腸道感染細菌

1、第11章腸道感染細菌教學目的1 .掌握腸桿菌共同生物學特征.2 .掌握埃希菌屬致病物質與所致疾病,熟悉其生物學性狀及微生物學檢 查法.3 .掌握志賀菌屬致病物質與所致疾病及其耐藥性問題.4 .熟悉志賀菌屬抗原結構與分類、微生物學檢查及菌苗預防問題.5 .掌握沙門氏菌屬致病物質與所致疾病、免疫性、及標本采集原那么,腸 熱癥的細菌學檢查及血清學檢查肥達氏反響的分析與判斷.6 .熟悉沙門氏菌屬抗原結構與分類、傷寒的特異性預防.7 .掌握霍亂弧菌形態(tài)染色、培養(yǎng)特性及致病物質和所致疾病.8 .熟悉霍亂弧菌生化反響、抗原構造與分型；副溶血性弧菌致病性.9 . 了解其它腸道細菌生物學性狀、致病性和免疫性.教

2、學重點和難點1 .腸道桿菌的共同生物學特性.2 .埃希菌屬的致病物質和所致疾病,引起腸道內(nèi)感染的五種大腸埃希菌.3 .志賀菌屬志賀菌屬的致病性和免疫性：致病物質與所致疾病.微生物學檢查4 .沙門菌屬致病物質及所致疾病.免疫性微生物學檢查防治原那么：特異性預防5弧菌屬霍亂弧菌生物學性狀. 致病性：霍亂弧菌腸毒素的作用機制免疫性微生物學檢查及防治原那么.參考教材1.醫(yī)學微生物學,周正任主編,第6版,人民衛(wèi)生出版社,20032 .醫(yī)學微生物學,賈文祥主編,第 1版,人民衛(wèi)生出版社,20053 .Medical Microbiology , Kenneth J. Ryan and C. George

3、Ray, 4th ed, Mcgraw-Hill Medical Publishing Division, 2004學時安排教學內(nèi)容：時間分配一、腸道桿菌的共同特點：一形態(tài)結構與染色革蘭陰性桿菌,無芽胞,多數(shù)有鞭毛,致病菌大多有菌毛.有質粒,能攜帶耐藥性、菌毛、腸毒素等結構基因.二培養(yǎng)及生化反響易培養(yǎng),生化反響水平強.可用含乳糖的培養(yǎng)基別離培養(yǎng)以識別致病菌.致病菌-分解乳糖水平常居菌+三抗原構造復雜.1. O菌體抗原：是細菌胞壁脂多糖上的.-特異性多糖側鏈,按低聚糖上各種糖及其排列次序的不同,構成了 .抗原的特異性.2. H鞭毛抗原：是組成細菌鞭毛的蛋白質成分,按多肽鏈的氨基酸排列順序及空間構

4、型決定鞭毛抗原的特異性.3. 外表抗原：莢膜或包膜抗原,多糖質,抗吞噬,毒力抗原.在各屬細菌中名稱不 同：大腸桿菌屬中稱 K抗原,沙門氏菌屬中稱 Vi抗原,志賀氏菌屬中稱 B抗原.四致病作用多數(shù)靠內(nèi)毒素,少數(shù)能產(chǎn)生外毒素腸毒素.綜上所述,對腸道的鑒定原那么可總結為三句話：1形態(tài)無特殊,難區(qū)分；2初步鑒定靠生化反響；3最后鑒定靠抗原血清學反響.腸道感染細菌是通過糞一口途徑進行傳播的.包括腸桿菌科細菌、幽門螺桿菌、霍亂弧菌、副溶血性弧菌及彎曲菌屬等.其中的腸桿菌科細菌種類最多,對人類有致病作用的主要是志賀菌屬、沙門菌屬和 局部大腸埃希菌,其他大多數(shù)為腸道正常菌群.二、埃希菌埃希菌屬有5個種,其中大

