： 此類(lèi)真菌在正常人體內(nèi)部不存在，一旦侵入機(jī)體，即可致病，如組織胞漿菌、球孢子菌、芽生菌等，屬外源性，我國(guó)少見(jiàn)； 2. 條件致病性真菌條件致病性真菌： 是人體正常菌群的成員，當(dāng)機(jī)體抵抗力下降時(shí)才致病，如

13、新型隱球菌、白色念珠菌、曲霉菌和毛霉菌等。編輯ppt一、白色念珠菌 白色念珠菌白色念珠菌（canidia Albicans）又稱(chēng)白色白色假絲酵母菌假絲酵母菌，廣泛存在于自然界，也存在于正常人口腔，上呼吸道，腸道及陰道，一般在正常機(jī)體中數(shù)量少，不引起疾病 。 為條件致病性真菌。為條件致病性真菌。編輯ppt（一）生物學(xué)特性 卵圓形，大小2m4m，革蘭氏染色陽(yáng)性。 有假菌絲。編輯ppt 培養(yǎng)特性：典型類(lèi)酵母型菌落酵母型菌落，表面光滑，呈灰白色或奶油色，有酵母氣味。 涂片鏡檢，可看到表層為卵圓形芽生細(xì)胞卵圓形芽生細(xì)胞，底層有較多假菌絲較多假菌絲。 編輯ppt（二）致病性和免疫性 白色念珠菌可侵犯人體許

14、多部位，可引起：1. 皮膚念珠菌?。汉冒l(fā)于皮膚皺褶處；2. 粘膜念珠菌?。葫Z口瘡、口角炎、陰道炎最多見(jiàn)。3. 內(nèi)臟及中樞神經(jīng)念珠菌病：肺炎、腸胃炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、腦炎等。 機(jī)體可產(chǎn)生一定免疫力。 編輯ppt（三）檢驗(yàn)方法及鑒定1直接鏡檢：革蘭氏染色鏡檢革蘭氏染色鏡檢2培養(yǎng)特點(diǎn)：典型的酵母菌落。編輯ppt3鑒定試驗(yàn)1）芽管試驗(yàn)：取少許待檢的白色念珠菌接種于0.5ml人或兔血清中，混勻，直37水浴2-3h后，取出一接種環(huán)菌液，涂片、鏡檢。有芽管產(chǎn)生者為白色念珠菌，其他念珠菌不產(chǎn)生芽管。編輯ppt2）TZC試驗(yàn)：將白色念珠菌接種于含0.005氯化三本四氮唑的沙保培養(yǎng)基中，經(jīng)2225，2448h培

15、養(yǎng)， 白色念珠菌不變色或僅淡紅色，其他念珠菌或酵母菌呈紅色或深紅色。3）糖發(fā)酵和糖同化試驗(yàn)： 根據(jù)這兩種試驗(yàn)可將常見(jiàn)的幾種念珠菌進(jìn)行鑒別。 編輯ppt4）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)： 本菌對(duì)兔有致病力。給兔耳靜脈注射本菌，經(jīng)45天死亡。解剖可見(jiàn)腎、肝腫脹、充血，并有小膿腫，涂片及培養(yǎng)均可見(jiàn)本菌及其假菌絲存在。 5）厚膜孢子形成試驗(yàn)： 本試驗(yàn)亦是鑒定白色念珠菌的重要方法之一，在玉米粉聚山梨酯80瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)本菌，鏡檢觀察到厚膜孢子及假菌絲。 編輯ppt編輯ppt編輯ppt4血清學(xué)診斷 用于診斷全身性念珠菌病。以念珠菌為抗原測(cè)定機(jī)體抗念珠菌抗體 編輯ppt二、新型隱球菌 新型隱球菌又名溶組織酵母菌，是土壤，鴿類(lèi)，

16、牛乳、水果等的腐生菌，也可存在人口腔中。 可侵犯人和動(dòng)物，一般為外源性感染，但也可能為內(nèi)源性感染，對(duì)人類(lèi)而言，它通常是條件致病菌。 編輯ppt（一）生物學(xué)特性 較大球形，直徑可達(dá)520um， 有肥厚的莢膜，折光性強(qiáng)，一般染料不易著色，難以發(fā)現(xiàn)，稱(chēng)隱球菌， 用墨汁陰性顯影法鏡檢 ，可見(jiàn)到透明莢膜包裹著菌細(xì)胞， 菌細(xì)胞常有出芽，但不生成假菌絲。 編輯ppt編輯ppt 在沙保氏瓊脂及血瓊脂培養(yǎng)基上，于25及37皆可生長(zhǎng)，而非病原性隱球菌在37不能繁殖。 酵母型菌落，呈白色。 本菌能分解尿素，以此與酵母菌和念珠菌鑒別。 編輯ppt編輯ppt（二）致病性 本菌大多由呼吸道轉(zhuǎn)入，在肺部引起輕度炎癥，或隱性傳染。 侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，發(fā)生腦膜炎、腦炎、腦肉芽腫等。 此外可侵入骨骼、肌肉、淋巴結(jié)、皮膚粘膜引起慢性炎癥和膿腫。 編輯ppt（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)1直接鏡檢：常用墨汁涂片法。2分離培養(yǎng)： 在沙保培養(yǎng)基上，室溫、3723天即可長(zhǎng)出典型酵母型菌落。有莢膜者菌落粘稠。