微柱凝膠卡式法交叉配血試驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、微柱凝膠卡式法交叉配血試驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科交叉配血試驗的技術(shù)操作，確保鑒定結(jié)果準(zhǔn)確 及臨床輸血安全有效，依據(jù)輸血實驗室管理程序4.1.7條款 的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科進(jìn)行交叉配血的操作技術(shù)的規(guī)范 化管理。3、職責(zé)：輸血科技術(shù)人員負(fù)責(zé)本實驗的技術(shù)操作。4、試驗方法及原理4.1試驗方法：凝膠測試法4. 2原理：本微量定型系統(tǒng)凝膠測試法基于生物化學(xué)凝膠過濾技 術(shù)和離心技術(shù)及免疫化學(xué)抗原抗體特異反應(yīng)。當(dāng)抗原抗體反應(yīng)， 抗人球試驗時，血細(xì)胞發(fā)生凝集。離心時凝集塊不能通過凝膠間 隙而留在凝膠上層，呈陽性反應(yīng)，未凝集細(xì)胞離心時可通過凝膠 間隙而沉積在凝膠管底部，呈

2、陰性反應(yīng)。5、樣本采集和處理受血者血樣為EDTA-K2抗凝血。抽取受血者靜脈血3、4nli于 專用管（紫色頭管）內(nèi)，分離出血漿。紅細(xì)胞配成0.8%的懸液, 供血者血樣以同樣方法分離血漿，并配制0.8%紅細(xì)胞懸液。配 血所用受血者血樣必需是輸血前3天內(nèi)的。6、試劑：6. 1 0.9%的生理鹽水;6. 2戴安娜合血卡；7、儀器：7. 1XTL-4. 7細(xì)胞洗滌離心機；7. 2DiaMed-ID Incubator 37 S I 溫育器；7. 3DiaMed-ID Centrifuge 12 SII8、操作程序：8. 1工作準(zhǔn)備：8.1.1生理鹽水室溫平衡。準(zhǔn)備樣本。標(biāo)記合血卡。8. 1. 2 0.

3、 8%T%樣本紅細(xì)胞制備:加25 Hl樣本壓積紅細(xì)胞懸浮液于2ml戴安娜2號稀釋液中。8. 1. 3于1號管中（主側(cè)）加入50 U 1獻(xiàn)血者紅細(xì)胞（0. 8%）o 25U1受血者血漿或血清。8. 1.4 2號管中（次側(cè)）加入50 U1受血者紅細(xì)胞（0.8%）。25U1獻(xiàn)血者血漿或血清。8.1.5 37c孵育15分鐘。8.1. 6離心10分鐘。判斷結(jié)果，并作好記錄。9、結(jié)果判斷：1+至4+為抗人球配血不相容；一（0）為配血相容，可以輸注。10、醫(yī)學(xué)解釋：AB0交叉配血試驗是檢查供、受血者血液中是否含有不相合的抗原和抗體成分的試驗。其目的是發(fā)現(xiàn)ABO血型的不規(guī)則抗 體；發(fā)現(xiàn)ABO血型以外的配血不和

4、合，防止因錯誤定型所致的輸 血事故。是安全輸血的根本保證。11、質(zhì)量控制：每天常規(guī)實驗前先做室內(nèi)質(zhì)控（具體執(zhí)行輸血科室內(nèi)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程），結(jié)果在控后方可將常規(guī) 檢查的報告發(fā)出。12、注意事項：12.1含抗體的新鮮血清，如補體尚有活性，遇相應(yīng)紅細(xì)胞抗原, 可發(fā)生溶血現(xiàn)象，其意義與凝集相同。12. 2可以用含EDTA的血漿代替血清使用。12. 3每日實驗前，先取出2號稀釋液及標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞，放置一段時 間到室溫，以防冷凝集。12. 4實驗前將卡離心3-4分鐘。必須標(biāo)記合血卡。12.5合血卡封口已損壞時，管中干涸，或有氣泡時，卡不可使 用。12. 6必須用2號稀釋液保證反應(yīng)結(jié)果可靠，細(xì)胞濃度要在0

