免疫學檢測技術的基本原理

1、免疫學檢測技術免疫學檢測技術 的基本原理的基本原理 免疫學診斷免疫學診斷抗原或抗體的檢測抗原或抗體的檢測淋巴細胞的測定淋巴細胞的測定免疫學檢測方法的應用免疫學檢測方法的應用 目的要求目的要求1.1.掌握：凝集反應、沉淀反應、免疫掌握：凝集反應、沉淀反應、免疫 標記技術的概念；凝集反應、沉淀標記技術的概念；凝集反應、沉淀 反應、免疫標記技術的常用方法及反應、免疫標記技術的常用方法及 實際應用實際應用. . 2.2.熟悉：細胞免疫檢測法的基本原理熟悉：細胞免疫檢測法的基本原理 及實際應用及實際應用; ;3.3.了解：其他免疫學檢測方法及其應用了解：其他免疫學檢測方法及其應用 ( (一一) )抗原抗

2、體反應的特點抗原抗體反應的特點 1. 1.抗原抗體反應的抗原抗體反應的特異性特異性 2. 2.抗原抗體反應的抗原抗體反應的可逆性可逆性 4. 4.抗原抗體反應的抗原抗體反應的階段性：階段性： 特異性結合階段、肉眼可見階段特異性結合階段、肉眼可見階段 3.3.抗原抗體反應的抗原抗體反應的可見性可見性一、抗原抗體結合反應的特點及影響因素一、抗原抗體結合反應的特點及影響因素 Ab 過剩Ag 過剩比例適當，交聯(lián)成網絡Ag-Ab反應的可見性反應的可見性（二）抗原抗體反應的影響因素（二）抗原抗體反應的影響因素 電解質電解質 抗原抗體抗原抗體（等電點（等電點pH3-5pH3-5和和pH5-6pH5-6）在中

3、性或弱堿性條件下帶有負電荷，在中性或弱堿性條件下帶有負電荷，需需適當濃度的電解質適當濃度的電解質（如（如0.85%NaCl0.85%NaCl）才才會結合；會結合； 溫度溫度 通常為通常為37371.1.酸堿度酸堿度 最適最適pHpH值在值在6-86-8之間之間。pHpH值值接近等電點時，抗原抗體多帶正負電接近等電點時，抗原抗體多帶正負電荷相等，由于自身吸引而出現凝集，荷相等，由于自身吸引而出現凝集，導致非特異性反應。導致非特異性反應。二、抗原或抗體的體外檢測方法二、抗原或抗體的體外檢測方法1.1.凝集反應凝集反應直接凝集反應直接凝集反應間接凝集反應間接凝集反應 細菌、紅細胞等細菌、紅細胞等顆粒

4、性抗原顆粒性抗原與相應與相應抗體結合后形成抗體結合后形成凝集團塊凝集團塊稱凝集反應。稱凝集反應。直接凝集反應的作法及應用直接凝集反應的作法及應用玻片法：定性試驗玻片法：定性試驗,主要用于細主要用于細菌與人類菌與人類ABO血型的鑒定。血型的鑒定。試管法：半定量試驗試管法：半定量試驗.常用于檢測抗常用于檢測抗體的滴度或效價，臨床診斷傷寒或體的滴度或效價，臨床診斷傷寒或副傷寒所用的肥達氏反應和診斷布副傷寒所用的肥達氏反應和診斷布氏菌病所用的瑞特試驗氏菌病所用的瑞特試驗 1:2稀釋待測血清稀釋待測血清 1:4 1:8 1:16 玻片法玻片法試管法試管法直接凝集反應直接凝集反應 間接凝集反應的應用間接凝

5、集反應的應用常用的載體顆粒：人常用的載體顆粒：人O型血紅細胞型血紅細胞和和 聚苯乙烯乳膠顆粒聚苯乙烯乳膠顆粒應用：鏈球菌應用：鏈球菌O抗體的檢測實驗抗體的檢測實驗; 類風濕因子的檢測類風濕因子的檢測.Coombs試驗試驗2.沉淀反應沉淀反應 可溶性抗原可溶性抗原與相應抗體結合后出現與相應抗體結合后出現沉淀物沉淀物稱沉淀反應。稱沉淀反應。單向免疫擴散單向免疫擴散免疫比濁法免疫比濁法雙向免疫擴散雙向免疫擴散免疫電泳免疫電泳 抗原或抗體的檢測抗原或抗體的檢測單向免疫擴散的應用單向免疫擴散的應用應用：測定血清中應用：測定血清中IgG、IgM、IgA 與補體與補體C3的含量的含量.缺點缺點:12天才出結