5、腸埃希菌最常見,是臨床上最重要的一個菌種.大腸埃希菌,俗稱大腸桿菌.主要表現(xiàn)在：1 .多數(shù)在腸道內(nèi)不致病,并終生伴隨,是腸道中重要的正常菌群.2 .在一定條件下可成為條件致病菌,引起腸外感染.3 .有些血清型大腸埃希菌可致人類致腹瀉,稱致病性大腸埃希菌.4 .在環(huán)境衛(wèi)生和食品衛(wèi)生學中,常用作被糞便污染的檢測指標.5 .在分子生物學和基因工程研究中,是重要的實驗材料.一生物學性狀多數(shù)菌株有周鞭毛和菌毛.發(fā)酵乳糖,在鑒別培養(yǎng)基上形成有色菌落.依此區(qū)別于沙門菌、志賀菌.典型的大腸埃希菌IMViC試驗結果為“ + + -.抗原結構有 O>170種 是血清學分型的根底H>56 種K>1

6、00種又分為L、A、B三型,一個菌株中,只含一種.大腸埃希菌血清型表示法O111 : K58 B4 : H2.大腸埃希菌產(chǎn)生的大腸菌素可用于大腸埃希菌的分型.二致病性致病物質有粘附素和外毒素.所致疾病1.腸外感染條件致病一一寄居位置改變病變以化膿性炎癥最為常見.(1)敗血癥是最常見的革蘭陰性菌(占 45%.(2)新生兒腦膜炎是1歲以內(nèi)嬰幼兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的主要致病因子.(3)泌尿道感染常見的有尿道炎、膀胱炎、腎盂腎炎、前列腺炎等.2 .胃腸炎某些血清型可引起腸內(nèi)感染,為外源性感染,根據(jù)致病機制不同,主要有五種類型.(1)腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌(ETEC致病物質1)腸毒素耐熱腸毒素(ST)和不耐熱

7、腸毒素(LT).2)菌毛(定植因子)、LPS K抗原等.(2)腸侵襲型大腸埃希菌(EIEC)致病物質質粒介導侵襲和破壞腸粘膜；內(nèi)毒素破壞細胞形成炎癥和潰瘍,引起腹瀉.(3)腸致病型大腸埃希菌(EPEC致病物質質粒介導(粘附素)粘附和破壞腸粘膜細胞.導致微絨毛萎縮、上皮細胞排列紊亂和功能受損,造成嚴重腹瀉.(4)腸出血型大腸埃希菌(EHEC曾在世界各地發(fā)生流行,5歲以下兒童易感染,病癥輕重不一,可為輕度水瀉至伴有劇烈腹痛的血便.死亡率3-5%.致病物質主要有菌毛、毒素.已別離到50多個血清型,引起人類疾病的大腸埃希菌血清型以O157: H7為主,但不同國家的流行株不一定相同.(5)腸集聚型大腸埃

8、希菌(EAEC致病物質是粘附素和毒素.特點是細菌在細胞外表聚集,形成磚狀排列,導致微絨毛變短,單核細胞浸潤和出 血.(二)微生物學檢查臨床標本的檢查1 .標本腸外感染取中段尿、血液、膿液、腦脊液等；腹瀉取糞便.2 .別離培養(yǎng)與鑒定(1)腸外感染：1)除血液標本外,均需作涂片染色檢查.2)別離培養(yǎng)后觀察菌落形態(tài).3鑒定生化反響、尿路感染需菌落計數(shù).2腸內(nèi)感染將糞便標本接種于鑒別培養(yǎng)基,挑選可疑菌落并鑒定為大腸埃希菌后再分別檢測不同類型致胃腸炎大腸埃希菌的腸毒素、毒力因子和血清型等特征.衛(wèi)生細菌學檢查腸道中的大腸埃希菌不斷隨糞便排出,可污染環(huán)境、水源、飲料和食品,樣品檢出 大腸埃希菌愈多,表示糞便