5、. 8% 左右，不可太濃或太稀。12.7纖維蛋白可吸附部分紅細(xì)胞，應(yīng)將血樣離心。12. 8液體應(yīng)加在反應(yīng)卡反應(yīng)室中。12. 9嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)程序操作可檢出弱抗原抗體反應(yīng)，弱凝集。12. 10某些藥物、疾病可導(dǎo)致血液不配合。12.11細(xì)菌及異常血清蛋白可影響結(jié)果。13、最常見的誤差來源：13.1自制分型血清抗體效價太低、親和力不強，造成定型不準(zhǔn)。13. 2患者纖維蛋白原升高或異常蛋白質(zhì)血癥（如多發(fā)性骨髓瘤， 巨球蛋白血癥），可產(chǎn)生緡錢狀假凝集。新生兒臍帶血中含有華頓 膠（Wharton jally）或操作中使用了質(zhì)量差的玻璃管（瓶），誤認(rèn) 其脫下的膠狀硅酸鹽為串錢狀凝集。13. 3病人輸入了高分子血

6、漿代用品或靜脈注射造影劑等藥物， 可引起紅細(xì)胞聚集，易誤認(rèn)為;娥。13.1 4血清中存在不規(guī)則抗體，如人和A2B型患者血清內(nèi)有4抗 體，能凝集&紅細(xì)胞。此外還有I抗體等。有些癌癥患者（如 胃癌、胰腺癌等）血中大量的可溶性A或B物質(zhì)可中和抗體血 清的抗體，從而抑制反應(yīng)，造成假的不凝集。13.5 嬰兒尚未產(chǎn)生自己的抗體（出生3、6個月后方逐漸產(chǎn)生）， 或有從母親獲得的血型抗體，故新生兒不宜用血清作反向定型。13.6 老年人血型抗體水平回下降，某些免疫缺陷的人或慢性淋 巴細(xì)胞白血病、遺傳性無丙種球蛋白血癥以及有些用了免疫抑制 劑的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗體也下降甚至缺如。可 出現(xiàn)反向

7、定性錯誤。13.7 用近期內(nèi)輸過血的患者血液做對照紅細(xì)胞，其紅細(xì)胞是多 種紅細(xì)胞的混合物。13. 8病人紅細(xì)胞已經(jīng)被大量抗體包被（如某些自身免疫疾病或新 生兒溶血病患者的紅細(xì)胞），或紅細(xì)胞懸浮于含高濃度蛋白的介 質(zhì)中，紅細(xì)胞都回自發(fā)地發(fā)生凝集。13.9有些人紅細(xì)胞膜有遺傳或獲得性異常，易發(fā)生多凝集（較罕見）。13. 10A或B的弱抗原易判斷為不凝集（假陰性），而由細(xì)菌引起 的獲得性類B抗原易誤判為陽性。13. 11由于患白血病或某些惡性腫瘤（如Hodgkin病）使A或B 抗原變?nèi)?。嬰兒及老年人的紅細(xì)胞抗原較青壯年弱，在實驗室內(nèi) 保存過久的紅細(xì)胞及部分衰老的紅細(xì)胞抗原性也會減弱。13. 12當(dāng)用血清配制紅細(xì)胞懸液時，若血清中有高濃度血型物質(zhì) 則會中和分型血清中的抗體，而不再與紅細(xì)胞抗原起反應(yīng)。13. 13紅細(xì)胞被細(xì)菌污染。13. 14嵌合體（chimera）現(xiàn)象，此處指混和細(xì)胞群，見于異卵雙生 子。如有98%0型紅細(xì)胞，2%B型紅細(xì)胞會定為0型，但血清中只 有抗A抗體。13. 15用了不潔的玻璃器皿或使用了嚴(yán)重污染的血清、紅細(xì)胞可 出現(xiàn)假陽性。試管沾染了洗滌劑會造成假陰性。13. 16紅細(xì)胞與血清的比例不當(dāng)、過度離心或離心不足可引