6、果。天才出結果。雙向免疫擴散的應用雙向免疫擴散的應用應用：根據沉淀線的數目和形狀可應用：根據沉淀線的數目和形狀可對抗原或抗體進行定性檢測、組分對抗原或抗體進行定性檢測、組分分析等。分析等。對流免疫電泳可檢測：對流免疫電泳可檢測： 血液中的血液中的HBsAg和和AFP 免疫比濁法主要用于：免疫比濁法主要用于： 血清蛋白及抗體成分的分析研究血清蛋白及抗體成分的分析研究3.免疫標記技術免疫標記技術 抗原或抗體的檢測抗原或抗體的檢測 用用熒光素熒光素、酶酶、同位素同位素等標記抗等標記抗體或抗原用以測定相應抗原或抗體的體或抗原用以測定相應抗原或抗體的技術稱為免疫標記技術。技術稱為免疫標記技術。特點：敏感

7、、特異、快速，能定性、特點：敏感、特異、快速，能定性、定量、定位。定量、定位。免疫印跡法免疫印跡法免疫膠體金技術免疫膠體金技術 放射免疫測定法放射免疫測定法免疫熒光技術免疫熒光技術化學發(fā)光免疫技術化學發(fā)光免疫技術 免疫標記技術免疫標記技術常用方法常用方法酶免疫測定法酶免疫測定法ELISA(1)(1)酶免疫測定法（酶免疫測定法（ELISAELISA） ： 19711971年瑞典學者年瑞典學者EngvailEngvail和和Perlman-Perlman-nn,nn,荷蘭學者荷蘭學者Van WeermanVan Weerman和和SchuursSchuurs分別分別報道將免疫技術發(fā)展為檢測體液中微

8、量報道將免疫技術發(fā)展為檢測體液中微量物質的物質的固相免疫測定方法固相免疫測定方法，稱為酶聯(lián)免，稱為酶聯(lián)免疫吸附試驗。疫吸附試驗。 抗原或抗體的檢測抗原或抗體的檢測l間接法間接法: : 常用于常用于檢測血清中的抗體檢測血清中的抗體。將已知抗。將已知抗原包被于固相載體，加入待檢標本，若標原包被于固相載體，加入待檢標本，若標本中有相應的抗體，則可與抗原結合，再本中有相應的抗體，則可與抗原結合，再加入酶標二抗，洗滌后加底物，底物受酶加入酶標二抗，洗滌后加底物，底物受酶的催化發(fā)生化學反應產生有色物質。的催化發(fā)生化學反應產生有色物質。 此法是測定抗體最常用的方法。 間接法間接法已知抗原待測抗體酶標抗體 抗

9、原或抗體的檢測抗原或抗體的檢測l雙抗體夾心法雙抗體夾心法: : 常用于常用于檢測標本中的抗原檢測標本中的抗原。將已。將已知抗體包被在固相載體上，加入待測知抗體包被在固相載體上，加入待測標本，使其中的抗原與抗體結合，洗標本，使其中的抗原與抗體結合，洗去未結合的抗原，加入已知的酶標抗去未結合的抗原，加入已知的酶標抗體與標本中抗原結合，再洗去未結合體與標本中抗原結合，再洗去未結合的酶標抗體，加入底物，底物受酶的的酶標抗體，加入底物，底物受酶的催化發(fā)生化學反應產生有色物質。催化發(fā)生化學反應產生有色物質。 雙抗體夾心法雙抗體夾心法抗體待測抗原酶標抗體底物lBAS-ELISA:BAS-ELISA:可用來檢

10、測細菌、病毒、腫可用來檢測細菌、病毒、腫瘤細胞表面抗原等瘤細胞表面抗原等。 生物素與抗生物素與抗生物素生物素有極高的親和力，利用有極高的親和力，利用抗生物素抗生物素為橋梁為橋梁，聯(lián)結生物素化的抗體及生物素化過氧，聯(lián)結生物素化的抗體及生物素化過氧化物酶，可獲得化物酶，可獲得極高極高的敏感性（多級放的敏感性（多級放大系統(tǒng)）。大系統(tǒng)）。 -Ab+-Ab+待測待測Ag+ Ag+ Ab-Ab-生物素化生物素化+ +抗生物素（四價）抗生物素（四價）+ + 生物素化生物素化EE+ +底物底物卵白及某些微生物中的蛋白質卵白及某些微生物中的蛋白質 抗原或抗體的檢測抗原或抗體的檢測l微粒捕獲酶免疫分析技術微粒捕獲

