復(fù)方牡蠣根管充填糊劑的皮膚致敏性觀看

1、復(fù)方牡蠣根管充填糊劑的皮膚致敏性觀看劉夢冬鄧靖許曉燕孫慧斌尚偉【摘要】目的評(píng)判一種新型根管充填糊劑一一復(fù)方牡蠣糊劑潛在 的皮膚致敏性。方式采納豚鼠最大劑量實(shí)驗(yàn)方式，選用健康白色豚鼠 40只，隨機(jī)分為陰性對(duì)照組、粉劑組、混合物組、陽性對(duì)照組（各10 只），別離于皮內(nèi)注射9g/L氯化鈉溶液、材料粉劑浸提液、材料混合 物浸提液、50g/L甲醛溶液與完全弗氏佐劑的乳化液，進(jìn)行第一次致 敏，1周后進(jìn)行二次致敏，于二次致俄后第14天進(jìn)行激發(fā)接觸，別離 于24、4八、72h后觀看注射處皮膚有無紅斑、水腫現(xiàn)象，并計(jì)算致 敏率。結(jié)果陰性對(duì)照組、粉劑組與混合物組動(dòng)物均無明顯致敏反映， 陽性對(duì)照組顯現(xiàn)明顯紅斑、水腫

2、現(xiàn)象。粉劑組致敏率10%,混合物組 的致敏率為0o結(jié)論復(fù)方牡蠣糊劑作為根管充填糊劑無潛在的皮膚致 敏性。【關(guān)鍵詞】根管充填材料；皮膚致敏實(shí)驗(yàn)；殼聚糖；豚鼠根管醫(yī)治術(shù)的臨床療效與根管充填糊劑的性能有緊密的關(guān)系。目 前，國內(nèi)臨床上經(jīng)常使用的根管充填糊劑各有優(yōu)缺點(diǎn)，傳統(tǒng)的根管充 填材料（氧化鋅丁香油糊劑、根管充填糊劑）盡管價(jià)錢低廉，但有很 多短處。國外產(chǎn)品（如紅糊，Vitapex）盡管性能優(yōu)越，但價(jià)錢昂貴, 難以在國內(nèi)普及。復(fù)方牡蠣糊劑是將傳統(tǒng)中藥牡蠣粉與竣甲基殼聚糖 混合制成的一種糊劑，具有根管充填糊劑所應(yīng)有的多種特性，并可能 修復(fù)根尖周組織。該材料作為根管填充材料應(yīng)用于臨床需要進(jìn)行系列的實(shí)驗(yàn)研究

3、。本文依照ISO 109931標(biāo)準(zhǔn)1,對(duì)該材料的必測項(xiàng)目一一皮膚致敏性進(jìn)行研究，以對(duì)其生物相容性進(jìn)行初步的檢測。1材料和方式材料牡蠣殼粉（生物碳酸鈣），產(chǎn)自渤海灣，細(xì)度200目，由中國 海洋大學(xué)提供；裝甲基殼聚糖，由中國海洋大學(xué)提供；C02恒溫細(xì)胞 培育箱（NationalAppounce ）、完全弗氏佐劑（FCA , SIGMA ALDRICHCO.）,均產(chǎn)自美國。健康白色豚鼠40只（上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提供），體質(zhì)量 300500g,隨機(jī)分為4組，別離為粉劑組、混合物組、陰性對(duì)照組和 陽性對(duì)照組，每組10只。方式材料制備將牡蠣殼粉作為材料的粉劑，將500mg按甲基殼聚 糖加熱溶解于10mL雙

4、蒸水中（50g/L）,作為該材料的液劑。將牡蠣殼 粉過200目篩孔后與段甲基殼聚糖液按：（V/V）的比例混合調(diào)成糊狀, 待其凝固作為該材料的混合物。依照我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/ 1997的規(guī)定, 將材料粉劑及調(diào)合固化24h的混合物粉碎后，經(jīng)高溫、高壓消毒，按 L的比例溶于9g/L氯化鈉溶液中，配成200g/L的溶液，置37細(xì)胞 培育箱24h,取其上清液即為材料浸提液。取完全弗氏佐劑依照1 ： 1 比例別離與材料浸提液及9g/L氯化鈉溶液和50g/L甲醛溶液均勻混 合，制備成混合乳化液。第一次致敏依照豚鼠最大劑量實(shí)驗(yàn)方式的要求，對(duì)各組動(dòng)物 采納相同處置方式皮下注射試劑:在豚鼠背部剪毛4cmX6cm,消