9、污染愈嚴重,并間接說明可能有腸道致病菌污染.因此衛(wèi)生 細菌學常以“大腸菌群數(shù)作為水源、飲料、食品等被糞便污染程度的指標.大腸菌群數(shù)是指1000ml飲水中的大腸菌群數(shù).我國規(guī)定的衛(wèi)生標準： 每1000ml飲水中大腸菌群數(shù)不得超過 3個；每100ml瓶裝汽 水、果汁中大腸菌群數(shù)不得超過5個.三、志賀菌志賀菌屬的細菌,通稱痢疾桿菌,是人類細菌性痢疾的病原菌.一生物學性狀無鞭毛,有菌毛.在腸道鑒別培養(yǎng)基上形成無色、半透明的菌落.均能分解葡萄糖只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,除 宋內(nèi)志賀菌緩慢發(fā)酵乳糖外,均不分解乳糖.抗原構造與分類有O和K兩種抗原.O抗原是分類的依據(jù),將志賀菌屬分為四群種40余血清型包括亞型.二致病性與

10、免疫性1 .致病物質主要是侵襲力和內(nèi)毒素,有的菌株尚產(chǎn)生外毒素.1侵襲力借菌毛粘附、穿入回腸末端和結腸粘膜上皮細胞,在上皮細胞內(nèi)繁殖,形成感染灶,引起炎癥反響.細菌一般不進入血流.志賀菌穿透上皮細胞的水平,由基因所限制.志賀菌只有侵入腸粘膜后才能致病.2內(nèi)毒素1作用于腸粘膜,使通透性增高,促進對內(nèi)毒素的吸收,引起發(fā)熱,神志障礙等.2破壞腸粘膜,形成炎癥、潰瘍、呈現(xiàn)典型的膿血粘液便.內(nèi)毒素還能作用于腸壁 植物神經(jīng)系統(tǒng),使腸功能發(fā)生紊亂,腸蠕動失調和痙攣.尤其是直腸括約肌痙攣最明顯, 因而出現(xiàn)腹痛、里急后重等病癥.3外毒素 A群志賀菌I型和=2 * ROMAN II型還能產(chǎn)生外毒素,稱志賀毒素.使

11、蛋白質合成中斷上皮細胞損傷.2 .所致疾病傳染源是病人和帶菌者.傳播途徑主要為糞一口.人類對志賀氏菌較易感.痢疾志賀菌引起病情較重；宋內(nèi)志賀菌多引起輕型感染；福氏志賀菌感染易轉變?yōu)?慢性,病程遷延；福氏和宋內(nèi)志賀菌是我國常見的流行型別.臨床感染類型1急性菌痢局部病癥有膿血便、腹痛、里急后重.急性中毒性菌痢,以小兒多見,無明顯的消化道癥狀,主要表現(xiàn)全身嚴重的中毒病癥.各型志賀菌都有可能引起.臨床主要有高熱、神志 障礙、休克,病死率較高.2慢性菌痢病程2月,遷延不愈,局部病癥為主.3 .病后建立的型特異免疫SIgA短暫、不持久,無交叉.三微生物學檢查1 .粘液膿血便、肛拭標本.2 .別離培養(yǎng)與鑒定

12、標本接種腸道鑒別或選擇培養(yǎng)基,J 37 C 24h取無色較透明菌落進行生化反響和血清學試驗,以確定菌群和菌型.3 .毒力試驗測定志賀菌的侵襲力可用Senery試驗致豚鼠角膜結膜炎.4 .快速診斷法1免疫染色法鏡下觀察有無凝集現(xiàn)象.2免疫熒光菌球法3協(xié)同凝集試驗4乳膠凝集試驗簡便、快速、特異性高.查糞便中有無志賀菌可溶性抗原.既可查抗原又可查抗體.5分子生物學方法PCR核酸雜交等查細菌 DNA四防治原那么特異性預防口服依賴鏈霉素株Sd制成的多價活疫苗有一定保護作用.藥物治療抗生素,注意多重耐藥菌株.四、沙門菌沙門菌屬是一大群寄生在人類和動物腸道中,生化反響和抗原結構相關的革蘭陰性桿菌.已達246