11、酶免疫分析技術 常用于檢測腫瘤標志物常用于檢測腫瘤標志物(CEA(CEA、AFP)AFP)性激素、甲狀腺素（性激素、甲狀腺素（T3T3、T4T4）、）、HCGHCG等等微微量可溶性抗原量可溶性抗原 。將已知抗體致敏的微粒。將已知抗體致敏的微粒與生物素與生物素親和素酶親和素酶放大系統(tǒng)結合，最后放大系統(tǒng)結合，最后酶酶作用于作用于熒光底物熒光底物，通過檢測，通過檢測熒光強度熒光強度來判斷未知抗原的含量。來判斷未知抗原的含量。 u磁性微粒子固相：直徑磁性微粒子固相：直徑2.82.8微米，粒子小，懸微米，粒子小，懸 液類似液相；包被面積大；磁吸引分離方便。液類似液相；包被面積大；磁吸引分離方便。 抗原或

12、抗體的檢測抗原或抗體的檢測l免疫組化技術：指帶顯色劑（酶）標免疫組化技術：指帶顯色劑（酶）標記的特異性抗體或抗原在組織細胞原位記的特異性抗體或抗原在組織細胞原位發(fā)生抗原抗體反應和組織化學的呈色反發(fā)生抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，應，對相應抗原或抗體進行定位、定性對相應抗原或抗體進行定位、定性、定量檢測的技術、定量檢測的技術。 免疫組化技術免疫組化技術(2)(2)免疫熒光技術免疫熒光技術 是用熒光素標記一抗或二抗，檢是用熒光素標記一抗或二抗，檢測特異性抗原或抗體的方法。測特異性抗原或抗體的方法。常用的常用的熒光素有異硫氰酸熒光素、藻紅蛋白熒光素有異硫氰酸熒光素、藻紅蛋白等等. .l直接熒光法

13、：直接熒光法：檢測不同的抗原檢測不同的抗原，需要不，需要不同的特異性熒光抗體同的特異性熒光抗體l間接熒光法：用一抗與樣本中的抗原結間接熒光法：用一抗與樣本中的抗原結合，再用熒光素標記的二抗染色。此方合，再用熒光素標記的二抗染色。此方法法既可檢測抗原又可檢測抗體既可檢測抗原又可檢測抗體。若查抗。若查抗原，一抗為已知的；若查抗體，抗原是原，一抗為已知的；若查抗體，抗原是已知的。一種熒光抗體可用于多種不同已知的。一種熒光抗體可用于多種不同抗原的檢測抗原的檢測(3)(3)放射免疫測定法放射免疫測定法(RIA(RIA）：是用放射性）：是用放射性核素標記抗原或抗體進行的免疫測定。核素標記抗原或抗體進行的免

14、疫測定。將同位素的敏感性與抗原抗體結合的特將同位素的敏感性與抗原抗體結合的特異性結合起來，具有重復性好、準確性異性結合起來，具有重復性好、準確性高等優(yōu)點高等優(yōu)點. . 用于激素、藥物等微量物質的檢測，用于激素、藥物等微量物質的檢測，敏感性可達到敏感性可達到pg/mlpg/ml水平。常用的放射水平。常用的放射性核素有性核素有131131I I和和125125I I等。等。(3)(3)化學發(fā)光免疫技術（化學發(fā)光免疫技術（CLIACLIA）：）： 將化學發(fā)光（如魯米諾）分析和將化學發(fā)光（如魯米諾）分析和免疫反應相結合而建立的一種新的免免疫反應相結合而建立的一種新的免疫分析技術。疫分析技術。 特點：靈

