重金屬檢查法

1、重金屬檢查法定義定義:重金屬重金屬系指在實(shí)驗(yàn)條件下能與系指在實(shí)驗(yàn)條件下能與硫代硫代乙酰胺乙酰胺或硫化鈉作用顯色的或硫化鈉作用顯色的金屬金屬雜質(zhì)。雜質(zhì)。 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的制備n 重金屬檢查法n稱取硝酸鉛0.160g，置1000ml量瓶中,加硝酸5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。n臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml相當(dāng)于10g的Pb)。n配制與貯存用的玻璃容器均不得含鉛。n生產(chǎn)中遇到鉛的機(jī)會(huì)較多，且鉛又易在體內(nèi)積蓄中毒，所以檢查時(shí)以鉛為代表。重金屬影響藥物的穩(wěn)定性及安全性。 【中國藥典95版】附錄中規(guī)定了四種方法：n 第一

2、法 除另有規(guī)定外，n取25ml納氏比色管兩支，甲管中加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量與醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml后，加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml，乙管中加入該藥品項(xiàng)下規(guī)定的方法制成的供試液25ml；若供試液帶顏色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液,使之與乙管一致；再在甲乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較,不得更深。n如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使顏色一致時(shí)，可取該藥品項(xiàng)下規(guī)定的二倍量的供試品和試液，加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑使成30ml，將溶液分成甲乙二等分，乙管中加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋

3、成25ml；甲管中加入硫代乙酰胺試液2ml，搖勻,放置2分鐘，經(jīng)濾膜(孔徑3m)濾過,然后甲管中加入標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑使成25ml；再分別在乙管中加硫代乙酰胺試液2ml，甲管中加水2ml，照上述方法比較，即得。n供試品如含高鐵鹽影響重金屬檢查時(shí)，可取該藥品項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試液，加抗壞血酸0.51.0g，并在對(duì)照液中加入相同量的抗壞血酸，再照上述方法檢查。n配制供試品溶液時(shí)，如使用的鹽酸超過1.0ml（或與鹽酸1.0ml相當(dāng)?shù)南←}酸），氨試液超過2ml,或加入其他試劑進(jìn)行處理者，除另有規(guī)定外，對(duì)照液中應(yīng)取同樣同量的試劑置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2m

4、l與水15ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，再用水稀釋成25ml。第二法n除另有規(guī)定外，取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)酉跛?.5ml，蒸干,至氧化氮蒸氣除盡后（或取供試品一定量，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51.0ml,使恰濕潤,用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在500600熾灼使完全灰化），放冷，加鹽酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨試液至對(duì)酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加水稀釋成25ml；另取配制供試品溶液的試劑，置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5

5、）2ml與水15ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，再用水稀釋成25ml；n照上述第一法檢查，即得。第三法n除另有規(guī)定外，取供試品適量,加氫氧化鈉試液5ml與水20ml溶解后，置納氏比色管中,加硫化鈉試液5滴,搖勻,與一定量的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液同樣處理后的顏色比較，不得更深。第四法n儀器裝置n濾器由具有螺紋絲扣并能密封的上下二部，以及墊圈、濾膜和尼龍墊網(wǎng)所組成。如圖。nA為濾器上蓋部分，入口處應(yīng)能與50ml注射器緊密聯(lián)接；B為連接頭；C為墊圈(外徑10mm，內(nèi)徑6mm)；D為濾膜，直徑10mm，孔徑3.0m，用前經(jīng)在水中浸泡24小時(shí)以上；E為尼龍墊網(wǎng)(孔徑不限)，直徑10mm；F為

6、濾器下部，出口處套上一合適橡皮管。n標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備n精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，置小燒杯中，用水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成10ml，加入醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml與硫代乙酰胺試液1.0ml,搖勻，放置10分鐘，用50ml注射器轉(zhuǎn)移至上述濾器中進(jìn)行壓濾(濾速約為每分鐘1ml)，濾畢,取下濾膜，放在濾紙上干燥，即得。檢查法n取照各藥品項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試液10ml，照標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備，自“加入醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml”起，依法操作,將生成的斑點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)鉛斑比較,不得更深。n若供試溶液有顏色或渾濁，應(yīng)用濾膜進(jìn)行預(yù)濾，如濾膜上有污染，應(yīng)換濾膜再濾，直至濾膜不再染色；然后取濾液10ml,照標(biāo)

