分離土壤中分解尿酸的細(xì)菌-實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、。分離土壤中分解尿素的細(xì)菌和計(jì)數(shù)制作：鄒霖1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簭耐寥乐蟹蛛x出能夠分解尿素的細(xì)菌，計(jì)數(shù)2 .實(shí)驗(yàn)原理：A.培養(yǎng)基中加入唯一氮源-尿素，能分解尿素的細(xì)菌自身能夠合成脲酶， 能夠分解利用尿素中的氮元素， 從而能夠生存繁殖；不能分解尿素的細(xì)菌的繁殖受到抑制， 從而達(dá)到分離出土壤中能分解尿素的細(xì)菌的作用。B.使用酚紅鑒定尿素是否被分解.CO（NH2）2分解產(chǎn)生 NH3 使溶液顯堿性.如果尿素被分解，則酚紅會(huì)顯紅色，C.分解原理 .CO（NH2）2+H2O= 月尿酶=CO2+NH3D.稀釋涂布平板法.將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋， 然后將不同稀釋濃度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)

2、，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成單個(gè)細(xì)胞， 從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。E計(jì)數(shù)菌落，一個(gè)或幾個(gè)細(xì)菌可以繁殖為一個(gè)肉眼可見(jiàn)的菌落（計(jì)數(shù)結(jié)果低于實(shí)際細(xì)菌數(shù)）3 .提出問(wèn)題：尿素分解后NH3 的產(chǎn)生是否會(huì)影響實(shí)驗(yàn)？4 .做出假設(shè)：尿素分解后NH3 的產(chǎn)生會(huì)影響實(shí)驗(yàn)。5 .實(shí)驗(yàn)材料用具： 超凈工作臺(tái)、 取樣鏟、 試管、 錐形瓶、 恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿、 高壓蒸汽滅菌鍋、 酒精燈、 酒精、 無(wú)菌水、 地面以下 3-8CM處的土壤、培養(yǎng)基A （磷酸二氫化鉀1.4g磷酸氫化二鈉2.1g 七水合硫酸鎂0.2g 葡萄糖10g 尿素1g 瓊脂15g）培養(yǎng)基B（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基） 涂布器、

3、干熱滅菌箱、燒杯、膠頭滴管6 .實(shí)驗(yàn)步驟：1 . 對(duì)實(shí)驗(yàn)用具消毒滅菌；按配方稱取上述物質(zhì)，將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到 1000ml 。2 .配置好培養(yǎng)基后， 將培養(yǎng)基 A.B 倒置都放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 1d ，取出后觀察是否產(chǎn)生了菌落，若無(wú)，則繼續(xù)下一步實(shí)驗(yàn)。若有，重做(>_<)3 .系列稀釋：將分別盛有9ml 水的 5 只試管和 90ml 水的1 個(gè)錐形瓶滅菌，并按1010 的順序編號(hào)錐形瓶編號(hào)10。將10g符合條件的土壤放入錐形瓶中，震蕩錐形瓶，用移液管吸取1ml 菌液， 注入標(biāo)有 10 的試管中， 用手輕壓移液管上的橡皮頭， 吹吸三次，使菌液與水充分混勻。 以此類推，

4、 直到完成最后一只試管的稀釋。 （注意：移液管需要經(jīng)過(guò)滅菌，操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰12cm 處）4 .涂布平板：將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中， 分別取 10.10 .10 中的少量菌液，分別各滴加到 3 個(gè)培養(yǎng)基 A （總計(jì) 9 個(gè)）的表面， 注明培養(yǎng)基種類， 培養(yǎng)日期以及平板上培養(yǎng)樣品的稀釋程度，取少量無(wú)菌水滴加到 1 個(gè)培養(yǎng)基中作為空白對(duì)照組， 取少量菌液滴加到培養(yǎng)基 B 中（判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用） ， 將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃， 待酒精燃盡后，冷卻 8-10S 。用涂布器 將菌液均勻的涂布在每個(gè)培養(yǎng)基表面 （每次涂布前都必須用酒精燈灼 燒）涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻。-可編輯修改-5 .將培養(yǎng)基倒置并放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1-2d6 .相同稀釋程度的3個(gè)培養(yǎng)基統(tǒng)計(jì)其菌落數(shù)（30-300 ）取 平均值。7 .實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1.空白對(duì)照組無(wú)菌落2 .培養(yǎng)基B上的菌落