15、敏度高、特異性強特點：靈敏度高、特異性強 分離簡便、自動化分析。分離簡便、自動化分析。（4 4）免疫膠體金技術（）免疫膠體金技術（ICSICS）：）： 用膠體金顆粒標記抗體或抗原，用膠體金顆粒標記抗體或抗原，以檢測未知抗原或抗體的方法稱免以檢測未知抗原或抗體的方法稱免疫膠體金技術。疫膠體金技術。 （5 5）免疫印跡技術）免疫印跡技術 又稱又稱Western blottingWestern blotting，是將十二，是將十二烷基磺酸鈉（烷基磺酸鈉（SDSSDS）聚丙烯酰胺凝膠電泳）聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGEPAGE）分離得到的蛋白轉移到固相載）分離得到的蛋白轉移到固相載體膜上，再用標記的特異

16、性抗血清或單體膜上，再用標記的特異性抗血清或單克隆抗體對蛋白質進行定性及定量分析克隆抗體對蛋白質進行定性及定量分析的技術。敏感性為的技術。敏感性為1 15ng5ng。4 4、蛋白質芯片技術、蛋白質芯片技術 常用于微生物感染的檢測。其原理常用于微生物感染的檢測。其原理是將是將各種蛋白質固定于載體上制成芯片各種蛋白質固定于載體上制成芯片，再用熒光標記抗體與芯片作用，洗去，再用熒光標記抗體與芯片作用，洗去未結合的抗體后，用熒光掃描儀或激光未結合的抗體后，用熒光掃描儀或激光共聚焦掃描技術測定芯片上各點熒光強共聚焦掃描技術測定芯片上各點熒光強度，以此度，以此檢測檢測熒光對應的熒光對應的抗體抗體及其相互及

17、其相互結合的程度。結合的程度。三、免疫細胞的測定三、免疫細胞的測定人的免疫細胞測定：外周血人的免疫細胞測定：外周血動物的免疫細胞測定：動物的免疫細胞測定： 外周血、胸腺、脾臟與其他組織。外周血、胸腺、脾臟與其他組織。常用的方法：葡萄糖常用的方法：葡萄糖- -泛影葡胺密泛影葡胺密 度梯度離心法。度梯度離心法。 外周血單個核細胞的分離外周血單個核細胞的分離 淋巴細胞及其亞群的分離淋巴細胞及其亞群的分離1.1.免疫吸附分離法免疫吸附分離法: :獲得不同的獲得不同的T T細胞亞群細胞亞群2.2.免疫磁珠分離法：獲得不同表面標志的免疫磁珠分離法：獲得不同表面標志的 活活T T細胞亞群細胞亞群. . 3.

18、3.免疫磁珠法免疫磁珠法4.4.抗原肽抗原肽-MHC-MHC分子四聚體技術分子四聚體技術 l免疫吸附分離法：免疫吸附分離法： 將已知抗淋巴細胞表面標志的抗將已知抗淋巴細胞表面標志的抗體包被聚苯乙烯培養(yǎng)板，加入淋巴細體包被聚苯乙烯培養(yǎng)板，加入淋巴細胞懸液，表達相應細胞表面標志的淋胞懸液，表達相應細胞表面標志的淋巴細胞可被吸附在培養(yǎng)板上，即可與巴細胞可被吸附在培養(yǎng)板上，即可與其他細胞分開。其他細胞分開。 免疫吸附分離法免疫吸附分離法加入淋巴加入淋巴細胞懸液細胞懸液anti-CD4anti-CD4anti-CD4棄上清棄上清l免疫磁珠法免疫磁珠法: :應用較廣泛應用較廣泛 是一種特異性分離所需淋巴細

19、胞的是一種特異性分離所需淋巴細胞的方法。首先將特異性抗體（如抗方法。首先將特異性抗體（如抗CD3CD3、抗、抗CD4CD4或抗或抗CD8CD8等）吸附在磁性微珠上，與等）吸附在磁性微珠上，與待測細胞懸液中的相應細胞特異性結合待測細胞懸液中的相應細胞特異性結合后后, ,再將磁珠結合細胞與未結合磁珠細胞再將磁珠結合細胞與未結合磁珠細胞分開，即可獲得純度高的所需細胞。分開，即可獲得純度高的所需細胞。 磁珠分離法磁珠分離法l熒光激活細胞分選儀分離法：熒光激活細胞分選儀分離法： （流式細胞術分離法）（流式細胞術分離法） 是一種集光學、流體力學、電力學和是一種集光學、流體力學、電力學和計算機技術于一體，可