7、準(zhǔn)鉛斑的制備,自“加入醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml”起，依法操作，并照上述檢查法中所述比較，即得。n 重金屬是指在規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件下能與顯色劑作用顯色的金屬雜質(zhì)。中國藥典2005年版二部附錄 H采用硫代乙酰胺試液或硫化鈉試液作顯色劑，以鉛（Pb）的限量表示 1.2 由于實(shí)驗(yàn)條件不同，分為4種檢查方法n：n第一法適用于供試品不經(jīng)有機(jī)破壞，在酸性溶液中進(jìn)行顯色的重金屬限度檢查；n第二法適用于供試品需灼燒破壞，取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，?jīng)處理后在酸性溶液中進(jìn)行顯色的重金屬限度檢查；n第三法用來檢查能溶于堿而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的藥品中的重金屬；n第四法用微孔濾膜過濾，使重金屬硫化物沉淀

8、富集成色斑，用于有色溶液或重金屬限度較低的品種。檢查時(shí)，應(yīng)根據(jù)藥典品種項(xiàng)下規(guī)定的方法選用。 四種方法顯示的結(jié)果均為微量重金屬的硫化物微粒均勻混懸在溶液中所呈現(xiàn)的顏色；采用濾膜法可獲得“色斑”；如果重金屬離子濃度大，加入顯色劑后放置時(shí)間長，就會(huì)有硫化物聚集下沉。 n1.4 重金屬硫化物生成的最佳pH值是3.03.5，選用醋酸鹽緩沖液（pH 3，5）2.0ml調(diào)節(jié)pH 較好，顯色劑硫代乙酰胺試液用量經(jīng)實(shí)驗(yàn)也以2.0ml為佳，顯色時(shí)間一般為2分鐘。以1020ug的Pb與顯色劑所產(chǎn)生的顏色為最佳目視比色范圍。在規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件下，與硫代乙酰胺試液在弱酸條件下產(chǎn)生的硫化氫呈色的金屬離子有銀、鉛、汞、銅、鎘、

9、鉍、銻、錫、砷、鋅、鈷與鎳等。n1.5 由于在藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機(jī)會(huì)較多，且鉛易積蓄中毒，故以鉛作為重金屬的代表，用硝酸鉛配制標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液。 2 儀器與用具n2.1 納氏比色管 應(yīng)選玻璃質(zhì)量好、無色（尤其管底）、配對(duì)、刻度標(biāo)線高度一致的納氏比色管。n2.2 濾器 見中國藥典2005年版二部附錄 H重金屬檢查法第四法附圖，由具有螺紋絲扣并能密封的上、下兩部分以及墊圈、濾膜和輔助濾板組成。n2.2.1 濾器上蓋部分A的入口處應(yīng)能與50ml注射器緊密聯(lián)接，濾器下部F的出口處能套上一合適橡皮管。A與F能通過螺紋絲扣密封。n2.2.2 墊圈應(yīng)內(nèi)徑光滑、大小相同，以使斑點(diǎn)邊緣圓整、清楚、大小一致。在濾器

10、上加上橡皮墊圈，既可使濾膜與濾板緊密結(jié)合，又可避免在旋緊濾器接頭時(shí)扭曲或損壞濾膜。n2.2.3 濾膜的直徑為10mm，孔徑為3.0um，使用前在水中浸泡24小時(shí)以上，可使色斑均勻。n2.2.4 50ml注射器，應(yīng)能與濾器上蓋入口處緊密聯(lián)接 3 試藥和試液n3.1 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液 精密稱取在105干燥至恒重的硝酸鉛0.160g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于10ug的Pb ）。n3.2 硫代乙酰胺試液、硫化鈉試液、醋酸鹽緩沖液（pH3.5）與抗壞血酸