5、毒后 于肩胛骨內(nèi)側(cè)從頭向尾成對(duì)地注射6個(gè)點(diǎn)，每點(diǎn)注射，陰性對(duì)照組注射 完全弗氏佐劑與9g/L氯化鈉溶液的乳化液，陽性對(duì)照組注射完全弗氏 佐劑與甲醛的乳化液，粉劑組注射材料粉劑浸提液與完全弗氏佐劑等 體積乳化物，混合物組注射混合物浸提液與完全弗氏佐劑的乳化液。二次致敏實(shí)驗(yàn)第7天同區(qū)域剪毛，100g/L十二烷基硫酸鈉涂 布各注射點(diǎn)，24h后各注射點(diǎn)涂布相應(yīng)的被試液。激發(fā)接觸于二次致敏后第14天，在豚鼠腹部剪毛2cmX4cm, 消毒后于皮內(nèi)注射相應(yīng)被試液，注射后24、4八、72h觀看注射點(diǎn)情 形。致敏性評(píng)判依照皮膚反映程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各注射點(diǎn)的反映程 度記分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下:無紅斑水腫記為0分，輕度紅斑

6、水腫記為1 分，中度紅斑水腫記為2分，嚴(yán)峻紅斑水腫記為3分，紫紅色斑并有 焦痂形成、重度水腫、皮膚隆起記為4分。皮膚致敏實(shí)驗(yàn)以致敏率表示致敏的程度,致敏率是反映評(píng)分 為1分或以上的動(dòng)物數(shù)占該組動(dòng)物總數(shù)的百分比,即致敏率二致敏動(dòng)物 數(shù)/動(dòng)物總數(shù)X 100%。并按Mafhusson致敏率分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)：致敏率0 8%為I級(jí)，弱致敏物；致敏率9%28%為H級(jí)，輕度致敏物；致敏率 29%64%為IH級(jí)，中度致敏物；致敏率65%80%為IV級(jí)，強(qiáng)致敏物； 致敏率81%100%為V級(jí)，極強(qiáng)致敏物。2結(jié)果陽性對(duì)照組致敏動(dòng)物數(shù)為10只；陰性對(duì)照組致敏動(dòng)物為0 只；粉劑組致敏動(dòng)物數(shù)為1只，致敏率為10%,按致敏率

7、分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分度 為II度，為輕度致敏物；混合物組致敏動(dòng)物數(shù)為0只，無致敏性。3討論在皮膚致敏反映進(jìn)程中，半抗原滲透入皮膚，與皮膚蛋白質(zhì) 結(jié)合后具抗原性。皮膚內(nèi)的郎罕細(xì)胞將抗原傳遞給特異型淋巴細(xì)胞， 其中具有長壽命的經(jīng)歷細(xì)胞在激發(fā)時(shí)期作為原始活性因子，以后再接 觸同一抗原時(shí)，致敏的淋巴細(xì)胞釋放淋巴因子，吸引炎細(xì)胞至局部產(chǎn) 生反映，致使一系列有害反映。本實(shí)驗(yàn)采納皮內(nèi)注射的方式減少了機(jī) 體免疫系統(tǒng)對(duì)待測材料的阻礙，能夠從頭組合致敏物，具有較高的靠 得住性，是致敏實(shí)驗(yàn)的首選方式。豚鼠最大劑量實(shí)驗(yàn)是國際上評(píng)判化 學(xué)物引發(fā)皮膚致敏作用的經(jīng)典方式，在我國己列入國家標(biāo)準(zhǔn)。 本實(shí)驗(yàn)參照IS01099310標(biāo)準(zhǔn)2,