20、對細胞進行多參數計算機技術于一體，可對細胞進行多參數定量測定和綜合分析方法定量測定和綜合分析方法. . 定量分析活細胞表面表達的特異分子定量分析活細胞表面表達的特異分子 免疫細胞分析和細胞計數。免疫細胞分析和細胞計數。 白血病和淋巴瘤的免疫學分型。白血病和淋巴瘤的免疫學分型。 細胞周期和細胞凋亡檢測。細胞周期和細胞凋亡檢測。流式細胞術流式細胞術熒光抗體標熒光抗體標記混合細胞記混合細胞噴嘴噴嘴單細胞懸液單細胞懸液5000-10000個個/秒秒細胞分選器細胞分選器熒光熒光檢測器檢測器l抗原肽抗原肽-MHC-MHC分子四聚體技術分子四聚體技術 將特異性抗原肽段、可溶性將特異性抗原肽段、可溶性MHC-

21、MHC-類分子重鏈及類分子重鏈及22微球蛋白在體外正確折微球蛋白在體外正確折疊，在親和素存在下構建四聚體，并結疊，在親和素存在下構建四聚體，并結合流式細胞儀定量檢測外周血及組織中合流式細胞儀定量檢測外周血及組織中抗原特異性抗原特異性CTLCTL的比率。的比率。 淋巴細胞及其淋巴細胞及其亞群的分離亞群的分離免疫細胞免疫細胞功能測定功能測定磁珠分磁珠分離法離法免疫吸附免疫吸附分離法分離法流式細流式細胞術胞術肽肽MHC四聚四聚體技術體技術T細胞功細胞功能測定能測定B細胞功細胞功能測定能測定細胞因細胞因子檢測子檢測T細胞增殖試驗遲發(fā)型超敏反應的檢測抗體含量測定溶血空斑試驗巨噬細胞吞噬試驗細胞毒細胞毒試

22、驗試驗吞噬功吞噬功能測定能測定51Cr釋放法乳酸脫氫酶釋放法細胞染色法凋亡細胞檢測法硝基藍四氮唑試驗生物活性檢測法免疫學檢測法（三）淋巴細胞功能的測定（三）淋巴細胞功能的測定1.T淋巴細胞功能的測定淋巴細胞功能的測定 形態(tài)學方法：形態(tài)學方法：T淋巴母細胞轉化試驗淋巴母細胞轉化試驗. 3H-TdR摻入法摻入法:靈敏性高靈敏性高,但有放射污染但有放射污染. MTT法：靈敏性不及法：靈敏性不及3H-TdR摻入法摻入法,但但 無放射污染無放射污染.（4）遲發(fā)型超敏反應（）遲發(fā)型超敏反應（DTH）的檢測）的檢測 l形態(tài)學方法：形態(tài)學方法：T T淋巴母細胞轉化試驗淋巴母細胞轉化試驗 T T淋巴細胞在體外培

23、養(yǎng)時，在有絲淋巴細胞在體外培養(yǎng)時，在有絲分裂原刺激下分裂原刺激下, ,可轉化為可轉化為T T淋巴母細胞淋巴母細胞( (體積增大、細胞形態(tài)不規(guī)則、胞質增體積增大、細胞形態(tài)不規(guī)則、胞質增多、細胞核松散及出現較多核仁多、細胞核松散及出現較多核仁) )。通。通過觀察培養(yǎng)細胞的數量，了解其細胞的過觀察培養(yǎng)細胞的數量，了解其細胞的增殖變化。增殖變化。l3H-TdR摻入法摻入法: T細胞增殖過程中細胞增殖過程中DNA和和RNA合成合成會增加。在細胞培養(yǎng)液中加入氚標記的會增加。在細胞培養(yǎng)液中加入氚標記的胸腺嘧啶核苷胸腺嘧啶核苷(3H-TdR）或）或125I標記的尿標記的尿嘧啶核苷（嘧啶核苷（125-UdR），