11、等均按藥典附錄XV的規(guī)定。n3.3 稀焦糖溶液 取蔗糖或葡萄糖約5g，置磁坩堝中，在玻璃棒不斷攪拌下，加熱至呈棕色糊狀，放冷，用水溶解成約25ml，濾過，貯于滴瓶中備用。臨用時(shí)，根據(jù)供試液色澤深淺，取適當(dāng)量調(diào)節(jié)使用。4 操作方法 4.1 第一法n4.1.1 取25ml納氏比色管兩支，編號(hào)為甲、乙。n4.1.2 甲管中加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量與醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，加水或各品種項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml。n4.1.3 乙管中加入按該品種項(xiàng)下規(guī)定的方法制成的供試液25ml。n4.1.4 如供試液帶顏色，可在甲管中滴加稀焦糖溶液少量或其它無干擾的有色溶液，使其色澤與乙管一致。n4.1.5 在

12、甲、乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液各2.0ml，搖勻，放置2分鐘，同置白色襯板上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。n4.1.6 如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使顏色一致時(shí)，可取該品種項(xiàng)下規(guī)定的二倍量的供試品和試液，加水或該品種項(xiàng)下規(guī)定的溶劑使成30ml，將溶液分成甲乙二等份，乙管中加水或該品種項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml；甲管中加入硫代乙酰胺試液2.0ml，搖勻，放置2分鐘，經(jīng)濾膜（孔徑3um）濾過，然后甲管中加入標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，加水或該品種項(xiàng)下規(guī)定的溶劑使成25ml，再在乙管中加入硫代乙酰胺試液2.0ml，甲管中加水2.0ml，照上述方法比較，即得。n4.1.7 供試品中

13、如含高鐵鹽而影響重金屬檢查時(shí)，可取該品種項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試液，加抗壞血酸0.51.0g，并在對(duì)照溶液中加入相同量的抗壞血酸，再照上述方法檢查。n4.1.8 配制供試品溶液時(shí)，如使用的鹽酸超過1.0ml（或與鹽酸1.0ml相當(dāng)?shù)南←}酸），氨試液超過2.0ml，或加入其他試劑進(jìn)行處理者，除另有規(guī)定外，對(duì)照液中應(yīng)取同樣同量的試劑置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2.0ml與水15ml溶解后移置甲管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，再加水稀釋成25ml。4.2 第二法n4.2.1 除另有規(guī)定外，取該品種在500600灼燒的熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，加硝?.5ml蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，加鹽酸2.

14、0ml，置水浴上蒸干后加水25ml，滴加氨試液至對(duì)酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2.0ml，微熱溶解后，移置乙管中，加水稀釋成25ml。n4.2.2 如不取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，則可取供試品一定量，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51.0ml，使恰濕潤，用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸0.5 ml，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在500600熾灼使完全灰化，再按 4.2.1自“放冷，加鹽酸2.0ml”起，依法操作至“加水稀釋成25ml”。n4.2.3 取配制供試溶液的試劑，置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2.0ml與水15ml，微熱溶解后，移置甲管中，加標(biāo)準(zhǔn)

15、鉛溶液一定量，加水稀釋成25ml。n4.2.4 按4.1.5方法檢查。4.3 第三法n4.3.1 取25ml納氏比色管兩支，編號(hào)為甲、乙。n4.3.2 除另有規(guī)定外，取供試品適量，加水20ml與氫氧化鈉試液5ml溶解后，置乙比色管中。n4.3.3 取一定量的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液，與4.3.2同樣處理，置甲管中。n4.3.4 于甲、乙兩管中各加硫化鈉試液5滴，搖勻。n4.3.5 甲、乙兩管同置白色襯板上，自上向下透視，乙管中所顯的顏色與甲管比較，不得更深。4.4 第四法n4.4.1 標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備 精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，置小燒杯中，加水或各品種項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成10ml，加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5