13、3種血清型,但對人致病的僅少數(shù),如引起腸熱癥的傷寒、副傷寒沙門菌.其他沙門菌一般對動物致病,也有些沙門菌偶爾可傳染給人,引起食物中毒或敗血癥,如豬霍亂沙門菌、鼠傷寒沙門菌和腸炎沙門菌等.一生物學性狀革蘭陰性,除個別外,都有周身鞭毛,有菌毛.在鑒別培養(yǎng)基上因不分解乳糖,形成無色、光滑、較透明的菌落.生化反響對沙門菌屬各菌的鑒定有重要意義.抗原構造較復雜,主要有：1. O抗原 約58種,每個沙門菌的血清型含一種或多種O抗原.凡含有相同抗原組分的歸為一個組,可將沙門菌分成42個組,引起人類疾病的沙門菌大多數(shù)在A-E組.2. H抗原 分第I相和第n相.第I相特異性高,第n相特異性低.每一組沙門菌根據(jù)H

14、抗原不同,可進一步將組內(nèi)沙門菌分成不同菌型.3. Vi抗原存在于新別離的傷寒沙門菌和希氏沙門菌菌體外表60 c加溫、石炭酸處理和傳代培養(yǎng)即消失,可阻止O抗原與其相應抗體的凝集反響.二致病性與免疫性1 .致病物質1侵襲力1沙門菌有毒株通過菌毛與小腸上皮細胞M細胞結合,并在其中大量繁殖.2沙門菌是胞內(nèi)寄生菌,被巨噬細胞吞噬后,由耐酸應答基因介導使細菌能在吞噬 體的酸性環(huán)境中生存和繁殖.3） Vi抗原的保護抗吞噬、抗殺菌物質.2內(nèi)毒素可引起發(fā)熱、白細胞下降、中毒性休克等.3腸毒素某些沙門菌如鼠傷寒桿菌等能產(chǎn)生腸毒素,可導致急性胃腸炎.2.所致疾病1腸熱癥 傷寒傷寒沙門菌,副傷寒甲型副傷寒沙門菌、肖氏

15、沙門菌、希氏沙門菌傳染源 傷寒、副傷寒病人和帶菌者.傳播途徑 消化道糞一口途徑.發(fā)病過程病原菌食入后在腸及淋巴結中繁殖第一次菌血癥擴散發(fā)熱、不適等病菌侵入肝、膽、脾、腎、骨髓中繁殖第二次菌血癥高熱、肝脾腫大等糞便排菌腸出血或穿孔尿液排菌假設無并發(fā)癥,2-3w后病情開始好轉.2胃腸炎食物中毒是最常見的沙門菌感染,約占70%由攝入大量鼠傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌、腸炎沙門菌等污染的食物引起.起病急,有發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹痛、水樣腹瀉.大多在23d自愈.嚴重者休克、腎衰死亡.3敗血癥多見于兒童和免疫力低下者,致病菌以豬霍亂沙門菌、希氏沙門菌、鼠傷寒沙門菌多見,有高熱、寒戰(zhàn)、厭食等病癥,菌隨血流擴散到組

16、織器官,引起腦膜炎、骨髓炎,膽囊炎、心內(nèi)膜炎等.4無病癥帶菌者約有1%-5呦寒或副傷寒患者在病癥消失后1年或更長時間內(nèi)仍可在糞便中檢出有相應沙門菌.3.免疫性引起腸熱癥的沙門菌侵入后,主要為細胞內(nèi)寄生菌,細胞免疫是主要防御機制,體液免疫有輔助的殺菌作用.胃腸炎的恢復與局部SIgA有關.三微生物學檢查1 .標本腸熱癥第1w取血液；第2w取糞便、尿；第1-3w取骨髓.胃腸炎取糞便、嘔吐物、可疑食物.敗血癥取血液.2 .別離培養(yǎng)與鑒定標本直接接種腸道鑒別或選擇培養(yǎng)基取無色菌落接種雙糖或三糖鐵培養(yǎng)基系列生化反響鑒定血清學反響鑒定(玻片凝集試驗)陽性時即可作出初步診斷近年來,采用免疫學方法快速檢測糞便、