8、選用白色豚鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。豚鼠血清中含有豐碩的補(bǔ)體，是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中補(bǔ)體含量最多的一種動(dòng)物， 其補(bǔ)體超級(jí)穩(wěn)固。因此，豚鼠皮膚對(duì)刺激反映靈敏，且其遲發(fā)性超敏 反映與人類相似。其中23月齡、體質(zhì)量為350400g的豚鼠最適合 用于過敏反映的研究。弗氏佐劑是免疫學(xué)上普遍應(yīng)用的油類佐劑，分為完全弗氏佐 劑和不完全弗氏佐劑兩種。完全弗氏佐劑是在不完全佐劑的基礎(chǔ)上加 必然量的分支桿菌制成。它的高度佐劑活性是其他物質(zhì)難以相較的， 可使正常狀態(tài)下無免疫原性的物質(zhì)成為免疫原，并能啟動(dòng)細(xì)胞免疫。 完全弗氏佐劑作為一種增強(qiáng)免疫反映的藥物，能夠最大限度地放大免 疫反映的程度，關(guān)于材料致敏性的檢測有較高的準(zhǔn)確性、靈敏性和靠

9、 得住性。根管充填材料與活體組織接觸后，不可幸免地會(huì)與體液、組 織間液發(fā)生作用，對(duì)活體產(chǎn)生阻礙。本實(shí)驗(yàn)選用9g/L氯化鈉溶液作為 浸提遞質(zhì)，使待測材料浸提液的性質(zhì)盡可能與實(shí)際情形相似。本實(shí)驗(yàn)復(fù)方牡蠣糊劑未顯現(xiàn)出皮膚致敏性與該材料的性質(zhì)有 關(guān)。竣甲基殼聚糖是殼聚糖分子中引入瘦甲基取得的一種水溶性殼聚 糖衍生物，它具有良好的生物相容性，并對(duì)多種口腔重要厭氧菌有抑 制作用3。而且它可直接作用于骨母細(xì)胞，增進(jìn)其分化和骨礦物質(zhì)的 合成，提高堿性磷酸酶的活性，加速骨基質(zhì)的形成和修復(fù)作用。在降 低血糖水平方面也有顯著的作用4,在醫(yī)學(xué)各個(gè)領(lǐng)域正在日趨取得普 遍的應(yīng)用5。在口腔醫(yī)學(xué)中，己有學(xué)者在研究其在脯病防治

10、、蓋髓術(shù) 和牙周病方面的應(yīng)用6。牡蠣粉是海洋甲殼類動(dòng)物牡蠣的外殼研磨所形成的粉劑。其 要緊成份是碳酸鈣，含多種微量元素與氨基酸的復(fù)合物，其組成與根 管壁的成份相近，可提供大量的鈣離子。將牡蠣粉與段甲基殼聚糖聯(lián) 合應(yīng)用具有根管充填劑應(yīng)具有的一些特性，將其應(yīng)用于根管醫(yī)治有著 良好的理化性能和生物學(xué)基礎(chǔ)。在本實(shí)驗(yàn)中，粉劑組中有個(gè)別位點(diǎn)顯現(xiàn)輕微過敏反映，這可 能與牡蠣粉中成份多樣，而其中完全弗氏佐劑又最大限度放大了材料 的致敏性，和動(dòng)物對(duì)致敏原個(gè)體不同性有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)僅為該材料系列研究中的一部份，可否應(yīng)用于臨床， 尚需通過其他的實(shí)驗(yàn)研究以對(duì)其進(jìn)行客觀綜合的評(píng)判而定?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1IS0109931:Bi

11、ologicalevaluationofmedicaldevicesparti:EvaluationandTestingS. :ISOcopyrightoffice, 2003： 8.2IS01099310:BiologicalevaluationofmedicaldevicespartlO:TestsforirritationandSensitizationS. 2nd, Switzerland :ISOcopyrightoffice, 2003:15.3唐濤,薛毅，信玉華,等.裝甲基殼聚糖對(duì)口腔重要厭氧菌的抑菌性能評(píng)判J.中國微生態(tài)學(xué)雜志,2003, 15(6) :337339.4閻春玲,劉萬順,劉