24、則會被摻入細），則會被摻入細胞核中。培養(yǎng)結束后收集細胞，用液體胞核中。培養(yǎng)結束后收集細胞，用液體閃爍儀測定樣本中放射性活性，可反映閃爍儀測定樣本中放射性活性，可反映細胞的增殖水平。細胞的增殖水平。 靈敏性高靈敏性高, 有放射污染。有放射污染。放射性測定3H-TdR絲裂原刺激淋淋巴巴細細胞胞轉轉化化試試驗驗原原理理示示意意 MTT法：靈敏性不及法：靈敏性不及3H-TdR摻入法摻入法 但無放射污染但無放射污染. T細胞增殖時，線粒體中的琥珀酸脫細胞增殖時，線粒體中的琥珀酸脫氫酶將氫酶將MTT還原為還原為紫褐色的甲臜顆粒，紫褐色的甲臜顆粒，該顆粒被隨后加入的異丙醇或二甲基亞砜該顆粒被隨后加入的異丙醇

25、或二甲基亞砜溶解。用酶標儀測定細胞培養(yǎng)上清液中溶溶解。用酶標儀測定細胞培養(yǎng)上清液中溶解紫褐色甲臜的解紫褐色甲臜的OD值，即反映細胞的增值，即反映細胞的增殖水平。殖水平。 （ MTT一種噻唑鹽，二苯基溴一種噻唑鹽，二苯基溴化四唑，淡黃色可溶性物質）?；倪?，淡黃色可溶性物質）。l遲發(fā)型超敏反應（遲發(fā)型超敏反應（DTH） 體內檢測細胞免疫功能的皮試方法體內檢測細胞免疫功能的皮試方法原理：被抗原已致敏的機體，再用相同原理：被抗原已致敏的機體，再用相同的抗原作皮試可導致遲發(fā)型超敏反應，的抗原作皮試可導致遲發(fā)型超敏反應， 72小時后局部充血、滲出、紅腫和硬結小時后局部充血、滲出、紅腫和硬結。細胞免疫正常

26、者出現陽性反應，細胞。細胞免疫正常者出現陽性反應，細胞免疫低下者則呈弱陽性或陰性反應。免疫低下者則呈弱陽性或陰性反應。 常用于檢測某些微生物感染常用于檢測某些微生物感染 2.B2.B淋巴細胞增殖試驗淋巴細胞增殖試驗 (1)(1)利用前面介紹的抗原抗體檢測方法利用前面介紹的抗原抗體檢測方法 測定標本中抗體含量。測定標本中抗體含量。 (2)(2)抗體形成細胞測定試驗：抗體形成細胞測定試驗： 又稱溶血空斑形成細胞試驗又稱溶血空斑形成細胞試驗, ,可可 檢測產生抗體的檢測產生抗體的B B細胞數量。細胞數量。 3.細胞毒試驗細胞毒試驗:是檢測是檢測CTL、NK等細胞等細胞殺傷靶細胞活性的細胞學技術。殺傷

27、靶細胞活性的細胞學技術。主要用主要用于腫瘤免疫、移植排斥反應和病毒感染于腫瘤免疫、移植排斥反應和病毒感染等方面的研究。等方面的研究。 4.吞噬細胞功能測定吞噬細胞功能測定 顯微鏡測定法顯微鏡測定法 吞噬率（）吞噬率（）= =（吞噬細菌的（吞噬細菌的吞噬吞噬細胞數細胞數 200200個個吞噬吞噬細胞）細胞）100 100 吞噬指數吞噬指數= =（200200個個吞噬吞噬細胞中所吞噬的細菌細胞中所吞噬的細菌 總數總數 200 200個吞噬細菌的個吞噬細菌的吞噬吞噬細胞）細胞） 100 100 5 5細胞因子的測定細胞因子的測定 細胞因子的檢測有助于了解其在細胞因子的檢測有助于了解其在免疫調節(jié)中的作

28、用，監(jiān)測細胞免疫功免疫調節(jié)中的作用，監(jiān)測細胞免疫功能。常檢測的細胞因子有能。常檢測的細胞因子有IL-2IL-2、IL-4IL-4、IL-10IL-10、IFN-IFN-等。等。常用的方法主要常用的方法主要有生物活性檢測法、有生物活性檢測法、ELISAELISA法等。法等。三、免疫學檢測的應用三、免疫學檢測的應用（一）協(xié)助診斷感染性疾?。ㄒ唬﹨f(xié)助診斷感染性疾?。ㄈ﹨f(xié)助診斷免疫系統(tǒng)疾?。ㄈ﹨f(xié)助診斷免疫系統(tǒng)疾?。ㄋ模┻M行免疫學監(jiān)測（四）進行免疫學監(jiān)測（二）協(xié)助診斷腫瘤（二）協(xié)助診斷腫瘤思考題思考題1.1.解釋名詞解釋名詞 凝集反應凝集反應 沉淀反應沉淀反應 免疫標記技術免疫標記技術2.2.可用哪