17、血清、尿液標本中的細菌抗原.分子生物 學技術檢測細菌核酸.3 .血清學診斷針對腸熱癥多用肥達( Widal )試驗.(1)概念用傷寒沙門菌 O和H抗原,以及甲型副傷寒、肖氏、希氏沙門菌H抗原的診斷菌液,與受檢者血清作試管或微孔板凝集試驗,測定有無相應抗體及其效 價,輔助診斷腸熱癥.(2)結果解釋考前須知1)正常值傷寒沙門菌O凝集價低于1 : 80; H凝集價低于1: 160.副傷寒沙門菌,H凝集價低于1: 80.才有診斷價值.2)動態(tài)觀察病程中逐周復查,假設效價升高 4倍,有意義.3 ) H與O抗體的診斷意義O抗體(1gM)出現(xiàn)較早,維持約半年.H抗體(1gG)出現(xiàn)較晚,維持時間長達數(shù)年.故：

18、O T , H T可輔助診斷；O J , H J 一般否認診斷；O J , H T既往感染、預防接種、非特異回憶反響；0 T, H J感 染 早期.4)其他少數(shù)腸熱癥病人,肥達試驗始終正常( Ab不升高).4 .傷寒帶菌者的檢出別離出病原菌是最可靠的方法.但檢出率不高,可先檢測可疑者血清中 Vi抗體,假設 效價? 1: 10,再反復取糞便別離培養(yǎng)沙門菌.四防治原那么1 .特異性預防 1死菌苗：接種傷寒副傷寒疫苗. 有一定保護作用,但不理想.2減毒口服活疫苗：以傷寒沙門菌Ty21a活疫苗,效果仍不理想,且工藝復雜,國內(nèi)已停用.3傷寒vi莢膜多糖疫苗：平安,有效期至少3年.2 .治療抗生素氯霉素、

19、氨茉青、環(huán)丙氟哌酸等.五、霍亂弧菌弧菌屬Vibrio 細菌是一大群菌體短小,弧形的革蘭陰性菌,與腸道桿菌主要不同 是氧化酶試驗陽性和有一根位于菌體一端的單鞭毛.至少有12種與人類疾病有關,尤以霍亂弧菌和副溶血性弧菌最為重要.一、霍亂弧菌是烈性傳染病霍亂的病原菌,曾屢次引起世界大流行,因此屬國際檢疫的傳染病.一生物學性狀1 .形態(tài)染色中等大小革蘭陰性弧菌,有單端鞭毛和菌毛,有些菌株有莢膜,運動活潑.假設取病人米柑水樣糞便作懸滴觀察,可見穿梭樣或流星樣運動.2 .培養(yǎng)特性與生化反響嗜堿常用堿性蛋白月東水或堿性瓊脂平板作為選擇培養(yǎng)基,PH8. 8-9 . 0.溫度范圍寬生長繁殖的溫度為18-37 C

20、.可在無鹽環(huán)境中生長,依次區(qū)別于其他致病性弧菌.過氧化氫酶、氧化酶、硝酸鹽復原及口引喋試驗均陽性.分解多種單糖,產(chǎn)酸不產(chǎn)氣.3 .抗原構造與分型霍亂弧菌有O和H抗原,根據(jù)O抗原不同分為200多個血清群,其中 01群、0139 群引起霍亂,其余的血清群分布于地面水中,可引起人類胃腸炎等疾病,但從未引起霍 亂的流行.其中01群 根據(jù)菌體抗原組成分三個血清型. r古典生物型 根據(jù)表型差異分2個生物型Y EL-Tor 生物型4 .反抗力 ELTor生物型和其他非01群較古典生物型為強,可在河水、井水、海 水中存活l3周,有時還可越冬.但對熱、酸,消毒劑敏感.二致病性1 .致病物質1霍亂腸毒素由ctxA