16、）2.0ml與硫代乙酰胺試液1.0ml，搖勻，放置10分鐘，用50ml注射器轉(zhuǎn)移至過濾器中進(jìn)行壓濾（濾速約為每分鐘1ml），濾畢，取下濾膜，放在濾紙上千燥，即得。n4.4.2 檢查法 照各品種項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試液10ml，照4.4.1標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備，自“加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml起，依法操作，將生成的色斑與標(biāo)準(zhǔn)鉛斑比較，不得更深。n4.4.3 若供試溶液有顏色或渾濁，應(yīng)用濾膜進(jìn)行預(yù)濾，如濾膜上有污染，應(yīng)換濾n膜再濾，直至濾膜不再染色；然后取濾液10ml，照4.4.1標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備，自“加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2.0ml”起，依法操作。所得供試液的鉛斑與標(biāo)準(zhǔn)鉛斑比較，不得更深

17、。5 注意事項(xiàng) n5.1 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液應(yīng)在臨用前精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液新鮮稀釋配制，以防止硝酸鉛水解而造成誤差，配制與貯存標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液使用的玻璃容器，均不得含有鉛。n5.2 硫代乙酰胺試液與重金屬反應(yīng)的最佳pH值是3.5，故配制醋酸鹽緩沖液（pH3.5）時(shí)，要用pH計(jì)調(diào)節(jié)，硫代乙酰胺試液加入量以2.0ml時(shí)呈色最深；第四法中的檢測范圍為25ug的Pb，且因體積小，所以硫代乙酰胺試液的用量為 。硫代乙酰胺試液顯色劑的最佳顯色時(shí)間為2分鐘，除第四法由于檢測限量低，且為了方便過濾，顯色時(shí)間為10分鐘外，第一、二法均為放置2分鐘。n5.3 為了便于目視比較，第一、二和三法中的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液用量以2.0ml（相當(dāng)

18、于20ug的Pb）為宜，小于1.0ml或大于3.0ml，呈色太淺或太深，均不利于目視比較。n5.4 如需將熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)髦亟饘贆z查時(shí)，則熾灼溫度必須控制在500600。實(shí)驗(yàn)證明，熾灼溫度在700以上時(shí)，多數(shù)重金屬鹽都有不同程度的損失；以鉛為例，在700經(jīng)6小時(shí)熾灼，損失達(dá)68。某些供試品（如安乃近，諾氟沙星等）在熾灼時(shí)能腐蝕瓷坩堝而帶入較多的重金屬，應(yīng)改用石英坩堝或鉑坩堝操作。n5.5 熾灼殘?jiān)酉跛崽幚恚仨氄舾?，至氧化氮蒸氣除盡，否則會(huì)使硫代乙酰胺水解生成的硫化氫，因氧化析出乳硫，影響檢查。蒸干后殘?jiān)欲}酸處理，使重金屬轉(zhuǎn)化為氯化物，在水浴上蒸干以趕除多余的鹽酸，加水溶解，加入酚

19、酞指示液1滴，再逐滴加入氨試液，邊加邊攪拌，直到溶液剛顯淺紅色為止，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）使供試液的pH調(diào)節(jié)至3.5。n5.6供試品中如含有高鐵鹽，在弱酸性溶液中會(huì)使硫代乙酰胺水解生成的硫化氫進(jìn)一步氧化析出乳硫，影響檢查，可加入抗壞血酸將高鐵離子還原為亞鐵離子而消除干擾。n5.7如供試品自身為重金屬的鹽，在檢查這類藥品中的其他重金屬時(shí)，必須先將供試品本身的金屬離子除去，再進(jìn)行檢查。如在枸櫞酸鐵銨中檢查鉛鹽時(shí)，利用 在一定濃度的鹽酸中形成 ，用乙醚提取除去，再調(diào)節(jié)供試液至堿性，用氰化鉀試液掩蔽微量的鐵后進(jìn)行檢查；右旋醣酐鐵注射液中重金屬檢查，也是在一定濃度的鹽酸中，用醋酸異丁酯提取除去鐵鹽后進(jìn)行檢查。n5.8藥品本身生成的不溶性硫化物，影響重金屬檢查，可加入掩蔽劑以避免干擾。如硫酸鋅和葡萄糖酸銻鈉中鉛鹽檢查，是在堿性溶液中加入氰化鉀試液，或在中性溶液中加入酒石酸，使鋅離子或銻離子生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，再依法檢