29、些方法定量檢測血液標本中的抗原？可用哪些方法定量檢測血液標本中的抗原？3.3.可用哪些方法檢測組織中的抗原？可用哪些方法檢測組織中的抗原？4.HIV4.HIV、HBVHBV感染者的診斷和病情監(jiān)測可用哪感染者的診斷和病情監(jiān)測可用哪些方法些方法? ?凝集反應原理圖解（一）凝集反應原理圖解（一）凝集反應原理圖解（二）凝集反應原理圖解（二）凝集反應原理圖解（三）凝集反應原理圖解（三） 單向瓊脂擴散試驗單向瓊脂擴散試驗 雙向瓊脂擴散試驗雙向瓊脂擴散試驗免疫電泳(immunoelectrophoresis) 對流免疫電泳對流免疫電泳 火箭電泳火箭電泳測吸光度測吸光度抗體抗體抗原抗原免疫復合物的免疫復合物的

30、濃度與透射光濃度與透射光的衰減呈正相的衰減呈正相關。關。免疫比濁法原理免疫比濁法原理 免疫熒光技術免疫熒光技術 酶聯(lián)免疫吸附試驗酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA-間接法間接法)斑點金免疫層析試驗斑點金免疫層析試驗膠體金：氯金酸（膠體金：氯金酸（HAuCl4HAuCl4）在還原劑的）在還原劑的作用下，可聚合成特定大小的金顆粒，作用下，可聚合成特定大小的金顆粒，因其在靜電作用下而呈穩(wěn)定的膠體狀態(tài)因其在靜電作用下而呈穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。，故稱膠體金。斑點金免疫層析試驗斑點金免疫層析試驗 用膠體金作為標記物來檢測抗原或用膠體金作為標記物來檢測抗原或抗體的方法。膠體金顆粒聚集后呈紅色抗體的方法。膠體

31、金顆粒聚集后呈紅色，可用于標記多種大分子，如白蛋白、，可用于標記多種大分子，如白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、激素、脂蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、激素、脂蛋白、植物血凝素、卵白素等。植物血凝素、卵白素等。 兔抗鼠兔抗鼠IgG鼠抗鼠抗HCG單抗單抗金標鼠抗金標鼠抗HCG單抗單抗尿液浸濕標志線尿液浸濕標志線 手持端手持端斑點金免疫層析試驗（一）斑點金免疫層析試驗（一）斑點金免疫層析試驗（二）斑點金免疫層析試驗（二）尿樣尿樣陽性陽性弱陽性弱陽性陰性陰性免疫印跡法圖解免疫印跡法圖解裂解病毒裂解病毒聚丙酰胺凝膠電泳聚丙酰胺凝膠電泳-+ 95 68 45 12KD電轉印至電轉印至NC膜上膜上置待測血清中，漂洗；

32、置待測血清中，漂洗；加酶標抗抗體，漂洗；加酶標抗抗體，漂洗；加底物加底物 顯色顯色120 41 24KD十二烷基磺酸鈉SDS T T細胞亞群的檢測細胞亞群的檢測抗抗凝凝血血 分層液分層液 抗凝血抗凝血血漿血漿 白膜層白膜層 紅細胞紅細胞離心離心淋巴細胞的分離淋巴細胞的分離 T細胞亞群的檢測細胞亞群的檢測花環(huán)法（一）花環(huán)法（一） T細胞亞群的檢測細胞亞群的檢測花環(huán)法（二）花環(huán)法（二）PHA淋巴母細胞轉化試驗示意圖淋巴母細胞轉化試驗示意圖細胞細胞淋巴母細胞淋巴母細胞淋轉（標本片）淋轉（標本片）淋巴母細胞淋巴母細胞淋轉（標本片）淋轉（標本片）淋轉（標本片）淋轉（標本片）操作流程操作流程1.制備抗體包被板（試劑盒中所帶） 2.加待測標本及對照品；加酶標記物 3.溫育，37 30min 4.漂洗（磷酸緩沖鹽水） ,20s*5次 5.加底物(四甲基聯(lián)苯胺)、顯色劑(H(H2 2O O2 2) )37 5min 6.結果測定E