21、和ctxB基因編碼,包括有：A亞單位為毒性亞單位,在細胞內(nèi)被蛋白酶裂解為 Al和A2兩條多肽,Al通過活化G腺昔環(huán)化酶的一局部,使細胞內(nèi)cAMPK平升高,使細胞分泌功能亢進,導致嚴重 的水和電解質喪失,產(chǎn)生腹瀉和嘔吐.B亞單位為結合亞單位.可與小腸粘膜上皮細胞GM1神經(jīng)節(jié)昔脂受體結合,介導A亞單位進入細胞質.2鞭毛的活潑運動,有助于細菌穿過腸粘膜外表粘液層而接近腸壁上皮細胞.菌毛有粘附定植作用.3 0139群還具有莢膜和特殊 LPS毒性決定簇,反抗血清中殺菌物質和粘附小腸 粘膜作用.2 .所致疾病霍亂,是我國甲類法定傳染病.傳染源病人和無病癥感染者.傳播途徑 糞一口途徑水.正常胃酸條件下能引起

22、感染的菌量為101°.任何能降低胃酸的因素,均可使人對本菌的敏感性增加.食入病原菌,于小腸粘膜粘附迅速繁殖產(chǎn)毒J 2-3d腸液大量分泌引起劇烈嘔吐、腹瀉米淚水 樣失水、失鹽、酸中毒、低容量性休克及腎衰等死亡率高及時補液及電解質,死亡率可小于1%古典生物型較 ELTor生物型嚴重,0139群比01群嚴重.病愈后局部患者可短期帶菌,不超過3-4w3 .免疫性感染后可獲得牢固免疫力抗腸毒素及抗菌抗體.霍亂弧菌引起的腸道局部粘膜免疫是霍亂保護性免疫的根底.01群與0139群之間無交叉免疫保護.4 三微生物學檢查對首例病人的病原學診斷應快速、準確,并及時作出疫情報告.1 .標本 糞便、肛拭、流

23、行病學調查還包括取水樣置于堿性保存液中.2 .直接鏡檢懸滴法觀察細菌的穿梭樣運動有助于診斷.3 .別離培養(yǎng)標本接種堿性蛋白月東水增菌TCBS培養(yǎng)基分解蔗糖呈黃色菌落生化反響及玻片凝集反響01群多價和單價、0139群四防治原那么1.特異預防 1 01群霍亂弧菌死疫苗肌注.（2） 口服疫苗：包括 B亞單位-全菌滅活口服疫苗；基因工程減毒 活菌苗；帶有霍亂弧菌幾個主要保護性抗原的基因工程菌苗.3候選菌苗01群和0139群二價菌苗.2.治療1及時補液及電解質.2抗生素使用多重耐藥質粒的菌株在增加,且0139群的耐藥性強于01群.六、副溶血性弧菌副溶血性弧菌存在于近海的海水、海底沉積物和魚類、 貝類等海

24、產(chǎn)品中. 是我國大陸沿海地區(qū)食物中毒中最常見的一種病原菌.一生物學性狀嗜鹽3.5%NaCl的培養(yǎng)基中生長良好,無鹽不生長.在鹽濃度不適宜時呈多形性,菌體一端有單鞭毛.在TCB胡養(yǎng)基形成綠色不分解蔗 糖的菌落.不耐熱、不耐酸.某些菌株可溶解人、兔的紅細胞,產(chǎn)生3溶血.二致病性引起食物中毒確實切致病機制尚待說明.致病物質致病菌株別離出兩種致病因子1 .耐熱直接溶血素TDH ,是一種腸毒素.2 .耐熱相關溶血素TRH其他致病因子粘附素、粘液素酶等.本菌引起的食物中毒系經(jīng)烹飪不當?shù)暮．a(chǎn)品或鹽腌制品傳播.因食物容器或砧板生 熟不分污染本菌后,也可發(fā)生食物中毒.有腹痛、腹瀉、嘔吐和低熱,糞便多為水樣, 少